脓毒症小鼠肝肺损伤机制的研究

目的：利用盲肠结扎穿孔伴严重腹腔感染造成的脓毒症模型，探讨脓毒症肝、肺损伤的机制。方法：24只雄性昆明小鼠随机分为2组，盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture，CLP）组和假手术对照组。于术后3h和12h检测肝、肺微血管通透性改变、组织含水量以及髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性的改变，并检测肝窦内皮细胞和肺微血管内皮细胞的凋亡情况。结果：肝、肺微血管的通透性在CLP后12h明显高于对照组（P〈0.01）。CLP同时造成肝、肺组织的含水量和MPO活性明显高于对照组。另外，在CLP组12h肺微血管内皮细胞的凋亡率为（5.03±0.92）％，对照组为（3.48±1.21）％，两者比较差异有显著性意义（P〈0.01）。结论：脓毒症可引起严重的肝、肺组织损伤，肺微血管内皮细胞凋亡可能是导致脓毒症肺微血管通透性增高并引起肺损伤的重要原因。     

铁调素及其调控机制研究进展

铁调素是一种肝脏分泌的小分子肽,其对铁代谢调节起负调控作用。铁的缺乏与过载会导致多种疾病,但机体本身缺乏对铁排泄的调控机制,所以铁调素的负调控作用对维持机体铁代谢平衡尤为重要,对铁调素调控机制的研究也逐渐受到关注。研究发现铁代谢异常、贫血、炎症、缺氧等因素均对铁调素的生成起调控作用,从而间接地影响机体铁代谢平衡。随着分子生物学的发展,在明确铁调素基因表达及分子构成的基础上,对刺激其表达的信号通路也取得了研究进展,如经典的BMP/SMAD信号通路和JAK/STAT信号通路。调节信号通路的调节因子也随之被发现,如铁调素调节蛋白、跨膜丝氨酸蛋白6、Neogenin蛋白、遗传性血色素沉着症候选基因等。它们的发现有助于阐明生理性和病理性铁代谢异常的分子生物学机制,同时使铁调素有望成为新的诊治铁代谢异常疾病的手段。     

铁调素表达调控及相关疾病的研究进展

铁调素（hepcidin）是由肝脏表达和分泌的一种多肽,其表达和分泌受多种因素的影响,最近研究表明,铁调素含量的异常与多种疾病密切相关.笔者就其表达调控,及其与疾病关系的最新研究进展进行综述.     

PUMA在小鼠肝再生早期的表达及其调控机制

目的：观察部分肝脏切除术后PUMA及其相关的转录因子在小鼠肝再生早期的表达.方法：成年雄性C57/BL6小鼠经70%肝脏切除后建立肝再生模型,采用实时定量PCR,Western印迹和免疫组化方法研究PUMA在肝再生不同时期（共7个时间点）的表达,同时还检测了p53和Slug蛋白水平的变化.结果：同对照组相比,PUMA mRNA自肝切术后6~72 h显著下降（P〈0.05）,同其蛋白水平的变化一致;同时p53和Slug蛋白分别自术后24 h和6 h上调.结论：在肝切术后72 h,PUMA的表达下调并不依赖p53,可能与Slug的上调相关,提示PUMA在肝再生早期可能参与对细胞凋亡的调节.     

