糖尿病大鼠视网膜神经源性一氧化氮合酶表达及乙酰胆碱酯酶的变化

目的:观察糖尿病大鼠视网膜神经源性一氧化氮合酶(nNOS)蛋白和基因水平的表达以及乙酰胆碱酯酶(AchE)的变化。方法:注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,于注射后12周和16周时将模型组及对照组大鼠的眼球冰冻切片。用原位杂交法、免疫组织化学法和组织化学法分别显示nNOS mRNA、nNOS和AchE阳性神经元或神经纤维,RS IMAGE软件进行图像分析处理。结果:与对照组比较,糖尿病大鼠视网膜nNOS mRNA、nNOS、AchE的光密度值均降低,12、16周都有显著性差异。结论:糖尿病大鼠视网膜nNOS基因转录和表达均下降,AchE含量降低,导致了NO水平下降,成为糖尿病性视网膜病变的主要因素之一。     

参芪汤对糖尿病大鼠勃起功能的影响

目的　探讨参芪汤对雄性糖尿病大鼠勃起功能的作用。方法　48只Wistar大鼠随机分为正常 对照组(NC组);糖尿病组(DM组),链脲佐菌素60mg/kg腹腔注射;中药治疗组(DD组),参芪汤17.7g· kg-1·d-1灌胃。检测各组第8周的血糖、阴茎勃起潜伏期、酶组化及图象分析观察阴茎海绵体中一氧化氮合 酶(NOS)和球海绵体肌中乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性。结果　DD组的血糖略低于DM组,无差异(P> 0.05)。DD组阴茎勃起潜伏期明显短于DM组,差异显著(P<0.05)。DD组的NOS、AchE的阳性反应显著 强于DM组,差异显著(P<0.05)。DD组的勃起潜伏期、NOS、AchE阳性反应与正常组接近。结论　参芪汤 可能通过增加NOS和AchE活性,发挥改善阴茎勃起功能的作用。     

诱导型一氧化氮合酶在糖尿病性阴茎勃起功能障碍大鼠阴茎的表达

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在糖尿病性阴茎勃起功能障碍(ED)发病进程中的可能作用.方法:注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数,取大鼠阴茎,用ABC免疫组织化学方法检测阴茎iNOS的分布与表达,免疫印迹检测阴茎iNOS蛋白量的变化.结果:糖尿病大鼠的阴茎勃起次数低于对照组,并随病程延长降低;与对照组比较,糖尿病组阴茎内iNOS阳性细胞数和平均光密度、iNOS蛋白量升高,并随病程延长而进行性升高.结论:糖尿病组大鼠阴茎iNOS表达的升高与ED相关.     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型的建立

目的探讨理想糖尿病性勃起功能障碍(ED)大鼠模型的制备方法。方法90只SD大鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组再分为正常组(CN)和糖尿病组(DM),每组各15只,糖尿病组腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,成模8、12及16周注射阿朴吗啡(APO,80μg/kg)观察大鼠阴茎勃起情况,制备糖尿病性ED大鼠模型。结果DM组在8、12、16周注射阿朴吗啡后勃起次数分别为1.0±0.0、1.0±0.0、1.0±0.0,勃起率分别为33.3%、21.4%、14.3%,ED发生率分别为66.7%、78.6%、85.7%,CN组勃起次数分别为2.2±0.8、2.3±0.8、2.0±0.7,勃起率均为100%,ED发生率为0。组间差异有统计学意义(P0.01)。结论采用STZ 65 mg/kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型方法安全有效,颈部皮下注射APO 80μg/kg筛选糖尿病ED大鼠可行可靠。     

