壬基酚免疫层析快速检测试纸条的研制

目的制备壬基酚的免疫层析快速检测试纸条,为检测和治理环境污染物提供一种快速检测方法。方法用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金;确定胶体金标记壬基酚多克隆抗体的最适条件并制备胶体金-抗体结合物;在玻璃纤维膜上灌注结合物溶液并干燥,在硝酸纤维素膜上喷涂包被原(NP-OVA)和羊抗兔抗体作为检测线和控制线,搭建试纸条并检测标准样品。结果制出的胶体金经电镜检测,金粒子平均直径为(19.0±2.5)nm;制备的壬基酚检测试纸条检测限为(4.4±2.5)μg.mL-1;检测样品所需时间约为10 min。结论研制出的壬基酚检测试纸条,检测样品所需时间约为ELISA检测法的1/20,可用于特殊环境,尤其是突发事件中壬基酚的快速检测。     

胶体金标记抗甲基苯丙胺复合物的合成

目的:合成高质量的胶体金标记抗甲基苯丙胺复合物,以应用于能检测吸毒人员尿液中是否含有甲基苯丙胺的胶体金试纸条。方法:用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用抗甲基苯丙胺单克隆抗体标记胶体金。结果:成功制备了直径约20 nm颗粒均一的胶体金,进一步制备了高质量的胶体金标记抗甲基苯丙胺复合物。结论:制备的胶体金标记抗甲基苯丙胺复合物活性较好,能用于检测甲基苯丙胺的胶体金试纸条。     

黄曲霉毒素B_1胶体金免疫层析法检测试纸条的制备

目的制备黄曲霉毒素B_1胶体金免疫层析试纸条。方法用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶胶,用目测法、紫外可见分光光度法及精密p H试纸对其进行鉴定表征;并采用碳二亚氨法(EDC)将黄曲霉毒素B_1(AFB_1)偶联于载体蛋白卵血清蛋白(OVA)上,合成包被抗原AFB_1-OVA。通过目测法及紫外-可见分光光度法优化标记胶体金的最佳黄曲霉毒素B_1单克隆抗体浓度和pH,最后将包被有抗原AFB_1-OVA和羊抗鼠Ig G的硝酸纤维素膜和干燥的吸附有金标抗体的玻璃纤维膜组装成试纸条,初步利用竞争性免疫层析原理检测标准品黄曲霉毒素B_1。结果制备的胶体金澄清透亮,呈酒红色,无聚集现象,最大吸收波长为518 nm,呈酸性(p H=5.8)。OVA与AFB_1偶联后,偶联物紫外扫描吸收光谱与OVA及AFB_1吸收光谱有明显区别,说明有新物质生成。进一步用新合成的AFB_1-OVA组装试纸条,检测阴性样品,两线均显深红色,为阴性结果,表明合成的人工抗原成功;胶体金标记黄曲霉毒素B_1单克隆抗体最适标记p H为1 ml胶体金溶液中添加0.1 mol/L K_2CO_3量为20μl,最适蛋白浓度为13μg/ml;初步组装试纸条并检测一定浓度的AFB_1标准品,结果表明,试纸条的检测限为200 ng/ml。结论制备的胶体金符合试纸条所用胶体金的要求;并成功制备AFB_1胶体金免疫层析法测定试纸条,但尚须进一步优化条件以提高试纸条的检测性能。     

快速检测日本脑炎病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断日本脑炎病毒的胶体金标记免疫层析试纸条方法,并对其进行评价。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记日本脑炎病毒的NS1的抗体,制成免疫层析检测试纸条。对试纸条进行特异性和敏感性评价,并对三带喙库蚊进行模拟添加日本脑炎病毒检测。[结果]用三带喙库蚊研磨悬液上清、正常的昆虫细胞液进行测试,呈阴性反应;检测日本脑炎病毒的灵敏度均为1×10^5pfu／ml,对三带喙库蚊添加日本脑炎病毒进行检测也取得同样结果,并在10～15min即可得到结果。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测日本脑炎病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。     

快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究

目的：为产单核李斯特菌提供了一个方便快捷切实有效的检测技术。方法：采用胶体金标记产单核李斯特菌抗体制备免疫层析检测试剂，通过免疫层析作用对产单核李斯特菌进行检测。结果：通过选用柠檬酸钠改良法制备胶体金，测定其最适结合蛋白浓度为28μg／ml，构建起免疫层析检测试剂和检测方法，检测了冷冻猪肉、牛奶、冰激凌以及不同稀释度的产单核李斯特菌标准样品，灵敏度达87．5％，具有良好的重现性。结论：免疫胶体金层析法用于快速检测产单核李斯特菌是可行的。     

