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1.
目的 基于转化生长因子β1/Ras相关C3肉毒素底物1(transforming growth factor β1/rasrelated C3 botulinum toxin substrate,TGF-β1/Rac1)信号通路,探究山柰酚对肺癌细胞阿霉素耐药敏感性的作用机制。方法 将H1299/R细胞分为空白组(control group,NC)、山柰酚低、中、高剂量组、TGF-β1抑制剂组、Rac1抑制剂组、山柰酚高剂量+TGF-β1抑制剂组、山柰酚高剂量+Rac1抑制剂组以及山柰酚高剂量+TGF-β1抑制剂+Rac1抑制剂组。MTT检测细胞生长抑制率和细胞耐药敏感性;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞侵袭;免疫印迹检测细胞中TGF-β1和Rac1蛋白表达。结果 和NC组相比,山柰酚低、中、高剂量组、TGF-β1抑制剂组及Rac1抑制剂组的H1299/R细胞半数抑制浓度(half in... 相似文献
2.
目的:探讨灵孢多糖(GLPS)对M146L细胞APP mRNA表达的影响,寻找潜在的能够抑制Aβ分泌的中药单体,以达到治疗阿尔茨海默病(AD)的目的。方法:以可过表达β淀粉样蛋白42(Aβ42)的β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/突变型早老素1(PS1)双转基因的CHO细胞(M146L细胞)为体外AD治疗药物筛选模型。经不同浓度的GLPS(100,200,300μg/mL)处理后,采用MTT比色法检测细胞活性;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测灵孢多糖对M146L细胞APP mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测M146L细胞中APP,Aβ42,Bax, Bcl-2等蛋白表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测M146L细胞外Aβ42的表达情况。结果:低、中剂量GLPS组细胞活性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量GLPS组相比于对照组,细胞活性明显下降(P<0.05)。相比于对照组,低、中、高剂量GLPS组APP mRNA,APP,Aβ42<... 相似文献
3.
目的 探讨褐藻聚合酚(PFFE-A)对大肠癌细胞增殖与侵袭的影响,以及其对转化生长因子β1(TGF-β1)及母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3(Smad2/3)通路的调控作用。方法 细胞分组:依次以50、100、150μmol·L-1的小、中、大剂量的PFFE-A干预细胞,另设立正常对照组细胞。5-乙炔基-2’脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;异种种植结肠癌裸鼠模型检测细胞的体内生长与转移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关基因的表达;Western blotting检测细胞中TGF-β1、p-Smad2/3的表达水平。结果 与正常对照组比较,PFFE-A小、中、大剂量组细胞的增殖率、侵袭细胞数、肿瘤瘤体质量、病灶转移比例、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的mRNA的表达、TGF-β1和p-Smad2/3的表达明显下降(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)... 相似文献
4.
目的 通过观察肿瘤标志物免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交技术平台(TM-i FISH)富集并计数肺癌脑膜转移患者脑脊液中的恶性肿瘤细胞,探讨一种新的检测脑脊液中恶性肿瘤细胞的方法。方法 选取6例经脑脊液细胞学或头增强MRI扫描确诊的肺癌脑膜转移患者,每例患者经腰椎穿刺获取脑脊液20 m L(共10份),其中7.5m L应用TM-i FISH技术富集并计数脑脊液中的恶性肿瘤细胞,10 m L行脑脊液细胞学检查,2.5 m L行脑脊液生物化学检查。结果 10份脑脊液标本均顺利完成上述检测,其中7份标本通过TM-i FISH技术计数示肿瘤细胞数为3~1 823个/7.5 m L脑脊液,3份脑脊液细胞学检查发现肿瘤细胞,9份脑脊液生物化学检查结果蛋白量高于正常值。3例患者治疗后应用TM-i FISH技术再次计数脑脊液恶性肿瘤细胞,2例患者计数较治疗前减少。结论 TM-i FISH技术可以富集并计数肺癌脑膜转移患者脑脊液中恶性肿瘤细胞,可能成为肺癌脑膜转移的诊断和疗效评价方法。 相似文献
5.