内源性一氧化氮合酶抑制物在糖尿病大鼠勃起功能障碍中的作用

目的:探讨内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物非对称性二甲基精氨酸(ADMA)在糖尿病大鼠勃起功能障碍中的作用及其机制。方法:采用高脂饲养加小剂量链脲佐菌素腹腔注射诱导8周病程的2型糖尿病大鼠模型;麻醉下分离大鼠阴茎海绵体,用器官浴槽方法检测海绵体对乙酰胆碱的内皮依赖性舒张反应以反映其勃起功能;检测血清ADMA含量;检测海绵体组织NOS活性及一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(c GMP)含量;用Western blot检测海绵体ADMA信号通路蛋白和磷酸二酯酶5(PDE5)的表达;检测超氧化物歧化酶活性和脂质过氧化产物丙二醛含量以评价氧化应激。结果:糖尿病大鼠血糖升高,胰岛素敏感性降低,表明糖尿病大鼠模型建立成功;与正常对照组比较,糖尿病大鼠海绵体舒张功能明显降低,血清ADMA浓度升高,海绵体组织NOS活性及NO和c GMP含量降低,ADMA生成酶蛋白精氨酸甲基转移酶1表达上调,ADMA代谢酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶1、2及ADMA靶酶内皮型NOS和神经元型NOS表达下调,PDE5蛋白表达上调,氧化应激增加;体外用ADMA孵育正常大鼠离体海绵体,亦可产生与糖尿病大鼠海绵体相似的舒张功能障碍及NO和c GMP含量减少。结论:内源性NOS抑制物ADMA蓄积是导致糖尿病大鼠勃起功能障碍的重要原因,其机制可能与减少NO生成、增加氧化应激有关。     

一氧化氮及其信号转导通路在糖尿病性勃起功能障碍的作用

勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）是糖尿病的常见并发症,影响人们的生活质量,其病变机理还不甚清楚.一氧化氮（NO）由一氧化氮合酶（NOS）合成,是调节海绵体肌肉松弛和阴茎勃起的重要的神经递质.PI3-kinase/Akt （PKB）通路使eNOS磷酸化,NO的产量增加;NO/cGMPPKG通路参与平滑肌的舒张;RhoA和Rho-kinase参与平滑肌的收缩,抑制eNOS基因表达和酶的活性.周围血管病变和自主神经变性是引起糖尿病性ED的主要原因之一.基因和干细胞（eNOS、 RhoA/Rho-kinase与Mesenchymal stem cell-based cell）治疗糖尿病性ED取得一些进展.     

大鼠桡神经钳夹伤后背根节和脊髓nNOS免疫阳性神经元的变化

目的研究大鼠桡神经钳夹伤后背根神经节(DRG)和脊髓nNOS免疫阳性神经元的变化,探讨NO是否参与大鼠桡神经钳夹伤后的DRG和脊髓水平的痛觉调制。方法用辣根过氧化物酶追踪大鼠桡神经的由来;大鼠桡神经钳夹伤结合免疫组化法,研究桡神经钳夹伤后DRG鄄和脊髓的nNOS免疫阳性结构变化。结果(1)大鼠桡神经的组成范围在C5～T1;(2)大鼠桡神经钳夹伤后,DRG内nNOS免疫阳性神经元的变化难以分析:脊髓后角nNOS免疫阳性结构数量减少、免疫强度下降。结论大鼠桡神经钳夹伤后,脊髓nNOS免疫阳性结构发生可塑性变化,NO在桡神经钳夹伤后的痛觉调制中有一定的作用。     

一氧化氮合酶与阴茎勃起功能障碍相关研究进展

勃起功能障(erectile dysfunctio,ED)是指阴茎不能达到和(或)维持足够的勃起以完成满意的性交,且病程至少持续6个月以上[1].     

核因子-κB在糖尿病性阴茎勃起功能障碍中的作用

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)在糖尿病(DM)性阴茎勃起功能障碍(ED)中的作用.方法:注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数、取大鼠阴茎和脊髓第2～4骶椎节段,免疫印迹法检测阴茎核因子-κB(NF-κB)蛋白量的变化,ABC免疫组织化学方法检测脊髓第2～4骶髓节段NF-κB的...     

