HPVDNA永生化人宫颈上皮细胞的生长方式与宫颈上皮内肿瘤的比较

目的：研究人乳头瘤病毒（HPV）DNA永生化人宫颈上皮细胞在器官培养的生长特点及将其与体内宫颈上皮内肿瘤（CIN）进行比较。方法：先用HPV16和18型DNA转染人宫颈上皮细胞,建立永生化的人宫颈上皮细胞株,再用胶原筏培养方法分析永生化人宫颈上皮细胞在器官培养的生长特点,将其与体内CIN的形态进行了比较。结果：人宫颈上皮细胞经HPV16和18DNA转染后,可以使其变成一种永生化细胞。细胞生物学研究显示永生化细胞是一种前恶性细胞。胶原筏培养显示水生化人宫颈上皮细胞的生长行为类似体内CIN。结论：HPV感染主要影响宫颈癌的发生的早期阶段。     

人乳头状瘤病毒不同型别与宫颈病变的相关性研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）不同型别与宫颈病变性质的关系。方法应用ＰＣＲ技术和原位杂交方法对６１例宫颈上皮内瘤（ＣｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＮｅｏｐｌａｓｉａＣＩＮ）和１２例宫颈鳞癌（ＳＣＣ）进行ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ检测。结果ＰＣＲ检测结果显示ＨＰＶ６、１１主要分布于低度鳞状上皮内病变（６１９％）和一部分ＣＩＮⅡ中（２０％），而在ＣＩＮⅢ和ＳＣＣ中检测不到；ＨＰＶ１６、１８的检出率随ＣＩＮ级别增高而增加，在ＳＣＣ中高达８３３％。原位杂交结果显示在低度鳞状上皮内病变中，地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ杂交物质在核中均呈细颗粒状，为“游离型”。上述杂交阳性信号形态亦出现于ＣＩＮⅡ的所有ＨＰＶ６Ｂ／１１及部分ＨＰＶ１６、１８型感染中，而ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌及部分ＣＩＮⅡ中，其杂交阳性信号均为非颗粒状的“整合型”。结论低度鳞状上皮内病变是以ＨＰＶ６、１１低危型为主的多型别病毒的繁殖性感染，ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌为ＨＰＶ１６、１８高危型病毒的整合型感染，而在ＣＩＮⅡ中存在着ＨＰＶ６，１１和ＨＰＶ１６，１８的繁殖性感染及ＨＰＶ１６，１８的整合型感染     

人巨细胞病毒协同人乳头瘤病毒16型诱导宫颈上皮细胞癌变的研究

目的 探讨宫颈癌的发生发展与人乳头头瘤病毒（ＨＰＶ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）协同感染的关系。方法 应用我室建立的ＨＰＶ１６永化化的人宫颈上皮细胞系,转染ＨＣＭＶ即早基因（ＩＥ）。结果 ＨＣＭＶ整合在细胞染色体中,协同ＨＰＶ１６促进宫颈上皮细胞的恶性转化,在裸鼠中形成肿瘤。结论 ＨＣＭＶ ＩＥ基因可协同ＨＰＶ１６恶性转化宫颈上皮细胞,并对其协同机制进行了细胞和分子生物学的探讨。     

多重聚合酶链反应在人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

采用多重聚合酶反庆技术，在一个反应中同时加入３对人乳头瘤病毒型特异性引物，１次可完成３个型别ＨＰＶＤＮＡ扩增。其结果显示，在有ＨＰＶ感染的样品中，ＨＰＶ１６占７２．７％，ＨＰＶ１８占１６．４％，其他型占１０．９％，从正常宫颈上皮细胞到宫颈癌变细胞，ＨＰＶ１６ＤＮＡ检出率随病变程度的加重而增加（８．８％－２２．２％－６０．％），反了宫颈癌与ＨＰＶ１６感染关系密切；在正常宫颈和良性病变宫颈上皮细胞中未     

