哮喘小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路及维生素D的作用

目的 观察哮喘小鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)m RNA和蛋白表达变化,以及维生素D的干预作用。方法 将48只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和1,25-(OH)2D3干预组,每组16只。建立哮喘动物模型,干预组在每次雾化激发前给予腹腔注射1,25-(OH)2D3(4μg/kg)。分别在雾化激发1周和2周采集各组标本,常规苏木精-伊红(HE)染色测定气道壁厚度;免疫组化染色观察HMGB1、TLR4和NF-κB在肺组织中的表达;采用实时荧光定量PCR和Western blot分别从m RNA和蛋白质水平检测HMGB1、TLR4和NF-κB表达变化。结果 雾化激发1周和2周,哮喘组小鼠气道壁厚度较对照组明显增加,干预组较哮喘组明显减少(P0.05);哮喘组肺组织中HMGB1、TLR4和NF-κB的m RNA表达量均明显高于对照组,干预组TLR4和NF-κB的m RNA均明显低于哮喘组(P0.05)。雾化激发1周时干预组HMGB1 m RNA表达量与哮喘组比较差异无统计学意义(P0.05),但在雾化激发2周时则明显下降(P0.05)。雾化激发1周和2周,肺组织中HMGB1、TLR4和NF-κB的蛋白表达量均明显高于对照组,干预组均明显低于哮喘组(P0.05)。小鼠气道壁厚度与肺组织HMGB1、TLR4和NF-κB的m RNA的表达量均呈正相关性(r分别为0.804、0.895、0.834;P0.05)。结论 HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路在哮喘发病中起重要作用,适量1,25-(OH)2D3可能通过对其的调控作用阻止哮喘的进展,有望成为哮喘治疗的新选择。     

呼吸道合胞病毒感染对气道上皮细胞表皮生长因子受体、紧密连接相关蛋白及黏蛋白表达的影响

目的 探讨呼吸道合胞病毒（RSV）感染气道上皮细胞后对表皮生长因子受体（EGFR）、紧密连接相关蛋白occludin及E-cadherin、黏蛋白MUC5AC表达的影响,并探讨可能的机制。方法 体外实验分两组,以人气道黏液上皮细胞NCI-H292细胞为研究对象,紫外线下灭活的RSV加入NCI-H292细胞培养基中作为对照组,迅速解冻的RSV感染NCI-H292细胞为RSV感染组。48 h后通过Western blot法检测occludin、E-cadherin、磷酸化EGFR（p-EGFR）及EGFR的蛋白表达水平;采用细胞免疫荧光技术观察两组细胞occludin、E-cadherin的分布及表达;采用RT-PCR法检测两组MUC5AC mRNA的表达。结果 RSV感染组occludin、E-cadherin的蛋白表达水平较对照组下降（P < 0.05）。RSV感染组p-EGFR及EGFR蛋白的表达水平较对照组升高（P < 0.05）。RSV感染组MUC5AC mRNA表达水平较对照组增加（P < 0.05）。结论 RSV可破坏气道上皮细胞间的紧密连接,促进黏蛋白的分泌,影响气道的屏障功能。EGFR的磷酸化在上述过程中起重要作用。     

布地奈德雾化治疗对哮喘小鼠糖皮质激素受体及核因子-κB表达的影响

目的观察布地奈德雾化吸入对哮喘小鼠糖皮质激素受体(GR)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法 24只健康6~8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组、哮喘模型组(哮喘组)和布地奈德治疗组(BUD组),每组8只。通过腹腔注射卵清蛋白和氢氧化铝混悬液致敏以及卵清蛋白溶液雾化吸入激发哮喘。末次激发24 h后处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞计数,取肺组织行病理学检查及免疫组化检测GR和NF-κB表达水平。结果哮喘组BALF中嗜酸性粒细胞计数较对照组显著增加(P0.05);BUD组与哮喘组相比嗜酸性粒细胞数量显著减少,但仍较对照组增高(P0.05)。哮喘组小鼠肺组织可见嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润,BUD组炎症细胞浸润较哮喘组明显减轻。哮喘组GR阳性细胞百分比与对照组比较明显减少(P0.05),BUD组GR阳性细胞百分比较哮喘组明显增加,但仍低于对照组(P0.05);哮喘组NF-κB阳性细胞百分比较对照组明显增加(P0.05),BUD组NF-κB阳性细胞百分比较哮喘组明显减少,但仍高于对照组(P0.05)。结论 BUD治疗哮喘小鼠的作用机制可能与上调GR水平及抑制NF-κB的活性有关。     

