应用蛋白质组学技术筛选鉴定锌指蛋白139调控的胃癌转移相关蛋白质

目的以胃癌SGC7901细胞原位移裸鼠模型为对象,通过荧光双向差异凝胶电泳（2D-DIGE）结合液质联用（LC-MS）质谱
分析技术鉴定ZNF139 调控的胃癌转移相关蛋白质。方法合成针对ZNF139 的小干扰RNA（ZNF139-siRNA）,以
ZNF139-siRNA转染人胃癌细胞株SGC7901,G418筛选。以ZNF139-siRNA质粒转染的胃癌细胞、阴性质粒转染的胃癌细胞
及普通胃癌细胞分别进行裸鼠胃癌原位移植。造模成功后取出原位移植瘤及腹腔转移淋巴结。荧光双向差异凝胶电泳
（2D-DIGE）技术分别分离ZNF139-siRNA 各组原位移植瘤及腹腔转移淋巴结蛋白质;选定差异点,胶内酶解后,液质联用
（LC-MS）质谱分析技术鉴定蛋白质。蛋白印迹（Western blot）技术验证差异蛋白质的表达。结果转染ZNF139-siRNA质粒后
SGC7901细胞中ZNF139的表达受到有效抑制。与阴性质粒组及空白组比较,阳性质粒组原位移植瘤生长更慢（P<0.05）,且腹
腔淋巴结转移率更低（P<0.05）。蛋白质组学结果发现在阳性质粒组原发灶中Fascin、hnRNPA2/B1表达下调,ANXA1表达上
调;阳性质粒组转移淋巴结中ANXA5表达下调（P<0.05）。Western blot验证结果与蛋白质组学结果相符。结论ZNF139可能
通过调节Fascin、hnRNPA2/B1、ANXA1、ANXA5促进胃癌淋巴结转移。
     

裸鼠人胃癌原位移植模型的建立

作者以ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株裸鼠皮下移植的瘤组织块为材料，将其移植到裸鼠胃壁，成功地建立了裸鼠人胃癌原位移植模型。该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３～４周，以后迅速增长并与网膜粘连，约１２周以后部分动物（２／６）出现肝转移，生存期为１６～２４周。本方法原位成瘤率及局部浸润率均为１００％，且可出现肝脏转移，肿瘤生长过程与临床胃癌类似，适用于人胃癌转移的研究     

白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤中PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将BGC-823细胞复苏后,通过右前肢腋部皮下移植构建裸鼠胃癌移植瘤模型。建模成功后的荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、Res组、顺铂组和联合用药组(白藜芦醇+顺铂),各组分别在成瘤部位皮下注射0.2ml相应的药物,每日1次,治疗1周。停药后将裸鼠处死,剥离肿瘤组织。采用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中PDCD5蛋白表达,采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。结果 Res组中PDCD5蛋白表达水平明显高于空白对照组,但低于顺铂组和联合用药组,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测到胃癌移植瘤中凋亡细胞核呈棕褐色,染色深浅不一,染色质分布不均,空白对照组中仅见到少数凋亡细胞,Res组、顺铂组和联合用药组凋亡细胞数依次增加,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可上调裸鼠胃癌移植瘤细胞中PDCD5的蛋白表达,表明其可能通过上调PDCD5的表达进而诱导细胞凋亡。     

金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MK-45细胞凋亡的影响

目的:评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞的抑制作用。方法:50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组。各组裸鼠予以相应药物实施干预。观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率。流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluoresceinisothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI)双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞。电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化。结果:金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13%、55.94%和50.31%,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义。金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81%~38.54%,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期。AnnexinV-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多。结论:金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一。     

胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139与肿瘤细胞凋亡和生存素及B细胞淋巴瘤/白血病-2的关系及意义研究

目的 探讨胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139（ZNF139）与肿瘤细胞凋亡、生存素（Survivin）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的关系及意义。方法 选取2012年1-6月在河北医科大学第四医院外三科行手术切除的35例进展期胃癌患者为研究对象,收集患者胃癌组织及相应的淋巴结转移组织,采用DNA原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡指数（AI）,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA的相对表达水平,蛋白印迹法（Western blotting）检测ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表达水平。结果 胃癌原发灶AI（10.8±4.7）高于淋巴结转移灶的（8.7±3.0）（t=-2.176,P=0.039）。淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均高于胃癌原发灶（P＜0.05）。淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2蛋白表达水平均高于胃癌原发灶（P＜0.05）。胃癌原发灶Survivin mRNA相对表达水平与AI呈负相关（r=-0.517,P=0.001）;淋巴结转移灶ZNF139、Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均与AI呈负相关（r=-0.346、-0.467、-0.511,P=0.042、0.005、0.002）。淋巴结转移灶Bcl-2 mRNA相对表达水平与胃癌原发灶Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.791,P＜0.001）。在胃癌原发灶中,ZNF139 mRNA相对表达水平与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.482,P=0.003）。在淋巴结转移灶中,ZNF139 mRNA相对表达水平与Survivin、Bcl-2 mRNA相对表达水平均呈正相关（r=0.436、0.452,P=0.009、0.006）;Survivin mRNA相对表达水平与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.465,P=0.005）。结论 胃癌肿瘤细胞在转移过程中抗凋亡能力增强,这可能与ZNF139对部分凋亡相关基因（Survivin、Bcl-2）的调控有关,但这种调控关系在胃癌原发灶和淋巴结转移灶中并不相同。     