应用原位PCR技术检测阴茎癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的：研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与阴茎癌的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术对４６例阴茎癌组织中的ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：３３例阴茎癌中检测到了ＨＰＶＤＮＡ（７１．７％），其中２９例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性（６３．０％），６例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性（１３．０％），２例ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性，４例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６阴性；２例淋巴结转移癌，３例癌旁不典型增生组织和１例癌旁增生组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性。结论：阴茎癌与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染有密切关系，原位ＰＣＲ技术是一项敏感性高、特异性强的技术。     

妊娠期人乳头瘤病毒的感染状况及母婴传播的研究

应用聚合酶链反应检测孕妇尖锐湿疣（ＣＡ）组织、无ＣＡ孕妇宫颈分泌物、外周血及羊水、新生儿咽分泌物、脐血中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染及母婴传播。结果表明：ＣＡ组织中ＨＰＶＤＮＡ阳性率为９０．３２％，以ＨＰＶ６／１１型为主；无ＣＡ孕妇宫颈分泌物中ＨＰＶＤＮＡ阳性率为３５．７１％，以ＨＰＶ１６／１８型为主；孕妇血中ＨＰＶＤＮＡ阳性率为５７．６９％；母婴间经产道垂直传播率为４４．４４％，血性经胎盘传播传播率为６０％。说明ＨＰＶ不仅存在于ＣＡ组织中，还存在于无ＣＡ孕妇生殖道及外周血中，母婴间传播途径除产道外，还有胎盘传播     

卵巢上皮性肿瘤p16抑癌基因突变与HPV感染的研究

采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，对同一卵巢上皮性肿瘤石蜡包埋组织中ｐ１６基因（第二外显子）突变及人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染进行相关性研究。并与正常卵巢组织进行对照。结果，２８例卵巢上皮性肿瘤组织中ｐ１６基因突变１５例，突变率为５３．６％（１５／２８），其中７例伴有ＨＰＶ１６型或ＨＰＶ１８型感染，占突变率的４６．７％。在卵巢上皮性肿瘤组ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ阳性率为５３．６％（１５／２８），对照组ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ阳性率为５．６（１／１８），二者比较有显著性差异。提示：卵巢上皮性肿瘤中ｐ１６基因突变与ＨＰＶ１６、１８型感染有关。ＨＰＶ１６、１８型感染与卵巢上皮肿瘤密切相关     

人乳头状瘤病毒感染与宫颈癌前病变的关系

目的 探讨人乳头状瘤毒（ＨＰＶ）感染与宫颈湿疣、癌前病变的相关性。方法 对１７９例宫颈细胞涂片异常患者行宫颈多点活检,病理形这观察,其中１２８例同时采用ＰＣＲ方法检测ＨＰＶ－ＤＮＡ,１０例行原位杂交分析。结果（１）形态学观察：宫颈湿疣多为扁平型（９７．３％）;除表现经典的诊断性控空细胞（３９．７％）外,国可见异型性明显的非典型性控空细胞（６０．３％）;宫颈湿疣常伴宫颈上皮内肿瘤（ＣＩＮ,４２．５％     

地高辛配基人乳头瘤病毒DNA探针的制备和应用

采用非同位素标记物地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ），通过随机引物法制成地高辛配基人乳头瘤病毒ＤＮＡ（Ｄｉｇ－ＨＰＶＤＮＡ）探针。用斑点杂交法检测宫颈组织中的ＨＰＶＤＮＡ。经试验证明，该探针检测ＨＰＶＤＮＡ的灵敏度与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针相近。经与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针同时对６５份临床标本进行比较，结果附合率达９５％以上。３５份宫颈癌组织中ＨＰＶ１６／１８型检出率为３４．２９％。Ｄｉｇ标记的探针检测ＨＰＶＤＮＡ特异性高，重复性好，背景显色低。     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒DNA的原位杂交研究

