低氧对K562细胞侵袭转移的增强作用

［摘要］目的：研究低氧对白血病细胞株K562细胞侵袭能力和转移能力的影响。方法：细胞体外常规培养,用浓度为1%,3%,5%的氧分别处理细胞24 h,以常氧培养K562细胞为对照组,通过细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测细胞HIF-1α蛋白的表达。结果：与对照组相比,3%和5%的氧均增强K562细胞黏附力、运动力和侵袭力(P<0.05或P<0.01),而且还能上调K562细胞HIF-1α蛋白,HIF-1α mRNA,VEGF mRNA,MMP9 mRNA,MMP2 mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);而1%氧与对照组相比,以上各检测指标无明显变化(P>0.05)。结论：适度低氧能增强白血病细胞株K562细胞侵袭能力和转移能力,其机制可能是通过HIF-1α上调VEGF,MMP-2和MMP-9表达实现的。［中国当代儿科杂志,2009,11（7）：566-570］     

siRNA下调AEG-1表达对神经母细胞瘤细胞MMP-9的表达及侵袭能力的影响

目的 观察下调Astrocyte elevated gene-1(AEG-1)基因对神经母细胞瘤细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达以及细胞侵袭能力的影响.方法 根据RNA干扰原理,设计合成AEG-1 siRNA.通过荧光定量RT-PCR和Western blotting观察神经母细胞瘤细胞中AEG-1基因mRNA和蛋白下调情况;采用Western blotting观察下调AEG-1表达对神经母细胞瘤细胞中MMP-9蛋白表达的影响;通过侵袭实验(Transwell法)观察下调AEG-1表达对神经母细胞瘤细胞侵袭能力的影响.结论 采用AEG-1 siRNA转染神经母细胞瘤细胞,下调细胞内AEG-1的mRNA和蛋白表达(P＜0.05)后MMP-9蛋白表达抑制率分别为63.1%和58.9%.此外下调AEG-1表达使细胞侵袭能力明显减弱(P＜0.05).结论 AEG-1基因下调使神经母细胞瘤细胞中MMP-9的蛋白表达明显减少、活性明显减弱,同时使细胞的侵袭能力降低.由此可见AEG-1在肿瘤细胞的侵袭转移中可能扮演重要角色,将会成为神经母细胞瘤基因治疗的新靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of astrocyte elevated gene-1 (AEG-1)siRNA induced inhibition of invasion in neuroblastoma cells.Methods A small interference RNA(siRNA) targeting to AEG-1 mRNA(AEG-1 siRNA) was constructed and transfected into neuroblastoma cells with Lipofectamine 2000.A non-specific siRNA(control siRNA) and non-treatment were used as negative control group and blank group.The expression of AEG-1 mRNA was detected by RT-PCR.The proteins of AEG-1 and MMP-9 were detected by Western blotting.Cell invasion after AEG-1 knockdown was observed by Transwell assay.Results Compared with the control group,the expression of AEG-1 mRNA and protein were significantly decreased in the cells transfected with AEG-1 siRNAs(P＜0.05).AEG-1 knockdown by siRNA markedly decreased the expression of MMP-9 protein by 63.1% in neuroblastoma cells and the ability of cell invasion (P＜0.05).Conclusions The expression of AEG-1 mRNA is down-regulated by AEG-1 siRNA in neuroblastoma cells.Moreover,knockdown of AEG-1 expression in human neuroblastoma cells significantly inhibits the expression of MMP-9 protein and cell invasion.Therefore,AEG-1 may play a key role for MMP-9 activity and cell invasion,making it a potential target gene for gene-therapy in neuroblastoma.     

基质金属蛋白酶组织抑制剂1对细胞因子诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）对细胞因子IL-1β、TNF-α和干扰素1（IFN-γ）诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法实验分TIMP-1干预组、细胞因子刺激组和对照组。细胞因子刺激组应用细胞因子（IL—1β 10ug／L，TNF—α 50ug／L，IFN-γ 50ug／L）诱导大鼠胰岛瘤细胞株RINmSF细胞凋亡；TIMP-1干预组在细胞因子刺激前予以TIMP—1（50ug／L）预处理1h；对照组采用无血清培养基同步培养。应用四甲基偶氮唑盐比色法和Caspase-3分光光度法检测各组细胞活力和Caspase-3活性，采用DNALadder进行凋亡鉴定。结果与对照组比较，细胞因子IL-1β、TNF—α和IFN-α联合刺激组细胞活力明显降低，并呈时间依赖性（Pa〈0．05，0．001）；TIMP-1干预组较细胞因子刺激组细胞活力上升约14％，Caspase-3活性下降约38％，二组比较差异有显著性意义（Pa〈0．001）。DNALadder检测，细胞因子刺激组可见特征性的梯状条带，TIMP—1干预组梯状条带不明显，出现与对照组相似的2条基因组大分子条带。结论IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激可诱导RINm5F细胞凋亡，TIMP-1对细胞因子诱导的RINm5F细胞的凋亡有一定的保护作用，此作用可能与其抑制Caspase-3活性有关。     

