利用基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的研究

目的利用基因芯片技术对我国结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变进行研究,建立大规模快速检测结核分支杆菌耐药基因型的基因芯片分子药敏试验方法. 方法利用寡核苷酸基因芯片技术分析19株结核分支杆菌临床分离株的rpoB基因突变,并经PCR-直接测序法(PCR-DS)验证,以结核分支杆菌H37Rv标准株为对照. 结果 7株结核分支杆菌药物敏感株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变,12株RFP耐药株中,1株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变;11株rpoB基因有突变,其中5株为531位TCG→TTG或TGG突变,5株为526位CAC→TAC或GAC或CGC突变,531位和526位突变占耐药菌株rpoB突变的83.3%,其余为502、505、506、507、516、518、522、538位突变;芯片检测和PCR-DS分析结果符合率达100%. 结论大多数结核分支杆菌耐RFP是由于rpoB基因突变所致,采用基因芯片技术可以快速、准确、大规模地确定结核分支杆菌RFP耐药突变的部位和性质,是一种有前途的结核分支杆菌分子药敏试验方法.     

结核分支杆菌耐药性检测方法研究进展

结核病至今仍是世界上一个严重的公共卫生问题,结核分支杆菌(MTB)的高耐药问题是结核病疫情恶化的重要原因。结核分支杆菌耐药性的快速检测,对于其防治具有重要意义,目前临床正在使用和研究的耐药性检测方法归纳起来,有表型检测和基因检测两大类。1表型检测1·1常规药敏试验方法用L-J或Middlebrook7H10培养基做直接或间接药敏试验。此方法由于受结核菌缓慢的生长速度的影响而费力费时(需6~8周甚至更长时间),不能满足临床之急需。1·2BACTECTB-460放射性液体培养基法是目前最常用的结核菌快速药敏试验方法。其原理为利用细菌生长需要代…     

绵阳市结核分支杆菌耐药性分析

目的了解绵阳市结核分支杆菌耐药情况,为耐药结核病的预防控制提供依据。方法采用比例法对79株结核分支杆菌进行一线抗结核药物:异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)耐药性检测。结果共检测出耐药菌17株,总耐药率为21.52%,多耐药率为12.66%,耐多药率为6.33%。初治耐药率为18.64%,获得性耐药率为30.00%。单耐药顺序为:INH>SM>RFP>EMB,耐药率分别为15.19%,12.66%,7.59%和7.14%。耐药在性别和年龄组方面无统计学意义。结论绵阳市结核分支杆菌耐药率低于全国平均水平,应进一步加强耐药菌监测以指导临床合理用药。     

兰州地区结核分支杆菌耐药性分析

目的 分析兰州地区2005～2007年结核分支杆菌耐药情况,为结核病的防治提供科学依据.方法 利用比例法对215株菌株进行药物敏感性检测,用SPSS 11.0进行统计分析.结果 兰州地区结核分支杆菌总耐药率为47.51％,耐多药率4.75％,低于2001～2004年统计结果,原发性耐药占耐药菌株总数的55％,获得性耐药率为46.59％.结论 兰州地区结核病患者结核分枝杆菌耐药率有所下降,但结核病传染源的控制、结核病防治宣教及结核病短程化疗(DOTS)健康教育和促进工作都需进一步加强.     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因的检测

目的 评估应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平（RFP）耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR0－SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株）和33例耐RFP肺结核病人痰标本rPOB基因突变进行检测,并对部分常规药敏试验耐药而用PCR－SSCP未检测到rPOB基因突变的PCR扩增产物阴性菌株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB基因PCR扩增产物258bp片段SSCP图谱正常;58株耐RFP分离株中,52株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为89．7％。SSCP图谱正常的5株耐RFP的PCR产物经测序证实,4株在531位密码子TCG→TTG,1株在526密码子CAC→TAC,1株未改变。33例耐RFP肺结核病人痰酝标本有30例PCR扩增阳性,23例SSCP图谱与H37RV株有差异,rPOB突变率为76．7％。结论 PCR－SSCP 以快速、准确地检测结核分支杆菌rPOB基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

