线粒体自噬对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的影响

目的了解缺氧缺血脑损伤的动物模型中线粒体自噬情况,探讨其在缺氧缺血脑损伤中的作用。方法将120只新生7日龄Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(HIBD)组、自噬抑制剂干预组(3MA组)。HIBD组行右侧颈总动脉结扎后置于低氧仓(8%氧气和92%氮气)2.5 h,3MA组腹腔注射2μL 3MA 30 min后再进行结扎和低氧处理,假手术组不予结扎和低氧处理。在造模后提取各组单细胞悬液,用Mitotracker标记线粒体、Lysotracker标记自噬小体、LC3标记自噬进行免疫荧光共定位观察线粒体自噬情况;荧光探针JC-1染色后,采用流式细胞仪检测线粒体膜电位。TTC染色法检测脑梗死灶大小。提取皮质神经元中的细胞浆蛋白,Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组线粒体膜电位明显降低(P0.05),线粒体自噬增加(P0.05),线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1的表达升高,线粒体外膜蛋白受体Tom20与内膜蛋白受体Tim23的表达降低(P0.05);3MA组膜电位比HIBD组降低更为明显(P0.05),但线粒体自噬程度明显减少(P0.05)。3MA组大鼠脑组织梗死程度较HIBD组明显增加(P0.05)。结论 HIBD能够增加线粒体自噬的发生,抑制线粒体自噬会加重新生大鼠HIBD的损伤程度。     

新生大鼠缺氧缺血脑组织缺氧诱导因子1α的表达及其与神经元凋亡关系的研究

缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是缺氧诱导细胞所产生的一种转录因子,其α亚单位(HIF—1α)对缺氧具有特异性感受,且在缺氧诱导的细胞凋亡中起关键作用。近年来,国外在成年鼠脑缺氧缺血时,对HIF—1α mRNA的表达做过一些研究,但尚未发现新生鼠脑缺氧缺血后HIF—1α mRNA表达变化规律及其与神经元凋亡的关系。     

不同血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白基因表达的影响研究

目的：葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因及其产物在调节脑内能量代谢方面有重要作用,近来葡萄糖在围产期缺氧缺血损伤中的作用正日益受到关注。该研究拟探讨不同血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内GLUT3基因表达的影响,评估葡萄糖的缺氧缺血脑保护作用。方法：对7日龄SD新生大鼠通过调节25%葡萄糖的注射次数及时间或禁食12h,分别建立单纯低血糖组,缺氧缺血(HI)组,HI前低血糖组,HI后低血糖组,HI前轻度高血糖组,HI后轻度高血糖组,HI前重度高血糖组以及HI后重度高血糖组;另设正常组和假手术组。应用RT-PCR方法,分别在HI后2,24,48,72h及7d对各组新生大鼠脑内GLUT3基因进行测定。结果：正常组GLUT3基因表达量随日龄增加而表达量增高,HI可引起GLUT3基因表达量的短期上调,至HI后72h及7d则非常显著低于正常组(均P<0.01)。HI前低血糖组GLUT3基因表达量在各缺氧缺血组中为最低,尤其在HI后72h显著低于HI组(P<0.05)。HI前重度高血糖可明显上调GLUT3基因表达量,在HI后大部分时段的GLUT3基因表达量均显著高于其余各组(P<0.05或0.01)。HI前轻度高血糖对GLUT3基因表达的影响不如HI前重度高血糖组。在HI后无论轻或重度高血糖组以及HI后低血糖组,其GLUT3基因的表达时相均与HI前低血糖组类似。结论：结果提示HI前低血糖可使GLUT3基因表达和产物合成明显下调、脑病理改变加重;HI前重度高血糖则使GLUT3基因表达和产物合成明显上调、脑病理改变显著改善;在缺氧缺血前预先补充足量葡萄糖,有可能在一定程度上提高脑内应对缺氧缺血的侵袭、改善缺氧缺血程度的能力。     

