补肾温阳中药对哮喘小鼠Foxp3-mRNA表达及CD4~+CD25~+调节性T细胞水平的影响研究

目的建立哮喘样气道炎症小鼠动物模型。观察补肾温阳中药对哮喘小鼠Foxp3-mRNA表达与活化以及对CD4+CD25+调节性T细胞的数量、分化与功能的影响,探讨补肾温阳法在防治过敏性哮喘气道炎症的作用机制。方法 100只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘模型组、中药干预组及中药+抗体干预组,除正常对照组外,其余各组均以卵白蛋白(OVA)致敏激发方法建立小鼠哮喘模型,中药+抗体干预组小鼠于激发前30min事先给予抗IL-10&抗TGF-β抗体滴鼻。同时,中药干预组组、中药+抗体干预组于实验的第1天至第21天,每只小鼠给予补肾温阳中药(用淫羊藿、巴戟天、补骨脂免煎颗粒配制500μl)灌胃qod,哮喘模型组、正常对照组予等量的生理盐水作对照。观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数结果;取小鼠左肺组织作病理切片观察炎症改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组BALF上清细胞因子IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度及血清IgE水平;分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4+CD25+Treg细胞比例;用RT-PCR方法检测转录因子Foxp3-mRNA的表达。结果哮喘模型组、中药+抗体干预组小鼠BALF中细胞总数以及淋巴细胞、中性粒细胞和EOS百分比分别均高于正常对照组、中药干预组(分别为P<0.01、P<0.05、P<0.05和P<0.01),而巨噬细胞百分比与正常对照组、中药干预组相比较,则分别有所降低(P<0.05)。正常对照组、中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度分别高于哮喘模型组(P<0.01)和中药+抗体干预组(P<0.05);中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度低于正常对照组(P<0.05);哮喘模型组BALF上清细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)浓度高于中药+抗体干预组(P<0.05)。血清IgE水平正常对照组、中药干预组均分别低于哮喘模型组(均为P<0.01)及中药+抗体干预组(均为P<0.05);中药干预组血清IgE水平低于正常对照组(P<0.05)。哮喘模型组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平较正常对照组、中药干预组均明显减低,差异有统计学意义(分别为P<0.01,P<0.05);与哮喘模型组、中药+抗体干预组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平显著增高,差异有统计学意义(均为P<0.05);与正常对照组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.01);与哮喘模型组比较,中药+抗体干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞、FoxP3-mRNA、细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)均参与了支气管哮喘的发病过程,补肾温阳中药可通过上调CD4+CD25+调节性T细胞数量、诱导FoxP3-mRNA的表达与活化、降低血清IgE水平及增加IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量等机制来达到减轻哮喘炎症的作用。     

定喘汤对哮喘模型小鼠肺组织炎性病变及Th2细胞相关炎性因子的影响

目的:研究定喘汤对哮喘模型小鼠气道炎症及气道阻力的干预作用及其可能的作用机制。方法:104只雄性C56BL/6小鼠随机均分为生理盐水对照组、定喘汤对照组、哮喘模型组、定喘汤治疗组,每组26只。哮喘模型组与定喘汤治疗组小鼠予卵蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型。末次激发24h后,每组取10只小鼠测定气道阻力;每组取8只小鼠右下肺组织行HE染色及肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫组化观察肺组织炎性病变,同时取左上肺组织提取蛋白,行蛋白印迹试验(westernblot)检测肺组织中GATA-3蛋白表达;每组取8只小鼠采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量,计数BALF及外周血中炎性细胞。结果:与生理盐水对照组比较,哮喘模型组小鼠气道阻力显著升高,肺组织出现炎性病变,TNF-α表达升高,BALF及外周血的炎性细胞比例上升,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量升高,肺组织中GATA-3蛋白表达水平上升。与哮喘模型组比较,定喘汤治疗组小鼠气道阻力显著降低,肺组织炎性病变缓解,TNF-α表达降低,BALF及外周血的炎性细胞比例下降,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量降低,肺组织中GATA-3蛋白表达水平下降。上述指标在生理盐水对照组与定喘汤对照组间无显著性差异。结论:定喘汤可减轻哮喘小鼠的气道炎性病变,降低气道高反应性,可能与经GATA-3介导抑制Th2细胞相关炎性因子有关。     

