鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用

目的研究鱼腥草水提液体外对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用。方法应用微量倍比稀释法测定鱼腥草水提液、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法测定鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的影响,镜下观察该药对铜绿假单胞菌生物被膜的形态影响。结果实验结果提示,鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌的MIC为250 g.L-1,协同实验表明与阿奇霉素有抗菌相加作用。鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的SMIC501,3,7d分别是31.25,62.5,62.5 g.L-1,SMIC80分别是250,250,250 g.L-1。SMIC80药物浓度显示对铜绿假单胞菌生物膜形态形成有干扰作用。结论鱼腥草水提液与阿奇霉素抗菌相加作用明显,并能抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成,为鱼腥草治疗由生物膜引起的慢性感染提供了依据。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌黏附的清除作用及对生物被膜形成的影响

目的:研究鱼腥草素钠(houttuyfonate sodium,SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)黏附的清除作用及对生物被膜(biofilm,BF)形成的影响。方法:用96孔板孔建立铜绿假单胞菌黏附生物被膜,MTT法检测膜内菌的代谢变化、评价药物对黏附菌的最小清除浓度(minimum eliminateing concentration,MEC)及最小抑膜浓度(sessile minimal inhibitoryconcentration,SMIC);菌落计数法观察药物对黏附、膜内菌量影响;扫描电镜观察药物对受试菌黏附作用及生物被膜的形态结构影响。结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MEC80为500 mg·L-1,MEC50为125 mg·L-1,对铜绿假单胞菌早期生物被膜和成熟生物被膜SMIC80均为500 mg·L-1,早期生物被膜、成熟生物被膜SMIC50分别为31.25,1.95 mg·L-1。250 mg·L-1药物浓度使载体上黏附的及初步生物被膜、成熟生物被膜内的活菌数明显减少,和对照组比较差异显著(P<0.05),扫描电镜观察黏附载体上的细菌明显减少,连续用药后,成熟生物被膜阶段载体上未见有生物被膜结构,菌量明显减少并且细菌形态发生变异,由杆状变为球杆状。结论:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的黏附有较强的清除活性,通过连续给药能抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的清除作用

目的研究鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌早期生物被膜及成熟期生物被膜的清除作用。方法用96孔板建立体外铜绿假单胞菌生物被膜,给药24 h后MTT法检测生物被膜最低清除浓度(sessile minimal eradicating concentration,SMEC),扫描电镜下观察药物对生物膜形态影响。结果鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的SMEC50,早期是15.6 mg/L,成熟期是250 mg/L,在早期生物被膜向成熟生物被膜发展过程中SMEC50均在250 mg/L,镜下观察250mg/L药物质量浓度能清除大部分的生物被膜,同时可使铜绿假单胞菌发生形态变异。结论鱼腥草素钠对早期及成熟期的生物被膜有一定的清除作用,对早期生物被膜的清除作用更强于成熟期生物被膜。     

鱼腥草素钠增强亚胺培南抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的：研究鱼腥草素钠联合亚胺培南增强抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用。方法：2倍稀释法测定被试药物最小抑菌浓度（MIC）,结晶紫染色法检测1/2MIC,1MIC,2MIC 的鱼腥草素钠（SH）、亚胺培南（IMP）单药组和1/2MIC的SH与IMP各药物浓度联合组对黏附菌的清除量、生物被膜生长量、藻酸盐产生量的影响。FDA-PI荧光素双染法荧光显微镜下观察各药物组膜分散后死活细菌、生物被膜形态。结果：鱼腥草素钠能增强亚胺培南抗绿假单胞菌生物被膜的作用,尤以2MIC药物浓度联合组作用最强（与阴性对照组比较P<0.001）。荧光显微镜下观察死活细菌、生物被膜形态支持了上述结果。结论：鱼腥草素钠联合亚胺培南能增强抗生物被膜作用,预期两药联合会提高相关感染的临床疗效。     