目的 探讨紫草素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌A549细胞迁移、上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法 (1)紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L-1作用A549细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1水平。(2)设细胞对照组、TGF-β19 pmol·L-1组、TGF-β1+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L-1组,作用A549细胞24 h,分别采用划痕和Transwell实验检测细胞划痕愈合百分率和迁移细胞数,Western印迹法检测N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、E-钙黏蛋白、Smad4、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白磷酸化水平。结果 (1)与细胞对照组比较,紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L-1作用于A549细胞24 h后均未显著改变细胞培养上清液中TGF... 相似文献
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目的:基于磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成激酶3β(GSK3β)信号通路探讨芥子酸(SA)抗β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)致PC12细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠PC12细胞随机分为对照组、Aβ组(Aβ1-422μmol/L)、Aβ+SA组(Aβ1-422μmol/L+SA 100μmol/L)、Aβ+SA+LY组[Aβ1-422μmol/L+SA 100μmol/L+LY294002(PI3K抑制剂)10μmol/L]、Aβ+LY组(Aβ1-422μmol/L+LY294002 10μmol/L)、LY组(LY294002 10μmol/L)。除对照组、LY组外,其余各组细胞均以Aβ1-42复制损伤模型。培养24 h后,使用显微镜观察各组细胞的形态,采用MTT法检测各组细胞的存活率;采用Western blotting法检测各组细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达情况... 相似文献
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目的 研究益气散结汤联合氟尿嘧啶对食管癌患者的治疗效果及对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)的影响。方法 选取2018年1月~2019年12月收治的80例行手术治疗的食管癌患者为研究对象,随机分为试验组(n=40)与对照组(n=40)。对照组术后给予氟尿嘧啶治疗,试验组术后给予益气散结汤联合氟尿嘧啶治疗。比较两组患者治疗前后IGF-1、TGF-β1表达水平的变化,分析两组患者临床疗效和不良反应的发生率。结果 试验组总有效率(70.00%)明显高于对照组(52.50%),差异具有统计学意义(P <0.05);治疗前,两组患者血清TGF-β1、IGF-1表达水平无明显差异(P> 0.05);治疗后,两组患者血清中TGF-β1、IGF-1表达水平均明显降低(P <0.05),且试验组降低更明显... 相似文献
8.
目的 研究双硫仑(DSF)对转化细胞生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞的上皮间质转化(EMT)的抑制作用及其可能的作用机制。方法 构建EMT模型,采用MTT实验检测细胞活性,通过细胞划痕、基质粘附、内皮细胞粘附、transwell小室实验测定DSF对细胞迁移、粘附和侵袭能力的作用。Western blot分析双硫仑对EMT模型中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平的影响;qPCR检测DSF对Vimentin、E-cadherin以及EMT相关干细胞标志基因乙醛脱氢酶-1(ALDH-1)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和Octamer转录因子4(OCT4)等的mRNA表达水平的影响。结果 DSF可呈现剂量依赖性抑制肿瘤细胞的EMT过程,IC50=80μM。与对照组相比,DSF对TGF-β1诱导的A549发生EMT后迁移、粘附、侵袭能力的增强具有明显的抑制作用;DSF显著降低Vimentin的表达,促进E-cadherin的表达,且能显著降低干细胞标志基因ALDH-1、SOX2... 相似文献
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目的探讨丹参酮ⅡA对人肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法实验分为空白对照组(A组,等体积培养基),顺铂组(B组,10μg/mL顺铂),丹参酮ⅡA低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组,5,10,20μmol/L),各组细胞以加入相应药物或培养基处理。采用MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验法观察细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、整合素(integrin)α2、integrin β1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达水平。结果与A组比较,B组及C1组、C2组、C3组细胞处理24,48,72 h时的增殖率均显著降低,24 h时的... 相似文献
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目的:探究中药活性单体白藜芦醇对β-淀粉样蛋白(amyloid-beta,Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用及对相关蛋白表达调控的影响。方法:用不同浓度(1,5和10μmol·L-1)白藜芦醇处理Aβ1-42诱导的PC12细胞,应用MTT法检测PC12细胞增殖情况,ELISA法检测PC12细胞内Aβ1-42含量变化,qPCR法检测晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1 (low-density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1)在基因水平的变化,应用Western Blot法检测RAGE和LRP1在蛋白水平的变化。结果:白藜芦醇对PC12细胞增殖的IC10值是11.2μmol·L-1。白藜芦醇能够改善Aβ1-42诱导的细胞增殖活力下降,同时白藜芦醇能够降低Aβ1-42在... 相似文献