小青龙汤对支气管哮喘小鼠肺泡灌洗液中炎性细胞及IL-4,IFN-γ水平的影响

目的:探讨中药方剂小青龙汤对小鼠哮喘模型气道炎症白介素-4(IL-4)及干扰素(IFN-γ)表达的影响.方法:30只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、小青龙汤治疗组(C组).B,C组采用卵白蛋白(OVA) ip致敏与雾化吸人激发制作哮喘模型,在实验21 ～28 d,A,B组以生理盐水15 mL· kg-1 ig,C组激发前1 hig小青龙汤15 g·kg-1.于OVA激发结束后24 h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数炎性细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数目,并测定BALF上清液中IL-4和IFN-γ水平变化.结果:小青龙汤的干预治疗能显著降低小鼠BALF中炎性细胞总数及嗜酸粒细胞数量;BALF上清液中IFN-γ水平明显升高,IL-4水平显著下降.C组与A组、B组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:小青龙汤能明显降低哮喘小鼠BALF中炎性细胞数量,影响细胞因子水平变化,从而改善哮喘气道炎症.     

朝医麻黄定喘汤通过WNT-5A对支气管哮喘小鼠的影响

目的讨论麻黄定喘汤对支气管哮喘的作用机制,其机制是否与WNT-5A有关。方法将50只BABL/c小鼠随机分成正常组、模型组、麻黄定喘汤低剂量组、麻黄定喘汤高剂量组、地塞米松组(10只/组)。通过致敏(OVA、氢氧化铝),激发(OVA、NS)建立小鼠哮喘模型。末次激发24 h后解剖小鼠取肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。左肺组织进行苏木精-伊红(HE)、PAS染色观察肺组织中病理学改变。采用免疫吸附(ELISA)法检测BALF中炎性细胞种类及炎性细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL13)、干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果与正常组相比,模型组小鼠的BALF中炎性细胞数增多,IL-4、IL-5、IL-13水平明显增高(P0.01)。与模型组相比,麻黄定喘汤高、低剂量组和地塞米松组小鼠的BALF中的炎性细胞数、IL-4、IL-5、IL-13水平。结论麻黄定喘汤可能通过WNT-5A抑制支气管哮喘气道炎症的发生。     

红景天对支气管哮喘小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子的影响

目的:观察红景天对支气管哮喘小鼠Th17/Treg T细胞及其细胞因子白介素IL-17、IL-23、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达影响,探讨其可能作用机制。方法:选择8周龄健康雌性BALB/C小鼠,随机分为3组:对照组、支气管哮喘模型组、红景天组,每组10只;支气管哮喘模型采用卵清蛋白致敏方法构建,小鼠支气管灌洗液细胞(BALF)计数,ELISA法测定肺组织中IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1水平,流式细胞术测定外周血CD_4~+IL-17~+与FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+的比例,HE染色观察肺组织病理形态学变化。结果:与对照组比较,模型组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及肺匀浆IL-17、IL-23、CD_4~+IL-17~+占CD_4~+比例明显升高(P<0.05),肺匀浆IL-10、TGF-β1及FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+比例明显降低(P<0.05),肺组织炎症反应增加;与模型组比较,红景天组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及IL-17、IL-23、CD_4~+IL-17~+占CD_4~+比例明显降低(P<0.05),IL-10、TGF-β1及FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+比例明显升高(P<0.05),肺组织炎症反应减轻。结论:红景天可有效抑制哮喘小鼠气道炎症反应,其作用可能与调控哮喘小鼠Th17/Treg T细胞及其细胞因子IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1表达有关。     