结核分支杆菌耐药性快速检测的研究进展

近年来,全球结核病的发病率呈上升趋势。迄今为止,有5000万人感染的是耐药的结核分支杆菌,而在过去30年中未开发出有效的新型抗结核药。出现这种情况的根本原因在于结核分支杆菌产生了耐药性。在结核控制中,建立快速、敏感和特异的检测耐药性结核分支杆菌的方法,可以指导制定合理的治疗方案,判断治疗是否失败并产生耐药性,也便于进行较大规模的结核分支杆菌耐药性调查。     

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的研究

目的：研究结核分支杆菌耐利福平（RFP）分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对355株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株109株，耐RFP或含耐RFP株246株）rpoB基因进行检测，并对其中31株耐药株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果：以结核分支杆菌标准株H37Rv为对照，所有109株药物敏感株rpoB基因均无突变；246株耐药株中，225株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性为91.5％。31株耐药株（其中SSCP异常25株，正常6株）PCR扩增产物经测序证实，19株在531位密码子TCG-TTG，7株526位密码子CAC-TAC，3株在516位密码子GAC-GTC，2株未改变。结论：rpoB基因突变是耐 RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制；其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸，PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性。     

结核分支杆菌检测概述（综述）

自上世纪末以来,由于各国对结核病控制工作重视不足、流动人口增加、耐药结核杆菌增多以及结核病与艾滋病合并感染等原因,结核病在全球死灰复燃,严重危害人类健康,不仅成为严重的公共卫生问题,更成为影响各国发展的重大社会和经济问题。1993年世界卫生组织（wHO）宣布“结核病全球紧急状态”,我国是世界上22个结核病高负担国家之一,结核病患者数量居世界第二位（第一位为印度。结核病作为单因致死率最高的传染性疾病,加之耐药结核菌、艾滋病以及移民等因素,目前疫情再次呈现上升趋势田。结核病的临床诊断主要依靠结核菌检测和胸部x线检查以及其他辅助检查,结核分支杆菌的检测对诊断结核病尤其重要。现就结核分支杆菌检测技术作概述如下。     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果。方法选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值。结果基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P>0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(P>0.05)。结论基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法。     

结核菌耐药基因突变及检测方法的研究进展

20世纪 80年代以来 ,结核病的疫情有重新上升的趋势 ,特别是高耐药及多耐药菌株的不断出现和传播 ,对化疗效果及结核病的流行产生了极大影响。据世界卫生组织估计 ,目前全球约有 2 0亿人感染结核分支杆菌 ,其中约有5 0 0 0万人感染耐药结核杆菌。结核杆菌耐药性的产生主要是由于不合理用药引起的结核杆菌内抗结药物作用靶基因突变所致。近年来 ,由于分了生物学的迅猛发展 ,一线抗结核药物的耐药分子机制大部分已被阐明 ,也相应地建立了一些耐药基因的检测方法 ,为快速检测结核分支杆菌的耐药性开辟了一条新的途径。1　耐药基因的突变1.1　利…     

深圳市结核分枝杆菌异烟肼耐药流行株的基因分析

异烟肼(INH)和利福平(RFP)是抗结核药中的一线药物,近年来出现了大量耐药结核分枝杆菌,在中国INH-耐药率高达17.6%[1].INH耐药相关的最主要基因为katG,其次为inhA、ahpC和inhA94.为了解深圳地区INH耐药流行株的主要基因突变类型,本研究对深圳地区303株结核分枝杆菌的katG、inbA、oxyR-ahpC基因进行序列分析.     

煤矿工尘肺结核患者结核分枝杆菌L型耐药基因rpoB序列分析

目的 探讨淮南矿区尘肺结核患者感染结核分枝杆菌L型利福平耐药基因rpoB突变特点.方法 收集结核分枝杆菌L型临床分离株42株,其中利福平耐药株31株,敏感株11株,抽提临床分离株DNA和H37Rv标准菌株DNA,PCR法扩增rpoB基因,并应用全自动DNA测序仪对rpoB基因的突变集中区域进行测序分析.结果 42株结核分枝杆菌L型中,31株耐药株rpoB基因突变率93.55%(29/31),主要集中在531位点(51.61%,16/31)和526位点(32.26%,10/31)碱基置换突变,新发现516位点突变目前在国内外研究中未见报道.11株敏感株未见rpoB基因单链构象异常.结论 高度保守的rpoB基因突变是导致结核分枝杆菌L型利福平耐药的分子基础,其突变位点呈多样性.     