川芎嗪对土三七诱导的肝小静脉闭塞病小鼠肝组织中PAI-1表达的影响

 目的 探讨川芎嗪对土三七诱导的肝小静脉闭塞病小鼠肝组织中纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）表达的影响。方法 115只昆明小鼠随机分为土三七组(A组,30只) 、低剂量川芎嗪干预组(B组,30只)、高剂量川芎嗪干预组(C组,30只）和正常对照组 (D组,25只)。A组给予土三七浓缩煎液灌胃(30 gkg-1d-1),B组给予土三七浓缩煎液(30gkg-1d-1)+川芎嗪(100 mgkg-1d-1)灌胃,C组给予土三七浓缩煎液(30 gkg-1d-1)+川芎嗪(200 mgkg-1d-1)灌胃,D组给予PBS( 30 mLkg-1d-1)灌胃,30 d后处死小鼠。留取肝组织行HE和Masson染色并检测血清中ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL的水平。采用免疫组化法检测肝组织中PAI-1蛋白的表达。结果 土三七组中有24只小鼠成模,其肝功能（ALT、AST、TBIL、DBIL、ALB）较正常对照组有明显异常（P<0.05）,PAI-1蛋白表达水平显著高于正常对照组（P<0.05）;不同剂量川芎嗪干预组小鼠肝功能（ALT、AST、TBIL、DBIL、ALB）较土三七组均有所改善, 其差异有统计学意义（P<0.05）,PAI-1蛋白表达水平显著低于模型组（P<0.05）,其中以高剂量干预组改善较为明显（P<0.05）结论 川芎嗪干预能有效防治肝小静脉闭塞病（HVOD）,以高剂量（200 mgkg-1d-1）疗效更为确切。其可能的机制是通过下调PAI-1表达,阻止凝血系统活化,从而有效防治HVOD。     

川芎嗪对肝星状细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及可能机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法.方法 以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪30μmol/L刺激HSC-T6,作用24 h后,Western blot法检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态.结果 Western blot法结果表明,与PDGF组比较,川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,p-ERK/ERK水平降低.流式细胞仪检测结果表明川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色结果表明川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化.结论 川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡.     

外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症小鼠肝脏能量代谢的调控作用及机制

目的：观察脓毒症小鼠肝脏能量代谢的变化,同时探讨外源性一氧化碳释放分子2（carbon monoxide—releasing molecules-2,CORM-2）对其调控及作用机制。方法：将48只C57BL／6小鼠随机均分成对照组,盲肠结扎穿孔（CLP）组,CORM-2组,无活性CORM-2（inactivated CORM-2,iCORM-2）组。采用CLP术制作脓毒症模型,时照组不作任何处理,CORM-2组和iCORM-2组除术后使用CORM-2或无活性CORM-2外,其余处理同CLP组,术后72h内连续监测各组12只小鼠血糖浓度的动态变化及存活情况。另选32只小鼠分组同上,术后24h收集肝脏组织及血浆,检测肝组织的^18F—FDG分布、葡萄糖激酶活性、乳酸含量,全自动生化分析仪检测血浆丙氨酸转氨酶（ALT）,天冬氨酸转氨酶（AST）。结果：与对照组比较,CLP组葡萄糖代谢水平增强,葡萄糖激酶、AST、ALT活性以及乳酸含繁均明碌增高（P均〈0．05）;CORM-2干预后上述指标明显降低（P均〈0．05）。与对照组比较,各手术绀小鼠血糖在术后36h内持续下降,且组间差异无统计学意义。结论：CORM-2能明显减少脓毒症小鼠肝^18F-FDG摄取、葡萄糖激酶活性和乳酸含量,从而改善脓毒症小鼠肝脏能量代谢紊乱,提高生存率。     

川芎嗪对小鼠吗啡戒断症状的抑制作用及机制

目的:研究川芎嗪（TMP）对小鼠吗啡戒断症状的影响。方法:以剂量递增法形成吗啡依赖模型,用纳洛酮催促戒断。结果:ip给药,TMP20mg/kg抑制“湿狗”样抖动、打洞、前爪震颤症状;TMP40mg/kg抑制跳跃、“湿狗”样抖动、上睑下垂、前爪震颤、体重下降等症状。结论:TMP能抑制大部分吗啡戒断症状。     

