G2／M期阻滞与细胞放射敏感性关系的研究进展

在肿瘤的临床治疗中,放射治疗的适应证宽泛,选择性大,故其在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出。电离辐射可以引起肿瘤细胞的DNA损伤,之后通过多种机制杀灭肿瘤细胞。其中,影响肿瘤细胞的周期调控,即通过降低肿瘤细胞的G2／M期阻滞,从而影响肿瘤细胞受损DNA的修复,引起肿瘤细胞死亡就是其治疗肿瘤的主要机制之一。研究表明,肿瘤细胞的放射敏感性与其增殖周期和病理分级有关,不同组织器官来源的肿瘤在受到射线照射后的反应程度各不相同,放射治疗的疗效正是取决于肿瘤细胞对射线的敏感程度,即放射敏感性。如何提高肿瘤的放射敏感性正是现代医学的研究热点和难点。本文针对有关电离辐射造成DNA损伤后ATM介导的G2／M期细胞周期阻滞与肿瘤细胞放射敏感性关系的研究现状进行综述,以期为肿瘤的预防和放射治疗提供新的切入点。     

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562／G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3－（4,5－二甲基噻唑－2）－2,5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测FM—Nov17对K562及K562／G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562／G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562／G01细胞增殖,半数抑制率（IC50）分别为（58．28±0．31）和（62．36±0．14）μmol／L,并减少K562及K562／G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。／M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2／M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562／G01细胞的增殖。     

姜黄素对胰腺癌细胞体外生长及其细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对人胰腺癌细胞PANC—1株体外生长及其细胞周期的影响。方法MTT法检测肿瘤细胞活性，流式细胞仪（FCM）进行细胞周期时相分析。结果MTT结果表明姜黄素对PANC-1细胞具有细胞毒作用。30μM、60μM浓度的姜黄素对细胞增殖的抑制率分别为45．9％、78．1％，10μM浓度抑制作用较小。姜黄素处理24h，分裂相细胞的比例可达8～10％。FCM结果显示姜黄素处理24h时，主要使细胞阻滞于S，G2／M期，使此期的细胞比例增加。而GO／l期的细胞比例减少。处理48h后，G2／M期的细胞比例反而降低，部分可能由于G2／M期细胞并发凋亡所致。结论姜黄素可抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长，其机制可能与干扰细胞周期有关。     

细胞周期蛋白G1、G2与恶性肿瘤的研究进展

肿瘤的形成是细胞增殖、凋亡和分化异常的结果。基于细胞分子生物学的现代医学研究表明细胞周期与细胞癌变已不是两个独立的事件,肿瘤是一种细胞周期紊乱性疾病。细胞周期蛋白目前分Cyclin A、B、C、D、E、F、G、H、I、K十大类。除Cyclin G以外,细胞周期蛋白多数通过在细胞周期时相性地合成与降解,调节对其依赖的蛋白激酶（CDK）活性,从而调控细胞周期进程。细胞周期人为分为DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）和分裂期（M期）。     

Mdm-2、p16在大肠癌中的研究进展

近年来,对肿瘤与细胞周期深入研究,越来越清晰地认识到肿瘤是一类细胞周期疾病和细胞周期调控机制在肿瘤的侵袭、转移的过程中起着重要作用。细胞周期中最主要的调控点在G1～S转折和G2～M转折的DNA损伤关卡：①G1～S期关卡监控DNA是否损伤;②G2～M处的关卡监控DNA是否损伤及DNA是否正确、完全的复制,其分别控制DNA复制和细胞的有丝分裂。     

浅蓝霉素对大肠癌细胞的影响

目的：研究浅蓝霉素能否抑制大肠癌细胞的生长及其可能作用机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法观察浅蓝霉素对大肠癌细胞的影响。以流式细胞仪对浅蓝霉素作用后肿瘤细胞的细胞周期变化进行观察。结果：浅蓝霉素对大肠癌细胞生长的抑制作用具有时间－剂量依赖关系，与对照组比较有显性差异（P＜0．05）。浅蓝霉素引起大肠癌细胞发生G2／M期阻滞。结论：浅蓝霉素通过诱导肿瘤细胞发生G2／M期阻滞而引起大肠癌细胞死亡。     