PINK1基因对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠细胞凋亡及自噬的影响

目的 研究PINK1 基因对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠细胞凋亡及细胞自噬的影响。方法 将野生型和PINK1 基因敲除型新生小鼠各72 只分为野生型假手术组(SWT)、野生型模型组(MWT)、基因敲除假手术组(SKO)及基因敲除模型组(MKO)。模型组小鼠行右侧颈总动脉结扎后置于低氧舱中(含8%氧气和92% 氮气)2.5 h,假手术组不予结扎和低氧处理。缺氧缺血处理后24 h,采用TTC 染色法检测各组新生小鼠脑梗死程度;采用免疫组化法检测各组脑组织中活化型半胱天冬酶-3(CC3)的表达;采用TUNEL 法检测细胞凋亡;采用免疫荧光法及Western blot 法检测细胞自噬相关蛋白LC3 的表达。结果 MKO 组小鼠脑组织梗死程度较MWT 组小鼠明显减轻(P<0.05);脑组织凋亡阳性细胞数明显减少,凋亡指数降低(P<0.05);凋亡蛋白CC3 表达显著减少(P<0.05)。MKO 组小鼠自噬相关蛋白LC3 表达较MWT 组减少,进一步检测证实自噬指标LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值较MWT 组降低(P<0.05)。结论 敲除PINK1 基因对新生鼠缺血缺氧脑损伤具有神经保护作用。     

IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响

为了解新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA水平的变化以及IGF-I治疗后对BDNF的影响,制作新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,用原位杂交方法观察HIBD后各时间点海马和大脑皮层BDNF基因表达的动态变化,并比较IGF-I治疗组与对照组HIBD后12h、72h BDNF mRNA的表达水平,用病理图像分析软件作半定量分析。结果显示HIBD后12h海马的BDNF mRNA开始上升,72～96h达高峰,120h下降;皮层BDNF mRNA在HIBD后72h才显著升高,且持续时间短,仅48h;给予外源性IGF-I治疗后10hBDNF mRNA开始上升,70h仍维持在较高水平,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示IGF-I可能诱导BDNF的转录,两者协同发挥神经保护作用。     

血糖浓度对缺氧缺血新生大鼠脑内调控凋亡基因表达的影响

目的通过观察缺氧缺血(HI)合并高或低血糖新生大鼠脑内-对调控凋亡基因Bcl-2和Bax基因的表达变化，从分子生物学角度评估葡萄糖对缺氧缺血脑保护效果。方法将7日龄SD新生大鼠分成正常对照组、HI组、HI前低血糖组、HI前高血糖组以及HI后高血糖组，应用竞争性RT-PCR技术，分别于HI后0、2、6、12、24、48、72h及7d对各组新生大鼠脑内Bcl-2基因和Bax基因进行测定。结果正常情况下，Bcl-2基因和Bax基因在脑组织中无明显表达或仅有微弱表达。HI可引起这对调控凋亡基因的表达反应性增强，其中Bcl-2基因的表达高峰在HI后12h，Bax基因的表达高峰在HI后24h，在HI后48～72h，这一对基因的表达分别回落至低水平。血糖浓度对这一对基因的表达时相有明显影响。HI前高血糖组Bax基因的表达呈明显下调；Bcl-2基因的表达呈明显上调，其表达高峰较其余各组晚12h。HI前低血糖组Bax基因的表达呈明显上调；Bcl-2基因的表达则明显下调。HI后高血糖组的表达时相类似HI组，假手术组的基因表达则等同于正常组。结论结合本研究组已完成的脑细胞凋亡形态学结果，本研究进一步提示，通过上调Bcl-2基因和下调Bax基因的表达，高血糖在一定程度上抑制了HI后脑细胞的凋亡；低血糖则通过下调Bcl-2基因和上调Bax基因的表达，一定程度上加剧了HI后脑细胞的凋亡。结合临床，如对重度窒息新生儿在生后早期进行葡萄糖的合宜补充以及高危孕妇在临产前输注足量葡萄糖，有可能减轻窒息儿的脑病变程度，改善高危儿的生存质量。     