抗人血白蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制

目的:制备抗人血白蛋白单克隆抗体并对其抗体特性进行鉴定,将其标记胶体金,研制一种快速准确检测尿中人血白蛋白试纸条的方法。方法:用99.8%纯度的人血白蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并对其单克隆抗体的相关性质进行鉴定,制备胶体金,并标记所制备的单克隆抗体,按竞争法制备试纸条。结果:得到两株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系4C2,2F10。结论:建立的免疫层析试纸条,简便、可靠,有望通过进一步改进应用于临床检验。     

西方马脑炎病毒抗体快速检测试纸条的研制

目的研制一种快速检测西方马脑炎病毒（WEEV）抗体的试纸条。方法利用胶体金标记和免疫层析技术,用25 nm胶体金标记葡萄球菌A蛋白,并用硝酸纤维膜包被WEEV抗原及羊抗兔IgG作为检测带和质控带,研制出WEEV抗体快速检测试纸条。对该试纸条的敏感性、特异性和稳定性做出评价,并拟合检测曲线进行半定量检测。在健康人血清、兔血清和鼠血清中添加WEEV抗体模拟污染样品,评价该方法的检测能力。结果该试纸条可在20 min内完成定性和半定量检测,灵敏度为120 ng/ml,模拟样品的检测灵敏度也相同。线性范围120～1200 ng/ml。对发病症状相似以及近缘的其他病毒进行检测,均无非特异反应。试纸条在37℃下保存1个月,检测结果不变。结论该试纸条具有快速、简便、灵敏、特异、稳定的特点,适用于现场检测。     

胶体金法与酶联免疫法相结合快速检测克伦特罗

目的研究胶体金免疫层析法(GICA)与酶联免疫吸附法(ELISA)相结合,以建立对饲养、屠宰、流通各环节的畜尿克伦特罗(Clenbutero1,CL)定性和定量检测的方法。方法用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备20 nm粒径的胶体金,胶体金标记单抗后喷涂到玻璃纤维膜上,特异性抗原(CL-BSA)以线状包被在硝酸纤维素膜上,制成快速检测试纸条。用ELISA进行定量。结果对GC-MS不确定的36份阴性样品和24份阳性样品用GICA方法检测,其阴性符合率为97%,阳性符合率为96%。同样样品用ELISA方法检测,其符合率为100%。最低检测限为5.0 ng/mL;用GICA法只需在试纸条上滴加4~5滴样液5~10 min就可出结果;在2个月的随机抽查中,试纸条的检测结果没有变化。结论本方法准确性高、稳定性好,操作过程简单,适合于作现场大规模、高通量检测。因此本方法具有广泛的应用及推广价值。     

应用SPA胶体金试纸条检测囊虫特异抗体

目的研制一种同时适于基层医院与兽医部门使用的简便快速检测囊虫特异抗体的新方法。方法以SPA标记胶体金并固定在玻璃纤维纸上,囊虫特异抗原与兔IgG固化在NC膜上,制备可以检测囊虫特异抗体的SPA胶体金试纸条。用该试纸条检测人或猪囊虫病阳性、阴性血清以及相关疾病血清,验证方法的敏感性、特异性、重复性、可操作性以及试剂的稳定性。结果每毫升胶体金的标记SPA的最适量为5.5μg,囊虫特异抗原与兔IgG标记NC膜的最佳浓度分别为1.22mg/ml与0.97mg/ml。用SPA胶体金试纸条检测非疫区健康猪血清、人囊虫病阴性参考血清、包虫病人血清、弓形虫病人血清以及旋毛虫病人血清,结果均为阴性;检测囊虫病人血清与病猪血清,均为阳性;与I-ELISA比较,检测结果符合率100%。检测过程为2-10 min,该纸条在25℃保存2个月后的检测效果无明显变化。结论研制的SPA胶体金试纸条检测囊虫特异抗体,简便、快速、敏感、特异,试剂稳定,适于各级医院与兽医部门进行囊虫病的诊断和流行病学调查。     

建立快速检测鼠疫耶尔森菌的胶体金免疫层析法

〔目的〕　建立检测鼠疫耶尔森菌 (鼠疫杆菌 )的胶体金标记免疫层析方法。〔方法〕　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,并标记鼠疫杆菌的抗体 ,制成免疫层析检测试纸条 ,进行特异性和敏感性评价 ,并对面粉、土壤、奶粉、淀粉等不同材料进行模拟添加鼠疫菌检测。〔结果〕　用多种不同的常见细菌或近缘细菌进行测试 ,未出现非特异性反应 ,检测鼠疫杆菌的灵敏度为 1× 10 5cfu/ml,对水、土壤、奶粉、面粉、淀粉、酵母粉等不同材料中鼠疫杆菌进行检测也取得同样结果 ,10～ 15min即可得到结果。〔结论〕　建立了 1种可以用于现场快速检测鼠疫杆菌的胶体金免疫层析方法 ,为进一步大规模应用奠定了基础。     

