G6PD缺乏对红细胞膜磷脂脂肪酸组成的改变

探讨G6PD缺乏时红细胞膜磷脂的氧化性损伤。用氯仿：甲醇（2：1V／V）抽提膜脂质，通过硅胶柱层析分离得到磷脂，经薄层层析分离得磷脂酰乙醇胺（PE），磷脂酰丝氨酸（PS）和磷脂酰胆碱（PC）。采用TLC扫描仪测定各种磷的含量。用甲醇提取PE，PS及PC，经快速酯交换得到脂肪酸甲酯，采用毛细管气相色谱分析各种磷脂中脂肪酸的组成情况。结果：G6PD缺乏时，PS含量下降，红细胞膜总磷脂及PS中不饱和脂肪酸（C18：1，C18：2）的含量均减少，PE中C16：0的含量也减少，实验结果推测，G6PD缺乏时红细胞膜磷脂改变，PS含量的减少及PS中不饱和脂肪酸含量的下降可能与氧化性损伤有关。     

肝细胞线粒体磷脂组分的增龄性改变及其机理

目的：探讨肝细胞线粒体脂组分的增龄性改变。方法：测定了不同月龄（６、１２、１８和２４月龄）组大鼠肝细胞（ＨＣ）线粒体脂及其组分、丙二醛（ＭＤＡ）、维生素Ｅ（ＶＥ）和脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）水平及ＶＥ对以上各指标的影响。结果：各月龄级总磷脂水平无明显改变，１８和２４月龄组磷脂酰胆碱（ＰＣ）含量明显降低，磷脂酰胺（ＰＥ）／ＰＣ值显著升高。１８和２４月龄组ＭＤＡ和ＰＬＡ２水平较６月龄组明显上升，ＶＥ含量明显     

老化红细胞变形能力与膜磷脂及收缩蛋白含量的关系

①目的探讨老化红细胞变形能力与红细胞膜磷脂成分和收缩蛋白（ＳＰ）含量的关系。②方法检测４２例健康人外周血老化和年轻红细胞滤过指数（ＥＦＩ），膜磷脂成分中的神经磷脂（ＳＭ）、磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）、磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）、膜ＳＰ二聚体（ＳＰ－Ｄ）及四聚体（ＳＰ－Ｔ）含量的变化。③结果老化红细胞ＥＦＩ明显高于年轻红细胞（ｔ＝４．０６０，Ｐ＜０．００１），老化红细胞膜ＳＭ，ＳＭ／ＰＣ，ＳＰ－Ｄ和ＳＰ－Ｄ／ＳＰ－Ｔ明显增高，而ＰＥ，ＰＳ，ＰＣ和ＳＰ－Ｔ明显减低，与年轻红细胞比较差异有极显著性（ｔ＝２．９１１～３．５２０，Ｐ＜０．０１，０．００１）；老化红细胞ＥＦＩ与ＳＰ－Ｄ，ＳＰ－Ｄ／ＳＰ－Ｔ，ＳＭ和ＳＭ／ＰＣ呈正相关（ｒ＝０．５１１～０．６８４，Ｐ＜０．００１），而与ＳＰ－Ｔ，ＰＥ，ＰＳ，ＰＣ呈负相关（ｒ＝－０．５５２～－０．６１４，Ｐ＜０．００１）。④结论老化红细胞变形能力降低与膜磷脂成分和膜ＳＰ异常有密切关系。     