血糖对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1基因表达影响的研究

目的 探讨血糖对缺氧缺血(HI)新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因表达的影响.方法 对7日龄SD新生大鼠通过调节25%葡萄糖的注射次数、时间或禁食12 h,分别建立单纯低血糖组、HI组、HI前低血糖组、HI后低血糖组、HI前轻度高血糖组、HI后轻度高血糖组、HI前重度高血糖组以及HI后重度高血糖组:另设正常组和假手术组.应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,分别在HI后2、24、48、72 h及7 d对各组新生大鼠脑内GLUT1基因进行测定.结果 正常组GLUT1基因表达量随日龄增加而增高.HJ可引起GLUT1基因表达量的短期上调,至HI后72 h及7 d则非常显著地低于正常组(P＜0.01).HI前低血糖组GLUT1基因在HI后各时段均低于曾经HI各组,其中HI后48 h及HI后7 d显著低于HI组(P均＜0.05).HI前重度高血糖可明显上调GLUT1基因表达量,在HI后多数时段的表达量均显著高于曾经HI各组(P＜0.05或0.01).HI前轻度高血糖对GLUT1基因表达的影响不如HI前重度高血糖组.在HI后无论轻或重度高血糖组以及HI后低血糖组,其GLUT1基因表达时相均与HI前低血糖组类似.结论 结合过去系列研究结果提示,HI前低血糖可使GLUT1基因表达和产物合成明显下调、脑病理改变加重;HI前重度高血糖则使GLUT1基因表达和产物合成明显上调、脑病理改变显著改善.提示在HI前预先补充足量葡萄糖,有可能在一定程度上提高脑内应对HI的侵袭、改善缺氧缺血程度的能力.     

核转录因子FOXO3a在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用

目的：探讨核转录因子FOXO3a在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡中的作用及机制。方法：160只10日龄SD大鼠随机分为缺氧缺血（HI）组和假手术组,HI组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎后缺氧2.5?h;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理。两组在HI后0.5?h、2?h、4?h、8?h和24?h各处死16只大鼠取大脑皮层。应用Western blot定量检测FOXO3a总蛋白、胞核FOXO3a蛋白、胞浆FOXO3a蛋白及Bim蛋白表达。应用TUNEL染色法检测凋亡细胞。结果：与假手术组比较,HI组胞核FOXO3a蛋白于HI后0.5 h表达开始增高,随HI时间延长表达逐渐增高,24?h达高峰（P<0.01）;胞浆FOXO3a蛋白水平在HI后各时间点均低于假手术组（P<0.01）;Bim蛋白在HI后0.5 h表达升高,2?h达高峰,4?h开始降低,至8?h开始恢复至基线水平。TUNEL染色结果显示HI后4 h,凋亡细胞开始增多,24?h达高峰,各时间点凋亡指数均高于假手术组（均P<0.01）。结论：新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时FOXO3a自胞浆转位入胞核,诱导靶基因前凋亡蛋白Bim表达,Bim表达上调可能与神经元凋亡有关。     

缺氧缺血新生大鼠海马缺氧诱导因子1α和促红细胞生成素的表达

目的探讨新生鼠缺氧缺血后海马缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达。方法对7日龄SD新生大鼠结扎左侧颈总动脉并暴露在低氧环境建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,以及单纯持续暴露在低氧环境建立低氧诱导模型。新生大鼠HIBD后0、1、6、16h和1、3、7天,用免疫组织化学染色观察海马HIF-1α和EPO的表达情况。低氧诱导0.5、1、2、3、5h后免疫组织化学染色法观察海马HIF-1α的表达。结果 HIBD组随复氧时间的延长,海马CA1区EPO阳性细胞计数先增加后降低,16h最高,差异有统计学意义(P<0.001),对照组各时间点差异无统计学意义(P>0.05);HIBD组各时间点EPO阳性细胞数均高于对照组(P<0.001)。HIBD组缺氧缺血后即刻(0h)海马齿状回见少量HIF-1α阳性细胞,复氧后各时间点和对照组均未见HIF-1α阳性细胞;持续暴露在低氧环境0.5h,HIF-1α开始表达,至3h时HIF-1α表达达高峰。常氧对照组未见HIF-1α表达。结论新生大鼠HIBD后内源性EPO分泌增加,低氧可诱导HIF-1α表达,推测HIF-1α/EPO缺氧信号转导系统可能参与缺氧缺血后海马神经元形成。     

