癫癎发作对幼年大鼠海马齿状回神经发生影响的研究

目的 探讨癫癎发作对幼鼠齿状回颗粒细胞神经发生的影响。方法 生后第15天Wistar大鼠80只,随机分为癫癎组50只.对照组30只。癫癎组以海藻酸致癫,对照组幼鼠以相同方法注射生理盐水,2组于注射后第5天经腹腔注射5溴脱氧尿苷(BrdU)。采用BrdU标记新生细胞,再以β微管蛋白Ⅲ(βⅢtubulin,TuJ1)、钙调蛋白D28k(CaBP)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)双标免疫组织化学方法分别标记早期神经元、成熟颗粒细胞和胶质细胞,观察致癫幼鼠齿状回颗粒细胞的神经发生。另外,采用Timm染色对P15致惊幼鼠于致惊后1及2个月的苔藓纤维发芽情况进行观察。结果 BrdU注射后第7天和第21天,癫癎组幼鼠齿状回BrdU阳性细胞数明显高于各自对照组(第7天:244±15与190±10;第21天:218±19与133±12,P均<0.05);BrdU注射后第7天,癫癎组和对照组幼鼠分别约80.2％和78.7％的BrdU阳性细胞同时表达TuJ1(p>0.05);:BrdU注射后第21天,癫癎组和对照组幼鼠分别约60.2％和58.2％的BrdU阳性细胞同时表达CaBP(P>0.05):BrdU注射后第7天和第21天,两组幼鼠均约3％-5％的BrdU阳性细胞同时表达GFAP。P15致惊幼鼠在致惊后1及2个月均未发现内分子层及CA3区苔藓纤维的发芽现象。结论 癫癎发作可增加幼鼠齿状回颗粒细胞的神经发生,这些新生细胞大多数从颗粒下层迁移     

Dynamin-1和磷酸化dynamin-1在内侧颞叶癫癎患儿及大鼠海马组织中的表达

目的：观察内侧颞叶癫癎（mesial temporal lobe epilepsy, MTLE）患儿及MTLE大鼠海马组织中dynamin-1和磷酸化dynamin-1蛋白的表达变化,探讨其在MTLE发生发展中的作用。方法：25日龄Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为急性期对照组、急性期模型组、潜伏期对照组、潜伏期模型组、慢性期对照组、慢性期模型组,应用氯化锂-匹罗卡品诱导建立MTLE动物模型。同时收集接受神经外科手术、并经病理结果确认存在海马硬化的5例患儿的海马组织,及病理科尸检4例对照组海马组织。提取海马组织蛋白,采用Western blot方法和免疫组织化学技术检测总dynamin-1蛋白及磷酸化dynamin-1蛋白在MTLE患儿及不同时间点MTLE大鼠海马组织中的表达变化。结果：Western blot显示磷酸化dynamin-1蛋白在MTLE大鼠急性期及慢性期表达较同时期对照组显著降低（P<0.05）;同时,磷酸化dynamin-1蛋白在MTLE患儿海马组织表达较对照组显著下降（P<0.05）。而dynamin-1总蛋白在MTLE大鼠各期、MTLE患儿及对照组海马之间表达无明显差异 （P>0.05）。免疫组化结果显示磷酸化dynamin-1在对照组大鼠急性期、慢性期、对照组患儿海马神经元胞浆中高表达,而在同时期MTLE大鼠和MTLE患儿海马神经元胞浆中表达下降（P<0.05）。结论：磷酸化dynamin-1而不是dynamin-1总蛋白在MTLE患儿及MTLE大鼠出现癎性发作期间表达下调,其表达变化提示dynamin-1可能通过磷酸化/去磷酸化方式参与MTLE的发生发展。     

