山竹醇对人口腔鳞癌细胞糖酵解代谢通路的影响

目的 观察山竹醇(Garcinol)对人口腔鳞癌细胞系CAL27增殖和克隆形成能力的影响,以及对CAL27细胞糖酵解代谢的影响. 方法 培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,不同浓度的Garcinol处理CAL27细胞, MTT法检测其对细胞增殖能力的影响.克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.RT-PCR检测Garcinol对细胞内糖酵解通路关键酶表达的影响,以及对糖酵解通路的重要基因表达的影响.并检测细胞上清液中葡萄糖、乳酸含量的变化来评估Garcinol对CAL27细胞内糖酵解水平的影响.通过酶活性实验检测细胞内糖酵解关键酶(HK、PK、LDH)的酶活性变化. 结果 Garcinol能显著抑制CAL27细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);能明显抑制CAL27细胞的克隆形成能力(P<0.01).同时,Garcinol能促进糖酵解关键酶己糖激酶(HK),丙酮酸激酶(PK),乳酸脱氢酶(LDH)的基因表达,增强糖酵解关键酶(HK、PK、LDH)的酶活性(P<0.05).Garcinol也能增加AKT和mTOR的基因表达水平(P<0.05).Garcinol还能促进CAL27细胞的葡萄糖吸收和乳酸分泌.结论 Garcinol能够抑制人口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖和克隆形成能力,同时也增加了细胞内的糖酵解水平.     

天然产物五味子乙素对口腔癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 研究天然产物五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）对口腔癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 用不同浓度的五味子乙素分别处理口腔癌细胞株SCC15和CAL27细胞24 h和48 h,采用CCK-8法和AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术,检测五味子乙素对口腔癌细胞增殖及凋亡的影响;采用Transwell实验分别检测五味子乙素对细胞侵袭的影响,采用qRT-PCR和Western Blot检测五味子乙素对Prx1 mRNA与蛋白表达的影响。结果 CCK-8和流式细胞术检测发现五味子乙素明显抑制SCC15和CAL27细胞增殖并促进细胞凋亡,呈时间和剂量依赖性（P<0.05）。Transwell实验结果显示,五味子乙素对侵袭的抑制作用呈时间和剂量依赖性。五味子乙素对Prx1 mRNA的表达无显著影响,但对其蛋白表达有显著的抑制作用（P<0.05）。结论 五味子乙素可能通过调控Prx1蛋白的表达抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭,促进细胞凋亡。     

天然抗ABCC3 IgG抗体对口腔鳞癌细胞增殖的影响

目的探讨天然抗ABCC3 IgG抗体对口腔鳞癌细胞CAL27和SCC15的影响。方法采用ELISA方法筛查富含天然抗ABCC3 IgG抗体的阳性血浆为实验组,低含天然抗ABCC3 IgG抗体的阴性血浆为对照组。采用qRT-PCR检测ABCC3基因的mRNA表达水平。CCK-8实验和流式细胞术检测天然抗ABCC3 IgG抗体对CAL27和SCC15细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果在CAL27和SCC15细胞中均有ABCC3基因的表达。与阴性对照血浆相比较,富含ABCC3 IgG抗体的阳性血浆可以明显抑制CAL27细胞的增殖(P<0.01),促进CAL27细胞的凋亡(P<0.01),并对CAL27细胞周期中的G2/M期产生阻滞作用(P<0.01),但对SCC15细胞无明显影响。结论天然抗ABCC3 IgG抗体对口腔鳞癌细胞的增殖有抑制作用,可能成为治疗口腔鳞癌的一种有前景的新药物。     

可利霉素对口腔鳞癌细胞生物学活性的影响

目的: 体外评价可利霉素对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤活性。方法: 梯度浓度可利霉素分别处理口腔鳞状细胞癌细胞（HN6/HB96细胞系）,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制生长曲线;采用划痕实验分析细胞迁移能力;采用平板克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用 SPSS 18.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 可利霉素浓度依赖性抑制HN6/HB96的体外增殖,随着药物浓度增加,细胞迁移和克隆形成能力显著下降（P<0.05）;可利霉素使处理过的口腔鳞状细胞癌细胞G1期比例显著升高,S期和G2/M期比例显著下降,细胞周期阻滞于G1期（P<0.001）。可利霉素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,随着药物浓度增加,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。结论: 可利霉素体外抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生物学活性,为可利霉素用于口腔鳞状细胞癌的治疗提供了实验依据。     

KLF4转染对口腔鳞癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察KLF4转染对人口腔鳞癌细胞系SCC15侵袭能力的影响.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,构建pReceiver-Lv105/KLF4慢病毒表达载体,包装病毒颗粒,感染SCC15后,puromycin筛选KLF4稳定表达的细胞系.荧光显微镜和免疫荧光细胞化学鉴定病毒感染成功.然后通过划痕实验检测KLF4转导对细胞体外迁移能力的影响.Transwell细胞侵袭实验检测KLF4转导对细胞侵袭能力的影响.实时荧光定量PCR检测与细胞侵袭和迁移密切相关的因子MMP-9和Twist1的表达.结果 与对照载体转导组SCC15/Lv105细胞相比,SCC15/KLF4细胞中KLF4的表达明显增强.SCC15/KLF4细胞的相对迁移率显著高于SCC15/Lv105细胞(P＜0.01).SCC15/KLF4组的侵袭穿膜细胞数明显多于SCC15/Lv105组(P＜0.05).另外,SCC15/KLF4细胞中MMP-9和Twist1 RNA的表达也高于对照组SCC15/Lv105细胞,其中MMP-9 RNA的表达升高更为显著(P＜0.01).结论 KLF4转导SCC15细胞后,可能通过增强MMP-9和Twist1的表达促进细胞的迁移和侵袭能力.     