b-FGF和NF-κB在哮喘大鼠肺内的表达及布地奈德干预的作用

目的：探讨哮喘大鼠发病过程中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和核因子-κB（NF-κB）在气道内表达的变化,及布地奈德的干预对其表达的影响。方法：清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠45只,随机分为对照组、哮喘组、干预组。观察卵蛋白激发及用布地奈德干预后哮喘大鼠气道的病理变化;免疫组织化学染色观察b-FGF和NF-κB蛋白表达的变化。结果：布地奈德干预减轻了哮喘大鼠气道损伤。B-FGF和NF-κB在对照组中呈弱阳性表达,在哮喘组中表达明显增加,使用布地奈德进行干预后b-FGF和NF-κB的表达明显降低（111.61±5.52 vs 126.21±6.46; 110.65±8.71 vs 134.15±9.42; P<0.05）,且二者呈正相关性。结论：b-FGF和NF-κB可能与哮喘大鼠气道重塑相关,布地奈德改善哮喘大鼠的气道重塑可能与降低b-FGF和NF-κB的表达有关。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：393-396］     

脂多糖诱导的大鼠膀胱炎中NF-κB通路的激活对胶原蛋白分泌的影响

目的:探究在脂多糖（lipopolysaccharide ,LPS ）诱导的大鼠膀胱炎中核因子-κB (nuclear factor kappa B ,NF-κB）信号通路的激活对膀胱中胶原蛋白分泌的影响。方法:选用体重200~230 g的健康雌性SD大鼠48只,按数字随机法随机分为空白对照组（A组）、假手术组（B组）...     

卡托普利对病毒性心肌炎小鼠 NF-κB活化及 MCP- 1表达的影响

目的探讨核因子kB(NF-kB)活化在病毒性心肌炎发病机制中的作用及卡托普利对NF-kB活化的调节作用。方法55只Balb/c小鼠随机分为3组:柯萨奇病毒B3(CVB3)感染组、CVB3感染加卡托普利治疗组和对照组,分别在实验的第7、14和21天处死动物,留取血清、心肌标本,免疫组化检测心肌组织中NF-kB活化和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达,双抗体夹心ELISA法检测血清MCP-1含量。结果感染组小鼠心肌组织中NF-kB活化、MCP-1表达较对照组明显增强(P<0.01),而且与心肌病变程度相关;与对照组比较感染组小鼠血清MCP-1含量明显增加(P<0.001);治疗组心肌组织中NF-kB活化、MCP-1表达及血清MCP-1含量均较感染组显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论NF-kB活化在病毒性心肌炎发病机制中发挥重要作用,抑制NF-kB活化可能是卡托普利治疗病毒性心肌炎的作用机制之一。     

核因子κB反义寡核苷酸对肾小球硬化Caspase-3表达的影响

目的探讨核转录因子κB（NF-κB）反义寡核苷酸（ODN）对局灶性节段性肾小球硬化大鼠肾组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase-3）、NF-κB表达影响。方法SD雄性大鼠分成3大组：假手术组（A组）、硬化组（B组）各6只,干预组（C组）9只;C组再分成3小组：正义ODN组（C1组）、无义ODN组（C2组）、反义ODN组（C3组）各3只。采用右肾切除加尾静脉注射多柔比星制成肾小球硬化模型。8周后各组分别予不同的药物干预,应用免疫组织化学检测肾组织Caspase-3、NF-κBp65表达。结果反义ODN干预d7,C3组大鼠尿蛋白、肾小球硬化指数、肾组织Caspase-3、NF-κBp65蛋白表达较B、C1、C2组明显减少,差异有统计学意义（Pa〈0.05）;C3组与A组比较,NF-κBp65蛋白表达无显著差异（P〉0.05）。结论NF-κBODN能抑制肾小球NF-κB活性及Caspase-3表达,从而延缓肾小球硬化及细胞凋亡进程。     