川芎嗪对脓毒症急性肾损伤小鼠血管内皮细胞的保护作用

目的探讨川芎嗪对脓毒症急性肾损伤（AKI）小鼠血管内皮细胞的保护作用。方法将54只C57BL/6小鼠按照随机化区组分为5组：假手术组10只,安慰剂组、川芎嗪低剂量组（10mg/kg）、川芎嗪中剂量组（30mg/kg）、川芎嗪高剂量组（60mg/kg）各11只。假手术组只做剖腹关腹,不行盲肠结扎穿刺（CLP）操作。安慰剂组先尾静脉注射0.9%氯化钠注射液0.15ml,30min后行CLP手术制作脓毒症AKI模型。川芎嗪低、中、高剂量组分别尾静脉注射10、30、60mg/kg川芎嗪（溶于0.9%氯化钠注射液0.15ml）,30min后行CLP造模。观察小鼠造模后6h、12h、24h、3d存活率,测定肾脏含水量,采用ELISA检测尿液中肾损伤分子1（Kim-1）水平,观察肾组织学改变,采用免疫组化检测肾组织中内皮细胞损伤标志物血管性血友病因子（vWF）的表达。结果CLP手术成功建立起了小鼠脓毒症AKI模型,安慰剂组和川芎嗪各剂量组小鼠均产生了不同程度的肾脏损伤。与安慰剂组比较,川芎嗪各组小鼠术后存活率提高,川芎嗪高剂量组3d存活率与假手术组相似。川芎嗪组肾脏含水量、尿液中Kim-1水平、肾组织病理损伤评分明显小于安慰剂组、vWF表达明显小于安慰剂组（均P＜0.05）。结论川芎嗪能保护脓毒症AKI小鼠血管内皮细胞,减轻脓毒症小鼠的急性肾损伤,保护肾功能,改善生存率。     

卡托普利对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

目的:研究卡托普利对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:按随机数字表法将48只雄性C57BL/6J小鼠（6～8周龄）分为4组:对照组（Control组）、卡托普利组（Captopril组）、脂多糖组（LPS组）、卡托普利+脂多糖组（Captopril+LPS组）,每组12只。实验前30 min,Captopril组和Captopril+LPS组预先经腹腔给予卡托普利（50 mg/kg）处理,Control组和LPS组给予等量生理盐水对照。采用腹腔注射脂多糖（LPS,15 mg/kg）的方法制备脓毒症模型（LPS组和Captopril+LPS组）,Control组和Captopril组给予等量生理盐水。各组于制模后12 h采集标本,采用无创尾套测压法测量小鼠平均动脉压（MAP）,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清炎性因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,HE染色观察心肌组织病理形态改变,高分辨小动物超声成像系统检测心功能,Western印迹检测心肌组织磷酸化核因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果:造模后12 h,Captopril组各项指标与Control组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与Control组相比,LPS组MAP下降（q=4.377,P＜0.05）;血清IL-6 、TNF-α水平明显升高（q=4.966、10.440,均P＜0.05）; 左室射血分数（LVEF%）、左室短轴缩短率（LVFS%）水平明显降低（q=6.104、6.390,均P＜0.01）;心肌纤维断裂,间质水肿,炎性细胞浸润加重;心肌组织p-NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（q=12.430,P＜0.001）。和LPS组比较,Captopril+LPS组MAP差异无统计学意义（q=2.617,P＞0.05）;血清IL-6、TNF-α水平下降（q=4.085、5.721,均P＜0.05）; LVEF%、LVFS%水平升高（q=4.366、4.297,均P＜0.05）;心肌损伤病理改变减轻;心肌组织p-NF-κB p65蛋白表达水平下降（q=5.124,P＜0.01）。结论:卡托普利可能通过抑制核因子-κB的活化,减少炎性细胞因子（IL-6和TNF-α）产生,抑制脓毒症引起的心肌炎症,从而减轻脓毒症心肌损伤。     

