EGb761对急性大鼠脊髓损伤后血脊髓屏障的保护作用及其机制研究

[目的]观察银杏叶提取物(EGb761)对急性大鼠脊髓损伤后炎症反应及血脊髓屏障的保护作用,探讨其对急性脊髓损伤的作用机制.[方法]120只雌性SD大鼠,体重200～220 g,随机分为假手术组(A组)、损伤对照组(B组)、EGb761治疗组(C组),每组40只.A组仅行T9椎板切除术,不致伤脊髓.B、C组用改良Allen's法以25gcf致伤力制作大鼠T9脊髓损伤模型,C组术后至处死前每日经腹腔给予EGb761 100 mg/kg(首次给药在术后30min),A、B组在同一时间给予等量生理盐水.术后3、6、24、72 h分批处死动物,以T9为中心取损伤节段脊髓,采用Evans蓝含量测定法观察SCI后血脊髓屏障(blood cerebrospinal barrier,BSCB)通透性的变化,采用ELISA法测定脊髓组织白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量,免疫组织化学方法检测细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecular-1,ICAM-1)在脊髓组织中的表达变化.[结果]A组各时间点脊髓中无明显Evan's蓝渗漏,IL-1β含量及ICAM-1表达维持在基础水平;B组各时间点Evan's蓝渗漏、IL-1β含量及ICAM-1表达量均明显高于A组;C组EGb761干预后在6、24、72 h时Evan's蓝通过BSCB漏入脊髓组织量显著低于B组,在各时间点IL-1β、ICAM-1的表达均较B组明显减少.[结论]在Allen's大鼠急性脊髓损伤模型中,EGb761能降低局部脊髓中IL-1β含量,下调ICAM-1的表达,减轻BSCB的破坏.     

大剂量甲基强地松龙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用大剂量甲基强地松龙(MP)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用大剂量甲基强的松龙治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组)，损伤后不同时间点(4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d)按Tarlov标准评价大鼠双后肢神经功能恢复情况，然后处死。用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞，原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达，神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0．01)。结论：大剂量甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡。     

银杏叶提取物对大鼠坐骨神经切断后HSP 70在脊髓与脊神经节中表达的影响

目的 研究周围神经损伤后脊髓热休克蛋白(heat shock proteirns,HSPs)的表达变化,及银杏叶提取物EGb 761对其影响,探讨银杏叶提取物对周围神经损伤的保护机制.方法 取成年雄性SD大鼠144只,随机分成三组:对照组、坐骨神经切断组、坐骨神经切断+银杏叶提取物干预组[术后每天用EGb 761(100 mg·kg-1*d-1,溶于2 ml SAL)灌胃,直到取材],每组48只.术后6 h、12 h、1 d.2 d,4 d、7 d、14 d、28 d取L4～6节段脊髓节段,采用免疫组织化学方法检测HSP 70在脊髓前角及脊神经节中的表达.结果 正常大鼠脊髓与神经节中均有少量HSP 70表达,在坐骨神经切断后表达迅速增加,持续一段时间后又回到正常水平,用EGb 761干预后,HSP 70表达早期较未干预组表达低,后期表达增高,且表达持续时间长.结论 银杏叶提取物EGb 761可以增加神经损伤后HSP 70表达,可能是银杏叶提取物保护神经,促进神经再生作用的机制.     

Effect of nerve growth factor on neuronal apoptosis after spinal cord injury in rats