山柰挥发油对裸鼠原位移植人胃癌生长和细胞周期的影响

目的探讨山柰挥发油对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞增殖的抑制作用。方法建立裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞模型。105只裸鼠随机分为山柰挥发油乳剂高、中、低剂量组,乳剂溶媒对照组,生理盐水组,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组和空白对照组,每组15只。各组裸鼠予以相应药物实施干预。观察各组荷瘤裸鼠一般情况、肿瘤生长情况及抑瘤率。流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况。电镜下观察肿瘤细胞超微结构的变化。结果山柰挥发油乳剂高、中、低剂量组的抑瘤率分别为57.2%、28.0%和5.0%,肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期,与空白对照组比较差异有统计学意义,且呈剂量依赖效应。电镜下观察山柰挥发油乳剂高剂量组和CTX组可见较多凋亡细胞,而山柰挥发油乳剂中、低剂量组凋亡细胞较少。结论山柰挥发油对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制增殖作用,且呈剂量依赖效应,其机制可能与调节胃癌细胞周期、促进G1期阻滞及诱导细胞凋亡相关。     

绿色荧光蛋白标记的人卵巢癌裸鼠原位移植模型的建立

目的 应用绿色荧光蛋(GFP)基因标记人卵巢癌细胞株H08910,建立新型裸鼠原位移植瘤模型.方法 将处于对数生长期的人卵巢癌细胞株H08910/GFP 2×106个细胞注射于裸鼠腋下,收集瘤块后接种于左侧卵巢包膜下,共6只.术后利用荧光体视显微镜连续观察肿瘤生长情况,4周后处死荷瘤鼠,观察肿瘤生长及转移情况.结果 种植的原位移植瘤成瘤率100%,移植后2周可观察到左侧肋脊角处绿色荧光团,并逐渐增大,4周后,可见肿瘤侵及腹膜、网膜、肠管、脾脏、肝脏、子宫、盆腔淋巴结,转移率达66.7%.结论 成功建立新型裸鼠原位人卵巢癌的动物模型.     

罗非昔布对裸鼠人胃癌原位种植瘤组织中微血管密度表达的影响

目的探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌原位种植瘤组织中微血管密度(microvessel density,MVD)表达的影响。方法建立裸鼠人胃癌原位种植转移模型,随机分为生理盐水对照组、5-Fu化疗组、罗非昔布组及罗非昔布联合5-Fu化疗组(联合用药组),生理盐水、罗非昔布灌胃给药,5-Fu腹腔注射给药,采用免疫组织化学Envision法检测各组原位种植瘤组织中MVD的表达。结果MVD计数结果显示,生理盐水对照组为56.8±9.8,5-Fu化疗组为39.9±7.0,罗非昔布组为42.3±11.0,联合用药组为25.1±7.6。罗非昔布组与生理盐水对照组之间、罗非昔布组与联合用药组之间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论环氧合酶-2抑制剂罗非昔布可以通过降低胃癌肿瘤组织中MVD的表达,使胃肿瘤血管生成受到抑制;与化疗药物联合应用增加其抑制血管生成作用。     

建立裸小鼠人胃癌原位移植模型的一种新方法

目的 :建立人胃癌裸小鼠原位移植模型 ,并对不同方法进行比较。　 方法 :BAL B/Cnu/ nu裸小鼠 18只 ,随机分为三组 ,胃囊法组通过手术将 SGC- 790 1人胃癌组织块移植到裸小鼠由胃壁粘膜缝制的小囊内 ;缝挂法组以缝挂方法作对比 ;第三组为对照组。待荷瘤鼠濒临死亡时处死进行解剖。　 结果 :胃囊法组及缝挂法组原位成瘤率及局部浸润发生率均为 10 0 % ,胃囊法组肝脏转移率为 66.7% ( 4 / 6) ,显著 ( P<0 .0 1)高于缝挂法组 ( 33.3% ) ,而且幽门梗阻及癌性腹水发生率亦明显提高 (分别为 83.33% vs 16.6% ,P<0 .0 0 1;66.7% vs 16.6% ,P<0 .0 0 1)。　 结论 :胃囊法建立的模型能更好地再现人胃癌的生长特性     