放射线对体外培养鼻咽癌细胞细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57kip2表达的影响

目的研究放射线对鼻咽癌CNE细胞细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2蛋白表达的影响。方法运用流式细胞术检测放射线诱导的细胞周期阻滞、凋亡；运用免疫组织化学法检测抑癌基因p57^kip2蛋白的表达。结果CNE细胞经照射后，G1期无明显阻滞，S期出现短暂堆积，G2／M期阻滞程度具剂量和时间依赖性，G2／M期阻滞在12h与24h时与照射剂量呈正相关（P〈0．01），随照射后时间延长而增强，峰值出现于12Gy24h；细胞凋亡发生率与照射剂量和照射后时间均呈正相关（P〈0．01）。照射后p57^kip2蛋白表达随照射剂量增加和照射后时间延长而上调（均P〈0．01）。结论G2／M期阻滞、细胞凋亡率和p57^kip2蛋白均能反映及预测鼻咽癌细胞的放射敏感性。     

藤黄酸诱导膀胱癌细胞凋亡和细胞周期阻滞作用

目的：藤黄酸能抑制包括乳腺癌、肝癌、血液系肿瘤以及乳腺癌在内的多种肿瘤细胞的生长,但是目前对于藤黄酸在泌尿系肿瘤作用的报道尚少。文中旨在研究藤黄酸诱导膀胱癌细胞凋亡和细胞周期阻滞作用可能的机制。方法实验分为4组,藤黄酸1．0μmol／L组、2．0μmol／L组、3．0μmol／L组及阴性对照组（加入等渗盐水）。体外培养人膀胱癌细胞株BIU-87,将不同浓度藤黄酸加入处于对数生长期的人膀胱癌BIU-87细胞共培养,免疫组化法检测瘤组织Caspase-3蛋白的表达,使用流式细胞仪检测分析藤黄酸诱导人膀胱癌细胞的凋亡作用和细胞周期变化。结果藤黄酸1．0μmol／L组、2．0μmol／L组、3．0μmol／L组免疫组化评分分别为（4．28±1．86、5．03±0．78和6．47±1．31）,较对照组（2．13±1．27）明显升高,差异均有统计学意义（ P＜0．05）。流式细胞术结果显示：细胞周期 G0／G1期细胞逐渐减少,G2／M 期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显。结论藤黄酸可通过增加 Caspase-3蛋白的表达来促进膀胱癌细胞凋亡,可阻滞膀胱肿瘤细胞周期,抑制膀胱肿瘤细胞的增殖。     

去甲斑蝥素干扰 HL-60 肿瘤细胞周期及其机制研究

目的 明确去甲斑蝥素 (norcantharidin, NCTD) 对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐明 NCTD 的抗肿瘤作用机制。方法 体外培养 HL-60 细胞,NCTD 作用后采用3H-TdR 掺入实验检测 DNA 复制;流式细胞术检测细胞周期进程;Western blotting 检测细胞周期调控蛋白 Cdk1、Cyclin B1、Cdc 25c 表达变化。结果 不同浓度 (16～128 μmol/L) NCTD 作用于 HL-60 细胞 12 h 后,DNA 复制受到抑制,细胞周期出现明显的 S 期累积,并呈剂量依赖性趋势;同时观察到 G2/M 的阻滞,且调控 G2/M 周期进程的调节蛋白 Cdk1、Cyclin B1 及 Cdc 25C 蛋白表达下调。结论 NCTD 可抑制 HL-60 细胞 DNA 复制、下调周期调控蛋白从而干扰肿瘤细胞的周期进程。     