OBJECTIVE: To explore the molecular mechanism of the protective effect of nerve growth factor (NGF) on injured spinal cord. METHODS: The posterior T(8) (the 8th thoracic segment) spinal cords of 60 Wistar rats were injured by impacts caused by objects (weighing 10 g) falling from a height of 2.5 cm with Allen's way. Solution with nerve growth factors (NGF) was given to 30 rats (the NGF group) through a microtubule inserted into the subarachnoid cavity immediately, and at 2, 4, 8, 12 and 24 hours after spinal cord injury (SCI) respectively. Normal saline (NS) with same volume was given to the other 30 rats (the NS group) with the same method. And 5 normal rats were taken as the normal controls. The expression of bcl-2 and bax proteins in spinal cord was detected with immunohistochemistry. The apoptotic neurons in spinal cord were measured with terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling of DNA fragments (TUNEL) staining. RESULTS: The positive expression of bcl-2 protein was strong in the normal controls, but decreased in the NS group, and increased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). The positive expression of bax protein was also strong in the normal controls, but increased in the NS group, and decreased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). Apoptotic neurons were found in the NS group, and they decreased significantly in the NGF group as compared with that of the NS group (P<0.01). CONCLUSIONS: NGF can protect the injured nerve tissues through stimulating the expression of bcl-2 protein, inhibiting the expression of bax protein and inhibiting the neuronal apoptosis after SCI.     

丙戊酸对大鼠急性脊髓损伤后氧化应激的影响

[目的]探讨丙戊酸(VPA)对大鼠脊髓损伤(SCI)后氧化应激的影响。[方法]72只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(C组)、损伤组(SCI组)和丙戊酸保护组(VPA组)。采用改良的Allen法制作脊髓损伤动物模型。VPA组术后即刻及其后每12 h皮下注射VPA 300 mg/kg至取材;C组和SCI组在相应时间点注射等体积的生理盐水。大鼠在伤后24、48、72 h和1周先行后肢运动功能BBB评分,随后处死取材。通过石蜡切片HE染色观察脊髓组织病理变化,并用免疫组化法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;通过化学比色法测定脊髓组织中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。[结果]BBB评分显示C组运动功能未受影响,VPA组的BBB评分均高于SCI组,两者相比在伤后48、72 h和1周差异有显著性(P<0.01)。HE染色示C组脊髓组织形态正常,VPA组各时间点的病理变化与SCI组相比没有明显改善。C组偶见或未见iNOS阳性表达细胞。与C组相比,SCI组和VPA组的iNOS表达均明显增加(P<0.05),在伤后72 h达高峰,但VPA组的iNOS表达在各时间点均明显低于SCI组(P<0.05)。SCI组和VPA组脊髓组织的MDA含量明显高于C组,而GSH-Px活性明显低于C组(P<0.05),VPA组和SCI组相比较,MDA含量在各时间点均明显下降,GSH-Px活性均明显升高(P<0.05)。[结论]VPA通过减轻SCI所诱导的氧化应激,从而对SCI发挥保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后运动功能的影响

目的:研究胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复的影响。方法:采用改良Nystr(?)m法后路压迫大鼠胸段脊髓造成损伤模型,经蛛网膜下腔置管局部连续给予NGF （10μg/d）或GDNF（10μg/d）1周,对照组给予生理盐水。伤后4周3组分别观测:①伤段脊髓残存组织面积;②采用斜板试验和运动功能评分观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:大鼠脊髓损伤后4～14d,GDNF治疗组后肢运动功能评分明显高于NGF组和生理盐水对照组（P<0.05）。伤后28d GDNF组伤段残存脊髓组织面积大于对照组和NGF组（P<0.01）。结论:外源性GDNF能减少脊髓损伤后伤区的坏死、萎缩并促进大鼠后肢运动功能的早期恢复。     

大鼠钳夹式急性脊髓损伤模型的制备与评价

[目的]建立并评估大鼠钳夹式脊髓损伤模型,为研究急性脊髓损伤的机制及后续治疗提供基础。[方法]40只成年S-D大鼠,随机分为脊髓损伤组和假手术组,脊髓损伤组行T10水平的椎板切除术,并用一动脉瘤夹瞬间释放,造成脊髓的急性挫伤,假手术组大鼠则仅行T10水平的椎板切除,术后进行行为学评价,血清学检测及病理学检查。[结果]脊髓损伤组大鼠术后运动功能评分(BBB评分)低于假手术组大鼠,术后4 h血清TNF-α和IL-6的含量高于假手术组,且两组差异具有统计学意义,病理学检查脊髓损伤组有脊髓实质结构破坏、空洞及瘢痕形成,假手术组未见明显异常。[结论]本研究建立的大鼠急性脊髓损伤模型,能够反映脊髓损伤的病理生理过程,并具有较好的重复性及稳定性,可用于脊髓损伤的研究。     