四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用及机制研究

目的:研究中药四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用并探讨其作用机制。方法:将四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养,观察四季青水煎液在亚抑菌浓度下对细菌生长的影响;将铜绿假单胞菌培养3天构建生物被膜模型,加入不同浓度的四季青水煎液共同培养,于不同时间取样,经结晶紫染色后570 nm处测定生物被膜的光密度(OD值);将不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养18 h,经氯仿提取后于540 nm处测定绿脓菌素光密度(OD值),与刚果红反应后,492 nm处测定弹性蛋白酶光密度(OD值);用荧光定量PCR法检测四季青水煎液作用于铜绿假单胞菌后Las I/R和Rhl I/R基因的表达;用LC-MS/MS法测定不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养48h,72 h后培养液中细菌信号分子3-oxo-C12-HSL和C4-HSL的浓度及与生物被膜生长及毒力因子分泌的关系。结果:在亚抑菌浓度下四季青水煎液不影响铜绿假单胞菌的生长,但能显著抑制铜绿假单胞菌生物被膜生成和毒力因子分泌。其减毒作用机制可能是四季青中含有铜绿假单胞菌群体感应系统抑制成分,抑制了该系统中上游信号分子3-oxo-C12-HSL与LasR基因的结合,从而阻断了下游基因的启动。结论:四季青水煎液能通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中信号分子对相关基因进行调控,从而降低铜绿假单胞菌的致病性。     

黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌生物被膜 及与阿奇霉素协同抗菌作用

目的:研究黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌牛物被膜及与阿奇霉素协同抗菌作用.方法:微量倍比稀释法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定黄连解毒汤和阿奇霉素协同抗菌作用,MTT法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC),显微镜下观察药物对生物膜形态的影响.结果:黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的MIC 100 g·L-1,阿奇霉素200 mg·L-1,两药联合后MIC分别为25 g·L-1和25 mg·L-1抑菌分级指数(FIC)0.1875,提示两药协同作用明显.黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的SMIC5.1,3d均为15.6 g·L-1,7 d31.25 g·L-1;SMIC801,3,7d均为250 g·L-1,形态观察提示黄连解毒汤SMIC80浓度对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制作用明显.结论:黄连解毒汤具有抗铜绿假单胞菌生物被膜作用,与阿奇霉素有协同抗菌作用.     

苦参提取物与头孢他啶联用对铜绿假单胞菌生物被膜清除作用影响的体外研究

目的:通过建立生物被膜(Bacterial Biofilm,BF)体外模型,探讨苦参提取物在体外对铜绿假单胞菌BF的破坏清除作用及其与头孢他啶(CAZ)联用的协同杀菌作用.方法:用试管二倍稀释法检测最低抑菌浓度;BF快速银染法鉴定生物被膜;连续稀释法进行细菌茵落计数.结果:1/4、1/16 MIC苦参与1/4、1/2头孢他啶合用对铜绿假单胞茵有抑菌作用,2药单独使用均无抑茵作用.结论:2药联用对铜绿假单胞茵生物被膜有明显的清除作用,值得临床推广.     

麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的研究麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法微量倍比稀释法测定麻杏石甘汤、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法评价二者对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC(SMIC50、SMIC80)的影响,镀银染色法观察麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响。结果麻杏石甘汤SMIC50和SMIC80分别为250,1 000 mg.ml-1;500 mg.ml-1的麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的形态有显著影响。结论麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜有较强的抑制作用。     

三七对铜绿假单胞菌密度感应相关毒力因子表达的影响

目的：通过观察三七对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）密度感应（Quorum sensing,QS）相关毒力因子表达变化的影响,探讨其作用机制。方法：用不同浓度三七与细菌共培养,采用弹性蛋白-刚果红降解试验测定弹性蛋白酶活性;采用紫外分光光度法测定绿脓菌素分泌量;结晶紫染色法观察生物被膜形成量;检测细菌在含三七琼脂平板中的集群运动与泳动能力。结果：三七在25mg/ml、12.5mg/ml和6.25mg/ml浓度下对弹性蛋白酶活性、绿脓菌素分泌有显著抑制作用,并能减少生物被膜形成。12.5mg/ml三七作用后细菌泳动能力受到抑制而集群运动无显著变化。结论：三七对铜绿假单胞菌密度感应相关毒力因子表达均有抑制作用,提示三七可以抑制铜绿假单胞菌密度感应功能,三七可能是铜绿假单胞菌密度感应抑制剂。     