葡萄糖－6－磷酸脱氢酶缺乏时红细胞膜氧化性变化

用荧光分光法测定红细胞膜过氧化脂质（ＭＤＡ），同时用荧光偏振法，以疏水性荧光探剂１，６－二苯基－１，３．５－己三烯（ＤＰＨ）标记正常人及葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺乏者的红细胞膜脂区，测定０℃和９０℃的偏振荧光，膜流动性以荧光偏振度表示。结果发现：Ｇ６ＰＤ缺乏时红细胞膜ＭＤＡ含量（１．４８±０．０９５）及荧光偏振度（０．２６３３±０．００４３）明显高于正常（０．３８２±０．０７２及Ｏ２２６１±０．００６９），Ｐ均＜０．０１．即红细胞膜有序程度增高，流动性降低结果提示，Ｇ６ＰＤ缺乏时红细胞膜发生了氧化性损伤，红细胞膜ＭＤＡ含量增加，膜流动性下降，膜ＭＤＡ含量与流动性下降相关．这可能是引起溶血的一个重要原因。     

G6PD缺乏红细胞膜磷脂含量及其不对称性的变化（摘要）

Ｇ６ＰＤ缺乏红细胞膜磷脂含量及其不对称性的变化（摘要）研究生邹成钢导师田兴亚（昆明医学院生化教研室，昆明６５００３１）关键词Ｇ６ＰＤ缺乏，红细胞膜，磷脂，不对称性中图分类号Ｑ７３４研究了Ｇ６ＰＤ缺乏红细胞膜磷脂含量及其不对称性的变化，以探讨这些变化与...     

何首乌醇（PmTe）对家兔红细胞膜磷脂成分及电泳率的影响

采用家兔红细胞和血小板,以薄层色谱扫描法和显微（细胞）电泳法观察何首乌醇提取物（ＰｍＴｅ）对红细胞膜磷脂成发及血小板、红细胞电泳率（ＥＭＰ）的影响。结果：与对照组比较,实验组红细胞膜磷脂成分中磷脂酰胆碱（ＰＣ）、显增多,而鞘磷脂类（ＳＭ）、磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）都程度不等减少,特别是磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）含量及ＳＭ／ＰＣ和ＰＳ／ＰＣ比值显减小;血小板有红细胞的ＥＰＭ显高于对照组。提示ＰｍＴｅ对维     

宫颈癌组织中HPV16 E6C基因变异的研究

为探讨ＨＰＶ１６肿瘤相关抗原Ｅ６羟基端基因片段（Ｅ６Ｃ）在宫颈癌组织中的变异性以及采用Ｅ６Ｃ做为肿瘤治疗性轩抗原基因的可行性，采用ＰＣＲ方法自１８例单纯ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌组织中扩增ＨＰＶ１６５Ｅ６ＣＤＮＡ，经单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列测定法检测其基因变异性。ＳＳＣＰ分析结果显示，１８例宫颈癌组织ＨＰＶ１６Ｅ６ＣＤＮＡ电泳条带与标准对照ＤＮＡ条带一致，提示无基因变异现象存在     

各期高血压病患者红细胞膜磷脂成分的改变

本研究了各期高血压病患者红细胞膜磷脂各成分的变化。结果表明，在各期高血压组红细胞膜磷脂中神经磷脂（ＳＭ），磷脂酰胆碱（ＰＣ），磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）和ＳＭ／ＰＣ比值均明显增高，磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）则显著降低，并且各指标改变与病情轻重有关。提示，红细胞磷脂成本异常通过影响红细胞的性能，参与原发性高血压的发生和发展。     

CD11／CD18介导PMN－EC粘附在烧伤早期PMN损伤血管内皮细胞中的作用

将烧伤早期病人中性粒细胞（ＰＭＮ）与体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）孵育，观察内皮细胞的病理形态变化和检测培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量，以反映细胞损伤程度。并计数ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率。发现烧伤早期ＰＭＮ可使ＨＵＶＥＣ变形、细胞收缩、细胞间裂隙形成、胞浆出现小空泡、核固缩、部分内皮细胞从培养皿上脱落。培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量升高。预先用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８单抗（ｍＡｂ）和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ处理ＰＭＮ后，降低了ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率，ＨＵＶＥＣ损伤也明显减轻，尤其是二者联合应用时。结果提示：烧伤早期ＰＭＮ可引起ＥＣ损伤，损伤与ＣＤ１１／ＣＤ１８介导的ＰＭＮ－ＥＣ粘附相关，应用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ可部分阻断ＰＭＮ对ＥＣ的粘附和损伤。     