鞘内注射米贝地尔对神经痛大鼠脊髓nNOS表达的影响

目的：探讨脊髓T型钙通道在背根节慢性压迫（CCD）痛中的作用以及其对脊髓背角神经元神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响。方法: 行为学部分，SD大鼠48只，随机分为6组，每组8只，即sham组、CCD组、CCD+生理盐水组；CCD+米贝地尔50 μg组；CCD+米贝地尔100 μg组；CCD+米贝地尔200 μg组，sham组和CCD组在术前、术后1、3、5、7、14、21 d分别测定大鼠机械和热痛敏，其余各组在手术后5 d分别鞘内注射盐水、米贝地尔各个剂量，分别在术前、给药前、给药后30 min、60 min、120 min、240 min、480 min分别测定大鼠机械和热痛敏。免疫组化部分，设正常对照组（normal），其余分组同行为学部分,每组6只。Normal、sham组和CCD组大鼠术后5 d处死，其余各组动物在术后第5 d鞘内单次给药后2 h处死，取脊髓腰膨大做免疫组织化学实验。结果: CCD大鼠在手术后形成稳定的痛敏，鞘内单次注射米贝地尔各个剂量能抑制大鼠痛敏，并持续到给药后240 min。CCD大鼠术后5 d脊髓背角浅层nNOS阳性神经元明显增多，鞘内注射米贝地尔能抑制神经元nNOS的表达。结论：脊髓T型钙通道参与CCD大鼠机械和热痛敏的形成，且可能与脊髓背角神经元nNOS的表达有关。     

糖尿病大鼠神经生长因子的表达与阴茎勃起功能障碍的关系

目的：探讨糖尿病(DM)大鼠神经系统中 NGF 的表达与阴茎勃起功能障碍(ED)的相关性。方法：建立糖尿病大鼠模型,分别于造模1～4月注射阿扑吗啡(APO)作阴茎勃起功能试验,然后取大鼠的大脑、胸腰段交感干、阴茎和前列腺,用免疫组织化学法和荧光免疫组化法显示 NGF 阳性神经元或神经纤维,并作图像分析。结果：糖尿病1个月时尚无 ED 出现,但各处的 NGF 阳性神经元及纤维开始下降,与对照组相比有显著性差异,随着病程延长差异更明显;2个月时 DM 大鼠阴茎勃起次数与对照组已有显著差异3个月和4个月时差异非常显著。结论：糖尿病性早期中枢和周围神经系统内 NGF 减少,NGF 的减少与糖尿病性 ED 的发生发展密切相关。     

IkB激酶在糖尿病性大鼠ED中的作用

目的探讨IkB激酶(Ik kinases,IKK)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)性阴茎勃起功能障碍(erectiledy sfunction,ED)中的可能作用。方法注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数,取大鼠阴茎,Western Blot方法检测IKK蛋白量的变化,ABC免疫组织化学方法检测阴茎IKK的分布和表达。结果 Dm大鼠的阴茎勃起次数明显低于对照组(P0.01),随病程延长降低;Western Blotting结果显示,DM组阴茎IKK蛋白量明显高于正常对照组(P0.01),12周DM组明显高于8周DM组(P0.05);IKK主要分布于阴茎血管、阴茎背神经,与对照组比较,DM组平均光密度值明显上调并随病程延长而上调。结论 DM大鼠阴茎IKK蛋白量的上调可能通过作用于阴茎内的血管、神经参与了糖尿病性ED发病。     