苦参碱对大鼠铜绿假单胞菌感染肺组织Th1/Th2调节机制的研究

目的研究苦参碱对大鼠铜绿假单胞菌(PA)感染肺组织Th1/Th2机制的调节。方法 40只SPF级SD大鼠,随机分为5组,每组8只,分别为正常对照组、铜绿假单胞菌模型组、苦参碱干预组、左氧氟沙星干预组、左氧氟沙星联用苦参碱组。通过大鼠麻醉、支气管插管注入铜绿假单胞菌方法造模,正常对照组用0.9%Na Cl溶液代替铜绿假单胞菌。各组采取相应干预措施。观察大鼠肺组织病理变化,检测肺组织白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)细胞因子含量,转录因子T-bet、Gata-3的变化;用RT-PCR半定量法检测IL-4 mRNA、IFN-γmRNA以及T-bet mRNA、Gata-3 mRNA的表达。结果苦参碱组、左氧氟沙星组及左氧氟沙星联用苦参碱组肺组织IL-4含量及IL-4 mRNA均较铜绿假单胞菌模型组降低,而IFN-γ水平及IFN-γmRNA较铜绿假单胞菌模型组升高(P0.05);苦参碱组、左氧氟沙星组及左氧氟沙星联用苦参碱组中肺组织转录因子Gata-3水平和Gata-3 mRNA表达较铜绿假单胞菌模型组降低(P0.05),而转录因子T-bet水平和T-bet mRNA表达较铜绿假单胞菌模型组升高(P0.05)。结论苦参碱能调节大鼠铜绿假单胞菌肺部转录因子T-bet和Gata-3表达,诱导大鼠机体由Th2型向Th1型分化,促进IFN-γ炎症因子合成、抑制IL-4合成,从而减轻肺部组织感染损伤。     

鱼腥草注射液对硫酸庆大霉素兔体内抗菌作用的影响

目的观察鱼腥草注射液对硫酸庆大霉素注射液兔体内抗菌作用的影响。方法将健康家兔18只分为3组,每组6只。第1组注射鱼腥草注射液;第2组注射硫酸庆大霉素注射液;第3组注射硫酸庆大霉素注射液加鱼腥草注射液。以一定用量连续耳缘静脉注射6 d后心脏取血5 mL,用短小芽孢杆菌按微生物法测定各组药物抗菌活性。结果鱼腥草注射液体内外无抗菌活性,对兔体内硫酸庆大霉素注射液抗菌活性有明显增强作用(P<0.01)。结论鱼腥草注射液与硫酸庆大霉素注射液联合应用有明显的体内协同作用。     

鱼腥草的炮制工艺与质量标准研究

目的优选鱼腥草药材确定炮制工艺;GC法测定甲基正壬酮的含量。方法以甲基正壬酮的含量对鱼腥草药材进行优选研究,GC法检测鱼腥草饮片中的甲基正壬酮的含量。结果鱼腥草饮片中甲基正壬酮的含量不得少于0.002%。结论该法可以作为鱼腥草饮片炮制推荐标准。     

鱼腥草等5种中草药对10种常见细菌体外抑菌实验研究

目的探讨鱼腥草等5种中草药对10种常见细菌体外抑菌效果。方法采用葡萄糖酚红肉汤递倍稀释法,分别测定5种中草药对10种常见细菌的最低抑菌浓度(M IC)。结果艾叶、白芷、鱼腥草、姜、芦荟对10种常见细菌表现出不同程度抑菌作用,其中艾叶、鱼腥草的抑菌效果较好,对金葡球菌、白葡球菌及大肠杆菌有较强的抗菌作用;其余抑菌作用依次为白芷、芦荟、生姜。结论艾叶与鱼腥草有较好的抑菌效果。     