新生大鼠缺氧缺血后海马caspase-3 mRNA的表达及硫酸镁的神经保护机制研究

目的　探讨caspase 3mRNA在新生大鼠缺氧缺血后海马中的表达 ,研究硫酸镁对脑损伤可能的保护机制。方法　制作新生大鼠缺氧缺血模型 ,按治疗方式不同随机分为 :①正常对照组(n =4) ;②假手术组 (n =4) ;③缺氧缺血组 (n =4) ;④生理盐水对照组 (n =4) ;⑤硫酸镁预防组(n =4) ;⑥硫酸镁治疗组 (n =4)。预防组和治疗组分别在缺氧缺血前或后 0 5h腹腔注射 5 %硫酸镁5 0 0mg/kg。半定量RT PCR法测定缺氧缺血后 2 4h海马组织caspase 3mRNA的表达 ,比较两个硫酸镁干预组与对照组的差异。结果　正常对照组新生大鼠海马组织中caspase 3mRNA相对表达量为0 97± 0 46,缺氧缺血组海马组织中caspase 3mRNA表达量增高至 1 88± 0 3 6,与正常组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;硫酸镁预防组与治疗组表达量分别是 1 5 4± 0 49和 1 65± 0 48,与缺氧缺血组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,硫酸镁干预抑制了缺氧缺血后海马组织中caspase 3mRNA的表达。结论　新生大鼠缺氧缺血后 2 4hcaspase 3mRNA在海马中的表达明显增高 ,硫酸镁对缺氧缺血脑组织的保护作用可能与抑制海马caspase 3mRNA表达有关     

內源性白血病抑制因子在脑室周围白质软化新生大鼠脑组织中的表达

目的 探讨脑室周围白质软化（periventricular leukomalacia, PVL） 新生大鼠脑组织内源性白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）的表达变化。方法 采用左侧颈总动脉结扎并低氧（6% O2 4 h）处理建立 3 日龄 Wistar 大鼠缺氧缺血（HI）PVL 模型。HI 后 1 d、3 d、7 d、14 d 和 28 d 处死动物, 应用 Real-Time PCR 方法和 Western blot 方法分别检测脑组织 LIF mRNA 和蛋白的表达变化;应用免疫荧光双标染色方法检测 LIF 和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）的共表达情况。结果 HI 后 1、3、7 d PVL 组脑组织 LIF 蛋白表达量均高于对照组（均 PP结论 PVL 新生大鼠脑组织中星形胶质细胞 LIF mRNA 与蛋白的表达均呈先升高后降低的趋势;LIF 可能参与了 PVL 病变的修复过程。     

缺氧缺血新生鼠脑内乙酰胆碱水平的变化

目的 探讨缺氧缺血对新生鼠中枢胆碱能系统的远期影响及治疗措施。方法 采用碱性羟胺比色法对缺氧缺血新生鼠（7日龄）损伤后即刻及其14d后左、右脑乙酰胆碱（Ach）含量进行测定,并观察了损伤后即刻及3d后腹腔内连续7d注射4µg碱性成纤维生长因子（bFGF）对脑内Ach含量的影响。结果 缺氧缺血损伤后即刻,在脑Ach含量显著降低,（P﹤0.05）,于14d后仍未恢复;bFGF治疗对损伤后脑内Ach含量无显著影响。结论 缺氧缺血可损伤新生鼠中枢胆碱系统功能,此影响可持续至21日龄。bFGF对胆碱能损伤无明显保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期行为学和超微结构改变

目的：建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,观察远期行为学及超微结构改变。方法：60只7日龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分为HIBD组和假手术组,每组30只。生后5周进行Morris水迷宫试验及感觉功能测试;取脑组织切片行尼氏染色计数神经元数目;取皮层、海马行透射电镜,观察突触结构,测量突触后致密区（PSD）厚度及活性区长度,并与行为学结果进行相关分析。结果：Morris水迷宫试验中,HIBD组大鼠寻找平台潜伏期时间明显长于假手术组（P<0.05）;HIBD组大鼠穿越平台次数较假手术组少（P<0.05）。感觉运动功能试验中,HIBD组测试结果明显差于假手术组。尼氏染色提示HIBD组神经元数目明显减少（P<0.01）。电镜显示HIBD组大鼠突触数量减少,PSD厚度及活性区长度变薄变短。HIBD组大鼠PSD厚度与Morris水迷宫试验寻找平台潜伏期时间呈负相关（r=-0.861,P<0.01）,与三项感觉功能评估得分之和亦呈负相关（r=-0.758,P<0.05）。结论：缺氧缺血可致新生鼠远期神经元减少和超微结构损伤,造成远期行为学功能障碍。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体钟基因表达的变化