小青龙汤对哮喘小鼠气道重塑过程中TGF-β1和IL-13表达的影响

目的探讨小青龙汤对哮喘小鼠肺组织气道重塑干预作用及对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及白细胞介素-13(Interleukin 13,IL-13)表达的影响。方法 40只雌性小鼠随机分成正常对照组、哮喘模型组、小青龙汤组和强的松组。采用卵蛋白(OVA)致敏2周及OVA滴鼻(共18次)激发6周建立哮喘小鼠模型。小青龙汤组和强的松组分别于每次激发前30 min采用小青龙汤和强的松干预,共6周。HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化,Image-Pro Plus 6.0彩色图像分析系统测定支气管壁及平滑肌厚度,免疫组化法和实时定量PCR检测肺组织中TGF-β1和IL-13表达。结果哮喘模型组发生支气管管壁增厚、炎症细胞浸润、平滑肌增生等气道重塑的特征性改变。小青龙汤组和强的松组支气管壁及平滑肌厚度低于哮喘模型组(P0.05)。免疫组化结果显示:正常组肺组织TGF-β1和IL-13阳性较弱,主要分布在支气管壁;与正常组比较,哮喘模型组TGF-β1和IL-13呈强阳性表达于支气管壁。与哮喘模型组相比较,小青龙汤组和强的松组显著抑制TGF-β1和IL-13基因表达(P0.05)。结论 TGF-β1和IL-13高表达可能在哮喘气道重塑中起重要作用。小青龙汤改善哮喘小鼠气道重塑可能通过抑制肺组织TGF-β1和IL-13表达而实现。     

加味小青龙汤对哮喘大鼠肺—肠黏膜免疫影响及相关作用机制研究

目的 通过加味小青龙汤对慢性持续期哮喘大鼠肺肠组织病理学及肺泡灌洗液、肠黏液中IL-6、IL-10、SIgA表达的影响，探讨加味小青龙汤对肺-肠黏膜免疫影响及相关作用机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠随机分别为空白组、哮喘模型组、加味小青龙汤组、益生菌组、加味小青龙汤+益生菌组，每组各10只，采用苏木-伊红(HE)染色观察肺组织、肠道组织的病理学改变，同时对收集到的支气管肺泡灌洗液、肠黏液采用酶联免疫吸附实验(ELISA),测定其中IL-6、IL-10、SIgA的表达水平。结果 (1)肺组织病理学改变与肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、SIgA的表达：与空白组相比，哮喘模型组气道上皮出现部分缺损及脱落，管腔狭窄，形状不规则，平滑肌有部分增厚，气道周围有大量炎性细胞浸润。与空白组相比，哮喘模型组大鼠肺泡灌洗液中IL-6的表达明显升高而IL-10、SIgA的表达显著下降，差异均有统计学意义(P<0.01);与哮喘模型组相比，加味小青龙汤组、益生菌组、加味小青龙汤+益生菌组的IL-6表达显著降低，IL-10、SIgA的表达有所升高，差异均有统计学意义(P<0.05或P<...     

芹菜素对哮喘小鼠转录激活蛋白3及Th_2型细胞因子抑制作用的实验研究

目的研究芹菜素对哮喘小鼠2型辅助性T细胞(Th2)优势应答的抑制作用及其机制。方法选择32只6周龄SPF级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只:正常组(A组)、哮喘组(B组)、芹菜素高剂量治疗组〔C组,20 mg/(kg.d)〕、芹菜素低剂量治疗组〔D组,2 mg/(kg.d)〕。卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型。药物治疗组以芹菜素溶于1%二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射。小鼠末次雾化吸入24 h后,用小鼠肺功能仪检测气道对乙酰胆碱(Ach)阻力;苏木精-伊红(HE)染色观察气道炎症浸润情况;支气管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色计数嗜酸性粒细胞百分比;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清总IgE、BALF液中Th2型细胞因子〔白细胞介素(IL)4、IL-13〕;免疫印迹(Western blot)测定肺组织中信号转导和转录激活蛋白3(GATA-3)表达水平。结果与正常组比较,哮喘组Ach气道阻力、气道炎症、BALF细胞计数和嗜酸性粒细胞分类计数、血清总IgE、BALF中IL-4、IL-13以及肺组织GATA-3蛋白表达明显增高(P0.05)。与哮喘组比较,芹菜素治疗组各项指标均明显降低(P0.05),而且高、低剂量组之间差异有统计学意义(P0.05)。结论芹菜素通过降低肺组织GATA-3和Th2细胞因子的表达而降低哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性,具有潜在的临床应用前景。     