脊髓压迫性损伤大鼠海马和脊髓内BDNF的表达变化

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在脊髓压迫性损伤后的表达变化及作用。方法用自行设计的方法制作脊髓压迫模型,免疫荧光检测BDNF在星形胶质细胞、神经元和上下行轴突的表达;WB检测BDNF在大鼠海马及脊髓的表达。结果随着时间延长,受损部位的BDNF+-GFAP荧光强度逐渐增强;BDNF+-Tuj1荧光强度逐渐减弱;受损部位相邻上下段的BDNF+-NF200比受损部位的明显增强。海马和脊髓受损中心相邻的上、下段的BDNF蛋白表达在损伤后1d达到峰值,然后逐渐下降(P0.05);而脊髓受损中心的BDNF蛋白表达逐渐下降(P0.05)。结论脊髓损伤后,BDNF的表达下调,随伤后时间呈一定规律变化,是引起受损部位神经元表达下降的原因之一。     

经椎弓根椎体截骨术治疗脊柱后凸畸形的临床疗效观察

目的：探讨经椎弓根椎体截骨脊柱缩短术治疗并发脊髓神经功能障碍的脊柱后凸畸形的临床疗效。方法将2013年5月至2014年6月期间我院收治的80例并发脊髓神经功能障碍的脊柱后凸畸形患者纳入研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组各40例,观察组患者接受经椎弓根椎体截骨术治疗,对照组患者接受经椎板和小关节突截骨术,比较2组患者手术情况、椎体愈合和神经功能恢复、治疗效果。结果观察组患者手术时间[(76.52±9.1) min]、术后下床活动时间[(3.28±0.43) d]短于对照组[(113.46±13.44) min,(5.67±0.68) d],术中出血量[(36.14±4.28) mL]、术后引流量[(17.92±2.12) mL]少于对照组[(55.23±7.15) mL,(29.64±4.28) mL]。观察组患者的Cobb角、出现初始尿意和强烈尿意时的膀胱容量[(6.12±0.68) mL,(456.56±51.78) mL]、残余尿量[(241.45±28.56) mL,(63.78±7.24) mL]低于对照组[(9.78±1.21) mL,(335.54±36.86) mL,(586.35±63.12) mL,(96.32±10.22) mL],椎间隙高度[(12.62±2.81) mL]高于对照组[(8.41±1.32) mm]。观察组治疗优良率(97.50%)明显高于对照组(82.50%)。结论经椎弓根椎体截骨脊柱缩短术治疗有助于减小手术创伤,促进术后恢复,纠正后凸畸形,改善神经功能,提高治疗效果。     

自发性高血压大鼠勃起功能及海绵体形态结构的改变

目的：探讨自发性高血压大鼠(SHR)勃起功能的改变及其发病机理。方法：雄性 SHR 及同系 WKY 大鼠,夹尾法测量大鼠收缩压(SBP),皮下注射阿朴吗啡(APO)检测阴茎勃起功能,光镜及透射电镜观察海绵体形态结构的变化。结果：SHR 组及 WKY 组阴茎勃起次数分别为0．6±0．5和2．4±0．6,差异非常显著。光镜下 SHR 大鼠阴茎海绵体血窦、内皮细胞、平滑肌细胞分布杂乱,血管内皮细胞连续性破坏;其内皮细胞及平滑肌细胞超微结构线粒体退变、内质网扩张,糖原颗粒、吞饮小泡及微丝减少。还可见大量间质组织增生及微血管腔闭塞。结论：高血压严重影响阴茎勃起功能,海绵体组织超微结构的病理改变可能是自发性高血压大鼠勃起功能下降的机理之一。     

氧化应激与诱导性一氧化氮合酶在糖尿病性阴茎勃起功能障碍中的作用

目的:探讨氧化应激与诱导性一氧化氮合酶(iNOS)在糖尿病性阳茎勃起功能障碍(ED)中的可能作用。方法:注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数、取大鼠阴茎和血浆,测定血清丙二醛(MDA)水平、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮合酶(NOS)和iNOS活力以及用免疫组织化学ABC方法检测阴茎iNOS的表达。结果:糖尿病大鼠的阴茎勃起次数明显低于对照组,并随病程延长降低;糖尿病大鼠血清MDA、iNOS水平明显高于对照组;糖尿病大鼠T-AOC水平明显低于对照组;与对照组比较,糖尿病组阴茎内iNOS阳性细胞数和平均光密度值随病程延长而升高。结论:糖尿病性阴茎勃起功能障碍与氧化应激水平、血清iNOS活性以及阴茎iNOS的表达升高相关。     