血吸虫肝纤维化小鼠肝组织中去甲肾上腺素及受体的表达

目的研究血吸虫肝纤维化小鼠肝组织中交感神经递质去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）及其受体（adrenal receptor,AR）的表达。方法应用腹部敷贴尾蚴法使小鼠感染血吸虫。30只昆明种小鼠随机分成正常对照组（N组）和肝纤维化模型组（M组）。采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变,高效液相色谱-电化学（HPLC-ECD）法检测肝组织中NE的含量,同时应用Western blot方法检测肝脏组织中AR的表达水平。结果血吸虫肝纤维化小鼠的肝组织中NE的含量明显低于正常小鼠,而AR的含量明显高于正常组,其差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论小鼠血吸虫肝纤维化时肝组织中去甲肾上腺素表达减少,这可能是肝纤维化时交感神经促进肝纤维化发展的作用机制之一。     

组蛋白去乙酰酶抑制剂下调脓毒症小鼠肝内粘附分子表达

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对脓毒症小鼠肝内粘附分子表达及炎症细胞浸润的影响.方法:小鼠经腹腔注射组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TrichostatinA或丁酸钠)后,行盲肠结扎穿孔术以诱导小鼠脓毒症.18 h后处死小鼠并收集血清和肝组织,检测血清转氨酶活性及肝组织匀浆髓过氧化物酶活性;常规石蜡切片HE染色观察组织病理学...     

穿心莲内酯对脓毒症小鼠的保护作用及机制探讨

目的研究穿心莲内酯对脓毒症小鼠的保护作用及相关机制。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作小鼠脓毒症模型。64只C57BL/6小鼠随机均分为4组:假手术组(sham组)、脓毒症模型组(CLP组)、二甲亚砜组(DMSO组)和穿心莲内酯组(AND组)。各组小鼠于术后1、6、12h腹腔内分别注射相同剂量(0.2mL)的生理盐水、5%DMSO或穿心莲内酯(10mg/kg),记录各组小鼠术后7d生存率并绘制生存曲线。另取48只C57BL/6小鼠,分组及给药方法同前,术后24h分别检测腹腔灌洗液(PLF)中性粒细胞(PMN)数量、外周血及PLF细菌负荷以及外周血炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10水平,同时取小鼠肺脏及肝脏组织进行病理分析。结果与CLP组相比,AND组小鼠术后7d生存率增加(P<0.01),腹腔PMN计数下降(P<0.01),外周血和腹腔细菌清除能力增强(P<0.01),外周血TNF-α、IL-6水平降低,而IL-10水平升高(P<0.01),肺组织和肝脏组织病理损伤程度减轻(P<0.01)。DMSO组与CLP组各项检测指标差异均无统计学意义。结论穿心莲内酯对CLP脓毒症小鼠具有保护作用,可能与其调节免疫功能,增强细菌清除能力以及降低过度炎症反应有关。     

miR-27b-3p对脓毒症肺内皮细胞YAP信号表达的调控机制研究

目的 探讨微小RNA 27b-3p(miR-27b-3p)对脓毒症模型小鼠肺内皮细胞Yes相关蛋白(YAP)信号的调控机制.方法 将40只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为四组,对照组、盲肠结扎穿孔(CLP)组、miRNA类似物(mimic NC)组、miR-27b-3p类似物(miR-27b-3p mimic...     

姜黄素对结肠炎小鼠结肠组织相关细胞因子表达的调控作用

[目的] 探讨不同剂量姜黄素对结肠炎（UC）小鼠的疗效和作用机制。[方法] 把小鼠分成正常组、模型组、姜黄素低、中、高剂量组、美沙拉嗪组,采用三硝基苯磺酸（TNBS）复制小鼠结肠炎模型后,经姜黄素治疗7 d,观察小鼠体重和粪便性状等一般生活习性;分离结肠进行HE染色观察组织病理学形态改变及评分以进行疗效评价;ELISA检测相关细胞因子水平。[结果] 模型组与正常组比较,结肠组织上清液中GM-CSF、IL-2、IL-12P40、IL-21的表达上升,而IL-4、IL-15和IL-23的量则下降。经姜黄素治疗后的小鼠与模型组相比,结肠组织上清液中GM-CSF、IL-2、IL-12P40、IL-21的表达降低,IL-4、IL-15和IL-23的量升高。[结论] 姜黄素可通过抑制促炎因子的表达,同时增加抑炎因子分泌而有效治疗结肠炎。     