肉桂酰胺格尔德霉素增强肿瘤细胞对力达霉素敏感度的研究

目的 研究肉桂酰胺格尔德霉素（CNDG）与力达霉素（LDM）联合对应用肿瘤细胞敏感度的影响,并探讨相关DNA损伤修复作用机制.方法 用MTT法检测CNDG联合LDM对肿瘤细胞存活率的影响;流式细胞术检测CNDG联合LDM对肿瘤细胞周期的影响;应用免疫荧光法和Western blot方法检测CNDG与LDM联合对肿瘤细胞DNA损伤修复相关信号转导分子和DNA双链断裂水平的影响.结果 CNDG与LDM联合给药可增强LDM对肿瘤细胞增殖抑制作用,且显示二者显示协同作用;LDM和CNDG单药均可引起细胞的G2/M期阻滞,二者联合用药后肿瘤细胞G2/M期明显降低;Western blot法检测与凋亡相关的PARP的切割水平,LDM与CNDG两药联合显著提高肿瘤细胞PARP切割水平,CNDG能够降低LDM引起的ATRIP高表达水平和γH2AX阳性的细胞数量.结论 CNDG能够抑制HSP90活性,并降低LDM引起的肿瘤细胞DNA损伤后修复相关信号转导因子的蛋白水平,增强肿瘤细胞对LDM的敏感度.     

细胞周期激酶CHEK2和p53在恶性肿瘤细胞周期和凋亡中的作用

细胞周期检测点激酶2(cell cycle checkpoint ki-nase 2,CHEK2)是由抑癌基因CHEK2编码的丝氨酸/苏氨酸激酶,CHEK2激酶是DNA双链断裂损伤中重要的信号转导蛋白,参与细胞周期G1、S或G2/M期的阻滞,促进细胞对损伤进行修复。CHEK2基因发生突变后,其编码的激酶会丧失活性,无法修复DNA的损伤,受损伤的DNA不断复制,产生大量异     

多聚乙烯亚胺介导肿瘤细胞基因转染

目的:利用阳离子多聚物多聚乙烯亚胺(PEI)纳米凝胶将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转入同步化的肿瘤细胞中并检测绿色荧光蛋白的表达率,探讨PEI作为载体介导肿瘤细胞基因转染中细胞周期对转染效率的影响?方法:通过6 MV X线照射及药物阻滞使Hela及A549细胞同步化,在5个PEI/DNA梯度比(2/2?4/2?6/2?8/2?10/2 ?滋g/?滋g)下利用PEI介导EGFP报告基因转染进入上述同步化细胞,流式细胞仪和荧光显微镜下测定绿色荧光蛋白表达率,通过梯度试验分析细胞周期时相与表达率之间的关系?结果:在不同增殖状态及PEI/DNA比值梯度下,一定剂量-时间的X射线和顺铂可以使Hela细胞同步化于S期,一定剂量-时间的艾素可以使A549细胞同步化于G2/M期,而血清饥饿法培养则可以使细胞阻滞于G0/G1期,在不同细胞周期时相下EGFP的转染效率不同,两种同步化细胞均表现出S期及G2/M期细胞的转染率显著高于对照组(P < 0.05)和G0/G1期细胞(P < 0.0001)?结论:PEI导入基因的表达效率受细胞周期制约,PEI介导的基因转染受到宿主细胞摄取?转运入核及转录能力的影响,而该进程都是细胞周期依赖性的?     