叶酸-脂质体制备及对HeLa细胞靶向作用

目的　研制一种能通过叶酸受体途径靶向肿瘤细胞的叶酸脂质体。方法　将叶酸（Ｆ）、聚乙二醇二胺（ＮＨ２ＰＥＧＮＨ２）、琥珀酸酐（ＳＵＣ）和卵黄磷脂酰乙醇胺（ＥＰＥ）按序共价连接,并与胆固醇（ｃｈｏｌ）、卵黄磷脂酰胆碱（ＥＰＣ）以１０∶４０∶５６配比,用成膜水化结合冷冻熔融超声法制备内含钙黄绿素叶酸脂质体,以负染色电镜法确定其粒径;用荧光显微镜观察ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体与脂质体的差异;以荧光定量法确定浓度、时间、游离Ｆ、磷脂酶Ｄ（ＰＬＤ）和磷脂酰肌醇特异磷脂酶Ｃ（ＰＩＰＬＣ）对ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体影响程度。结果　（１）ＦＰＥＧＳＵＣＥＰＥ连接物为色谱纯;叶酸脂质体平均粒径为２００ｎｍ。（２）叶酸脂质体进入ＨｅＬａ细胞质内量明显高于脂质体。（３）浓度增大、时间延长,叶酸脂质体摄取量递增幅度明显减缓;ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体量均在脂质体的４倍以上。（４）５０μｍｏｌ／Ｌ游离Ｆ可使叶酸脂质体摄取量降低５０％;ＰＩＰＬＣ（０．２Ｕ／ｍｌ）和ＰＬＤ（０．５ｍｇ／ｍｌ）处理后,叶酸脂质体摄取量分别降低７１％和７０％。结论　２００ｎｍ粒径的叶酸脂质体能通过细胞膜上Ｆ受体介导内吞     

缩醛磷脂的分离 纯化和鉴定

目的　研究从猪心中提取和纯化缩醛磷脂 ,并测定其纯度 ,以利于进一步研究其生物学作用。方法　取新鲜猪心切块 ,绞碎 ,制成匀浆后 ,再经一系列过程包括①总脂的提取 ;②通过硅酸柱层析和硅胶薄板层析从总脂提取物中分离出磷脂酰乙醇胺 (PE)、磷脂酰胆碱 (PC)、磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰丝氨酸 (PS)和鞘磷脂 (SM ) ,并从含PE浓度最高的柱层析液中分离出PE ;③碱水解制备缩醛磷脂酰乙醇胺 (plas PE) ;④通过硅酸柱层析和硅胶薄板层析从碱水解物中进一步纯化和鉴定 plas PE ;⑤分别用Iodinedisappearance法和Bartlett法检测 plas PE制剂中plas PE的含量及无机磷的含量 ,并计算出其纯度。 结果　①从总脂提取液中分离出下列几种磷脂并经标准品鉴定出为PE、PI+PS、PC和SM ,其Rf值分别为 0 .87、0 .75、0 .54和 0 .37;②从含PE浓度最高的柱层析液中分离出PE ,并经碱水解 ,制备出plas PE ,其在薄板层析板上的Rf值为 0 .81 ;③plas PE制剂中无机磷含量为 3 .1 61 μmol/ml,plas PE含量为 3 .0 0 6μmol/ml,经计算 plas PE的纯度为 95 .1 0 %。 结论　猪心是缩醛磷脂含量丰富的器官 ,采用硅酸柱层析及碱水解分离是制备缩醛磷脂的有效流程     