甘珀酸对戊四氮点燃癫癎大鼠海马Fos NMDAR2 GFAP表达的影响

目的缝隙连接(GJ)是细胞间直接通道,对同步化放电有重要作用。该研究旨在探讨GJ阻断剂甘珀酸(CBX)对戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫癎样活动的影响。方法30只SD雄性大鼠随机分为3组:对照组(NS组),点燃组(K组),干预组(CBX组),每组10只大鼠。NS组每日腹腔注射生理盐水;K组和CBX组大鼠每日腹腔注射PTZ(35mg/kg)至点燃,再分别腹腔注射生理盐水、CBX(10mg/kg)干预3d。观察3组大鼠惊厥行为的变化,以及免疫组化染色方法观察Fos、NMDAR2、GFAP在海马内的表达变化。结果①PTZ点燃癫癎大鼠出现自发性抽搐,自发性抽搐次数K组>CBX组>NS组(P<0.05)。②点燃癫癎大鼠海马Fos-Li神经元、NMDAR2-Li神经元增多,GFAP-Li星形胶质细胞增多,胞体肥大,突起丰富。CBX干预后,Fos-Li、NMDAR2-Li神经元减少(P<0.05,P<0.01),GFAP-Li星形胶质细胞无明显改变(P>0.05)。结论CBX抑制自发性抽搐和神经元活动,CBX有潜在的抗惊厥或协助抗惊厥的作用。     

海人酸致(癎)大鼠海马及脑脊液谷氨酸及天冬氨酸变化的意义

目的探讨海人酸(KA)致大鼠模型海马及脑脊液谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)变化的意义。方法SD大鼠40只随机分成KA组(KA2μg/kg,海马杏仁核注射后分为6h、1、3、7d组,每组8只)和9g/L盐水对照组(n=8,海马杏仁核注射与致剂等容量的9g/L盐水)。采用高效液相色谱(HPLC)法测定大鼠海马组织及脑脊液兴奋性氨基酸Glu和Asp水平,并进行比较。结果大鼠海马中Glu、Asp水平在观察的24h内随时间推移呈逐步增长趋势,但与对照组相比无显著性差异,3d后仅Glu较对照组明显上升。其脑脊液Glu、Asp水平在致后6h与对照组比较有显著差异,且7d内保持上升趋势。结论癫大鼠脑脊液兴奋性氨基酸水平变化较海马组织早,其中Glu增高尤为突出。     

癫(癎)诱发后CB1受体在睡眠剥夺大鼠海马表达的研究

目的探讨癫痫诱发后大麻素CB1受体在睡眠剥夺大鼠海马的表达变化及其意义。方法50只Sprague-Dawley大鼠随机分为癫痫诱发前和癫痫诱发后2组,每组25只。每组大鼠又随机分为空白对照组（CC）,环境对照组（TC）和睡眠剥夺1d、3d、5d组（SD1d、SD3d、SD5d）。用改良多平台睡眠剥夺法建立快速眼球运动（REM）睡眠剥夺模型,戊四氮诱发癫痫。应用RT-PCR方法检测癫痫诱发前后大麻素CB1受体mRNA表达,并电镜观察其海马的超微结构改变。结果SD1d组神经元轻度固缩,染色质轻度边聚,SD3d组神经元凋亡,SD5d组超微结构改变基本同SD3d组。癫痫诱发后发现CC组与TC组大鼠无抽搐,CB1受体mRNA表达较癫痫诱发前明显升高（P〈0．01）。SD1d、SD3d、SD5d组大鼠抽搐严重,CB1受体mRNA表达与癫痫诱发前相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论睡眠剥夺能够造成神经元凋亡,影响大麻素CB1受体mRNA表达。大麻素CB1受体表达增高可能是一种自身稳定调节的保护机制,能抑制癫痫发作。     

甘珀酸对戊四氮点燃癫癎大鼠海马Fos NMDAR2 GFAP表达的影响

目的：缝隙连接（GJ）是细胞间直接通道,对同步化放电有重要作用。该研究旨在探讨GJ阻断剂甘珀酸（CBX）对戊四氮（PTZ）点燃大鼠癫癎样活动的影响。方法：30只SD雄性大鼠随机分为3组：对照组（NS组）,点燃组（K组）,干预组（CBX组）,每组10只大鼠。NS组每日腹腔注射生理盐水;K组和CBX组大鼠每日腹腔注射PTZ（35 mg/kg）至点燃,再分别腹腔注射生理盐水、CBX（10 mg/kg）干预 3 d。观察3组大鼠惊厥行为的变化,以及免疫组化染色方法观察Fos、NMDAR2、GFAP在海马内的表达变化。结果：①PTZ点燃癫癎大鼠出现自发性抽搐,自发性抽搐次数K组>CBX组>NS组（P<0.05）。②点燃癫癎大鼠海马Fos-Li神经元、NMDAR2-Li神经元增多,GFAP-Li星形胶质细胞增多,胞体肥大,突起丰富。CBX干预后,Fos-Li、NMDAR2-Li神经元减少（P<0.05, P<0.01）,GFAP-Li星形胶质细胞无明显改变（P>0.05）。结论：CBX抑制自发性抽搐和神经元活动,CBX有潜在的抗惊厥或协助抗惊厥的作用。［中国当代儿科杂志,2007,9（5）：465-468］     