脊髓损伤对大鼠睾丸生精细胞iNOS、Bcl-2基因表达的影响

目的 :探讨大鼠脊髓损伤后生精细胞减少的影响因素。　方法 :6 0只SD大鼠随机分为脊髓损伤手术组(n =4 0 )和假手术组 (n =2 0 ) ,应用免疫组化S P法检测脊髓损伤大鼠术后第 2周、第 4周睾丸生精细胞iNOS、Bcl 2表达情况。　结果 :术后第 2周 ,手术组大鼠睾丸生精细胞中iNOS表达与假手术组比较显著增强 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2表达与假手术组比较差异无显著性。术后第 4周 ,手术组大鼠与假手术组比较 ,睾丸生精细胞中iN OS表达显著增强 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2表达显著性减少 (P <0 .0 5 )。　结论 :脊髓损伤后iNOS表达的增强与Bcl 2表达的减少是造成生精细胞显著减少的原因之一     

脊髓损伤后大鼠骨细胞形态学特点

目的：探讨脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)后大鼠骨细胞形态学变化特点及在SCI后骨代谢改变中的意义。方法：20只3个月龄SD大鼠均分为SCI组与对照组。SCI组于T10椎体处完全横断脊髓；对照组仅行椎板切除术，6周后处死动物取材。透射电镜观察股骨近段超微结构。原位凋亡染色法计数股骨近段骨细胞凋亡指数。结果：SCI组骨细胞有4种改变：(1)细胞器减少，骨陷窝增大，絮状物质增多、凝聚以及骨陷窝壁嗜锇板层形成等骨细胞性溶骨表现；(2)退变相骨细胞表现为胞质和细胞器出现严重囊性改变如线粒体空泡化，细胞壁不完整，细胞器不清晰；(3)出现核固缩，细胞处于崩解状态为坏死的形态学改变；(4)异染色质凝集、边聚，细胞出芽起泡等典型凋亡样改变。SCI组小梁骨中骨细胞凋亡指数显著高于对照组(P＜0．01)。结论：骨细胞的溶骨、退变、坏死和凋亡样改变是SCI后骨细胞的形态学特征，也可能是SCI后骨代谢偶联失调的细胞学基础。     

白细胞介素-10对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 观察白细胞介素-10(IL-10)对大鼠脊髓损伤(SCI)后脊髓细胞凋亡的影响,探讨IL-10对脊髓损伤的保护作用。方法 将SD大鼠随机分为3组:单纯SCI组(A组)、IL-10治疗组(B组)及假损伤组(Sham组)。除Sham组不致伤脊髓外,A、B两组应用改良的Allen打击法制作大鼠急性 SCI模型,B组大鼠于 SCI后 30 min腹腔注射 10 μg IL-10,再分别于伤后 12、24、48 h、4、8、16和 24 d应用苏木素-伊红(HE)染色、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素缺口末端标记技术(TUNEL检测法)及开放野行为评分(BBB评分)观察IL-10治疗后脊髓细胞凋亡的变化及神经功能的恢复情况。结果 假损伤组未见凋亡细胞。A组大鼠伤后 12 h即可见零星的凋亡细胞,至 24 h渐增多,伤后 48 h脊髓组织凋亡细胞率达峰值。B组伤后 24、48 h及4d细胞凋亡率比单纯SCI组明显减少,差异具有显著性(P<0.01或P<0.05)。B组脊髓功能恢复亦比A组有明显提高(P<0.05)。结论 SCI后早期应用IL-10可抑制大鼠脊髓细胞凋亡,从而对脊髓损伤起到保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠急性脊髓损伤后神经功能恢复的作用及其机制