人体恶性肿瘤裸鼠体内移植进展,原位移植模型的建立

恶性肿瘤是对人生命威胁最大的疾病之一,为了进行全面的实验肿瘤研究,人们一直在努力建立较为理想的动物模型。自1966年Flanagan首先描述了裸小鼠(简称裸鼠)的遗传特征后,1968年Pantelouris发现裸鼠先天性胸腺缺如,体液中缺乏T细胞,对正常或肿瘤性的异种移植物不产生排斥,这一发现使人体恶性肿瘤的动物体内移植模型建立成为可能。     

大蒜匀浆对裸鼠荷人胃癌细胞移植瘤的影响

目的研究大蒜匀浆液(garlicjuice,GJ)诱导人胃癌MGC803细胞分化的作用。方法采用裸鼠成瘤抑制实验、生长曲线绘制、光镜、AgNOR染色及电镜,分别观察GJ对裸鼠荷人胃癌MGC-803细胞移植瘤生物学和病理形态学的影响。结果MGC803细胞移植裸鼠皮下后,对照组、灌注组与处理组分别有3只、2只和1只成瘤,灌注组与处理组较对照组,肿瘤生长速度明显减慢,肿块无明显坏死、出血和溃疡形成,瘤体重量减轻(P<0.05)。未处理组瘤细胞为卵圆形、胞浆少、核大、核浆比例大、核膜凹陷有切迹、核仁大而明显、核分裂多、线粒体减少、核蛋白体丰富,GJ处理后瘤细胞为多边形或梭形、核浆丰富、核小、核浆比例较小、核膜较光滑、核仁小或欠明显、核分裂减少、线粒体增加。对照组瘤细胞AgNOR颗粒多而细小,处理组瘤细胞AgNOR颗粒少而粗大(P<0.05)。结论GJ具有诱导人胃癌MGC803细胞向正常细胞分化的作用。     

胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白139、血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的 研究锌指蛋白139(ZNF139)、血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中的表达差异及其临床意义.方法 选择2019年2月至2020年8月在西安市长安区医院就诊的78例胃癌患者,共分离出78份癌组织和42份转移淋巴结组织,记录患者临床病理学特征.通过免疫组化法检测患者原发灶和区域淋巴结转移灶...     

人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型.方法 使用对数生长期的人结肠癌细胞(lovo)在8只裸鼠结肠浆膜至黏膜逐层注射,以完成原位移植瘤模型的制备,同时皮下种植8只裸鼠作为对照组.分别于第4、6、8、12周各组分别处死裸鼠2只,观察原位种植肿瘤的成瘤率、生长情况、转移率和腹水出现率.结果 16只裸鼠实验期间无1只死亡,成瘤率为100%, 原位种植成瘤率为100%(8/8),区域淋巴结转移率100%(8/8),肝转移率为100%(8/8),肺脏转移率为75.0%(6/8),腹膜转移率为75.0%(6/8),腹水出现率为27.5%(3/8).皮下种植组未见转移.结论 本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,该模型的生物学行为与临床病程非常相似,为研究人结肠癌转移机制和干预措施提供了较为理想的动物模型.     

人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

目的　建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型。方法　使用对数生长期的人结肠癌细胞(HT- 2 9)在裸鼠皮下接种4周形成稳定的皮下移植瘤,再将皮下移植瘤组织块原位接种于2 4只裸鼠盲肠浆膜下,以完成原位移植瘤模型的制备。术后随机分四组,对照组(C组)、塞来昔布(celecoxib)高、中、低剂量组(H、M、L组) ,分别给予纯水及含有不同浓度(15 0 0 ppm、10 0 0ppm和5 0 0 ppm)的塞来昔布的饮水,饲养4 2d后处死裸鼠,观察各组原位移植瘤的成瘤率、瘤体积、重量以及裸鼠实验前后的体重变化,计算抑瘤率。结果　2 4只裸鼠实验期间无一只死亡,成瘤率为10 0 % ,荷瘤鼠实验前后体重变化比较在统计学上无显著差异(P >0 .0 5 ) ,各组原位移植瘤体积P <0 .0 5和瘤重P <0 .0 1比较差异有显著性,L组、M组和H组的抑瘤率分别为2 5 .30 %、38.80 %、76 .92 % ,与对照组比较差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论　本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,为研究人结肠癌发病机制和干预策略提供了较为理想的动物模型,塞来昔布对人结肠癌原位移植瘤生长具有明显的抑制作用,且有一定的量效关系。     