亚低温对脓毒症大鼠肝组织能量代谢影响的研究

目的通过测定亚低温情况下脓毒症(sepsis)大鼠肝组织腺苷酸及乳酸含量改变,并结合肝细胞超微结构的变化,初步探讨亚低温能否减轻脓毒症大鼠组织损伤的程度。方法24只Wistar大鼠均分为正常对照组(NC组)、内毒素组(LPS组)、亚低温组(MHT组),应用高效液相色谱法及生化法分别测定各组肝组织腺嘌呤核苷酸及乳酸水平,并在透射电镜下观察肝细胞超微结构的变化。结果内毒素组大鼠肝组织腺苷酸水平[ATP(4.093±0.424),ADP(1.331±0.136),AMP(1.331±0.312)μmol/g·wet]和亚低温组大鼠肝组织腺苷酸水平[ATP(4.519±0.028),ADP(1.483±0.108),AMP(1.544±0.301)μmol/g·wet]均较正常对照组腺苷酸水平[ATP4.990±0.455,ADP1.632±0.181,AMP1.737±0.407μmol/g·wet]降低,尤以内毒素组明显。亚低温组肝组织腺苷酸水平较内毒素组明显升高;亚低温组肝乳酸含量为[(1.424±0.213)mmol/g·prot,明显低于内毒素组(1.676±0.267)mmol/g·prot,P<0.05],而与对照组比较差异无显著性[(1.379±0.314)mmol/g·prot,P>0.05];电镜下可见亚低温组肝细胞超微结构损伤明显轻于内毒素组。结论亚低温可减缓脓毒症大鼠肝组织能量的消耗,减轻肝组织损伤,可考虑作为防治脓毒症的一种新方法。     

Chromofungin调控自噬流改善脓毒症小鼠肺组织炎症损伤

目的 探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(chromofungin,CHR)在脓毒症小鼠肺组织中对自噬流的调控作用,及其对肺组织炎症损伤的影响.方法 以C57BL/6小鼠为研究对象,通过腹腔注射脂多糖LPS(10 mg/kg)建立脓毒症小鼠急性肺损伤模型.为研究CHR对自噬的影响,在予以LPS 30 min前,先...     

雌二醇对小鼠肝脏铁调素和膜铁转运蛋白表达的影响

目的研究雌二醇（E2）在小鼠铁调素和膜铁转运蛋白表达调节中的作用。方法在不同时间、使用不同浓度雌激素对小鼠进行腹腔注射,应用RT-PCR法检测肝脏铁调素和膜铁转运蛋白mRNA。结果注射50μgE212h和24h后小鼠铁调素表达增加（P〈0.05）,而注射100μgE212h后小鼠膜铁转运蛋白表达也出现上调（P〈0.05）。结论 E2可通过调节小鼠肝脏铁调素和膜铁转运蛋白表达而影响铁代谢。     

LPS对小鼠肺组织及RAW264.7细胞Akt蛋白表达及磷酸化的调控

目的 探讨脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)在体内外对Akt蛋白表达和磷酸化水平的影响.方法 用不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,检测不同时相点细胞Akt蛋白表达和磷酸化水平.小鼠腹腔注射LPS 6 h 后检测肺组织Akt蛋白表达和磷酸化水平.结果 不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,细胞Akt蛋白表达没有显著差异(P>0.05),磷酸化水平增加.而内毒素血症小鼠肺组织Akt蛋白表达没有显著变化(P>0.05),磷酸化水平减低.结论 LPS在体内外对Akt蛋白磷酸化作用不同,体外Akt蛋白磷酸化水平增高,但在内毒素血症小鼠体内出现Akt蛋白磷酸化水平异常减低.