癫癎大鼠海马中脂蛋白脂酶表达的动态观察及其对维生素E含量的影响

目的：研究大鼠癫癎模型海马中脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)表达的变化规律,探讨LPL在癫癎持续状态(status epilepticus)后对维生素E含量的影响。方法：采用匹罗卡品(PILO)腹腔注射法建立癫癎大鼠模型,免疫荧光方法观察癫癎损伤后不同时间点海马中LPL的表达,比色法测量海马中维生素E(Vit E)的含量。结果：免疫荧光发现正常组和癫癎组海马中均有LPL表达,且大鼠癫癎持续状态后24 h海马区LPL表达开始增加(P<0.05), 3 d达高峰(P＜0.01),以后逐渐下降,7 d时仍维持较高水平, 14 d后基本恢复正常。大鼠癫癎持续状态后12 h海马Vit E含量开始迅速降低,且明显低于正常 (P＜0.01),于24 h达到低谷(P＜0.01),3~7 d 逐渐升高,但仍显著低于正常(P＜0.05),14 d后基本恢复正常。结论：LPL在癫癎大鼠模型海马中表达上调,代偿性加速对Vit E的摄取,从而可能对癎性发作后氧化应激机制产生影响。［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：377-381］     

生酮饮食对海藻酸致癎大鼠海马突触重建和GluR5 表达的影响

目的探讨生酮饮食对海藻酸致大鼠海马突触重建和G luR5表达的影响机制。方法以海藻酸(KA)致的幼鼠为研究对象,采用Timm′s染色和尼氏染色,观察经不同饮食处理的动物海马结构和癫行为的变化;并用W estern B lot和RT-PCR法检测海马G luR5及其mRNA的表达。结果生酮饮食组动物自发性反复惊厥的次数(1.40±1.03)次,明显少于正常饮食组(7.36±3.75)次。KA致大鼠海马齿状回内分子层异常Timm′s染色颗粒的平均A值均显著高于非致组,但生酮饮食组和正常饮食组间则无明显差异;各组动物CA3区锥体细胞层及始层的Timm′s染色颗粒以及海马门区和CA1、CA3区神经元的平均A值未见明显差异。KA致后生酮饮食组大鼠海马G luR5的表达[(189.38±40.03)/mg总蛋白]明显高于正常饮食组[(128.79±46.51)/mg总蛋白],但两组间G luR5mRNA比较,差异无统计学意义。结论苔藓纤维发芽可能是KA致动物癫产生的原因,酮食疗法对KA致大鼠确有抗癫作用,其抗癫机制可能与增加幼年大鼠CA1区中间神经元G luR5的表达,使海马内抑制性突触传递增强,进而阻止癫活动扩散有关。     