人胃癌裸鼠体内原位移植生长过程的动态观察

目的 :建立与临床胃癌的生长过程和特点相似实验动物模型。　 方法 :以 SGC- 790 1人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤为材料 ,将瘤组织块种植到裸鼠胃壁 ,动态观察生长过程。　 结果 :原位移植模型潜伏期 2～ 4周 ,第 4周以后原位肿瘤明显长出 ,第 12周以后出现肝转移 ,第 16周以后部分荷瘤鼠发生腹水 ,幽门梗阻 ,动物逐渐衰竭 ,出现恶病质等征象。　 结论 :原位肿瘤模型与临床胃癌的生长过程和生物学特性非常相似 ,可作为胃癌实验研究的理想动物模型     

苦参素对裸鼠胃癌移植瘤组织中BIP表达的影响

目的通过研究苦参素对裸鼠胃癌移植瘤组织中结合免疫球蛋白(BIP)表达的影响,以探讨其诱导肿瘤凋亡的可能机制。方法运用移植瘤体积判定肿瘤生长抑制,TUNEL检测细胞凋亡率,原位杂交技术显现BIP表达状况。结果经不同浓度苦参素处理9 d后,肿瘤平均体积出现明显缩小(P0.05);各剂量组均出现细胞凋亡(P0.01);BIP表达明显下降(P0.01)。结论苦参素诱导裸鼠移植瘤凋亡的作用与调控内质网应激信号通路相关,BIP基因下调可能是其作用靶点之一。     

七甲川菁近红外荧光染料对胃癌原位移植模型的靶向识别

目的 研究七甲川菁近红外荧光（NIRF）染料在胃癌原位移植模型活体成像中的应用效果。方法 将标记荧光酶素的人胃癌细胞系HepG2原位移植裸鼠建立肿瘤模型,同时诱发制备胃溃疡模型;对上述模型分别采用生物发光成像和NIRF成像,观察胃癌组织对近红外荧光染料的吸收;探索缺氧和阴离子转运肽（OATP）对胃癌组织吸收NIRF染料的影响,明确NIRF染料靶向识别肿瘤细胞的特异性。结果 NIRF信号与生物发光信号在胃癌原位移植模型活体成像中具有较好的相关性。胃癌组织部位可获得较强的NIRF荧光信号,而胃溃疡部位未检测到荧光信号。缺氧能够增强胃癌细胞对NIRF染料的吸收,而阴离子转运肽特异性抑制剂磺溴酞钠（BSP）能够显著降低肿瘤细胞对NIRF染料的吸收。结论 七甲川菁近红外荧光染料能够靶向识别胃癌原位移植模型。     

“纤维蛋白原-凝血酶”法建立人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型

目的：采用“纤维蛋白原-凝血酶”法建立人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型,为研究胃癌的发病机制及实验治疗提供理想的动物模型。方法：以人胃癌细胞株SGC-7901反复接种传代于BALB／C裸鼠皮下形成的皮下移植瘤组织块为材料,采用“纤维蛋白原-凝血酶”法将其粘贴于裸鼠胃壁,观察原位移植瘤的生长情况,移植成功率及转移情况。结果：“纤维蛋白原-凝血酶”法人胃癌组织块原位移植成功率为100％,局部淋巴结转移率为100％,肝脏及其他脏器转移发生率为83％,腹腔积液形成率为50％。结论：“纤维蛋白原-凝血酶”法能成功地建立人胃癌组织块裸鼠原位移植模型,并能很好地重现胃癌患者的临床转移过程,可为胃癌的临床研究提供一种简便、易行的实验模型。     

胃肠安对人胃癌MGC-803裸鼠皮下移植瘤中乏氧相关蛋白表达的影响

目的:观察MGC-803人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型经胃肠安干预后对其相关乏氧蛋白表达的影响,探讨胃肠安对MGC-803人胃癌转移的作用机制。方法:选用BALB/C裸鼠,以人胃癌MGC-803细胞在其皮下注射建立移植瘤模型,随机分为3组并给予相应干预,分别为胃肠安组(胃肠安煎剂0.3 ml灌胃,1次/d)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组(5-Fu 1 mg腹腔注射,1次/周)、模型组(0.9%Na Cl溶液0.3 ml灌胃,1次/d),干预时间均为8周。用免疫组化法检测乏氧相关蛋白包括乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、赖氨酰氧化酶(LOX)、类赖氨酰氧化酶2(LOXL2)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果:胃肠安组裸鼠胃癌组织乏氧相关蛋白HIF-1α、TGF-β1、LOX、LOXL2、CTGF表达均较模型组明显降低,两组比较差异均有统计学意义(P0.01)。结论:胃肠安能明显降低人胃癌MGC-803裸鼠皮下移植瘤中HIF-1α、TGF-β1、LOX、LOXL2、CTGF的表达,提示胃肠安可能通过下调乏氧相关蛋白的表达而起到抑制肿瘤转移的的作用。