X线辐照激活NLRP3炎性体引起损伤肺组织细胞焦亡(pyroptosis)北大核心CSCD

目的建立放射性肺损伤模型,研究胱天蛋白酶1(caspase-1)依赖的程序性细胞死亡即细胞焦亡(pyroptosis)在放射性肺炎发病机制中的作用。方法 BALB/c小鼠胸腔15 Gy X线辐照5 d,处死小鼠。HE染色观察肺组织形态变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测辐照后肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织γ组蛋白2AX(γ-H2AX)、抗原KI-67(ki67)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1和含CARD结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC/TMS-1)的表达情况,实时荧光定量PCR检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的m RNA水平,采用免疫组织化学染色检测肺组织NLRP3、caspase-1和TMS1的表达情况,使用caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1活性;ELISA检测血清IL-1β和IL-18水平。结果辐照后小鼠肺泡壁毛细血管扩张充血,炎性细胞浸润,肺泡壁增厚;肺组织细胞TUNEL染色阳性指数升高,γ-H2AX和ki67的表达增强,提示细胞DNA遭到破坏且细胞增殖活性降低;肺组织细胞中IL-6、IL-8、TNF-α和MCP-1 m RNA水平增加;血清IL-1β和IL-18水平增加,肺组织NLRP3、caspase-1、ASC/TMS-1表达水平增加,caspase-1活性增强。结论辐照后,激活小鼠肺组织NLRP3炎性体诱导肺组织的细胞发生pyroptosis。     

金丝桃苷抑制肺炎支原体肺炎模型小鼠的损伤

目的:探讨金丝桃苷对肺炎支原体肺炎(MPP)小鼠的保护作用及其调控机制。方法:选取BALB/c小鼠40只,随机分为对照组、模型组、金丝桃苷低剂量(12.5 mg/kg)组和金丝桃苷高剂量(50 mg/kg)组。以肺炎支原体国际标准株(MPFH)滴鼻造模,第2天开始治疗,治疗3 d后进行后续实验。HE染色检测肺组织病理改变;全自动生化分析仪检测血清中C-反应蛋白(CRP)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,检测肺组织中活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平;ELISA和Western blot方法分别检测血清和肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;RT-q PCR和Western blot方法检测NLRP3、ASC和caspase-1的mRNA和蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠的肺组织中出现炎症反应、肺泡间质增宽等病理变化;CRP、ALT、AST、LDH和CK-MB水平显著上调(P0.05);ROS水平显著上升,而SOD和GSH水平显著下降(P0.05);IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平显著上调(P0.05);NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达也显著升高(P0.05)。与模型组相比,金丝桃苷组中的上述症状明显减轻,且高剂量比低剂量组的缓解效果更明显。结论:金丝桃苷能够抑制MPP小鼠的损伤,这可能与其抑制氧化应激和NLRP3炎性体的激活有关。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

miR-133靶向NLRP3对小鼠Kupffer细胞炎性活化的影响

目的:探究微小RNA-133(miR-133)靶向核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)对小鼠库普弗(Kupffer)细胞(KCs)炎症活化的影响。方法:从小鼠肝脏中分离KCs并鉴定。鉴定成功后用1 mg/L脂多糖(LPS)诱导KCs,并分别转染miR-133 inhibitor和miR-133 mimic。采用RT-qPCR检测细胞中miR-133和NLRP3的mRNA水平;ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blot实验检测细胞中NLRP3、含胱天蛋白酶募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)蛋白水平;TargetScan查找NLRP3 mRNA的3’UTR与miR-133的结合位点,并经双萤光素酶报告基因检测试剂盒鉴定。结果:72 h时KCs体积较24 h时大,边界清晰,形态基本稳定;碳素墨水实验观察到细胞中有大量黑色颗粒,证明该细胞有较强的吞噬能力,为KCs。1 mg/L LPS诱导后KCs中miR-133水平降低,NLRP3 mRNA和蛋白、caspase-1...     