细芥化痰平喘凝胶贴膏对哮喘小鼠气道炎症的影响

[目的]观察细芥化痰平喘凝胶贴膏对哮喘小鼠气道炎症的影响,探讨其治疗支气管哮喘的作用机制。[方法]选取60只健康雄性BALB/c小鼠,随机分为正常组、哮喘模型组、细芥化痰平喘凝胶贴膏低剂量组、中剂量组、高剂量组、细芥敷贴丸组,每组10只。除正常组外,其余各组采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发建立小鼠哮喘模型,取小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行炎性细胞的总数及炎细胞分类计数检测,苏木素-伊红（HE）染色、丽春红酸性品红-苯胺蓝（Masson）染色观察肺组织病理学变化。采用酶联免疫吸附法（ELLSA）检测小鼠BALF中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)的含量。[结果] 1)OVA成功致敏和激发,建立小鼠哮喘模型。2）与正常组相比,BALF中炎症细胞总数及以嗜酸性粒细胞（EOS）为主的各分类炎症细胞均显著增加（P<0.01）,细芥化痰平喘凝胶贴膏低中高3个剂量组、细芥敷贴丸组均能不同程度地抑制炎性细胞总数及炎症细胞的增加（P<0.01）,细芥敷贴丸组、细芥化痰平喘凝胶贴膏中剂量组两组对白细胞及EOS等炎...     

基于PI3K信号通路探讨肺“俞募配穴”艾炷灸对哮喘小鼠RORγt/Foxp3表达的影响

目的:观察肺"俞募配穴"艾炷灸对哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中相关炎性因子含量及对肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响,并探讨其机制。方法:将60只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、LY剂组、电针组、艾炷灸组,每组12只。采用卵蛋白(OVA)致敏法复制哮喘小鼠模型。LY剂组予尾静脉注射PI3K抑制剂LY294002;电针组、艾炷灸组分别予电针、艾炷灸"肺俞""中府",1次/d,连续2周。ELISA法检测小鼠血清和BALF中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)含量,荧光定量PCR法及免疫组织化学法检测肺组织中PI3K、RORγt、Foxp3的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清和BALF中IgE及IL-4含量、肺组织中PI3K及RORγt mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01),血清和BALF中IFN-γ含量、肺组织中Foxp3 mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,LY剂组、电针组及艾炷灸组血清和BALF中IgE及IL-4含量、肺组织中PI3K及RORγt mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01,P0.05),血清和BALF中IFN-γ含量、肺组织中Foxp3 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01)。结论:肺"俞募配穴"艾炷灸能通过PI3K信号通路调节RORγt和Foxp3表达,从而减轻气道炎性反应,控制哮喘发作。     

芍药甘草汤防治支气管哮喘机理研究

目的：探讨芍药甘草汤防治支气管哮喘模型小鼠的作用机制。方法：采用卵蛋白（OVA）致敏剂制备小鼠哮喘模型,随机分正常对照组、模型对照组、地塞米松组、芍药甘草汤低、中、高剂量组6组,流式细胞术检测外周血中调节性T细胞CD4＋CD25＋百分比,观察肺组织形态学的改变,肺泡灌洗液（BLAF）中的细胞计数及分类。结果：模型组小鼠肺组织有明显炎性细胞浸润,渗出物增加,水肿明显,说明造模成功。芍药甘草汤中、高剂量组CD4＋CD25＋T细胞比例显著升高（P〈0.05）,低剂量组与模型对照组比较没有统计学意义。病理学组织观察示芍药甘草汤中剂量组、地塞米松组炎症性变化较芍药甘草汤高、低剂量组及模型组明显减轻。芍药甘草汤中、高剂量组与模型对照组相比较,细胞总数及EOS、Lym比例均降低（P〈0.05）。芍药甘草汤低剂量组与模型对照组比较没有差异（P〉0.05）。结论：芍药甘草汤可以抑制OVA致敏支气管哮喘小鼠各类炎性细胞的增生,调节肺组织中氧化/抗氧化系统的平衡,减轻氧自由基对肺组织结构的氧化损伤程度,调节哮喘小鼠体内CD4＋CD25＋T的优势表达,芍药甘草汤对支气管哮喘有一定的预防及治疗作用。     