大鼠正常肝细胞与肝癌细胞磷脂酰胆碱及脂肪酸组成的比较研究

目的 :探讨肝癌细胞的膜磷脂组分变化。方法 :采用高效薄板层析方法并配合无机磷的测定 ,比较了大鼠正常肝细胞与癌变细胞磷脂的组成及摩尔分数 ,用气相色谱法对其中含量最多的磷脂组分磷脂酰胆碱 (PC)的脂肪酸组成进行了测定。结果与结论 :肝癌细胞的PC含量明显减少 (P <0 .0 5 ) ,PC中长链及不饱和脂肪酸含量显著减少 (P <0 .0 5 )。     

单纯疱疹病毒感染3T3膜脂的变化

利用气相色谱(GC)方法对单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ)感染后的3T3细胞与未感染病毒的3T3细胞的膜脂成分进行色谱分析。结果表明,细胞受病毒感染的病变初期和后期存在膜脂成分的构象互变现象。感染 12 h后膜不饱和脂肪酸(C_(18:2、C_(18:1))的含量增多,感染 36 h后情况与上述相反,不饱和脂肪酸均趋于减少,而饱和20碳酸却明显增加。     

Biochemical activity and gene analysis of inherited protein C and antithrombin deficiency in two Chinese pedigrees

Background We identified the gene mutations in two Chinese pedigree of type Ⅰ hereditary protein C deficiency and type Ⅰ hereditary antithrombin deficiency.Methods The plasma level of protein C activity (PC: A), protein C antigen ( PC: Ag) , protein S activity, antithrombin activity (AT: A) and antithrombin antigen (AT: Ag) of propositi and two family members were detected using ELISA and chromogenic assay, respectively. All exons and intron-exon boundaries of protein C gene and antithrombin gene were analyzed by direct sequencing of the corresponding amplified PCR products in DNA from the propositus.Results The plasma PC: A and PC: Ag of propositus 1 was 26% and 1.43 mg/dl, respectively. The PC: Ag and PC: A of his father were normal. The decreased PC: A level was seen in his mother and 4 of his maternal pedigree. PS: A and AT: A were all normal in pedigree 1 members. A C5498T heterozygous mutation in exon 3 of protein C gene, resulting in the substitution of Arg for Trp at the 15th amino acid, was identified in propositus 1 and 8 of his relatives. The plasma AT: A and AT: Ag of propositus 2 was 48.6% and 10.4 mg/dl, respectively. The reduced AT: A and AT: Ag levels were found in his father and 5 of paternal pedigree. PC: A, PC: Ag and PS: A were all in normal range. A heterozygous 13387-9G deletion in exon 6 of antithrombin gene was identified in propositus 2. This mutation introduced a frameshift and a premature stop at codon 426 and existed in 6 members of pedigree 2.Conclusion The C5498T heterozygous mutation in exon 3 of protein C gene, first reported in China,leads to type Ⅰ hereditary protein C deficiency. The 13387-9G deletion, a novel mutation, can cause antithrombin deficiency and thrombosis.     

G6PD缺乏患者红细胞膜蛋白氧化损伤的研究

目的研究G6PD缺乏患者红细胞膜蛋白氨基酸残基的氧化修饰,定量分析红细胞膜蛋白的氧化损伤程度.方法设置3组研究对象,分别是G6PD正常组和G6PD缺乏无急性溶血组;G6PD缺乏急性溶血组,用NDPH法分别测定各组红细胞膜蛋白活性羰基含量,荧光比色法测定色氨酸残基荧光强度的改变.结果（1）与正常组比较,G6PD缺乏无急性溶血组、G6PD缺乏急性溶血组的红细胞还原型谷胱甘肽含量下降,硫代巴比妥酸反应产物（TBARS）水平显著升高;（2）G6PD缺乏无急性溶血组、G6PD缺乏急性溶血组的红细胞膜蛋白羰基含量均显著增加,色氨酸残基荧光强度显著下降;（3）G6PD缺乏急性溶血组与非急性溶血组差异之间红细胞TBARS、膜蛋白羰基含量、色氨酸残基荧光强度差异均无显著性（P〉0.005）.结论G6PD缺乏可引起红细胞膜脂质和蛋白氧化损伤,但这些损伤不是急性溶血的直接原因.     