丽水市结核分枝杆菌5种耐药基因突变分析

目的:了解丽水市结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG、embB、rpsL和gyrA突变特点。方法:采用PCR-DNA直接测序法,对47株结核菌分离株5个耐药相关基因主要耐药位点突变进行分析。结果:药敏试验共获得耐药结核菌18株,总耐药率为38.30%;序列分析13株存在一个或多个突变位点,未发现碱基的插入或缺失,突变率为27.66%,二者吻合率72.22%。结论:丽水市结核杆菌趋向于耐多种药物,与多个基因突变相关。点突变是本地区结核菌产生耐药性的主要形式。     

结核分枝杆菌耐多药情况分析

目的：评估上海市近年来耐多药结核病（MDR—TB）发生情况。方法：对本市2749株结核分枝杆菌耐药性测定结果进行分析。结果：共查出234株耐多药菌株，其中新发病。组156株（6．8％），复治病人组35株（18．9％），外地病人组43株（15．8％）。234株耐多药菌株中，耐2药133株（56．8％），耐3药66株（28．2％），耐4药35株（15．0％）。耐2药菌株中，以HR耐药为主，占27．8％。耐3药菌株中，以HRS耐药为主，占66．7％。复治病人和外地病人组的耐多药率显著高于新发病人组，P＜0．01。结论：必须加强对复治病人和外地病人的管理和治疗。     

宜昌地区结核分枝杆菌北京基因型菌株的鉴定及VNTR分型

 目的 研究宜昌地区结核分枝杆菌北京基因型菌株的多态性和流行特征,揭示该地区结核病的分子流行病学特征,为结核病防治提供科学依据。方法 选择2018年1月-2019年12月具有完整病例信息的结核分枝杆菌298株,进行人型结核分枝杆菌的鉴定,用扩增RD105缺失片段的多重PCR (DTM-PCR)鉴定北京基因型菌株;应用优化的9位点数目可变串联重复序列技术(VNTR)分析北京基因型菌株的多态性。结果 298株结核分枝杆菌中,260株为人型结核分枝杆菌,DTM-PCR鉴定发现北京基因型菌株140株(53.85%),非北京基因型菌株120株(46.15%)。北京基因型菌株耐药率(32.14%)高于非北京基因型菌株耐药率(10.83%),差异有统计学意义(P<0.05)。VNTR-9位点对北京基因型菌株的分辨率为0.998 5,成簇率为12.15%。结论 北京基因型菌株在宜昌地区呈较高流行趋势,且北京基因型菌株耐药率更高。VNTR-9位点基因分型方法用于该地区结核分枝杆菌北京基因型菌株的鉴别,能准确反映宜昌地区结核分枝杆菌的分子流行病学特征。     

衢州市2010年371株结核分支杆菌耐药状况分析

目的：了解衢州市2010年结核分枝杆菌的耐药状况,为结核病的临床诊治和控制提供参考依据。方法：采用WHO推荐的药敏比例法对371株临床分离的结核分支杆菌进行药物敏感性试验。结果：总耐药率为24%,耐多药率为6.7%;对异烟肼与链霉素的耐药率较高,分别为15.4%、11.9%。结论：衢州市结核杆菌的耐药趋势仍然严峻,相关卫生部门应引起重视。     

海宁市2008年结核分枝杆菌临床分离株MLVA基因分型研究

目的：初步探讨海宁市结核分枝杆菌的数目可变串联重复序列（VNTR）的分型及分布特征,了解海宁市目前结核分枝杆菌的主要流行株,给结核病防治工作提供分子流行病学依据。方法：采用VNTR分型方法,提取DNA,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分枝杆菌15个VNTR位点进行检测,并通过BioNumerics 5.0软件进行DNA指纹图谱多态性分析。结果：95株结核分枝杆菌的15个VNTR位点结果显示明显的多态性,经基因聚类分析,共分为10个基因群,共90个基因型。其中群占2.1%,群占1.1%,群占1.1%,群占5.3%,群占1.1%,群占1.1%,群占69.5%,群占1.1%,群占14.7%,群占3.2%。结论：初步证实海宁市2008年的95株结核分枝杆菌VNTRS存在明显的多态性,至少存在10个VNTR群,主要流行群为群。     