目的：观察缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠松果体中CLOCK、BMAL1蛋白表达的变化,探讨钟基因表达异常在HIBD导致的昼夜节律紊乱中的作用。方法：72只7 日龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组与HIBD模型组,每组36只。采用改良Levine法建立HIBD模型,用Western blot方法测定两组新生大鼠术后0、2、12、24、36、48 h松果体中CLOCK、BMAL1蛋白水平。结果：HIBD模型组松果体的CLOCK及BMAL1蛋白表达水平在HIBD后48 h高于假手术组（P0.05）。结论：HIBD新生大鼠松果体中CLOCK和BMAL1蛋白在损伤48 h后有显著升高,提示两者可能共同参与缺氧缺血时昼夜节律紊乱的发生。     

rhIGF-1对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠Cyt-C及caspase-3表达的影响

目的：探讨人重组胰岛素样生长因子-1（rhIGF-1）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠细胞色素（Cyt-C）及 caspase-3 表达的影响。方法：90只新生Spargue-Dawley 大鼠随机分为正常对照、HIBD 和 HIBD+rhIGF-1 组。按照Rice-Vannucci 法制作HIBD模型,HIBD+rhIGF-1 组于HI后即刻予腹腔注射rhIGF-1（0.2 mg/kg）。应用 RT-PCR 和 Western blot技术于HI后24 h、48 h、72 h 分别检测 Cyt-C及caspase-3的mRNA及蛋白表达。结果：HIBD组各时间点的Cyt-C mRNA 和caspase-3 mRNA 表达较正常对照组均明显升高,HIBD+rhIGF-1 组的表达则较正常对照组升高、但较 HIBD 组降低,3组之间的差异具有统计学意义（P<0.01）。HIBD 组的 Cyt-C 和 caspase-3 蛋白表达在各时间点均明显高于正常对照组,HIBD+rhIGF-1 组的表达则较正常对照组升高、但较 HIBD 组降低,3组之间的差异具有统计学意义（P<0.01）。Peason 相关分析显示,HIBD 组和 HIBD+rhIGF-1 组的 CytC 与 caspase-3 mRNA和蛋白表达为直线相关关系。结论：rhIGF-1 可能通过抑制 Cyt-C 释放、减少 caspase-3 表达,从而对新生大鼠 HIBD 发挥保护作用。［中国当代儿科杂志,2010,12(12)：963-966］     

Pim1在体外培养大脑皮层神经元氧糖剥夺/复氧损伤中的表达及作用

目的 探讨原代培养大脑皮层神经元缺氧缺血损伤后Pim1的表达及其对细胞凋亡的作用。方法 取新生1日龄C57BL/6小鼠的大脑皮层神经元进行原代培养，培养第8天更换无糖无血清DMEM培养基，于1% O₂条件下培养3 h后，换为正常条件下培养，即氧糖剥夺/复氧（OGD/R）处理，以模拟体内神经元缺氧缺血状态。分别于OGD/R后0、6、12、24 h收集细胞，同时设立神经元正常培养组。原代培养神经元中分别转染Pim1过表达质粒或空质粒，然后分别进行正常培养或OGD/R处理，分别命名为Pim1组、对照组、OGD/R组和OGD/R+Pim1组；采用Real-time PCR检测Pim1 mRNA的表达，采用Western blot检测Pim1蛋白和凋亡相关蛋白活化的半胱氨酸蛋白酶（CC3）的表达。采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 Real-time PCR和Western blot结果显示，与正常组相比，OGD/R后神经元中Pim1 mRNA及其蛋白表达均显著降低，且均从OGD/R后0 h开始下降，12 h最低，24 h回升但仍维持在较低水平（P < 0.05）。Pim1过表达转染使神经元中Pim1蛋白水平增加。Pim1+OGD/R组CC3表达水平明显低于OGD/R组，Pim1+OGD/R组细胞凋亡率也较OGD/R组显著减少（P < 0.01）。结论 缺氧缺血损伤引起体外培养神经元中Pim1表达下降。过表达的Pim1可以抑制OGD/R诱导的神经元凋亡。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤内源性纤维蛋白溶酶原激活剂变化及其意义