应用地高辛标记的ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ探针分别在４８宫颈癌组织上进行原位杂交检测ＨＰＶＤＮＡ，结果ＨＰＶＤＮＡ阳性２３例，其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ例，ＨＰＶ１８ＤＮＡ４例，未见ＨＰＶ６ＤＮＡ和ＨＰＶ１１ＤＮＡ阳性，ＨＰＶＤＮＡ主要见于凹空细胞和癌细胞的细胞核中，少部分见于癌细胞浆中，我们的结果表明原位杂交可用来研究宫颈组织中ＨＰＶ的存在及分型，同时也证实了宫颈癌的发生和某些     

食管癌发生中人乳头瘤病毒感染与Langerhans细胞的关系

为了解人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）对免疫Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的影响及ＨＰＶ的致癌机理，采用地高辛配基标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１ＤＮＡ及ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ探针和抗Ｓ－１００蛋白抗体，分别用原位分子杂交和免疫组化ＬＳＡＢ法，检测了４０例食管鳞状细胞癌中ＨＰＶＤＮＡ序列及分布，重点观察了ＨＰＶ感染时局部癌旁上皮内Ｓ－１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞的分布、数量及形态改变。结果显示：在有ＨＰＶ感染时，上皮内ＬＣ数量明显少于无感染者。上皮内残留的少数ＬＣ的分布及形态也有改变。我们认为，ＨＰＶ可能通过减少局部的ＬＣ，破坏机体局部的免疫监视系统，并与其它致癌因素协同作用，进而导致食管癌的发生。     

人乳头瘤病毒16型E6E7反义RNA抑制宫颈癌细胞恶性？…

目的 研究癌基因的特异性反义ＲＮＡ对癌细胞生长繁殖和恶性程度的影响。方法 用逆转录病毒载体将人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）－６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ导入ＨＰＶ－１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌细胞株ＣａＳｋｉ中，观察该细胞在导入反义ＲＮＡ后其表型特征和在裸鼠体内致癌能力的变化。结果 ＨＰＶ－１６ Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能降低宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ的生长速率，抑制其在软琼脂上的集落形成能力，并能明显地抑制其在裸鼠体内的致癌能力     

人乳头瘤病毒16型E6E7反义RNA抑制宫颈癌细胞恶性表型的作用

目的研究癌基因的特异性反义ＲＮＡ对癌细胞生长繁殖和恶性程度的影响。方法用逆转录病毒载体将人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ导入ＨＰＶ－１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌细胞株ＣａＳｋｉ中，观察该细胞在导入反义ＲＮＡ后其表型特征和在裸鼠体内致癌能力的变化。结果ＨＰＶ－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能降低宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ的生长速率，抑制其在软琼脂上的集落形成能力，并能明显地抑制其在裸鼠体内的致癌能力。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ＨＰＶ－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能使宫颈癌细胞中病毒ＨＰＶ－１６Ｅ６基因的表达水平降低。结论ＨＰＶ－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能使宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ恶性表型逆转；由其引起的癌细胞中ＨＰＶ－１６癌基因表达水平的降低可能是癌细胞表型逆转的原因之所在；ＨＰＶ－１６癌基因的表达水平对维持癌细胞的恶性表型起着重要作用。     

食管鳞癌HPV感染与病毒致癌基因E6的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与食管鳞状细胞癌的关系。方法：采用多重引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）的免疫组化技术、对１０４例食管鳞癌进行ＨＰＶ ＤＮＡ和病毒癌基因Ｅ６蛋白检测。结果：ＨＰＶ ＤＮＡ阳性者占５０．９６％（５３／１０４），其中ＨＰＶ１６型ＤＮＡ４９．０６％（２６／５３），ＨＰＶ１８型 ＤＮＡ５．６％（３／５３），ＨＰＶ６／１１ ＤＮＡ７．５％（４／５３）；两上或三个类型的混合感染占３７．     

pcDNA3/HPV16 E6真核表达质粒的构建及裸DNA注射动物实验观察

目的探讨ＨＰＶ１６Ｅ６基因ＤＮＡ诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法利用基因工程技术构建了ＨＰＶ１６Ｅ６真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／Ｅ６，脂质体法转染Ｃｏｓ７细胞，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫组化技术检测抗体产生及抗原表达。结果被转染的Ｃｏｓ７细胞表达ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白免疫小鼠产生抗ＨＰＶ１６Ｅ６抗体。结论这一结果为ＨＰＶ１６相关宫颈癌治疗性ＤＮＡ疫苗的研制提供了资料。     