LRP1-pPyk2-MMP9通路在高氧诱导新生大鼠肺损伤中的作用

目的 探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1（low-density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1）-磷酸化酪氨酸激酶2（proline-rich tyrosine kinase 2 phosphorylation,pPyk2）-基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9,MMP9）通路在高氧诱导新生大鼠肺损伤中的作用。 方法 将16只新生大鼠随机分为空气组和高氧组,每组8只。高氧组大鼠于生后即置于吸入氧浓度>95%的环境中7 d,空气组大鼠置于同室空气环境中;第8天处死全部大鼠。苏木精-伊红染色法观察两组大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测血清及支气管肺泡灌洗液中可溶性LRP1（sLRP1）、MMP9水平;Western blot法检测肺组织LRP1、MMP9、pPyk2及Pyk2蛋白表达水平;RT-PCR法检测肺组织LRP1 mRNA及MMP9 mRNA表达水平。 结果 血清和支气管肺泡灌洗液中sLRP1、MMP9在高氧组的水平均高于空气组（P<0.05）;高氧组肺组织匀浆LRP1、MMP9、pPyk2蛋白表达水平较空气组显著升高（P<0.05）;肺组织LRP1 mRNA、MMP9 mRNA在高氧组的相对表达量显著高于空气组（P<0.05）。 结论 LRP1-pPyk2-MMP9通路在高氧诱导新生大鼠肺损伤中活化增强,可能参与支气管肺发育不良的发病机制。     

S100A4反义核酸抑制神经母细胞瘤细胞侵袭的作用

目的　探讨S10 0A4基因在神经母细胞瘤 (NB)细胞侵袭和转移中的作用及其可能机制。方法　将S10 0A4反义核酸转染NB细胞系LA N 6,RT PCR检测S10 0A4、基质金属蛋白酸 (MMP 2 )mRNA水平 ,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。结果　转染反义核酸的LA N 6细胞S10 0A4、MMP 2mRNA表达与对照组相比 ,分别下调 3 5.6%和 2 5.5% ,趋化和侵袭细胞数较对照组明显减少 (P均 <0 .0 5)。结论　反义封闭S10 0A4基因可抑制LA N 6细胞迁移和侵袭力 ,伴MMP 2mRNA表达减低 ,因此 ,S10 0A4基因在NB侵袭转移过程中发挥作用 ;其作用机制可能与增加瘤细胞运动能力 ,调节MMP 2表达有关     

不同转移潜能人神经母细胞瘤细胞系趋化因子受体CXCR4的表达及对瘤细胞趋化作用的影响

目的 以自建的人神经母细胞瘤转移瘤(QDDQ-NM1)及原位瘤(QDDQ-NM2)细胞系的细胞为研究对象,探讨CXCR4在不同转移潜能人神经母细胞瘤细胞系细胞中的表达情况及其对瘤细胞趋化作用的影响.方法 采用RT-PCR检测两神经母细胞瘤细胞系细胞CXCR4 mRNA的表达;流式细胞仪直接免疫荧光法检测两细胞系细胞膜表面CXCR4蛋白的表达;通过趋化和趋化抑制实验观察CXCR4特异性配体CXCL12对QDDQ-NM1和QDDQ-NM2细胞系瘤细胞的趋化作用.结果 RT-PCR显示QDDQ-NM1细胞系CXCR4mRNA的相对含量为0.57±0.08,QDDQ-NM2细胞系为0.29±0.05,两者比较差异有统计学意义(P=0.005＜0.05),流式细胞仪直接免疫荧光法检测两细胞系细胞膜表面CXCR4蛋白表达的阳性率分别为(64.59±1.57)%和(36.72±0.57)%,两者的差异有统计学意义(P=0.00＜0.05),CXCR4特异性配体CXCL12可在一定范围内呈浓度依赖性的趋化QDDQ-NM1和QDDQ-NM2细胞系细胞的迁移,以100 ng/ml的效果较为明显,两细胞系迁移到聚碳酸酯膜下的细胞数差异有统计学意义(P＜0.05).CXCR4特异性拮抗剂AMD3100能有效抑制这种趋化作用(P＜0.05).结论 QDDQ-NM1细胞系的细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4,可能与人神经母细胞瘤QDDQ-NM1细胞系细胞的体外高转移潜能有关.