亚麻木酚素通过抑制TXNIP和激活NLRP3炎症小体减轻慢性间歇性低氧小鼠肾脏炎症损伤

目的:探讨亚麻木酚素/开环异落叶松脂素二葡萄糖苷(SDG)对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肾脏炎症损伤的改善作用及潜在机制。方法:将SPF及雄性C57BL/6N小鼠分为正常组、CIH组和SDG治疗组。记录小鼠体重变化;HE染色观察肾脏组织形态;生化检测血清肌酐和血尿素氮的含量;羟胺法和硫代巴比妥酸比色法测定肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;免疫组织化学检测硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达情况;ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β等促炎因子的含量;Western blot检测TXNIP、NLRP3炎症小体相关蛋白[NLRP3、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1]、IL-1β和IL-18的蛋白表达情况。结果:3组小鼠的体重和肾脏指数无显著差异(P>0.05)。HE染色显示,CIH组肾小球形态不规则,肾小管上皮细胞肿胀,胞浆模糊,出现轻微的水泡变性,经SDG治疗后有所改善。与正常组相比,CIH组小鼠血清肌酐及炎症因子TNF-α、...     

基于NLRP3信号通路探讨活血通脉颗粒对急性心肌梗死大鼠免疫炎症紊乱的干预作用

目的探讨活血通脉颗粒对急性心肌梗死(AMI)大鼠在免疫炎症紊乱的干预作用。方法大鼠42只随机选6只为空白对照组,其余36只大鼠AMI造模。建模后存活大鼠30只随机分成5组,阳性药物对照组,AMI组,活血通脉颗粒低、中、高剂量组,每组6只。空白对照组、AMI组每天灌胃生理盐水,阳性药物对照组184 mg/(kg·d)灌胃辛伐他汀,活血通脉颗粒低、中、高剂量组按生药2.7、5.4、10.8 g/(kg·d)灌胃,每日1次,连续28d。同时建立人H9C2心肌细胞缺氧模型,缺氧处理21 h,加药处理。HE染色观察心肌组织形态学变化;MTS检测心肌细胞活力变化;ELISA检测心肌组织和心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平;q RT-PCR检测心肌组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、接头蛋白ASC(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)m RNA水平;蛋白免疫印迹检测心肌组织中NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶酶原(pro-caspase-1)、caspase-1蛋白水平。结果大鼠和人心肌细胞模型中,AMI组心肌细胞破坏、死亡严重,形态及结构损害严重。随着活血通脉颗粒剂量的增加,心肌细胞坏死现象减弱,逐渐恢复形态。大鼠模型中,与空白对照组相比,AMI组心肌组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白、pro-caspase-1蛋白表达量升高(P 0.05)。与AMI组相比,活血通脉颗粒低剂量组心肌组织中ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白表达量降低;活血通脉颗粒中、高剂量组心肌组织中IL-1β、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白、pro-caspase-1蛋白表达量降低,并呈剂量依赖效应(P 0.05)。人心肌细胞中加药6 h时IL-1β、TNF-α的变化与大鼠模型中类似。结论活血通脉颗粒可能通过减弱NLRP3信号通路、抑制促炎因子表达,实现对AMI大鼠的保护作用。     

浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关

目的 探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制.方法 采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1...     

缺血后处理通过抑制细胞焦亡减轻大鼠肺缺血/再灌注引发的肝损伤

目的：探讨细胞焦亡在大鼠肺缺血/再灌注（I/R）引发的肝脏损伤中的作用及缺血后处理（I-post-C对其干预的保护机制。方法：将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照（control）组、I/R组、I/R+I-post-C组及I/R+INF39（细胞焦亡抑制剂）组,每组8只。普通光镜下观察肝脏组织形态;用相关化学试剂盒测定丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和caspase-1活性;采用ELISA的方法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平;使用Western blot及免疫荧光法检测肝组织细胞焦亡相关蛋白的表达情况。结果：与control组相比,I/R组肝小叶结构紊乱,部分肝细胞出现水肿、空泡样变性和坏死,炎症细胞浸润,血清ALT和AST水平显著升高（P<0.01）;细胞焦亡相关指标核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)和gasdermin D N端片段（GSDMD-N）蛋白表达增加（P<0.05）;NLRP3的免疫荧光表达显著增强（P<0.01）;caspase-1活性显著上升（P<0...     