左乙拉西坦对癫癎大鼠海马组织中NCAM和GAP-43 mRNA表达的影响

目的：通过氯化锂-匹罗卡品(Li-PILO)诱导的癫癎大鼠模型,观察左乙拉西坦(LEV) 对大鼠海马组织中神经细胞黏附分子(NCAM)和生长相关蛋白-43 (GAP-43)mRNA的表达变化,为阐明LEV的抗癫癎机制及其剂量效应提供实验依据。方法：将48只Wistar大鼠随机分成对照组、Li-PILO组（模型组)、150 mg/kg LEV组和300 mg/kg LEV组,每组12只。对LEV 组大鼠予以LEV灌胃,首次灌胃时间为癫癎持续状态后6 h,剂量分别为150和300 mg/kg,每日一次,持续2 周。Real-time PCR法测定各组大鼠海马组织中NCAM和GAP-43的mRNA表达。结果：模型组大鼠海马NCAM及GAP-43的mRNA表达水平明显高于正常对照组(P<0.05), 150 mg/kg LEV组和300 mg/kg LEV组明显低于模型组(P<0.05),其中300 mg/kg LEV组明显低于150 mg/kg LEV组(P<0.05)。结论：Li-PILO诱导癫癎大鼠海马NCAM和GAP-43 mRNA表达上调,LEV能够抑制NCAM和GAP-43 mRNA的表达, 其抑制效果与剂量有关。     

加巴喷丁和米诺环素对癫癎持续状态大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的研究加巴喷丁(GBP)和米诺环素对戊四氮(PTZ)致癫癎持续状态(SE)大鼠海马区N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR1)表达的影响。方法 SD大鼠84只随机分为对照组、PTZ致组(PTZ组)、GBP 600 mg组(GBP组)、GBP 600 mg干预组(干预组1)、米诺环素45 mg干预组(干预组2)、米诺环素90 mg干预组(干预组3)、米诺环素180 mg干预组(干预组4),每组12只。采用PTZ溶液60 mg.kg-1.d-1腹腔注射诱发SE大鼠,PTZ注射期间出现RacineⅣ～Ⅴ级的惊厥发作持续30 min,连续3 d未死亡者为SE点燃成功。GBP组予GBP灌胃,对照组给予9 g.L-1盐水灌胃。采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠性放电的脑电图。免疫组织化学染色检测NMDAR1表达。结果 NMDAR1表达在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组1表达低于PTZ组(P<0.05)。3个不同剂量的米诺环素组NMDAR1表达与PTZ组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05)。结论 PTZ致SE大鼠海马神经元NMDAR1表达增加,GBP能降低PTZ所致的SE大鼠NMDAR1表达增加,而米诺环素45～180 mg.kg-1不能降低PTZ所致的SE大鼠NMDAR1表达增加。     

多药耐药基因在慢性癫癎大鼠中的表达及托吡酯对其表达的影响

目的探讨多药耐药基因（mdr）在慢性大鼠中的表达及托吡酯（TPM）对其表达的影响。方法将生后28d的SD大鼠给予海人酸致,对照组给予相同的方法注射生理盐水。待自发性形成后,将癫痫组分为持续状态并发自发性（简称SE）组、持续状态并发自发性治疗（简称SE＋TPM）组、非癫痫持续状态并发自发性癫痫（简称N—SE）组和非持续状态并发自发性治疗（简称N—SE＋TPM）组;将生理盐水对照组分为正常生理盐水对照组和正常生理盐水对照治疗（对照＋TPM）组。治疗组均给予TPM治疗,治疗6周后,将所有大鼠断头取海马,RT—PCR检测mdr1α和mdr1b mRNA的表达。结果SE组、SE＋TPM组和N—SE＋TPM组的mdr1α和mdr1b mRNA表达均比对照组高（P〈0．001或〈0．05）,SE＋TPM组的mdr1α和mdr1b mRNA表达也比SE组高（P〈0．001）,其他治疗组（N—SE＋TPM,对照＋TPM）mdr1α和mdr1b mRNA表达较相对应的未治疗（N—SE,对照）组相比高,但无统计学意义（P〉0．05）。结论反复癫痫发作,特别是持续状态可使大鼠海马中mdr1α和mdr1b mRNA表达增加,颞叶的耐药可能与mdr1α和mdr1b mRNA高表达有关。TPM可增加大鼠海马中mdr1α和mdr1b mRNA的表达,尤其mdr1α mRNA的表达更明显。mdr1α 和mdr1b mRNA高表达可能与癫痫和TPM均有关。     