Abstract：

Objective To study the expression of functional chemokine receptor CXCR4 and its effects on the metastatic potential of human neuroblastoma.Methods Two human neuroblastoma cell lines were used in this study,including QDDQ-NM1 with high metastatic potential and QDDQ-NM2 with low metastatic potential.The expression of CXCR4 was explored at mRNA level using RT-PCR,and the protein level by flow cytometry.Chemotaxis assay was also performed to study the migratory response of QDDQ-NM1 and QDDQ-NM2 to CXCR4 ligand CXCL12.Results The mRNA of CXCR4 was higher in QDDQ-NM1 group than that in QDDQ-NM2 group (0.57±0.08 vs 0.29±0.05,P =0.005).The expression of CXCR4 on QDDQ-NM1 group was also higher than that in QDDQ-NM2 group [(64.59 ±1.57) % vs (36.72 ± 0.57) %,P＜0.05] The QDDQ-NM1 cells exhibited stronger migratory response to CXCL12 in a concentration dependent manner (P＜0.05),and the response peaked to CXCL12 at 100 ng/ml.AMD3100,a specific CXCR4 antagonist,could reverse the tumor's migratory response to CXCL12.Conclusions The expression of CXCR4 is associated with the metastatic potential of human neuroblastoma.     

苦参碱和川芎嗪抑制白血病细胞侵袭转移作用的实验研究

目的探讨苦参碱及川芎嗪对低氧(3%O2)培养条件下人B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞、人慢性髓系白血病细胞株K562细胞侵袭转移的抑制作用及机制。方法体外常规培养细胞,低氧环境下继续培养24 h后,分别加入终浓度为0、0.15、0.2、0.25 g/L苦参碱或0、0.1、0.15、0.2 g/L川芎嗪处理,以常氧培养不加药物的细胞为对照组,分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力,并以RT-PCR方法检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达。结果低氧环境下Raji细胞和K562细胞的黏附、迁移和侵袭能力,以及HIF-1α、VEGF mRNA的表达均较常氧对照组显著增强(P<0.01)。0.15、0.2、0.25 g/L苦参碱均有效抑制低氧环境下Raji细胞的黏附、迁移和侵袭能力,并下调HIF-1α、VEGF mRNA的表达(P<0.05)。0.2、0.25 g/L苦参碱均有效抑制低氧环境下K562细胞的黏附、迁移和侵袭能力并下调HIF-1α、VEGF mRNA的表达(P<0.05)。0.1、0.15、0.2 g/L川芎嗪均有效抑制Raji细胞、K562细胞的黏附、迁移和侵袭能力,并下调HIF-1α、VEGF mRNA的表达(P<0.05),均呈剂量依赖性。结论苦参碱和川芎嗪能有效抑制低氧环境下Raji细胞和K562细胞黏附、迁移和侵袭能力,其作用机制可能通过下调细胞内HIF-1αmRNA的表达,从而减少VEGF mRNA的生成来实现。     

地高辛对非霍奇金淋巴瘤raji细胞侵袭能力的影响及作用机制研究

目的　了解强心苷类药物地高辛对非霍奇金淋巴瘤raji细胞侵袭能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法　选取河北医科大学第四医院病理科2010年10月至2013年12月手术切除的非霍奇金淋巴瘤组织标本30例,采用免疫组化S-P方法检测非霍奇金淋巴瘤T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam-1）及Ras相关的C3肉毒素底物1（Rac-1）蛋白表达情况;通过细胞侵袭实验以及实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术检测不同浓度地高辛作用于raji细胞后Tiam-1、Rac-1表达水平变化。结果　免疫组化结果显示,非霍奇金淋巴瘤中Tiam-1蛋白染色阳性率（70%）及Rac-1蛋白染色阳性率（73.33%）均高于正常淋巴结组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。相关分析结果显示,Tiam-1及Rac-1具有相关性,相关系数r＝0.757（P＜0.01）。细胞侵袭实验结果显示,不同浓度组地高辛作用raji细胞48 h后,随着作用浓度的增加侵袭率下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。实时荧光定量PCR结果显示,不同浓度的地高辛分别作用于raji细胞48 h,各组之间Tiam-1及Rac-1的相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）,并随着作用浓度的增加相对表达量降低。结论　强心苷类药物地高辛可通过调节Tiam-1及Rac-1因子的表达对淋巴瘤侵袭及转移起到一定抑制作用。     