右美托咪定通过调控TXNIP/NLRP3炎症小体途径减轻脂多糖诱导的小鼠肠道屏障损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)调控硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径减轻脂多糖(LPS)诱导的小鼠肠道屏障损伤的机制。方法:实验小鼠分为对照组、模型组、DEX组、DEX+pcDNA3.1组和DEX+TXNIP组,每组12只。除对照组外,其余各组小鼠腹腔注射15mg/kg LPS,对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。在LPS诱导肠道屏障损伤前30 min,DEX组小鼠腹腔注射30μg/kg DEX,DEX+pcDNA3.1组和DEX+TXNIP组在DEX组基础上分别皮下注射5 nmol pcDNA3.1空载体及5 nmol pcDNA3.1-TXNIP过表达载体,对照组和模型组小鼠则皮下注射等体积生理盐水。收集小鼠血清及肠道组织样本,采用ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肠道组织形态,采用相应试剂盒检测肠道组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平,采用RT-qPCR和Western blot分别检测肠道组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平。结果:模型组肠道组织完整性被破坏,出现明显的细胞脱落现象,炎症浸润明显,病理评分升高(P0.05);DEX组和DEX+pcDNA3.1组肠道组织完整,但出现明显的炎症浸润现象,与模型组相比病理评分降低(P0.05);DEX+TXNIP组肠道完整性被破坏,出现细胞脱落现象,炎症浸润明显,与DEX+pcDNA3.1组相比病理评分升高(P0.05)。与对照组相比,模型组血清中IL-1β和TNF-α水平升高,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性降低(P0.05);与模型组相比,DEX组和DEX+pcDNA3.1组血清中IL-1β和TNF-α水平降低,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平降低(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性升高(P0.05);分别与DEX组和DEX+pcDNA3.1组相比,DEX+TXNIP组血清中IL-1β和TNF-α水平升高,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性降低(P0.05)。结论:DEX通过抑制TXNIP/NLRP3炎症小体途径减轻LPS诱导的小鼠肠道屏障损伤。     

金丝桃苷对支原体肺炎模型小鼠TLR-4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金丝桃苷对支原体肺炎模型小鼠TLR-4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。方法60只BALB/c小鼠通过随机数表法分为对照组(Control)、模型组(MP)及金丝桃苷组(Hyp),每组20只,采用支原体菌液滴鼻感染建立支原体肺炎小鼠模型。HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化;全自动生化分析仪检测血清中C-反应蛋白（CRP）、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平,检测肺组织中活性氧簇（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）水平;酶联免疫方法（ELISA）检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western blot方法检测各组小鼠肺组织TLR-4、MyD88与NF-κB蛋白的表达。结果 金丝桃苷能够减轻MP感染小鼠肺组织的炎症反应;降低MP感染小鼠血清CRP、ALT、AST、LDH和CK-MB表达水平（P<0.01）;降低血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量（P<0.01）;降低MP感染小鼠肺组织ROS...     

NLRP1炎性体促进高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡

目的研究含pyrin结构域NOD样受体家族1(NLRP1)炎性体对高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡(pyroptosis)的调控作用。方法将培养的人肾小球系膜细胞(HRMC)分为4.5 mg/m L葡萄糖处理的高糖组和10μg/m L胰岛素处理的高胰岛素组,分别处理0、12、24、48、72、96 h。在各时间点,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞焦亡,实时定量PCR检测HRMC的NLRP1、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和胱天蛋白酶1前体(pro-caspase-1)的mRNA水平,Western blot法检测NLRP1、IL-1β、TNF-α、caspase-1的蛋白水平;高糖高胰岛素培养的HRMC中转染NLRP1小干涉RNA(si NLRP1),采用以上方法检测上述指标的变化情况。结果高糖高胰岛素处理48 h后,HRMC增殖能力下降、焦亡细胞数目显著增加,NLRP1、pro-IL-1β、TNF-α和pro-caspase-1 mRNA和NLRP1、IL-1β、TNF-α和caspase-1蛋白水平均显著增加;si NLRP1下调HRMC中NLRP1水平后,高糖高胰岛素培养的HRMC细胞焦亡减少,IL-1β、TNF-α和caspase-1表达显著降低。结论高糖高胰岛素处理促进NLRP1的激活从而增加肾小球系膜细胞焦亡和炎症反应,下调NLRP1的表达可抑制高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡和炎症反应。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

Wnt5a正反馈调控二氧化硅诱导的小鼠肺泡巨噬细胞铁死亡

目的 探讨Wnt5a信号在二氧化硅诱导的小鼠巨噬细胞铁死亡过程中的调控作用。方法 设置C57BL/6小鼠生理盐水组和二氧化硅处理组,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。免疫荧光细胞化学染色法检测小鼠BALF细胞Wnt5a、核因子κB p65(NF-κB p65)和Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达;ELISA检测小鼠血浆和BALF上清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,Western blot法检测(50、100、150、200、300)μg/mL二氧化硅刺激下RAW264.7细胞磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)、Wnt5a、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、裂解型胱天蛋白酶1(c-caspase-1)、消皮素D(gasdermin D)以及铁死亡蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)和转铁蛋白(transferrin)的表达;CellROX~?荧光探针负载法检测活性氧(ROS)的水平;实时荧光定量PCR检测Wnt5a、...     