悬灸治疗中性粒细胞哮喘的细胞免疫学机制研究

目的:探讨悬灸对中性粒细胞哮喘相关信号因子的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组与悬灸组,每组8只。用鼻腔滴入脂多糖、腹腔注射卵白蛋白及雾化吸入卵白蛋白引喘制备中性粒细胞哮喘模型。造模成功后,地塞米松组按0.5mg/kg予以腹腔注射地塞米松,悬灸组悬灸"肺俞""脾俞""肾俞""膻中",40min/次,均每日1次,共14d。治疗结束后,统计各组支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数与分类,流式细胞术检测脾及外周血辅助性T淋巴细胞17(Th 17)含量,酶联免疫法检测BALF中的白介素17(IL-17)含量,免疫组化法及免疫印迹法检测右肺下叶维甲酸相关孤儿受体γ的胸腺异构体(ROR-γt)蛋白的表达水平,real-time PCR法检测ROR-γt mRNA的表达水平。结果:模型组与正常组比较,气道有大量炎性细胞浸润,中性粒细胞显著升高(P0.01),BALF中IL-17含量显著增高(P0.01),脾与外周血中Th 17含量显著增多(P0.01),肺组织中ROR-γt蛋白与mRNA的表达水平显著升高(P0.01)。地塞米松组与模型组比较,上述指标皆显著降低(P0.01);悬灸组与模型组比较,上述指标亦显著降低(P0.05,P0.01)。与悬灸组比较,地塞米松组外周血Th 17含量更低(P0.05)。结论:悬灸可以通过抑制ROR-γt转录因子表达,下调炎性反应因子IL-17含量,降低气道内中性粒细胞水平,从而达到减轻中性粒细胞哮喘炎性反应的作用,其疗效与地塞米松相当。     

神香草提取物防治支气管哮喘的作用机制

目的研究神香草提取物对支气管哮喘小鼠的防治作用。方法采用卵白蛋白致敏和滴鼻激发建立小鼠哮喘模型,给予神香草提取物进行干预后,检测小鼠外周血中白细胞总数(Leu)、嗜酸性粒细胞数(Eos)和中性粒细胞数(Neu)。用ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素4(IL-4)和干扰素(IFN-γ)以及血清中特异性免疫球蛋白(IgE)的水平。观察不同剂量的神香草提取物对哮喘小鼠肺组织病理变化的影响。结果神香草提取物可剂量依赖性的显著降低外周血中Leu、Eos、Neu数量,能显著降低小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-4和血清中IgE的含有量,升高IFN-γ的含有量,减小IL-4/IFN-γ比值,并改善肺组织病理学的炎症。结论神香草提取物对支气管哮喘小鼠炎症因子的释放,Th1/Th2免疫应答的失衡具有一定的调节作用。     

玉屏风散抗OVA致小鼠过敏性哮喘的作用研究

目的:观察玉屏风散(YPFS)抗OVA致小鼠过敏性哮喘的作用.方法:建立OVA诱导的小鼠过敏性哮喘模型,第0,14天,分别腹腔注射20 μg OVA,自21 d时开始雾化吸入0.5％ OVA溶液20 min,连续7d.空白对照组给予同体积的生理盐水.YPFS低、中、高剂量组每天分别灌胃给予玉屏风散生药3.25,6.5,13 g·kg-1,模型组和空白对照组给予同体积生理盐水,阳性药组从雾化期开始腹腔注射地塞米松(DEX)1 mg·kg-1.最后一次OVA雾化后24h取血,进行血中嗜酸性粒细胞(Eos)计数,血清中IgE测定;收集支气管灌洗液(BALF)进行细胞计数、分类;取右侧肺组织研磨匀浆,检测细胞因子IL-4,IFN-γ,左侧肺上叶做病理组织学观察.结果:模型组血中Eos及血清中IgE显著增高,BALF中出现大量Eos,肺组织病理显示支气管浆液性渗出,小管上皮细胞脱落,管腔狭窄或闭塞,且肺泡间隔变宽增厚,支气管周围淋巴细胞浸润.肺组织匀浆中IL-4增加,IFN-γ/IL-4显著降低,YPFS各剂量组能降低血中Eos及血清中IgE含量,减少BALF中Eos,减轻上述模型的病理改变.同时降低肺组织匀浆中IL-4含量,提高IFN-γ/IL-4.结论:玉屏风散对OVA导致的过敏性哮喘有明显的抑制作用,表现为降低哮喘小鼠的血中Eos,IgE分泌,肺组织炎症细胞的浸润.同时降低肺匀浆中IL-4的水平,提高IFN-γ/IL-4,抑制Th细胞向Th2极化.     