低浓度紫杉醇对大鼠肺动脉平滑肌细胞外胶原沉积的作用及其机制研究

目的 探讨低浓度紫杉醇（PTX）对转化生长因子β1（TGF-β1）促进大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）外胶原沉积的作用及其机制。方法 原代培养大鼠PASMCs并分为空白对照组、模型组和干预组（n=3）。空白对照组不做任何处理,模型组施加终浓度为10 ng/mL的TGF-β1,干预组在模型组基础上施加终浓度为100 nmol/L的PTX。MTT比色法检测细胞增殖能力;实时荧光定量PCR法检测Ⅰ型胶原（COLⅠ）、Ⅲ型胶原（COLⅢ） mRNA相对表达量;ELISA法检测COLⅠ、COLⅢ蛋白的OD值;Western blot法检测COLⅠ、COLⅢ蛋白,以及TGF-β1/Smad3信号通路关键蛋白Smad3、p-Smad3的相对表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组细胞增殖能力、COLⅠ、COLⅢ mRNA及其蛋白、p-Smad3蛋白相对表达水平均明显增高（P < 0.05）;干预组上述指标较模型组均有所下降,但仍高于空白对照组（P < 0.05）;各组Smad3蛋白相对表达水平比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 低浓度PTX对TGF-β1促进PASMCs外胶原合成具有明显抑制作用,该作用可能是通过调控Smad3蛋白的磷酸化来实现。     

A类清道夫受体在高糖诱导系膜细胞炎症损伤中的作用机制

目的观察高糖刺激对人肾小球系膜细胞(HMC)A类清道夫受体(SR-A)表达的影响,并初步探讨SR-A介导HMC在高糖环境下发生炎症损伤的相关机制。方法将体外培养的HMC按照其培养基中D-葡萄糖浓度分为正常糖组和高糖组(葡萄糖浓度分别为5.5 mmol/L和30 mmol/L),并以甘露醇组作为高渗对照,在高糖组瞬时转染SR-A小干扰RNA(siSR-A)并设置转染对照组(siNC)。运用蛋白免疫印迹法检测各组SR-A、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素(IL)1β蛋白含量,免疫荧光技术检测SR-A,实时荧光定量PCR检测各组NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(Caspase-1)、IL-1β、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(GRP)78 基因mRNA,酶法检测Caspase-1相对活性,酶联免疫吸附法检测细胞培养基中IL-1β浓度,流式细胞术检测细胞周期。运用单因素方差分析和 SNKq检验进行统计分析。结果高糖组HMC中SR-A蛋白水平高于正常糖组和甘露醇组(1.23±0....     

NF-κB通路在神经母细胞瘤侵袭转移中的作用及机制

目的 以自主建立的有骨髓转移的神经母细胞瘤细胞系(QDDQNM1)为对象,初步探讨NF-κB通路在神经母细胞瘤(NB)转移过程中的作用及其机制.方法 本实验将细胞系(QDDQ-NM1)分为3组,即:肿瘤坏死因子干预组(Ⅰ组)、正常对照组(Ⅱ组)和PDTC干预组(Ⅲ组).利用RT PCR检测NF-κB通路主要蛋白P65 mRNA及其下游蛋白趋化因子受体4(CXCR4) mRNA的表达;Western-blot法检测P65蛋白及CXCR4蛋白的表达;Transwell小室检测各组间瘤细胞的转移侵袭能力.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组P65 mRNA相对含量分别为0.7211±0.2233、0.6002±0.1822和0.5553±0.0904,CXCR4 mRNA相对含量分别为0.4128±0.0176、0.3045±0.1910和0.1829±0.0091,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组P65蛋白相对含量分别为0.9026±0.0375、0.8340±0.0379和0.8007±0.0793,CXCR4蛋白相对含量分别为0.9472±0.0193、0.9091±0.0216和0.6025±0.0384,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).瘤细胞培养48 h后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组中穿过ECM胶的细胞数分别为55.8000±2.7749、46.6000±5.9414和30.2000±7.4967,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NF-κB通路通过调节其下游蛋白CXCR4的表达来增强NB细胞的侵袭能力.通过抑制NF-κB通路来降低NB细胞的侵袭转移能力,有望成为治疗NB的新途径.     