中药联合长春瑞滨对小鼠Lewis肺癌细胞周期及细胞增殖抗原的影响

目的探讨中药消积饮、华蟾素联合长春瑞滨对小鼠LewiS肺癌细胞周期的作用机制。方法将90只皮下接种LewiS肺癌细胞的C57BL／6小鼠随机分成生理盐水阴性对照组（NS）、环磷酰胺治疗对照组（CTX）、消积饮组（XJY）、华蟾素组（HCS）、长春瑞滨组（NVB）及其相应的组合（XH、XN、HN与XHN），每组10只，分别给予相应药物处理，7d后计算抑瘤率。运用FCM分析小鼠肿瘤细胞周期各时相分布，并利用IHC技术测计PCNA阳性标记指数（PCNA-LI，％）。结果各治疗组小鼠的肿瘤生长均受到不同程度抑制。与NS组比较，XJY组的G0／G1期细胞比例增高（P〈0．01），HCS组的S期细胞比例增高（P〈0．01），而NVB组的G2／M期细胞比例较高（P〈0．01）；XJY＋HCS组G0／G1期、S期细胞比例有所增高（P〈0．01），XJY＋NVB组G0／G1期、G2／M期细胞比例有所增高（P〈0．01），HCS＋NVB组的S期、G2／M期细胞比例则略高（P〉0．05）；而XJY＋HCS＋NVB组的G0／G1期细胞比例较XJY＋HCS、XJY＋NVB、HCS＋NVB组均有所增高（P〈0．05）。各治疗组的PCNA-LI均低于NS组（P〈0．01），两药联合组的PCNA-LI均低于单药组（P〈0．01）。三药联合组的PCNA-LI低于所有两药组（P〈0．05）。结论消积饮、华蟾素和长春瑞滨对小鼠Lewis肺癌细胞增殖具有协同抑制作用，其机制可能与其协同作用于不同细胞周期有关。     

20(S)-人参皂苷Rg3抑制肿瘤生长的作用

目的：观察20(S)-人参皂苷Rg3的抗肿瘤生长的作用并探讨其机制。方法：通过B16黑色素瘤实体瘤模型、MTT法观察Rg3对B16黑色素瘤生长的作用,采用新生血 管计数实验、流式细胞术检测Rg3对肿瘤组织血管生成及细胞周期的影响。结果：实体瘤模型中,不同浓度Rg3各组瘤重明显低于对照组（P<0.01）,且Rg3组肿瘤周围的血管数也明显少于对照组（P<0.01）。体外实验中,MTT法见Rg3抑制B16黑色素细胞的生长,其IC₅₀为（7.76±0.46）mg·L^-1,并且Rg3可阻滞B16黑色素瘤细胞于G0/G1和S期,使G₂/M期细胞数明显减少。 结论：Rg3抑制B16黑色素瘤的生长,其机制可能是通过抑制肿瘤内血管生成及阻滞肿瘤细胞进入分裂期来发挥作用的。     

柠檬酸钠与三氧化二砷联合应用对胃癌SGC一7901细胞的作用

目的探讨柠檬酸钠（sodiumcitrate,CT）与三氧化二砷（As：O,,AS）联合应用对胃癌SGC-7901细胞凋亡及作用机制。方法用sodiumcitrate（终浓度为5mmol／L,CT5）和As20,（终浓度依次为5t~mol／L,AS5）处理体外传代培养的胃癌SGC-7901细胞株。应用DAPI细胞核染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT—PCR法观察抗凋亡相关基因bcl一2表达的变化。结果sodiumcitrate与As：03联合应用相对于单用sodiumcitrate或As203可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（P〈0．05）;与空白组相比,用药后G0／G1期细胞比例下降,G2／M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G2／M期,抗凋亡基因bcl．2表达明显下降。结论sodiumcitrate与As：O,联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与活性氧水平相关

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导NB4细胞凋亡的周期性选择与细胞 活性氧（reactive oxygen species,ROS)水平的关系。方法 以碘化丙啶（PI）标记DNA,流式细胞仪检测As2O3单独或联用二甲萘醌（DMNQ）作用后细胞周期的变化,以7－氨基放线菌素D（7AAD）标记DNA,双氢罗丹明123（DHR）或双氢－乙酰乙酸二氯荧光黄（DCFH－DA）捕获ROS,流式细胞仪双参数法检测细胞周期不同阶段ROS水平。结果 2μmol/L As2O3可选择性诱导NB4 G2／M期细胞凋亡,DMNQ可增强这一效应;G2／M期细胞ROS水平明显高于G1、S期。结论 As2O3诱导NB4 G2／M期细胞凋亡与G2／M期ROS水平较高相关。As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与细胞ROS水平有关。     