大黄素对哮喘小鼠肺组织形态及BALF中炎性细胞因子分泌水平的影响

目的:研究大黄素对哮喘小鼠肺部炎症及肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞因子分泌水平的影响,初探其作用机理。方法:采用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏加激发法建立支气管哮喘小鼠模型。20只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、大黄素组及阳性药对照组,实验结束后观察各组小鼠整体情况和肺组织病理学改变,收集肺泡灌洗液进行细胞因子检测。结果:模型组小鼠可见呼吸急促、喘息、打喷嚏、抓耳挠鼻、弓背、大小便失禁等症状,BALF中白介素(Interleukin,IL)-4、IL-5、IL-17A含量明显升高(P0.01);肺组织病理学结果为支气管及血管周围大量炎性细胞浸润,肺泡结构不完整,伴支气管上皮损坏甚至纤维化等明显改变。经大黄素治疗后,哮喘小鼠上述症状、体征及病理改变均有所改善,且炎性细胞因子水平明显降低。结论:大黄素能够在一定程度上改善支气管哮喘小鼠肺部的症状及病理变化,抑制IL-4、IL-5、IL-17A的分泌。     

化痰活血方对哮喘小鼠IL-17A和IL-13的影响

目的研究化痰活血方(川芎、当归、白芍等)对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素IL-17A、IL-13和肺组织血管内皮生长因子-2(VEGFR2)表达的影响。方法小鼠用卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏,并予2%OVA雾化吸入激发的方式建立哮喘小鼠模型,HE染色观察肺组织病理炎症,PAS染色观察肺组织杯状细胞增生情况,酶联免疫法(ELISA)测定BALF中细胞因子IL-17A和IL-13的量,免疫印迹法(Western blot)测定蛋白VEGFR2在肺组织中的表达。结果哮喘组肺部的炎症评分、杯状细胞增生、BALF中IL-17A和IL-13与蛋白VEGFR2的量均明显高于正常组(P0.05,P0.01)。与哮喘组比较,化痰活血方组小鼠肺组织病理炎症和杯状细胞增生均减轻,BALF中IL-17A和IL-13的量降低(P0.05,P0.01),而肺组织中蛋白VEGFR2的表达无明显变化(P0.05)。结论化痰活血方可能通过调节IL-17A和IL-13途径来缓解哮喘小鼠症状。     

黑种草保健茶水浸液对OVA诱导小鼠过敏性哮喘的作用

目的研究黑种草保健茶水浸液对卵蛋白(OVA)诱导小鼠的过敏性哮喘的作用,并初步探讨其机制。方法将SPF级雄性BALB/c小鼠随机分成正常组、OVA模型组、地塞米松组及黑种草保健茶低、中、高剂量组,建立OVA诱导的小鼠过敏性哮喘模型,第1天腹腔注射50μg OVA、1 mg氢氧化铝凝胶,第14天腹腔注射50μg OVA,第27～29天以5%OVA溶液雾化激发,每次20 min,正常组小鼠给予同体积PBS致敏、雾化;黑种草保健茶低、中、高剂量组剂量分别为20、40、80 mg/kg,第15～26天给药,正常组、OVA模型组小鼠给予同体积PBS溶液,地塞米松组小鼠每天腹腔注射0.5 mg/kg药物,最后1次OVA雾化后24 h取血,进行血清IgE、IgG1水平测定。收集支气管灌洗液(BALF),进行炎性细胞分类、计数。取未灌注的小鼠右侧肺上半部分,进行病理组织学观察;右侧肺下半部分研磨匀浆,检测BALF、肺组织匀浆中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、IL-12、IFN-γ水平。结果黑种草保健茶可促进小鼠体质量增长,降低BALF中炎症细胞数,减少血清中IgE、IgG1水平及BALF肺组织中Th2细胞因子水平,提高Th1、Treg细胞因子水平,减轻肺组织病理学变化。结论黑种草保健茶可抗OVA诱导小鼠过敏性哮喘,其机制可能是通过调节BALF、肺组织中Th1/Th2/Treg的失衡,从而减少嗜酸性粒细胞等炎性细胞的浸润和血液中IgE、IgG1的合成。     