复方氯胺酮口服液对大鼠海马CA1 CA3区NMDA受体1 GABA_A受体mRNA表达的影响

目的：通过观察小儿麻醉前用药复方氯胺酮口服液(CKOS)对大鼠海马CA1、CA3区的γ氨基丁酸A受体(GABAAR)和氮甲基天冬氨酸受体1(NMDAR1)分布及其表达影响,探讨其镇静作用的机制。方法：选健康SD大鼠50只,随机分为10组,每组5只,分别在给药后0,5,10,15,30,60,90,120,240,360min处死。0min点为对照组,经灌胃器灌注2μL/g生理盐水,其它各组灌注2μL/gCKOS。采用免疫组化和原位杂交技术检测各组NMDAR1、GABAARmRNA在海马CA1、CA3区的表达和分布。结果：用药后海马CA1、CA3区的GABAARmRNA的表达逐渐增强,30～90min时受体表达最强,360min逐渐恢复用药前水平。NMDAR1在CA1、CA3区表达呈抑制状态。结论：CKOS能增强海马CA1、CA3区的GABAA受体的mRNA表达和抑制NMDAR1的表达,从而产生镇静作用,最终达到消除恐惧的目的。     

Calpain抑制剂-3对新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区Caspase-3表达和神经元凋亡的影响

目的：钙依赖中性蛋白酶Calpain的活化可引起神经元凋亡,其抑制剂3(MDL28170)对成年动物脑缺血有治疗作用,但尚不清楚MDL28170对新生动物缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是否也有治疗作用。本研究观察了MDL28170对新生大鼠HIBD后海马CA1区Caspase3表达及细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法：将7日龄新生SD大鼠随机分为HIBD模型组(n=40)、干预组(n=40)及对照组(n=8),干预组在HI后0h、2h、4h予腹腔注射MDL2817050mg/kg,模型组和对照组同时予腹腔注射生理盐水。干预组和模型组大鼠在HI后6h、12h、24h、48h、72h各处死8只,用免疫组化染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测海马CA1区Caspase3的表达和神经凋亡。结果：HIBD组大鼠损伤侧海马CA1区Caspase3阳性细胞在HI后6h时较对照组增多(13.4±3.5/HPvs2.6±0.6/HP,P=0.028),于48h(27.1±4.1/HP)达到高峰,72h仍高于对照组(22.6±4.8/HP,P<0.001);TUNEL阳性细胞于HI后6h开始增多,12h时与对照组比较差别有显著性(25.0±1.7/HPvs2.3±1.5/HP,P<0.001),48h(67.8±2.6/HP)到达高峰,72h仍处于较高水平(44.3±6.8/HP)。MDL28170干预可明显减少Caspase3及TUNEL阳性细胞数量,与模型组比较48h内差异有显著性,72h以后作用不明显。结论：MDL28170可通过抑制海马CA1区Caspase3的表达,减少脑细胞凋亡,起到脑保护作用。     

缺氧缺血海马组织中自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达变化以及雷帕霉素对其表达的影响

目的 观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠在不同时间点海马组织中自噬相关蛋白Beclin-1 及LC3 的表达变化,并探讨雷帕霉素对上述蛋白表达的影响。方法 将生后7 d 的108 只Sprague-Dawley 大鼠随机分为假手术组、HIBD 组和雷帕霉素组,每组36 只。采用改良Rice 法建立HIBD 模型;假手术组分离左侧颈总动脉但不予结扎,不行低氧处理;雷帕霉素组在模型制作前1 h 予腹腔注射雷帕霉素(0.5 mg/kg)。各组大鼠分别于模型制作结束后0、6、12、24、48、72 h 时间点麻醉后断头取脑,采用Western blot 法检测大鼠海马组织Beclin-1 及LC3 蛋白表达的变化。结果 HIBD 组Beclin-1 蛋白及雷帕霉素组Beclin-1、LC3- Ⅱ蛋白表达水平均从0 h 起开始升高,24 h 时达到峰值后回落;HIBD 组LC3- Ⅱ蛋白表达水平从0 h 起开始升高,12 h时达到峰值后回落。与假手术组相比,HIBD 组及雷帕霉素组Beclin-1、LC3- Ⅱ蛋白表达水平在各时间点均显著升高(P<0.05);与HIBD 组相比,除12 h 时LC3- Ⅱ蛋白水平外,雷帕霉素组各时间点Beclin-1、LC3- Ⅱ蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论 海马组织细胞经缺氧缺血后出现自噬激活,而雷帕霉素能增强自噬这一表达过程。