一种快速检测甲型流感病毒方法的建立

目的 建立一种用于甲型流感病毒抗原检测的基于胶体金免疫层析法的快速、简便试剂盒。方法 以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记一种抗甲型流感病毒单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被另一种抗甲型流感病毒单克隆抗体,制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合,然后移动至硝酸纤维素膜上与固定的单克隆抗体发生反应,形成肉眼可见的红色带。结果 本试纸与不同浓度甲型流感病毒培养液均能发生特异性反应,与乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒等16种病原体无交叉反应。用甲型流感病毒培养液不同浓度标本与美国同类产品比较,灵敏度相同。稳定性检测显示42 ℃和37 ℃热破坏放置结果均优于美国同类产品。临床比对结果评价kappa值为0.976,一致性非常高。结论 试纸条灵敏度和特异性能够达到临床使用的要求,并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点,对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

ELISA法与胶体金法在检测新型冠状病毒血清抗体中的应用探讨

目的 探讨酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法与胶体金法检测新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)血清抗体的诊断价值。方法 选取湖南省新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎,COVID-19)确诊病例88例作为病例组,51例核酸检测阴性者作为对照组。采集研究对象血标本,采用ELISA法和胶体金法对所采集标本进行抗体检测,比较两种方法检出率差异;以核酸检测结果作为金标准,评估ELISA法和胶体金法的检验效能。结果 本研究结果显示,ELISA法和胶体金法检测2019-nCoV IgM 检出率均为20.97%,2019-nCoV IgG检出率分别为 43.55%、35.48%。不同采样时间ELISA法和胶体金法检测2019-nCoVIgM 检出率差异无统计学意义(均P>0.05)。发病-采样时间间隔≤7 d时,两种检测方法对2019-nCoV IgG检测结果差异有统计学意义(χ²=5.55,P=0.02),ELISA检出率(26.47%)高于胶体金法(5.71%)。通过对比不同发病-采样间隔发现,无论是ELISA法还是胶体金法,在一定时间内,间隔时间越长,2019-nCoV IgM和IgG检出率越高。以核酸检测结果为金标准,检测 IgG和IgM时,ELISA法和胶体金法的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值差异均无统计学意义。结论 ELISA法与胶体金法检验效能相当,两者特异度高,但灵敏度上都存在局限性,不建议用于筛查,可以作为确诊的补充诊断手段或应用于聚集性疫情溯源。     

甲基苯丙胺的胶体金免疫层析检测卡的研制

目的建立一种无需仪器、敏感、特异并适用于非专业人员现场快速检测甲基苯丙胺(冰毒)的方法。方法用冰毒-BSA免疫BALB/C小鼠,采用有限稀释法筛选特异性单克隆抗体并用分型试剂盒分析抗体亚型。采用物理方法将胶体金标记纯化的抗体,组装胶体金快速检测卡并检测此卡的灵敏度和特异性。结果采用有限稀释法筛选出7株特异性分泌株,其中R6腹水纯化后间接竞争ELISA测其效价为108,分型试剂盒测试显示此抗体属于IgG1型;金标抗体量为5μg/ml时,胶体金免疫检测卡的灵敏度为500ng/ml,与8种结构类似物均无交叉反应。结论高灵敏度的胶体金免疫层析快速检测卡作为毒品的初筛工具可有效地帮助查禁人员现场缉毒。     

运用免疫胶体金技术快速检测丙型肝炎病毒抗体

目的采用免疫胶体金层析技术，研制一种对丙型肝炎病毒（HCV）抗体快速检测的试剂。方法采用双抗原夹心法，对HCV的Core和NS3抗原进行标记和包被，制备检测试剂，并进行性能分析和临床试验。结果制备出1种快速检测试剂，以国家参考品作为样品进行测试，检测结果和规定标准完全一致，预期稳定性为18个月以上。经对581例献血员和丙型肝炎病人样本进行检测，相对于ELISA试剂，该试剂的灵敏度为96．5％，特异性为97．4％。结论运用免疫胶体金技术制备了高质量的HCV抗体快速检测试剂，可运用于现场紧急情况或，临床对丙型肝炎的辅助诊断。     

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）胶体金试剂的研制

目的：研制乙型肝炎表面抗原（HBsAg)胶体金试剂,方法：用未加氢氧化铝佐剂的乙型肝炎血源疫苗原材料免疫BALB/c小鼠制备抗－HBs单克隆抗体,应用胶体金标记抗－HBs单克隆抗体,测定HBsAg胶体金剂试的稳定性,对该试剂进行临床考核及检定等,结果,经中国药品生物制品检定所检定,其灵敏度达到1ng/ml, 特异度为100％（20／20）,精密度为100％（10／10）,符合国家对HBsAg试剂僵的要求,临床考核合格,已通过国家药品监督管理局的新药评审,获国家新药证书,结论,HBsAg胶体金试剂可用于献血员HBsAg筛选,健康人群体检,乙型肝炎病毒（HBV）感染的流行病学调查和临床诊断。     