绿原酸通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究绿原酸对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响及活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)信号通路在其中的作用。方法:建立脓毒症小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照(地塞米松)组及低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)绿原酸组,每组各12只,另取12只正常小鼠作为对照组。计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;HE染色观察肺组织病理改变;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;ELISA法测定肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,相应试剂盒检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平;Western blot法检测TXNIP、NLRP3蛋白、caspase-1及细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D的N末端片段(GSDMD-N)的表达水平。结果:相较于对照组,模型组肺泡间隔增厚,肺泡内及肺泡间质水肿,炎症细胞数量显著增加,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平均显著升高(P0.05);而模型组SOD水平较对照组显著降低(P0.05)。相较于模型组,绿原酸低、中、高剂量组肺泡间隔增厚及水肿情况有所减轻,炎症细胞数量显著减少,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平显著降低(P0.05);而模型组SOD水平较对照组显著升高(P0.05);绿原酸高剂量组与阳性对照组上述指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:绿原酸可能通过下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路表达水平,抑制炎症分子产生及细胞焦亡发生,有效减轻脓毒症小鼠肺损伤。     

CD38蛋白下调炎症因子的表达减轻脂多糖联合D-氨基半乳糖诱导的急性肝脏损伤

目的研究CD38蛋白在脂多糖联合D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)所诱发的小鼠急性肝损伤中的作用。方法野生型C57BL/6小鼠(WT)和CD38基因敲除小鼠(CD38 KO)随机分为正常对照组,模型早期组和模型晚期组。在造模后2 h和6 h处死动物,检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),实时荧光定量PCR检测肝脏组织炎症因子的表达,HE染色检测组织病理改变。结果在LPS/D-GalN诱导的模型小鼠中,与WT小鼠相比,CD38 KO小鼠血清ALT和AST水平显著升高,肝脏组织中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及γ干扰素(IFN-γ)的表达水平显著升高;病理组织学检测显示肝脏组织出血严重,肝实质细胞空泡变形明显增多,肝细胞死亡显著增加。结论 CD38蛋白通过下调炎症因子的表达,减少肝细胞死亡,减轻LPS/D-GalN诱导的急性肝脏损伤。     

白花丹素减轻免疫球蛋白A肾病大鼠肾损伤的作用及机制

目的探究白花丹素(PLB)对免疫球蛋白A肾病(IgAN)大鼠肾脏损伤的缓解作用及其相关的机制。方法牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳法建立IgAN大鼠模型,并通过灌胃给予PLB(50,100和200 mg·kg-1)处理。收集尿液检测蛋白尿,取心尖血检测血清肌酸酐(SCr)和尿素氮(BUN)。HE染色观察病理变化,TUNEL染色检测细胞凋亡;专用试剂盒检测肾组织部位氧化应激水平。另设N-乙酰半胱氨酸(NAC)200 mg·kg-1组,Western印迹和ELISA同步检测肾组织IL-18和IL-1β及其前体表达水平,Western印迹法检测肾组织NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)、接头蛋白凋亡相关点状蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组肾组织尿蛋白、SCr、BUN浓度,细胞凋亡率和氧化应激水平升高,PLB(50、100和200 mg·kg-1)处理可显著降低肾组织尿蛋白、SCr、BUN含量,降低细胞凋亡及氧化应激水平。同时,NAC 200 mg·kg-1处理可显著降低氧化应激水平,降低IL-18和IL-1β及其前体蛋白表达,降低NLRP3/ASC/胱天蛋白酶1的蛋白表达;与200 mg·kg-1PLB处理有着一致的调控作用。结论 PLB可通过调控ROS抑制NLRP3激活,减轻IgAN大鼠肾脏损伤。     