哮喘小鼠肺组织中SDF-1的表达及意义

目的探讨哮喘小鼠肺组织中基质细胞衍生因子1(SDF-1)的表达与气道炎症的关系。方法清洁级雌性昆明小鼠随机分为对照组、哮喘组,每组10只。建立卵白蛋白致敏的哮喘小鼠模型,用免疫组织化学方法检测各组小鼠肺组织中SDF-1的表达,分别用HE染色和Wright-Giemsa染色方法对各组小鼠气道炎症细胞及支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞情况进行评估。结果哮喘组小鼠的支气管黏膜上皮细胞破坏、增生,管周有大量的炎细胞浸润,SDF-1的表达明显高于对照组;哮喘组BALF中炎细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞明显高于对照组;SDF-1表达量与气道炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞呈正相关。结论 SDF-1在哮喘小鼠气道炎症细胞募集中可能有重要作用。     

升气壮阳膏方联合特异性免疫对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察中药膏方联合特异性免疫治疗(SIT)对小鼠支气管哮喘的治疗作用。方法将BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为空白对照组、哮喘模型组、SIT组、SIT联合中药膏方组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射及雾化激发构建支气管哮喘小鼠模型,给予SIT及中药膏方灌胃治疗,进行肺泡灌洗液细胞计数和分类,用ELISA法测定血清IgE、肺泡灌洗液IL-4、IFN-γ含量,用HE染色法检测小鼠肺组织病理学改变。结果 SIT、中药膏方联合SIT治疗组小鼠肺组织炎症细胞浸润程度减轻,其中后者作用更显著,血清IgE水平较哮喘组下降(P0.05),中药膏方组联合SIT组较SIT下降显著;SIT、中药膏方联合SIT组在肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸性粒细胞总数均减少,BALF的IL-4下降、IFN-γ上升(P0.05),但两者间差异无统计学意义(P0.05)。结论中药膏方联合特异性免疫治疗可以降低小鼠血清IgE水平,减轻肺部炎症细胞浸润程度。     

清肺抗敏合剂下调RORγt及SOCS1/3表达改善哮喘小鼠炎症反应机制研究

目的:研究清肺抗敏合剂下调维甲酸孤儿核受体γt(RORγt)及信号传导抑制因子1/3(SOCS1/3)表达改善呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘小鼠炎症反应的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和清肺抗敏合剂低、中、高剂量组。通过RSV诱发、白蛋白致敏建立哮喘小鼠模型。末次激发后24 h,吸入乙酰胆碱(Mch)测定气道的相对阻力；制备肺泡灌洗液(BALF),用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中CD31、免疫球蛋白E(IgE)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)含量；计数炎症细胞。采用RT-PCR法检测肺组织中RORγt mRNA水平。采用qPCR法测定肺组织中SOCS1/3 mRNA表达水平。结果:地塞米松组及清肺抗敏合剂不同剂量组小鼠吸入梯度浓度的Mch后气道阻力与模型组比较显著降低(均P<0.05);地塞米松和不同剂量清肺抗敏合剂均可以改善小鼠肺组织的病理学损伤，缓解炎性细胞浸润。地塞米松组及清肺抗敏合剂不同剂量组小鼠病理半定量评分显著低于模型组(均P<0.05),且随着剂量...