目的新生儿缺氧缺血性脑损伤发病机制尚不十分清楚,目前缺乏有效的治疗手段。近年来,越来越多的研究显示组织纤维蛋白溶酶原激活剂（tissue type plasminogen activator, tPA)在神经系统中起到很重要的作用。该研究欲探讨纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)在新生鼠缺氧缺血脑损伤中的作用。方法选用Wistar大鼠7日龄的新生鼠,运用Rice Vannucci动物模型造成新生鼠脑缺血缺氧,缺血缺氧后不同时间取新生鼠大脑检测。异硫氰酸荧光素 右旋糖酐左心室灌注分析脑缺血缺氧后新生鼠脑的再灌注障碍。用逆转录酶 聚合酶链反应(RT PCR),酶谱法检测损伤后不同时间tPA的表达与活性;并采用双重免疫荧光,TUNEL和DAPI染色法检测血小板聚集指标(Integrin GPIIb)与纤维蛋白(fibrin)在缺血缺氧后不同时间的表达及神经细胞凋亡。 结果新生鼠脑缺氧缺血后1 h,异硫氰酸荧光素 右旋糖酐心室灌注提示新生鼠大脑有明显的缺血梗塞区,而Integrin GPIIb与fibrin的表达也较对照侧明显增加。但4 h后缺血梗塞区面积明显缩小,伴有Integrin GPIIb与fibrin的表达减少。tPA的表达与活性在缺血缺氧后明显增加。随着缺氧缺血后恢复的时间延长,大脑凋亡细胞增加。结论 tPA表达的增加在脑缺氧缺血的急性期可有助于血栓溶解,但在脑缺氧缺血的亚急性期却会导致神经细胞凋亡而加重脑损伤。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Caspase-1mRNA的表达变化

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后Caspase 1mRNA的表达变化。方法　制备新生大鼠左脑HIBD模型 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定HIBD 12、2 4、72 ,96h不同时点脑皮质Caspase 1mRNA的表达 ,同时观察光镜下神经元坏死情况。结果　假手术对照组有少量Caspase 1mRNA表达 ,HIBD 12hCaspase 1mRNA的表达仍较少 ,与对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,HIBD 2 4～ 96hCaspase 1mRNA的表达逐渐增多 ,达高峰 ,同其他各组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 )。光镜下HIBD 2 4～ 96h神经元坏死明显加重。结论　新生大鼠HIBD可诱导Caspase 1mRNA的表达 ,可能参与了新生儿HIBD的形成。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织小RNA表达的变化

目的：观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）皮层小RNA（microRNA,miRNA）差异表达,以研究其在HIBD的病理生理中的作用。方法：建立新生大鼠HIBD模型14 d后,取皮层脑组织,miRNA表达谱芯片检测miRNA差异表达。实时定量PCR检测miR-126-26a、-674-5p、-21、-25、-290和miR-124、-125b-5p、-9a等9个miRNA。结果：miRNA表达谱芯片结果提示,与对照组比较,HIBD大鼠皮层脑组织中27个已知miRNA表达上调2倍以上;60个表达下调2倍以上。实时定量PCR检测所选择的9个miRNA结果与miRNA芯片结果具有同样趋势。结论：HIBD模型大鼠miRNA表达有明显差异,这些改变可能在HIBD的病理生理中起着重要作用。［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：373-376］     

c-Jun氨基末端激酶介导的FOXO3a核转位在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡中的作用

目的探讨抑制c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核转录因子FOXO3a信号通路对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠神经元凋亡的保护作用机制。方法将64只7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血(HI)组、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组和JNK特异性抑制剂AS601245干预组(JNK抑制剂组)。各组分别在建模后24 h处死动物取大脑皮层,应用Western blot法定量检测JNK、p-JNK、FOXO3a、胞核FOXO3a、胞浆FOXO3a,以及促凋亡蛋白Bim及CC3的表达水平;应用TUNEL染色法检测神经细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,HI后24 h,p-JNK蛋白水平增高(P0.01);胞核FOXO3a蛋白水平增高,胞浆FOXO3a蛋白水平降低(P0.01);Bim及CC3表达水平增高(P0.01)。与HI组及DMSO溶剂组相比,JNK抑制剂组p-JNK蛋白水平降低(P0.01);胞核FOXO3a蛋白水平降低,胞浆FOXO3a蛋白水平增高(P0.01);Bim及CC3表达水平降低(P0.01)。JNK抑制剂组的TUNEL染色阳性细胞表达较HI组及DMSO溶剂组减少(P0.01)。结论新生大鼠HIBD时,JNK发生磷酸化,活性增高;抑制JNK活性可抑制FOXO3a核转位,下调促凋亡蛋白Bim及CC3表达,减少神经细胞凋亡。