2016—2018年乐山市学龄前儿童流感流行病学分析及不同检测方法效能

目的 分析乐山市2016—2018年学龄前儿童流感流行病学特征,比较抗原胶体金试剂和核酸检测试剂的差异,为流感防控提供数据支持。方法 采用系统抽样的方式选择乐山市2016年1月至2018年12月收治的1 100例疑似流感患者作为研究对象;收集患者流感流行病学临床资料和特征,分别采用抗原胶体金试剂和核酸检测试剂进行检测;以核酸检测作为标准分析抗原胶体金试剂检测方法差异。结果 以核酸检测金标准,抗原胶体金试剂法检测儿童流感病原体的敏感度、特异度均>80%,且以抗原胶体金试剂法检测流感病原体的AUC>0.90,具有较高的应用价值;2016—2018年乐山市以乙型Y型和甲型H3N2型为主;临床表现的主要特征为咳嗽、流涕、发热(P<0.05)。结论 2016—2018年乐山市学龄前儿童流感病毒感染以型Y型和甲型H3N2型为主,并呈现明显年龄、季节特征,临床中可抗原胶体金试剂对儿童进行筛选,但对检测阴性而属于高危患儿应尽快采用核酸法进行检查确诊。     

胶体金标记单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的制备

目的制备胶体金标记单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体（McAb）,用于检测食品中的致病性单核细胞增生李斯特菌。方法以纯化的单核细胞增生李斯特菌（标准菌株号54001、54002）为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,建立胶体金标记的单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的制备方法。结果筛选出2株单抗杂交瘤细胞株F5、F9,并获得免疫球蛋白,测定免疫球蛋白亚类为IgM。通过选用柠檬酸钠法制备胶体金标记单核细胞增生李斯特菌抗体,测定其最适蛋白结合浓度为12 g/ml。结论成功制备了胶体金标记的单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,为建立食品中病原性单核细胞增生李斯特菌检测技术奠定基础。     

O1群霍乱弧菌胶体金法快速检测

目的 了解胶体金法检测O1群霍乱弧菌的特异性、灵敏度和实用性.方法 取患者粪便标本,先用碱性蛋白胨水35℃增菌6 h,然后用胶体金法进行检测,同时作霍乱弧菌常规培养,培养出细菌后用血清凝集法作为鉴别诊断O1群霍乱弧菌的金标准,用统计学方法对胶体金法诊断试验的评价指标进行计算..结果 700份样本中,常规法培养出O1霍乱弧菌105株,胶体金法试验阳性108株,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=0.24,P>0.05),表明胶体金法检测O1群霍乱弧菌与常规培养法检测结果之间的差异无统计学意义.胶体金法检测O1群霍乱弧菌诊塑试验的灵敏度为93.33%,特异性为98.32%,阳性预测值为90.74%,阴性预测值为97.18%,假阴性率为1.68%,假阳性率为6.67%.结论 胶体金法检测O1群霍乱弧菌特异性高(98.32%),灵敏度好,与常规培养法的一致性也较高,在快速检测O1群霍乱弧菌中有一定应用价值.     

胶体金-DNA体系法测定食品中汞离子

[目的]建立低成本简单、而灵敏度高、准确性好的检测汞离子新方法。[方法]利用分光光度计扫描加入汞离子前后胶体金-DNA体系光谱,通过比较加入汞离子前后光密度比值（D660nm/D530nm）变化大小来快速定量汞离子。[结果]方法的线性范围为0．1～2．00μg/L,线性相关系数r=0．995,检出限为0．2ug/kg。[结论]胶体金-DNA体系法测定食品中汞离子简便、灵敏。     

免疫胶体金快速诊断技术的临床应用与质量控制

目的:免疫胶体金技术(ICGT)是继免疫荧光、放射性免疫和酶联免疫吸附法之后发展起来的固相标记免疫测定技术,了解ICGT在临床快速诊断的应用,提出在此实验过程中的质量控制建议。方法:以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应中。通过文献检索与归纳,对目前胶体金免疫技术的临床诊断、应用和常见问题进行总结。结果:医学检验中应用的免疫胶体金快速检测技术主要方法——快速斑点免疫金渗滤法(DIGFA)和胶体金免疫层析法(GICA)均以微孔滤膜为载体,该技术具有敏感性和特异性高、操作便捷及可快速判读结果等特点。结论:ICGT因其操作简便、快速诊断的特点,适用于广大基层医疗单位并能在现场进行检测和诊断。