鱼腥草的研究进展

目的综述中药鱼腥草的研究近况。方法采用文献追踪的方法对鱼腥草的有效成分、药理作用和临床应用等方面的研究进行分析归纳。结果鱼腥草生物活性较高,疗效确切,值得进一步推广应用;但对鱼腥草注射液的不良反应,应引起重视。结论应进一步加强鱼腥草的基础研究,研制现代中药新剂型。     

基于网络药理学的鱼腥草滴眼液治疗干眼作用机制探讨

目的:探讨鱼腥草滴眼液治疗干眼的成分靶点及作用机制。方法:运用中药系统药理学数据库与分析平台检索收集鱼腥草滴眼液中化学成分并筛选活性成分,多个数据库联用检索查询成分和疾病对应的靶点;利用Cytoscape 3.7.2软件构建“药物-成分-疾病-靶点”网络拓扑图,对成分靶点与疾病靶点进行可视化分析;利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并进行分析;运用Bioconductor数据库R语言软件包进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集,进一步分析靶点功能及机制通路。结果:共筛选出鱼腥草有效活性成分30个,与干眼的交集靶点128个。根据“药物-成分-疾病-靶点”网络拓扑图,鱼腥草治疗干眼的主要有效成分有23个,包括癸醛、乙酸龙脑酯、山柰酚、槲皮素、芦丁等。根据PPI网络,鱼腥草治疗干眼的潜在作用靶点度值排名前10的有Jun、蛋白激酶B1(Akt1)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、白细胞介素-6(IL-6)、转录因子p65(RelA)、白细胞介素-8(CXCL8)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、MAPK8和IL-1β。GO分析提示,鱼腥草治疗干眼的关键靶点富集在细胞因子受体结合、受体配体活动、细胞因子活性等功能上;KEGG通路富集分析则显示,鱼腥草治疗干眼涉及了包括糖尿病并发症中的晚期糖基化产物及其受体信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路和IL-17信号通路等在内的多条作用通路。结论:鱼腥草滴眼液主要成分鱼腥草治疗干眼的作用机制可能与抗炎、抑制细胞凋亡等有关。     

鱼腥草多糖对小鼠肝、肾、心肌和脑组织抗氧化作用的研究

目的:探讨鱼腥草多糖对小鼠肝、肾、心和脑组织体内外的抗氧化作用。方法:昆明种小鼠50只随机分空白对照组、病理模型组;鱼腥草多糖各保护组,每天分别给30,60,120 mg·kg-1剂量的鱼腥草多糖ig,连续7 d,末次ig 2 h,空白对照组腹腔ip调和油溶液,其余各组ip 0.15%CCl4调和油溶液,24 h眼球取血测定血清中ALT,AST活性。处死小鼠取出肝脏称质量计算肝体指数;制备肝、肾、心、脑组织匀浆测定MDA的含量,经fenton反应诱导产生自由基检测各组织,吸光度(A532 nm)值。结果:鱼腥草多糖可减轻实验性肝损伤所致炎性浸润,降低肝体指数,降低血清中ALT,AST活性(P<0.05)和各组织MDA的含量(P<0.01);体外抗氧化实验表明鱼腥草多糖能抑制脂质过氧化物的生成,A532 nm明显降低(P<0.01)。结论:鱼腥草多糖能降低CCl4损伤小鼠血清AST,ALT活性,降低各组织MDA的含量,对小鼠肝、肾、心肌、脑组织体内外有抗氧化作用,尤其对肝、肾抗氧化作用较强。     