人T淋巴细胞白血病系Jurkat细胞中Cdtl和Geminin的表达

目的探讨细胞复制允许因子Cdtl和复制抑制因子Geminin在白血病细胞中的表达,为阐明白血病的发病机制提供理伦依据。方法培养白血病细胞系Jurkat细胞,以处于对数生长期的Jurkat细胞作实验组,以正常人外周血淋巴细胞作对照组。利用RT—PCR方法检测细胞中Cdtl和GemininmRNA的表达,进行半定量分析;利用流式细胞仪对细胞荧光强度进行定量分析,以检测细胞中的Cdtl和Geminin蛋白的表达。结果（1）处于对数生长期的Jurkat细胞CdtlmRNA及蛋白表达显著高于对照组（P〈0．05）。（2）处于对数生长期的Jurkat细胞GemininmRNA及蛋白的表达显著高于对照组（P〈0．05）。结论人T淋巴细胞性白血病细胞系Jurkat细胞,Cdtl、Geminin的表达水平较正常人外周血淋巴细胞显著增高,Cdtl、Geminin可能与白血病细胞恶性增殖有关。     

Wnt1信号通路蛋白分子在肾上腺及神经母细胞瘤组织中表达的研究

目的 观察新生儿肾上腺、>2岁小儿肾上腺和神经母细胞瘤组织中经典Wnt信号通路中Wnt1、β-catenin和CyclinD1的表达,探讨Wnt1信号通路调控异常与神经母细胞瘤的相关性.方法 应用免疫组化方法 检测新生儿肾上腺、>2岁小儿肾上腺及各期、各病理类型、化疗前后神经母细胞瘤组织中Wnt1信号通路中Wnt1、β-catenin和CycinD1的表达.结果术前未化疗的肿瘤Wnt1和β-catenin蛋白表达明显强于新生儿肾上腺组织,后者又明显强于>2岁小儿肾上腺(P=0.014),差别均具有高度的统计学意义;Ⅲ～Ⅳ期肿瘤的Wnt1和β-catenin蛋白表达较Ⅰ～Ⅱ期肿瘤高;Ⅲ～Ⅳ期肿瘤中术前未化疗的Wnt1和β-catenin蛋白表达明显高于术前化疗的肿瘤;组织预后不良型(UH)肿瘤Wnt1和β-catenin蛋白表达较组织预后良好型(FH)肿瘤高,差别具有高度的统计学意义.新生儿肾上腺及>2岁小儿肾上腺组织中CyclinD1染色均为阴性,而肿瘤组织中表达阳性,Ⅰ～Ⅱ期肿瘤与Ⅲ～Ⅳ期术前未化疗的肿瘤CyclinD1蛋白表达无差别;Ⅲ～Ⅳ期术前未化疗的肿瘤CyclinD1蛋白表达明显高于术前化疗的肿瘤,UH肿瘤的CyclinD1蛋白表达高于FH肿瘤.结论 Wnt1信号通路对肾上腺细胞分化成熟有一定的调控作用.Wnt1通路异常可能是参与神经母细胞瘤发生和侵袭的重要机制.     

白血病细胞侵袭力及转移与黏附分子表达的关系

目的　研究急性白血病 (AL)细胞浸润及转移与黏附分子CD49d表达之间的关系及相应单克隆抗体的阻断效应 ,探讨AL细胞发生浸润和远处转移的分子机理。方法　对 2 0例急性淋巴细胞性白血病 (ALL)和 2 0例急性非淋巴细胞性白血病 (ANLL)患儿 ,采用免疫荧光染色 (IFS)和流式细胞术 (FCM)检测AL细胞表面CD49d的表达水平。采用ELISA和FCM检测体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经白血病细胞培养上清液或肿瘤坏死因子α(TNF α)作用后细胞间黏附分子 (ICAM 1) ,血管细胞黏附分子 (VCAM 1)的表达水平 ;采用甲基噻唑基四唑 (MTT)法检测AL细胞与HUVEC间黏附率 ,并观察相应单克隆抗体对黏附的抑制作用。结果　 (1)临床浸润明显的ALL和ANLL细胞表面CD49d明显高于正常对照组和非浸润组 (P <0 0 1)。 (2 )HUVEC经AL细胞培养上清液或TNF α刺激后ICAM 1、VCAM 1表达水平均增加 ,但是CD49d高表达的AL细胞与HUVEC之间黏附率随VCAM 1上调而增高 ,与ICAM 1表达无关。结论　AL细胞浸润与表面黏附分子CD49d表达水平有明显关系 ,提示 ,非常晚期抗原 4 (VLA 4 )及配体VCAM 1是AL细胞与血管内皮细胞黏附作用的主要分子基础。使用相应的单克隆抗体可抑制黏附分子间的作用 ,阻断AL细胞的异常生物学行为 ,对防止AL细胞浸润具有一定     