地塞米松对急性淋巴细胞白血病患儿核转录因子-κB表达的影响及意义

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达及意义,观察地塞米松(DEX)对其活性的影响,为临床寻求以NF-κB为靶点的治疗手段的依据。方法1.应用SP免疫组化法,检测20例ALL患儿和20例正常对照儿童NF-κB p65蛋白表达。2.用SP免疫组化法检测DEX对ALL细胞NF-κB p65蛋白活性影响。结果1.ALL患儿20例的NF-κB p65蛋白阳性表达率为85.50%(17/20),表达定位于ALL细胞胞核及胞浆中,明显高于正常对照组10.0%(2/20),两者比较有显著性差异(χ2=22.56 P<0.01)。2.临床治疗剂量的DEX 5.0 mg/L作用于ALL细胞24 h,能显著抑制NF-κB p65蛋白表达,其阳性表达率为(25.0±3.0)%,与未处理的ALL细胞比较,有显著性差异(t=55.00 P<0.01)。结论1.NF-κB p65蛋白表达于儿童ALL细胞中。2.抑制NF-κB的活性可能是DEX作用于儿童ALL细胞的机制之一,抑制NF-κB信号传导途径可能在儿童ALL治疗中有重大价值。     

胆红素对大鼠星形胶质细胞和神经元核因子-κB/IκBα表达的影响

目的探讨胆红素是否影响大鼠星形胶质细胞和神经元核因子(NF)-κB的活化.方法 100μmol/L胆红素分别作用于原代培养大鼠星形胶质细胞和神经元,于0、30、60及120min收集标本,免疫细胞化学染色检测NF-κB亚基P65核移位、Western Blot检测NF-κB抑制因子IκBα蛋白表达.结果胆红素干预星形胶质细胞30 min时,出现P65大量核移位(91.0±5.9)%,至60 min核移位率显著下降(50.03±9.69)%,120 min时核移位恢复至干预前水平.30 min时IκBα蛋白表达消失,至30 min、60 min均有蛋白明显表达;神经元各组间P65核移位和IκBα蛋白表达差异均无显著性.结论胆红素可诱导星形胶质细胞NF-κB活化.     

IL-1β诱导NF-κB通路对肠三叶因子治疗坏死性小肠结肠炎的影响及意义

目的 研究肠三叶因子(ITF)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠的肠黏膜中白细胞介素1β(IL-1β)含量的影响,观察ITF对NEC新生大鼠中核因子-κB(NF-κB)的活化及胞内分布规律,探讨其在NEC发病机制中的作用.方法 50只新生Wistar大鼠随机分为5组(正常对照组、正常对照给予ITF组、NEC模型组、NEC给予生理盐水组、NEC给子ITF组),每组10只,并于NEC模型后,母鼠身边喂养3 d.第四天处死并取回盲部组织1～2 cm固定、包埋、切片、HE染色,观察组织学变化及免疫组化表现NF-κB的表达,其他肠组织制备组织匀浆,取上清液检测IL-1β含量.结果 NEC新生大鼠模型中损伤肠组织IL-1β含量明显增多,NF-κB表达增强.ITF治疗组能明显的抑制NEC新生大鼠肠组织IL-1β的产生和NF-κB(P65)的表达.结论 NF-κB信号通路可能参与了NEC发病过程,并起着信号转导作用;ITF通过抑制NF-κB信号通路,减轻小肠结肠组织炎症反应,起到保护肠黏膜的作用.     