蛋白C、蛋白S缺乏症相关肺动脉血栓栓塞2例并文献复习

为提高对蛋白C(PC)/蛋白S(PS)缺乏症相关的肺动脉血栓栓塞症临床表现、诊治方法的认识,本研究分析了湘雅二医院收治的2例PC/PS缺乏相关肺动脉血栓栓塞患者的临床特点,并进行相关文献复习。两位男性患者年龄分别为29,26岁,临床症状主要表现为自发性反复双下肢肿痛,或胸闷气促、胸痛,或视力下将。血管彩超示下肢静脉血栓形成; 肺部血管造影(CTA)示双下肺动脉栓塞; 血清同型半胱氨酸浓度升高,血浆PC/PS总量明显降低,病例1为PC 57.4%,PS 28.9%; 病例2为PS 33.4%。患者行常规抗凝治疗疗效差,予以维生素B6、维生素B12联合抗凝治疗后症状改善。中青年无明显诱因的反复发作性下肢深静脉血栓形成及肺血栓栓塞,应考虑先天性易栓症可能性,血浆PC,PS浓度及活性检测具有重要的诊断治疗意义。     

G6PD缺陷症基因型分析：一种新的错义突变

目的对葡萄糖-6磷-酸脱氢酶（G6PD）缺陷症患者进行G6PD基因型分析,分析基因突变类型。方法选取经G6PD活性测定确诊为G6PD缺陷症的49例患者和100名G6PD活性正常的体检者的全血标本,PCR和DNA测序法对G6PD基因外显子2~13进行序列分析。结果 49例G6PD缺陷症患者中,共发现12种错义突变,其中常见的三种为G6PD G1388A（26.5%）、G1376T（28.6%）和A95G（14.3%）,此三类基因型患者G6PD活性仅为正常人群的5%~18%。临床主要表现为新生儿黄疸、进食蚕豆后发生急性溶血性贫血等。其余突变类型包括C1024T（4.1%）、C1225T（2.0%）、C1159T（2.0%）、G487A（4.1%）、G392T（4.1%）、G1160A（6.1%）、G871A/C1311T（4.1%）和C406T/C1311T（2.0%）;在外显子7上发现了一种新的错义突变即G691C,该突变造成G6PD第231位丙氨酸（A la）被脯氨酸（Pro）替代。正常对照标本未发现相同的基因改变。结论 G6PD基因G1388A、G1376T和A95G是G6PD缺陷症患者最常见的三种突变类型。新发现的G691C突变导致A la231Pro,是引起红细胞G6PD活性降低,患者临床出现溶血症状的主要原因。     

G6PD缺陷症基因型分析：一种新的错义突变

目的 对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷症患者进行G6PD基因型分析,分析基因突变类型.方法 选取经G6PD活性测定确诊为G6PD缺陷症的49例患者和100名G6PD活性正常的体检者的全血标本,PCR和DNA测序法对G6PD基因外显子2～13进行序列分析.结果 49例G6PD缺陷症患者中,共发现12种错义突变,其中常见的三种为G6PD G1388A(26.5%)、G1376T(28.6%)和A95G(14.3%),此三类基因型患者G6PD活性仅为正常人群的5%～18%.临床主要表现为新生儿黄疸、进食蚕豆后发生急性溶血性贫血等.其余突变类型包括C1024T(4.1%)、C1225T(2.0%)、C1159T(2.0%)、G487A(4.1%)、G392T(4.1%)、G1160A(6.1%)、G871A/C1311T(4.1%)和C406T/C1311T(2.0%);在外显子7上发现了一种新的错义突变即G691C,该突变造成G6PD第231位丙氨酸(Ala)被脯氨酸(Pro)替代.正常对照标本未发现相同的基因改变.结论 G6PD基因G1388A、G1376T和A95G是G6PD缺陷症患者最常见的三种突变类型.新发现的G691C突变导致Ala231Pro,是引起红细胞G6PD活性降低,患者临床出现溶血症状的主要原因.     