儿童急性白血病Notch1和Jagged1的基因表达

目的：探讨儿童急性白血病（AL）骨髓或外周血单个核细胞中Notch1和Jagged1基因表达及其在AL发病中的可能作用。方法：收集2009年2月至2011年7月初诊的47例AL患儿和20例正常或非恶性血液病儿童（对照组）骨髓或外周血单个核细胞,采用二步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨髓或外周血中Notch1和Jagged1基因表达情况。47例AL患儿中,急性淋巴细胞白血病（ALL）32例,其中B-ALL 26例,T-ALL 6例;急性髓细胞白血病（AML）15例。结果：ALL组及AML组Notch1基因阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。T-ALL患儿Notch1 基因表达水平高于B-ALL患儿,差异有统计学意义（P<0.01）。ALL组及AML组Jagged1基因阳性率与对照组比较差异无统计学意义,但ALL组及AML组Jagged1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1在儿童不同类型ALL中的表达有明显差异,T-ALL 患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL患儿;在儿童AL细胞中,普遍存在Notch1信号的活化;Notch1在AML儿童中异常表达,提示Notch1在AML儿童中也起着重要作用。Jagged1在ALL及AML儿童中异常表达,但需要收集更多资料论证。     

人T淋巴细胞白血病系Jurkat细胞中Cdt1和Geminin的表达

目的探讨细胞复制允许因子Cdt1和复制抑制因子Geminin在白血病细胞中的表达,为阐明白血病的发病机制提供理伦依据。方法培养白血病细胞系Jurkat细胞,以处于对数生长期的Jurkat细胞作实验组,以正常人外周血淋巴细胞作对照组。利用RT-PCR方法检测细胞中Cdt1和Geminin mRNA的表达,进行半定量分析;利用流式细胞仪对细胞荧光强度进行定量分析,以检测细胞中的Cdt1和Geminin蛋白的表达。结果 (1)处于对数生长期的Jurkat细胞Cdt1 mRNA及蛋白表达显著高于对照组(P0.05)。(2)处于对数生长期的Jurkat细胞Geminin mRNA及蛋白的表达显著高于对照组(P0.05)。结论人T淋巴细胞性白血病细胞系Jurkat细胞,Cdt1、Geminin的表达水平较正常人外周血淋巴细胞显著增高,Cdt1、Geminin可能与白血病细胞恶性增殖有关。     

The influence of propranolol on expression of vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinases-2 from in vitro hemangioma endothelial cells

目的 观察普萘洛尔对体外培养血管瘤内皮细胞血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2的影响,探讨普萘洛尔治疗血管瘤的机制.方法 用组织块结合酶消化法原代培养血管瘤内皮细胞,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定.待细胞处于对数生长期,换无血清培养基孵育48h使细胞同步化,然后分别加入0.5 μmol/L和1μmol/L的普萘洛尔作为干预组,而对照组不加任何干预因素,继续孵育24 h,用Real-time PCR法检测血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2的表达水平,同期检测血管瘤血管内皮细胞凋亡率,并分析血管内皮生长因子mRNA、基质金属蛋白酶-2 mRNA的表达水平与血管瘤血管内皮细胞凋亡的相关性.结果 0.5 μmol/L普萘洛尔组和1.0μmol/L普萘洛尔组血管瘤内皮细胞凋亡率分别为(22.42±0.83)％,(24.36±1.42)％,比对照组(15.72±0.59)％明显升高(P＜0.01);血管内皮生长因子mRNA相对表达量分别为1.02±0.42、0.93±0.22,比对照组1.61±0.52降低(P＜0.05),基质金属蛋白酶-2mRNA相对表达量分别为0.77±0.18、0.67±0.27,比对照组1.47±0.57降低(P＜0.05),但0.5μmol/L普萘洛尔组血管内皮生长因子mRNA、基质金属蛋白酶2 mRNA与1.0 μmol/L普萘洛尔组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 普萘洛尔可以促进体外培养的血管瘤内皮细胞凋亡,其机制可能是通过下调血管瘤内皮细胞血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2的表达,从而促进血管瘤内皮细胞凋亡.