核转录因子-κB在辛伐他汀抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在辛伐他汀抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖中的作用。方法随机将体外培养的大鼠PASMC分为对照组、血小板源性生长因子(PDGF)刺激组、辛伐他汀干预组和辛伐他汀联合小白菊内酯(NF-κB抑制剂)干预组,每组6个样本。通过MTT比色法和流式细胞术检测PASMC的增殖及细胞周期;通过免疫组织化学检测NF-κB蛋白的表达并进行图像分析;通过RealTime PCR检测NF-κB m RNA的表达水平。结果 PDGF刺激组的各时间点MTT值,S期和G2+M期细胞比例,NF-κB蛋白及mRNA表达水平均较对照组显著升高(均P0.05);给予辛伐他汀干预后,上述各指标水平均较PDGF刺激组降低(均P0.05);辛伐他丁联合小白菊内酯干预后上述各指标下降更加明显,但与辛伐他汀干预组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论辛伐他汀能抑制PASMC的增殖和细胞周期进程;NF-κB可能在辛伐他汀对PASMC增殖的抑制中起重要作用。     

表皮生长因子受体对哮喘小鼠气道重塑的影响及机制

目的：探讨哮喘小鼠气道重塑与表皮生长因子受体（EGFR）、肝素结合性表皮生长因子（HB-EGF）的关系以及EGFR酪氨酸激酶抑制剂（AG1478）对气道重塑的干预作用。方法：建立哮喘小鼠气道重塑模型,对肺组织切片行Masson和过碘酸雪夫（PAS）染色分别显示胶原沉积和气道黏膜杯状细胞增生情况。应用免疫组化和RT-PCR方法分别检测HB-EGF的蛋白和EGFR、HB-EGF mRNA表达的变化。结果：哮喘组出现气道重塑的特征性改变,HB-EGF、EGFR表达水平增高。AG1478干预组较哮喘组气道重塑有所改善,EGFR、HB-EGF表达降低（P<0.05）。结论：EGFR参与哮喘小鼠气道重塑,其酪氨酸激酶抑制剂AG1478可缓解气道重塑过程。AG1478可能通过下调EGFR及HB-EGF的表达以及抑制依赖于EGFR下游的细胞信号转导级联反应来缓解哮喘气道重塑过程。［中国当代儿科杂志,2010,12（2）：137-140］     

过表达髓样细胞触发受体2对过敏性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的影响

目的 探讨过表达髓样细胞触发受体2 （TREM-2）对哮喘模型小鼠气道炎症及气道重塑的影响。方法 将40只BALB/c小鼠随机分成空白对照组、哮喘组、空载体组和TREM-2过表达组 （n=10）。采用卵白蛋白 （OVA）致敏及激发建立哮喘模型,对照组以生理盐水替代致敏液,空载体组和TREM-2过表达组分别转染腺病毒载体和TREM-2腺病毒。采用RT-PCR和Western blot法检测TREM-2、基质金属蛋白酶 （MMP）-2、MMP-9、解整合素-金属蛋白酶 （ADAM）33和ADAM8的表达。收集各组支气管肺泡灌洗液进行细胞计数、分类。酶联免疫吸附试验 （ELISA）检测血清总IgE水平及BALF中细胞因子水平。结果 与对照组相比,哮喘组小鼠TREM-2 mRNA及蛋白水平均有所下降 （P < 0.05）;Th2细胞因子及总IgE水平升高 （P < 0.05）;总细胞数及分类细胞数增多 （P < 0.05）。与哮喘组相比,过表达TREM-2组Th2细胞因子及总IgE水平下降 （P < 0.05）;总细胞及分类细胞数减少 （P < 0.05）;与气道重塑相关的MMP-2、MMP-9、TGF-β1、ADAM8和ADAM33的mRNA及蛋白表达均下调 （P < 0.05）。结论 TREM-2过表达减轻哮喘小鼠的气道炎症和气道重塑,从而为儿童哮喘的防治提供潜在的新靶点。     