用PCR-限制性长度多态性鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌

目的通过PCR和限制性长度多态性分析,建立鉴定分枝杆菌的PCR-限制性长度多态性分析方法 ,为早期诊断结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)病提供新的工具。方法设计分枝杆菌属特异性通用引物,用MspⅠ对PCR产物进行限制性酶切,对酶切结果进行聚类分析,建立鉴定分枝杆菌的PRA方法。结果本实验所设计的一对引物具有良好的通用性和特异性,PRA法鉴定98株分枝杆菌的结果与传统鉴定法完全一致,其灵敏度、特异度和准确度均为100%,方法学评价指标结果达到诊断性实验的要求。结论 PRA法快速灵敏,可直接检测标本中的分枝杆菌而无需培养增菌,其成本低廉、结果准确,不会因耐药突变而影响结果判断。     

2018年珠海市某医院227株结核分枝杆菌药敏特征分析

目的掌握珠海地区结核分枝杆菌耐药水平,为给结核病患者制定合理的抗结核方案提供科学依据。方法收集中山大学附属第五医院2018年1月至2018年12月肺结核患者的痰液或肺泡灌洗液的标本,进行分枝杆菌培养、菌种鉴定和药敏试验,最终纳入227例进行统计分析。结果 227株结核分枝杆菌,对12种结核药物全敏感占71.8%(163/227),总耐药、单耐药、多耐药、耐多药、广泛耐药、利福平耐药比率分别为28.2%(64/227)、11.9%(27/227)、4.4%(10/227)、4.8%(11/227)、1.3%(3/227)和6.6%(15/227),其中初治患者分别为26.6%(54/203)、11.8%(24/203)、4.4%(9/203)、4.4%(9/203)、0%(0/203)、4.9%(10/203),复治患者分别为41.7%(10/24)、12.5%(3/24)、4.2%(1/24)、8.3%(2/24)、12.5%(3/24)和20.8%(5/24)。四种一线抗结核药的耐药率依次是:S(16.7%)、H(12.8%)、R(6.6%)、E(3.5%)。复治患者的结核分枝杆菌对...     

北京、广东、宁夏三地结核分支杆菌DNA指纹的应用研究

目的 分析“北京家族”结核分支杆菌,从分子流行病学角度探讨北京、广东及宁夏三地结核分支杆菌的分布特征。方法 采用Gel compare4．1软件对来自三地的206株结核分支杆菌的插入序列IS6110 DNA指纹图谱进行数字化,经互联网与世界结核分支杆菌DNA指纹库进行相似性比较;同时应用该软件对上述菌株行聚类分析;构建标准的结核分支杆菌Spoligotyping(间隔区寡核苷酸分型法)DNA指纹方法;用χ^2检验比较不同组别肺结核病人临床分离菌株成簇率的差别,同时计算相对危险度(OR)。结果 206株结核分支杆菌的IS6110 DNA指纹图谱与DNA指纹图谱库相比较,未发现相同者。56．8％(117／206)的结核分支杆菌IS6110 DNA指纹相似值在1．00—0．65之间,且它们的Spo1igotyping指纹图谱均与“北京家族”结核分支杆菌相一致;分组统计显示：男性组与女性组、年龄≥42岁组与＜42岁组成簇率之间差异有显著性(P＜0．05),OR值为男性4．43,95％CI：0．94—28．76;＜42岁为5．06,95％CI：1．00—34．34。其他各组之间差异无显著统计学意义(P＞0．05)。结论 “北京家族”结核分支杆菌在三地呈较高水平的流行;结核分支杆菌在男性和＜42岁人群中的传播频率较女性和≥42岁人群为高,且男性和＜42岁可能是三地结核病近期传播的危险因素。利用结核分支杆菌的DNA指纹图谱和互联网技术,可以实现结核分支杆菌传染源全球范围的追踪。