糖尿病大鼠脊髓nNOS免疫阳性神经元的变化

目的：观察糖尿病大鼠脊髓神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元数量的变化，探讨NO在糖尿病发生和发展中的作用机制。方法：用链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型，ABC免疫细胞化学法显示nNOS免疫阳性神经元。结果：大鼠脊髓内nNOS阳性神经元主要分布于中央管周围灰质和中间带等区域。中间带外侧核可见nNOS免疫阳性神经元较集中，细胞突起呈束状伸向中央管周围灰质方向；定量分析显示，糖尿病大鼠脊髓中央管周围灰质和中间外侧核在7w、12w时nNOS免疫阳性神经元数量明显增多。结论：糖尿病时伤害性刺激的传人增多，增多的nNC)S免疫阳性神经元可能与痛觉过敏等糖尿病周围神经病变有关。     

Neural and anatomical abnormalities of the gastrointestinal system resulting from contusion spinal cord injury

Gastrointestinal (GI) abnormalities resulting from spinal cord injury (SCI) are challenging disorders that have not been examined experimentally using clinically relevant models. In this study, female Sprague–Dawley rats (n=5/group×4: T10–T11 contusion, laminectomy, or naïve) were fasted for 24 h before being submitted to dye recovery assays (Phenol Red solution, 1.5 ml/rat; per oral) on GI emptying/transiting at 48 h or 4 weeks postinjury (p.i.). Compared with controls, SCI significantly increased dye recovery rate (DRR, determined by spectrophotometry) in the duodenum (+84.6%) and stomach (+32.6%), but decreased it in the jejunum (−64.1% and −49.5%) and ileum (−73.6% and −70.1%) at 48 h and 4 weeks p.i., respectively (P≤0.005, ANOVA with post hoc t-test). Electrophysiological analysis revealed that purinergic fast inhibitory junction potential (IJP) was reduced ∼30% in the antrum and duodenum of rats 48 h p.i. (numbers of animals/numbers of tissue samples=3/7; P<0.001), and slow IJP was essentially abolished. Immunocytochemistry consequently uncovered significant reductions in the GI vasoactive intestinal polypeptide and neuronal nitric oxide synthase (i.e. slow IJP mediators) reactivity at 48 h and 4 weeks p.i., suggesting that SCI disrupted interstitial neurotransmission. Importantly, SCI caused discernible atrophy of the GI mucosa and muscle coat (e.g. the two layers of gastric wall were correspondingly 28% and 27% thinner 4 weeks p.i.). We conclude that contusive SCI triggers GI abnormalities with unique pathophysiology and pathology in different segments. Such GI disorders evolve continuously during the entire post-SCI period examined, and may require therapeutic development to target specific underlying mechanisms.     

巢蛋白在不同发育阶段人胚胎脊髓中的表达变化

目的:研究人胚胎脊髓生长发育过程中巢蛋白(nestin)的变化趋势。方法:采用免疫组织化学方法对不同发育时期(3周～8个月)的人胚胎脊髓中巢蛋白(nestin)的表达及变化进行了研究。结果:Nestin阳性细胞在神经上皮贯穿整个发育过程,5周基板、翼板形成后即可见到阳性物,而边缘层6周出现。中央管、基板、翼板、边缘层内nestin阳性细胞达高峰的时间分别是6周、7周、8周、9周,而表达明显减少的时间分别是8周、9周、10周、11周。随着脊髓的发育成熟,灰、白质内nestin阳性产物逐渐减少,而中央管的阳性细胞数至3月后较为稳定。结论:在脊髓不同部位神经干细胞出现时间和达到高峰的时间均不同,提示在脊髓的不同部位神经干细胞增殖、分化并不同步。