斑点分子杂交检测HPV感染与宫颈癌的关系

采用ＤＮＡ－ＤＮＡ分子杂交技术，对经病理组织学确诊的慢性宫颈炎，宫颈癌和正常宫颈的宫颈活检组织中ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ进行同源序列检测，结果表明ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ的检出率在正常宫颈均为０；在慢性宫颈炎分别为１６．０９％，１２．６４％，１１．４９％，３．４５％；在宫颈癌组分别为３．９６％，１．９８％，４６．５３％，７．９２％。在宫颈癌组     

应用原位PCR技术检测阴茎癌组织中人乳头瘤病 …

研究人乳头瘤病毒与阴茎癌的关系，方法：应用原位ＰＣＲ技术对４６例阴茎癌组织中的ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：３３例阴茎癌中检测到了ＨＰＶ ＤＮＡ，其中２９例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性，６例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性，２例ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性，４例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６阴性，２例淋巴结转移癌，３例癌旁不典型增生组织和１例癌旁增生组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性。     

肺癌组织中人乳头瘤病毒16和18型DNA相关序列的检测

采用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）及用ＰＣＲ法制备生物素标记探针的斑点杂交法,检测５０例肺癌、１８例肺良性病及４例胎肺组织中高危险型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６、１８型ＤＮＡ相关序列,以探讨ＨＰＶ与肺癌之间发生的关系。结果３２％的肺癌组织中检测出ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ,其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性１０例,ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性５例,１例同时含ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ。２７例鳞癌组织中ＨＰＶＤＮＡ阳性率为４８．２％。而肺良性病组织及胎肺组织均未发现ＨＰＶＤＮＡ。ＨＰＶＤＮＡ呈阳性的肺癌患者绝大多数为重度吸烟者。提示原发性肺癌的发生可能与ＨＰＶ感染有关。     

巢式聚合酶链反应/酶切图谱分型检测宫颈刮片标本中人乳头瘤病毒DNA

采用巢式聚合酶链反应／酶切图谱分型检测重庆地区２５６例宫颈刮片标本中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ，全部病例均作病理学检查。其中，３０例宫颈湿疣，年龄２１～４３岁；５４例Ⅲ级宫颈上皮内瘤（ＣＩＮⅢ），６０例宫颈鳞癌，年龄２７～６４岁；１１２例正常宫颈，...     

人乳头状瘤病毒18型E6E7基因诱导人胚食管上皮永生化

目的为研究病毒和肿瘤的关系,用人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１８型Ｅ６Ｅ７基因感染胎儿食管上皮,建立一株新的人食管上皮永生化细胞株（ＳＨＥＥ）。方法ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７腺病毒伴随病毒（ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ））载体的构建;胚胎食管组织培养,ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ感染,继续培养传代。用光镜、电镜检查其形态;聚合酶链反应（ＰＣＲ）、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）检查该病毒片段;用软琼脂培养和裸鼠接种检查致瘤性。结果经过长时间的传代培养,ＳＨＥＥ的表型仍保留原代上皮细胞培养的特征,表现为单层生长和锚锭依赖性生长,在软琼脂培养不形成克隆,接种裸鼠未成瘤。ＳＨＥＥ细胞系电镜检查可见张力原纤维,免疫组织化学检查细胞角质蛋白阳性,证实为鳞状上皮来源。ＦＩＳＨ和ＰＣＲ检测显示有ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因。结论用ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７基因建立食管上皮永生化细胞株ＳＨＥＥ,支持ＨＰＶ１８可能和食管癌病因有关的观点,可进一步用以研究食管癌的病因和发病机制。