青蒿琥酯引起骨髓瘤细胞RPMI8226 G2/M期阻滞

目的研究青蒿琥酯对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞周期的影响及可能机制。方法分别以浓度为0、25、50μg/mL的青蒿琥酯作用于RPMI8226细胞,用透射电镜观察细胞变化,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclin B1和p34cdc2的变化。结果 50μg/mL青蒿琥酯处理48h后,多数细胞显示出凋亡细胞的特征性形态。随着青蒿琥酯浓度增加,G0/G1期细胞的比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞的比例逐渐上升(P<0.05),细胞明显阻滞于G2/M期。细胞周期蛋白cyclin B1表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而增加,p34cdc2表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而降低。结论青蒿琥酯能将RPMI8226细胞阻滞于G2/M期,其机制可能与cyclin B1的升高及p34cdc2的降低有关。     

内镜下瘤体内注射p53基因联合放射治疗治疗食管癌15例

放射线可引起细胞 DNA 损伤,导致肿瘤细胞周期阻滞,并引导细胞凋亡.野生型p53(WTp53)可使细胞阻滞于G2/M期,产生凋亡和细胞增殖抑制作用,而有利于发挥放疗敏感性,因此基因的改变尤其是抑癌基因p53对放疗的疗效起决定性的调控作用.而p53基因的变异(MTp53)将失去这种功能,这是产生肿瘤细胞放射抵抗的重要原因之一 [1].     

过氧化氢诱导同步化HepG2细胞DNA损伤和凋亡的敏感时相研究

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞的DNA损伤和凋亡效应在细胞周期不同时相的敏感性.方法:利用胸腺嘧啶核苷(TdR)阻断肝癌HepG2细胞于G1期末后,去除胸苷,培养不同时间,分别得到同步化的G1期、S期和G2/M期细胞,150 μmol/L的H2O2处理12 h,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定细胞的DNA损伤;将各期细胞用200 μmol/L的H2O2处理,采用流式细胞术测定细胞凋亡.同时实验设立未同步化和正常对照组.结果:①分别获得 88.6%的G1期细胞、78.1%的S期细胞、66.8%的G2/M期细胞.② SCGE结果显示,同步化于S期和G2/M期细胞的DNA尾长明显增长,尾部DNA百分比含量和尾矩明显增加,其中S期细胞效应最为显著.③凋亡检测结果显示,同步化各组细胞的凋亡率明显高于未同步化组,以S期最为显著.结论:H2O2诱导HepG2细胞DNA损伤和细胞凋亡在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导S期细胞的DNA损伤和凋亡.     

^125I粒子组织间植人治疗小鼠皮下移植性肝癌

目的探讨^125I粒子组织间植入治疗小鼠移植性肝癌的疗效及其作用机制。方法建立小鼠皮下移植性H22肝癌模型后行^125I粒子组织间植入治疗9～18d，以10％水合氯醛（0．4g／kg）腹腔注射麻醉小鼠，测肿瘤大小、血常规，取肿瘤组织做病理切片，bax、bcl-2免疫组化，流式细胞仪分析细胞凋亡率及细胞周期，并与对照组比较。结果^125I治疗组所有小鼠均存活，肿瘤缩小至平均直径0．44cm（与对照组比较，P〈0．05）；血常规中RBC、plt变化不明显（与正常组比较，P〉O．05），HGB、WBC下降明显（与正常组比较，P〈0．05）。病理检查治疗组残存肿瘤细胞呈岛状分布，可见大量凋亡细胞，肿瘤中央呈大片凝固性坏死，周围广泛纤维化，有少量淋巴细胞浸润；对照组肿瘤细胞丰富，生长旺盛，间质中有大量淋巴细胞浸润，小血管内可见脱落转移的肿瘤细胞。免疫组化治疗组bax表达增加平均为18．51％（与对照组比较，P〈0．05），bcl-2表达减少平均为4．94％（与对照组比较，P〈0．05）；FCM示治疗12、18d的细胞凋亡率分别为18．13％、20．92％（与对照组比较，P〈0．05），G0／G1期比例分别为37．41％、51．01％（与对照组比较，P〈0．05），出现G1期阻滞。结论^125I粒子组织间植入治疗可诱导H22肿瘤细胞凋亡，出现G1期阻滞，抑制肿瘤增殖，疗效确切。