山东省济宁地区新生儿脂肪酸氧化代谢病筛查及随访分析

目的：了解山东省济宁地区脂肪酸氧化代谢病的发病率、基因突变特征,并评估治疗效果。方法：采集2014年7月14日—2019年12月31日出生的新生儿血样,用串联质谱法测定血肉碱和酰基肉碱水平,筛查脂肪酸氧化代谢病。提取筛查阳性新生儿外周血DNA,用MassARRAY和高通量测序进行基因突变分析,用桑格–库森法验证。对确诊患儿早期干预治疗并随访。结果：从608?818名新生儿中筛查出脂肪酸氧化代谢病患儿42例,总发病率为1/14?496。以原发性肉碱缺乏症（16例,38.10%）和短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（16例,38.10%）多见,其次为极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（6例,14.29%）和中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（4例,9.53%）。原发性肉碱缺乏症患儿SLC22A5突变以c.1400C>G（p.S467C）和c.51C>G（p.F17L）常见,新发现c.278C>T（p.S93L）、c.1049T>C（p.L350P）、c.572A>G（p.K191R）、c.431T>C（p.L144P）突变。随访期内,肉碱替代治疗10例患儿发育正常;未用肉碱替代治疗6例患儿中5例发育正常,另1例新生儿期出现低血糖,肌酸激酶增高,后期出现智力和语言发育落后。短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿ACADS基因突变以c.1031A>G（p.E344G）和c.164C>T（p.P55L）常见,随访期内发育正常。极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿ACADVL基因突变以c.1349G>A（p.R450H）常见,新发现c.488T>A（p.L163*）、c.1228G>T（p.D410Y）、c.1276G>A（p.A426T）、c.1522C>T（p.Q508*）、c.1226C>T（p.T409M）突变。3例使用中链脂肪酸奶粉患儿随访期内发育正常;3例合并肉碱降低患儿使用左卡尼汀和中链脂肪酸奶粉治疗,其中1例患儿随访期内发育正常,1例患儿3月龄时急性发病死亡,1例患儿8月龄时曾急性发病,治疗后症状消失,随访期内发育正常。中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿ACADM基因突变以c.449_452del（p.T150Rfs*4）常见,新发现c.718A>G（p.M240V）突变。所有患儿确诊后进行低脂肪饮食并避免饥饿和疲劳,1例患儿补充左卡尼汀,其余3例患儿未使用药物治疗,随访期内发育均正常。结论：济宁地区脂肪酸氧化代谢病以原发性肉碱缺乏症和短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症常见,存在基因热点突变或新发现的基因突变,通过新生儿筛查早期诊治,患儿预后良好。     

海南汉族、黎族人葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的基因突变

目的:阐明海南汉族、黎族人群中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的分子基础。方法:用聚合酶链反应、限制性内切酶消化筛查了1388G→A、1376G→T、1360C→T、1024C→T、592C→T、517T→C、493A→G、487G→A、392G→T和95A→G突变;用单链构象多态性分析筛查其它突变;用核苷酸顺序分析鉴定具有SSCP异常区带样品的突变。结果:在59例汉族G6PD缺乏症患者中,发现1388G→A14例(23.7%)、1376G→T19例(32.2%)、871G→A3例(5.1%)、835A→T1例(1.7%)、517T→C1例(1.7%)、392G→T3例(5.1%)、95A→G4例(6.8%);在32例黎族G6PD缺乏症患者中,发现1388G→A6例(18.8%)、1376G→T18例(56.2%)、871G→A3例(9.4%)、95A→G2例(6.3%);结论:海南汉族、黎族人群中具有共同的常见G6PD基因突变型,提示一些G6PD基因突变是中国南方人群的遗传特征。