二十碳五烯酸对E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的影响

目的探讨二十碳五烯酸(EPA)对黏附侵袭性大肠杆菌(AIEC)LF82感染后肠上皮细胞(Caco-2)紧密连接蛋白(ZO-1)表达的影响。方法用Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞紧密连接模型,分为EPA处理组,EPA 0、25、50、100、200μmol/L干预96 h;以及EPA(EPA 0、25、50、100、200μmol/L)+E.coli LF82联合处理组,在不同浓度EPA干预96 h的基础上,予E.coli LF82分别干预0 h、6 h、12 h。通过细胞形态学观察,MTT法测定细胞生长曲线,以及细胞膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性检测对Caco-2细胞模型进行评价。流式细胞术检测不同浓度EPA对Caco-2细胞凋亡的影响。RT-q PCR检测EPA和/或E.coli LF82作用于Caco-2细胞后ZO-1 m RNA的表达情况。酶联免疫吸附法检测Caco-2细胞上清中TNF-α的变化。结果 EPA25、50μmol/L处理后,Caco-2细胞存活率均高于0浓度组,且增高呈浓度依赖性(P0.05);EPA100、200μmol/L处理组的细胞存活率下降呈浓度依赖性,均低于0浓度组(P0.05)。EPA浓度为100、200μmol/L时,细胞凋亡率较0浓度组增加(P0.05)。单独E.coli LF82干预Caco-2细胞6 h、12 h后,ZO-1 m RNA表达随处理时间延长而减少,均低于未处理组(P0.05)。EPA 25、50μmol/L干预联合E.coli LF82处理6 h或12 h,Caco-2细胞的ZO-1 m RNA表达随EPA浓度增加而增加,均高于E.coli LF82单独处理组(P0.05)。单独E.coli LF82处理6 h、12 h组的TNF-α分泌随干预时间延长而增加,均高于未处理组(P0.05)。EPA25、50μmol/L联合LF82处理6 h或12 h,细胞上清液中TNF-α分泌量随EPA浓度的增加而减少,均少于单独LF82处理组(P0.05)。结论 EPA能有效预防E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接的破坏,抑制炎症因子的分泌,对肠黏膜屏障有一定的保护作用。     

过表达KyoT2对哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究KyoT2对哮喘小鼠气道平滑肌细胞 （ASMC）增殖和迁移的影响。方法 卵白蛋白 （OVA）诱导BALB/c小鼠建立哮喘气道重塑模型后,行ASMC分离和培养,并以原代培养的正常小鼠ASMC作为对照组。检测对照组和哮喘组小鼠ASMC中KyoT2的表达。哮喘小鼠ASMC转染pCMV-Myc （空载体组）和过表达KyoT2质粒pCMV-Myc-KyoT2 （KyoT2过表达组）48 h后,采用RT-PCR和Western blot方法检测各组KyoT2 mRNA和蛋白表达;采用MTT法和BrdU法检测ASMC增殖;采用Transwell法检测ASMC的迁移。Western blot用于检测过表达KyoT2对RBP-Jκ、PTEN和AKT蛋白表达水平的影响。结果 与对照组比较,哮喘组ASMC中KyoT2表达下调,KyoT2过表达组ASMC中KyoT2表达显著上调 （P < 0.05）。与空载体组比较,KyoT2过表达抑制细胞增殖和细胞迁移 （P < 0.05）;且KyoT2过表达能下调RBP-Jκ和AKT的表达,上调PTEN的表达 （P < 0.05）。结论 KyoT2抑制哮喘ASMC增殖和迁移,其机制可能是通过负调控RBP-Jκ/PTEN/AKT信号通路来实现。     

Omi/HtrA2在缺氧复氧后人近曲肾小管上皮细胞中的表达及促红细胞生成素对其表达的影响

目的 探讨缺氧复氧(H/R)后人近曲肾小管上皮细胞内Omi/HtrA2的表达变化及促红细胞生成素(EPO)干预的影响.方法 以人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)为研究对象,将其分为对照组、H/R组及EPO干预组.对照组常规培养;H/R组缺氧24h后复氧6 h;EPO干预组在H/R前加入5 000 U·L-1EPO预处理.倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学检测细胞内Omi/HtrA2表达变化.结果 与对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞形态发生改变,细胞活力下降,细胞凋亡率显著增加,细胞内Omi/HtrA2表达增强,差异均有统计学意义(Pa＜0.05);而与H/R组相比,EPO干预组细胞数量增多,细胞形态明显改善,细胞活力增加,细胞凋亡率下降,Omi/HtrA2表达减弱,差异均有统计学意义(Pa＜0.05).但各指标均未恢复至对照组水平.结论.H/R可通过上调Omi/HtrA2表达而促进肾小管上皮细胞凋亡,EPO对H/R肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能与抑制Omi/HtrA2表达、减少细胞凋亡有关.