右美托咪定通过Akt/m TOR自噬通路介导NLRP3炎症小体失活而减轻脓毒症大鼠肠损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)是否通过蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体失活从而减轻脓毒症大鼠肠损伤。方法:随机数字法对50只大鼠分组:假手术组、模型组、DEX组(0、3和6 h腹腔注射10μg/kg DEX)、DEX+NVP-BEZ235组(在DEX组基础上腹腔注射30 mg/kg NVP-BEZ235)及DEX+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在DEX组基础上腹腔注射15 mg/kg 3-MA),每组10只。除假手术组外,其余各组盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型,建模后给药。HE染色观察肠道组织形态,对结肠标本进行结肠大体形态损伤指数(CMDI)评分;ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化检测肠道组织中自噬相关蛋白beclin-1和LC3-II蛋白水平;Western blot检测肠道组织中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1及其前体pro-caspase-1的蛋白水平。结果:模型组大鼠肠道组织完整性被破坏,细胞脱落和炎症浸润现象明显;DEX组大鼠肠道组织完整,仅出现部分细胞脱落和炎症浸润现象;DEX+NVP-BEZ235组和DEX+3-MA组大鼠肠道完整性被破坏,细胞脱落和炎症浸润明显。与假手术组相比,模型组大鼠CMDI评分,血清中IL-1β和TNF-α水平,肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平升高(P0.05);与模型组相比,DEX组大鼠CMDI评分,血清中IL-1β和TNF-α水平,肠道组织中NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平降低(P0.05),肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率及p-Akt/Akt和pmTOR/mTOR蛋白水平升高(P0.05);与DEX组相比,DEX+NVP-BEZ235组和DEX+3-MA组血清中IL-1β和TNF-α水平及肠道组织中NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率及p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白水平降低(P0.05)。结论:DEX能够通过激活Akt/mTOR通路促进自噬而介导NLRP3炎症小体失活,从而减轻脓毒症大鼠肠损伤。     

SO_2衍生物通过NLRP3炎症小体促进气道上皮细胞炎症发生

目的:观察二氧化硫(SO_2)衍生物亚硫酸钠和亚硫酸氢钠对支气管上皮细胞NLRP3炎症小体活化的影响。方法:使用不同浓度的SO_2衍生物作用于支气管上皮细胞16HBE,通过流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成,Western blot检测细胞内NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)的分泌水平,结合细胞毒性实验(MTT)确定2 mmol/L为SO_2衍生物的实验浓度。采用RNA干扰技术沉默16HEB细胞NLRP3基因及ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理16HBE细胞,通过流式细胞术检测细胞内ROS, Western blot和ELISA分别检测NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及IL-1β分泌水平。结果:与对照组比较, 2 mmol/L和4 mmol/L SO_2衍生物组细胞内ROS水平、 NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及细胞上清液中IL-1β水平明显升高(P0.05)。与2 mmol/L SO_2衍生物组比较,NLRP3 siRNA组细胞内的NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平明显降低(P0.05),且细胞上清液中IL-1β的浓度明显下降(P0.05),ROS无明显变化;NAC组NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平及IL-1β浓度均明显下降(P0.05)。结论:SO_2衍生物激活支气管上皮细胞NLRP3炎症小体,促进IL-1β生成。     

青藤碱抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症状

目的 探讨青藤碱对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的变化。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、 AA模型组、(100、 200、 400)mg/kg青藤碱组和100 mg/kg雷公藤组，每组10只。除对照组外，其余均采用Freund完全佐剂建立AA模型。建模后12 d,对照组和模型组给予等量生理盐水，其余各组分别灌胃给予相应药物，每天1次，连续16 d。通过多发性关节炎和关节肿胀度评价AA大鼠关节情况，Western blot法检测滑膜组织NLRP3蛋白水平，免疫组织化学染色法检测滑膜组织NLRP3表达和分布；ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 与对照组比较，模型组多发性关节炎明显，关节肿胀度增加，青藤碱各治疗组和雷公藤组大鼠多发性关节炎和关节肿胀度明显降低；青藤碱各治疗组滑膜组织NLRP3蛋白表达减弱，血清中IL-1β、 IL-6、 TNF-α水平显著下降。结论 青藤碱通过抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善AA大鼠关节炎症。     

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β

 目的: 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法: 预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot 法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果: 与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P< 0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加 (P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h 细胞上清液IL-1β含量显著增加(P< 0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论: Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。