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目的 分析血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、人干扰素epsilon(INF-ε)及microRNA-21在宫颈癌及癌前病变中的表达变化及与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染负荷量的相关性。方法 选择医院2020年1月~2021年1月诊治的宫颈癌和宫颈癌前病变患者各80例,将其分别纳入宫颈癌组、癌前病变组。按照1∶1原则在同期选择体检健康的女性80例,将其纳入对照组。检测血清TGF-β1、INF-ε及microRNA-21水平及HPV感染情况。比较三组血清TGF-β1、INF-ε及microRNA-21水平及不同HPV阳性情况。分析血清TGF-β1、INF-ε及microRNA-21水平与HPV负荷量相关性。结果 对照组、宫颈癌前病变组、宫颈癌组血清TGF-β1、INF-ε及microRNA-21水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);其中宫颈癌患者血清TGF-β1、microRNA-21水平分别高于宫颈癌前病变组、... 相似文献
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目的 探讨血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、叉头框蛋白M1(FOXM1)mRNA表达水平与支气管哮喘(BA)患儿气道重塑的影响。方法 选取2020年8月至2021年9月我院收治的110例BA患儿作为本次研究对象,依据《儿童支气管哮喘诊断与防治指南(2016年版)》将110例BA患儿分为急性发作组(n=56)和临床缓解组(n=54)。对两组的血清TGF-β1、FOXM1 mRNA、气道重塑相关指标(T/D、WA)、肺功能相关指标(FEV1、FEV1/FVC)水平进行检测并比较。采用Pearson分析急性发作期BA患儿血清TGF-β1、FOXM1 mRNA水平和肺功能及气道重塑指标的相关性。通过多因素Logistic回归分析方法分析影响BA患儿急性发作的因素,建立风险评估模型,经受试者工作特征曲线(ROC)评估模型诊断效能。结果 与临床缓解组相比较,急性发作组血清TGF-β1、FOXM1 mRNA水平和T/D、WA水平较高,FEV<... 相似文献
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目的:探讨黄柏提取物对Aβ1-42诱导的海马神经细胞的影响及分子机制。方法:分离培养海马神经细胞,将其分为对照组、模型组、模型+黄柏低、中、高浓度组、模型+si-NC组、模型+si-X失活的特异性转录本(XIST)组、模型+黄柏高浓度+pcDNA组、模型+黄柏高浓度+pcDNA-XIST组。MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Western blot法检测Cleaved-caspase3蛋白表达;RT-qPCR检测XIST表达水平。结果:模型组细胞存活率、S期细胞比例降低,G0-G1期细胞比例、XIST表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase3表达水平升高(P<0.05)。不同浓度黄柏提取物处理及抑制XIST表达后,细胞存活率、S期细胞比例升高,G0-G1期细胞比例、XIST表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase3表达水平降低(P<0.05)。过表达XIST减弱了黄柏提取物对Aβ1-42诱导的海马神经细胞增... 相似文献
14.
目的通过应用免疫组化方法研究胃癌患者原发灶转移及邻近非肿瘤胃黏膜等不同组织的基质金属蛋白酶-2(MMP2)和整合素β1亚单位分布特征,旨在探讨整合素β1、MMP2的表达与胃癌侵袭性的关系,并指导临床治疗及判断胃癌患者的预后。方法采用免疫组织化学通用二步法检测整合素β1和MMP2在64例胃癌原发灶及其淋巴结转移灶中的表达情况。结果整合素β1在正常胃小凹表层上皮细胞膜表面呈均质性表达,并沿基底膜呈连续性线状分布;在胃癌组织的细胞浆和细胞膜呈棕黄色表达;淋巴结转移灶中呈非均质性棕黄色表达。在胃癌组织中的阳性表达率明显高于邻近的正常黏膜组织(P<0.05);在不同的组织学类型整合素β1阳性表达也有差异,在高中分化组为40%,在低分化组中为84.6%,可见,在低分化癌明显高于高中分化癌(P<0.01);整合素β1的阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无明显相关性(P>0.05)。胃癌组织中MMP2阳性主要表达于胃癌组织的细胞浆和细胞膜内,呈棕黄色。MMP2表达阳性在胃癌组织明显强于邻近正常黏膜组织(P<0.05);浸透黏膜层组中的表达强于未浸透组(P<0.05);有淋巴结转移组的阳性表达高于无淋巴结转移组;不同的组织学类型中阳性表达也有差异,在低分化癌明显高于高中分化癌(P<0.01)。MMP2在胃癌中的表达与性别、年龄、肿瘤大小无关。结论整合素β1和MMP2的表达与胃癌的分化程度、侵润程度、淋巴结转移状况等临床病理因素密切相关,而与年龄、性别、肿瘤的大小等无关,其表达的检测对评估胃癌淋巴结转移程度有重要的意义,还可以作为估计患者预后及术后治疗的生物学指标。 相似文献
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目的探讨柚皮素对体外培养的Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关信号通路的调控机制。方法将生长至对数期的PC12细胞接种于培养瓶培养24 h,弃掉旧培养液后,随机分为空白组(培养液)、模型组(150μmol·L-1 Aβ25-35)、实验组-1(4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ25-35)和实验组-2(10μmol·L-1 U0126+4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ25-35),使每组细胞浓度为20μmol·L-1(除空白组),给药24 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果空白组、模型组、实验组-1、实验组-2的细胞总凋亡率分别为(4.13±0.55)%,(34.70±1.66)%,(11.26±0.77)%,(23.52±0.80)%;Bax蛋白表达量分别是0.24±0.06,0.76±0.03,0.21±0.02,0.68±0.04;Bcl-2蛋白表达量0.61±0.04,0.20±0.04,0.55±0.03,0.34±0.02;Caspase-3蛋白表达量0.13±0.03,0.40±0.03,0.21±0.04,0.31±0.02;p-ERK1/2蛋白表达量0.86±0.03,0.48±0.06,0.78±0.04,0.50±0.07。模型组与空白组、实验组与模型组和实验组-2与实验组-1比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论柚皮素可通过丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)信号通路改变Bax、Caspase-3、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达量,抑制细胞凋亡,对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用。 相似文献