MTUS1／ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨过表达MTUS1/ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法检测人舌鳞癌系UM1、SCC鄄9、SCC鄄15、Tca8113细胞株中MTUS1的表达水平。应用含ATIP1片段的质粒转染舌鳞癌细胞,48 h后MTT检测舌鳞癌细胞的增殖能力;应用流式细胞仪技术和细胞免疫荧光技术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测舌鳞癌细胞中MTUS1、p53、ERK1/2的表达情况。结果转染MTUS1/ATIP1后细胞的增殖明显受到抑制,其抑制率约为40％（t=0.023,P＜0.05）;高表达MTUS1/ATIP1可导致舌鳞癌细胞株G1期阻滞（G1期：t=0.032,G2期：t=0.036,S期：t=0.027,P＜0.05）并诱导细胞凋亡率的明显升高,差异具有统计学意义（t=0.005,P＜0.05）。 Western blot检测显示,转染MTUS1/ATIP1后ERK的表达升高,磷酸化的ERK表达下降,p53的表达升高。结论 MTUS1可抑制舌鳞癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

莱菔硫烷对RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的调控作用

目的 观察莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对RhoC稳定敲低的口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA的影响。方法 选取口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA进行培养，用不同浓度的SFN处理对数期CAL27RhoC/shRNA细胞，通过RT-PCR和western blot检测SFN对细胞中Nrf2 RNA和蛋白水平的影响。分别通过MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测SFN对口腔鳞癌细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响；PHOD染色检测SFN对口腔鳞癌细胞F-actin聚合能力的影响。结果 应用SFN能有效抑制口腔鳞癌细胞CAL27 RhoC/shRNA的增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力和F-actin蛋白聚合能力。结论 SFN可减弱RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的恶性能力。     

缺氧对口腔癌细胞增殖和凋亡的作用

目的检测口腔癌细胞中缺氧情况及缺氧/复氧对口腔癌细胞增殖、凋亡的影响。方法设立对照组和不同时间缺氧/复氧6个实验组,采用细胞培养、缺氧探针、MTT法及流式细胞术等方法检测SCC15口腔癌细胞中缺氧情况及缺氧/复氧对口腔癌细胞增殖、凋亡的影响。结果对照组和实验组SCC15细胞均呈现缺氧状态,随着缺氧时间的延长,活细胞数减少,细胞形态呈现细胞凋亡改变。缺氧12h组、24h组、缺氧12h/复氧2h组、缺氧24h/复氧2h组细胞增殖被显著抑制,随缺氧时间延长,SCC15细胞生长抑制的比例逐渐加大(P0.01)。缺氧对不同实验组SCC15细胞均能促进细胞凋亡。随缺氧时间延长,SCC15细胞发生凋亡的比例逐渐增高。除缺氧4h组外,其它各组与对照组相比,差异具有统计学意义((P0.01)。结论缺氧与口腔癌细胞增殖和凋亡密切相关,缺氧程度影响着口腔癌细胞的生长。     

土曲霉酮对人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9的作用

目的 观察土曲霉酮对人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9的影响.方法 不同浓度的土曲霉酮处理SCC9细胞后,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,用Annexin V/PI试剂盒及碘化丙啶分别检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果 土曲霉酮对SCC9细胞有抑制增殖的作用,抑制作用随着药物浓度的增大(P＜0.05)及给药时间的延长而增强(P＜0.05).此外,与不给药组相比,5 μmol/L和10 μmol/L土曲霉酮处理,可引起处于G2/M期的SCC9细胞比例由(24.8±0.6)％分别增加到(26.2±0.4)％和(34.2±1.2)％ (F=132.13,P＜0.01),但对SCC9细胞凋亡没有明显的影响.结论 土曲霉酮通过引起G2/M期阻滞来抑制人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9细胞的增殖,提示土曲霉酮有望在舌鳞状细胞癌的治疗中发挥作用.     

KLF4对口腔鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨KLF4对人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖抑制作用.方法 构建KLF4慢病毒表达载体,并转染人口腔鳞癌细胞系CAL27,转染不含KLF4开放读码框的慢病毒载体LV105作为对照.采用RT-PCR、免疫细胞化学法对KLF4表达进行鉴定.MTT实验、流式细胞术检测KLF4对口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖抑制作用.结果 RT-PCR、免疫细胞化学实验均表明实验组细胞KLF4的表达明显高于对照组(P＜0.01).MTT实验结果表明与对照组CAL27/LV105组相比,CAL27/KLF4能够抑制细胞的增殖能力(P＜0.01).CAL27/KLF4主要通过使细胞周期中的G2/M期阻滞来抑制CAL27细胞的增殖(P＜0.01).结论 KLF4转染能够抑制口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖能力,可能在口腔鳞状细胞癌中作为抑癌基因发挥作用.