鱼腥草注射液雾化吸入治疗呼吸道感染107例疗效观察

目的：研究鱼腥草注射液雾化吸入治疗呼吸道感染性疾病的疗效。方法：观察107例以咳嗽、咳痰为主要表现的呼吸道感染病人于鱼腥草注射液雾化吸入治疗前后症状改善情况及痰菌情况,对部分慢性支气管炎急性发作期及迁延期的病人进行病例对照研究,鱼腥草注射液雾化吸入方案为鱼腥草注射液25mL 生理盐水25mL雾化吸入,持续30分,每日2次。结果;症状缓解情况为咳嗽有效率91.59%,咳痰有效率85.06%,有98.13%的病人患者于雾化吸入治疗后自觉咽部及胸部舒畅感。对55例于雾化前使用抗炎、止咳药物治疗咳嗽仍不缓解者,有效率72.72%。对45例慢性支气管炎争性发作期及迁延期病人进行病例对照研究,二者差别无统计学意义。雾化吸入痰菌清除率为80.39%。结论：鱼腥草注射液雾化吸入治疗以咳嗽、咳痰为主要症状的呼吸道感染性疾病有效。     

指纹图谱结合一测多评模式在中药鱼腥草质量评价中的应用研究

研究中药质量评价中指纹图谱与一测多评结合的考察模式,以中药鱼腥草为研究对象,以绿原酸为参照物建立鱼腥草HPLC指纹图谱及其与其余成分的相对校正因子,并计算其含量,实现一测多评。同时采用外标法测定该7个成分的含量,并比较二者的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果建立了鱼腥草HPLC特征指纹图谱共有模式,标定了12个共有峰,指认了其中7个共有峰,20批鱼腥草的相似度在0.912~0.991。20批鱼腥草中7个成分的计算值与实测值间无显著差异。结果表明一测多评结合指纹图谱的质量控制模式在鱼腥草中得到验证,有望成为适合中药特点的质量评价模式。     

中药群体指纹图谱信息量和一次投料量数学模型的建立及对大黄和鱼腥草实验研究

目的建立中药材群体指纹图谱信息量及一次投料量数学模型并进行实验验证。方法运用信息熵及遗传统计学原理,建立数学模型,以大黄醇提物及鱼腥草挥发油进行验证。结果建立了中药群体指纹图谱信息量及制剂稳态质量控制的一次投料量数学模型。大黄醇提物采用HPLC测定,在4.189μg进样量时指纹图谱的绝对和相对信息量较大,指纹图谱绝对信息量为1.535×109μV.s,RSD为37.23%,相对信息量为5.360×108μV.s.μg-1,RSD为19.42%;稳态质量控制一次投料量共需80 836 g。鱼腥草挥发油采用GC测定,指纹图谱的绝对信息量为2.472×107 mV.s,RSD为90.46%,相对信息量为5.353×106 mV.s.μg-1,RSD为80.96%;稳态质量控制一次投料量共需43 600 g(合9 544株)。结论中药的质量受中药遗传多态性影响,体现Hardy-weiberg群体平衡质量。大黄、鱼腥草平衡质量(一次投料量)远大于中国药典规定,其斗谱给药不能反映其遗传多态性要求。     

针药并用治疗带状疱疹28例临床观察

目的：观察应用围针及外敷、内服药物治疗带状疱疹的疗效。方法：采用局部围针法,留针1hr,1日1次,10次为1个疗程,同时以辅以聚肌胞针剂外敷加TDP灯照射（1hr/次,1日1次）,然后外涂以雄黄1g、冰硼散2支加适量有液混匀的中药制剂（8hr／次,1日1次）,并内服中药（银花、连翘、薄荷、地肤子、土茯苓、鱼腥草、丹皮、蒲公英）。结果：28例患者经1个疗程治疗,治愈18例,占64．3％,显效5例,占17．9％,好转4例,占14．3％,无效1例,占3．5％。总有效率为96．5％。结论：本法针药并用,内服外治,双管齐下,可达到调和气血,清热解毒,消炎止痛止痒之功,应用于临床,效果满意。