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目的:研究槲皮素通过p38MAPK信号通路调节Aβ25-35引起PC12细胞线粒体损伤的作用。方法:20μmol·L–1的Aβ25-35作用PC12细胞作为AD细胞毒性损伤模型,0.1μmol·L–1的17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)和50μmol·L–1金雀异黄素(Genistein,Gen)作为阳性对照药,分别给予低剂量槲皮素(40μmol·L–1)、中剂量槲皮素(60μmol·L–1)和高剂量槲皮素(80μmol·L–1),同时设定SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)预处理组(Aβ25-35+10μmol·L–1 SB203580)。线粒体荧光探针(Mito-Tracker-red)检测线粒体形态;JC-1检测线粒体膜电位;荧光素酶发光法检测ATP含量;免疫荧光染色法检测pp38MAPK蛋白的表达;West... 相似文献
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目的探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对人肾小球系膜细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达及细胞增殖的影响。方法体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至38代细胞随机分为4组:正常对照组(加含5%胎牛血清DMEM培养基),增殖对照组(EGF组,加10μg/L的EGF),一般干预组[VD组,加10-8mol/L 1,25(OH)2D3],增殖干预组[EGF+VD组,加10μg/L EGF及10-8mol/L1,25(OH)2D3],均作用48 h。流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot检测各组PCNA表达的情况。结果 (1)细胞周期。与正常对照组相比,EGF组G1期细胞明显减少,S、G2/M期细胞增多,增殖指数(PI)较高;VD组G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,PI较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组G1期细胞增多,S、G2/M期细胞减少,PI较低,差异均有统计学意义。(2)系膜细胞中PCNA蛋白的表达。与正常对照组相比,EGF组PCNA的表达较高,VD组PCNA的表达较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组PCNA的表达较低。结论 1,25(OH)2D3通过阻滞细胞周期、抑制PCNA的表达,从而抑制人肾小球系膜细胞的增殖。 相似文献
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目的 探究肝特异性敲除AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)对小鼠胰腺功能和糖代谢相关基因的影响。方法 将AMPKα1/α2flox/flox小鼠分为空白组(给予普通饮食)和模型组(给予60%高脂胆碱缺乏饲料饲养),每组8只;另取AMPKα1/α2flox/flox/Alb-Cre+小鼠8只,设为敲除组,给予60%高脂胆碱缺乏饲料饲养,造模16周。用试剂盒检测小鼠的血脂水平和肝功能。用转录组测序检测小鼠胰腺中的差异表达基因。用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测小鼠差异基因的表达情况。结果 空白组、模型组和敲除组的三酰甘油分别为(0.94±0.11)、(0.71±0.14)和(1.05±0.17)mmol·L-1,高密度脂蛋白分别为(1.62±0.07)、(0.44±0.08)和(0.90±0.06)mmol·L-1,谷草转氨酶分别为(7.02±5.87)、(15.60±3.15)和(22... 相似文献
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目的:观察活性维生素D3(1,25-(OH)2D3)对糖尿病大鼠肾小球足细胞标志蛋白Nephrin,间质转化标志蛋白Snail及间质标志蛋白Desmin表达的影响,探讨1,25-(OH)2D3在上皮间质转化中的作用。方法:24只链脲菌素诱导的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(DM)和1,25-(OH)2D3治疗组(DD),后者给与1,25-(OH)2D3按3 ng·100 g-1·d-1皮下注射。另以10只大鼠作为对照组(NC)。于6周检测血糖(BG)、24 h尿蛋白(24 h UP)、尿液足细胞(UPC)。处死大鼠,PT-PCR及Westernbolt分别测定肾小球Nephrin、Snail、Desmin mRNA和蛋白质的表达。结果:DM组BG、24 h UP较NC组显著升高,而UPC与NC组相比无显著差异。DM组肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达水平较NC组显著降低,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达显著增加。DD组BG、UPC与DM组相比无显著差异,而24 h UP较DM组显著降低,肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达较DM组升高,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达降低。结论:1,25(OH)2D3上调Nephrin的表达,并减少Snail、Desmin的表达,可抑制上皮间质转化,减轻肾损伤。 相似文献