目的:观察银杏叶提取物(EGb)对大鼠实验性脊髓损伤后组织结构及运动功能恢复的作用,探讨其对急性脊髓损伤的作用机制。方法:120只SD雄性大鼠,随机分为假手术组(A组)、损伤对照组(B组)、甲基强的松龙(MP)治疗组(C组)和EGb治疗组(D组),每组30只。B、C、D组用Allen′s法以50g·cm致伤大鼠T9脊髓制作损伤模型,B组为单纯脊髓损伤,不给药;C组为脊髓损伤后30min内,由腹腔注入MP30mg/kg;D组为术后至处死前每天腹腔给予EGb17.5mg/kg;A组只打开T9椎板,不打击脊髓,不给药。术后24h、3d、5d、7d、14d对大鼠进行脊髓运动功能(BBB)评分。于术后24h、3d、5d、7d、14d处死动物(n=6),取T9节段脊髓,切片苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓大体组织结构变化,用免疫组织化学方法检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)在脊髓前角运动神经元中的表达变化情况。结果:各时间点B、C、D组大鼠脊髓运动功能(BBB)评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7d、14d时C、D组评分显著高于B组(P<0.05),各时间点C组与D组评分比较无统计学意义(P>0.05)。HE染色C组和D组大鼠脊髓损伤区较B组坏死程度轻、形成囊腔少,A组正常;1周后D组较C组片状出血灶少,神经细胞肿胀不明显。各时间点B、C、D组大鼠损伤脊髓前角运动神经元中Bcl-2阳性细胞数均显著高于A组(P<0.01),C、D组显著高于B组(P<0.01),7d、14d时D组显著高于C组(P<0.05);各时间点B、C、D组大鼠损伤脊髓前角运动神经元中Bax阳性细胞数均显著高于A组(P<0.01),C、D组显著低于B组(P<0.01),7d、14d时D组显著低于C组(P<0.01)。结论:EGb可能通过抑制Bax表达、提高Bcl-2表达,抑制脊髓损伤后神经元凋亡,在运动功能恢复、损伤脊髓组织保护上发挥其有益作用,1周后EGb仍能抑制脊髓损害后的继发性损伤。     

促红细胞生成素在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的:观察促红细胞生成素(EPO)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)中的表达和重组人促红细胞生成素(rhuEPO)预处理对再灌注损伤脊髓神经细胞的作用。方法:将W ister大鼠分为正常组、假手术组、rhuEPO处理组和生理盐水对照组;rhuEPO处理组和生理盐水对照组于术前3h腹腔注射rhuEPO和生理盐水,制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。以免疫组化和W estern blot法检测脊髓组织中EPO的表达变化;以原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法(TUNEL法)检测细胞的凋亡情况。结果:EPO在无损伤脊髓中即有少量的表达,SCII后8h表达显著上调,于12、24h(12h与24h组比较差异无显著性意义,P>0.05)达高峰,伤后3d表达逐渐下调,5d仍保持较高水平。rhuEPO处理组SCII后8h、12h及24h时神经细胞凋亡水平明显低于生理盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在脊髓缺血再灌注损伤中EPO呈现时序性表达变化,可能是机体内源性神经保护的机制之一;EPO预处理能明显抑制SCII后神经细胞的凋亡。     

骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠促肾上腺皮质激素和皮质酮的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤(SCI)大鼠促肾上腺皮质激素和皮质酮的影响,探讨BMSCs移植治疗SCI的潜在抗慢性应激机制。方法:成年雄性SD大鼠48只,随机分为对照组、损伤组和治疗组,每组16只,每组动物再根据取材时间点(造模后21d、35d)平均分为2个亚组。损伤组和治疗组采用改良Allen法建立大鼠T10 SCI模型;对照组仅显露硬膜囊,不损伤脊髓。造模后7d,对照组及治疗组于L4/5间隙蛛网膜下腔注射100μl含1.0×106个BMSCs的Hank′s缓冲液混悬液,损伤组注射同体积Hank′s缓冲液。术前、造模后7d、21d、35d以BBB评分评估大鼠后肢运动功能,同时记录动物体重。根据分组分别于造模后21d、35d处死动物,取左心室血,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和血清皮质酮(CORT)含量。结果:造模前三组大鼠、造模后对照组各时间点BBB评分均为21分,造模后7d损伤组BBB评分与治疗组比较无显著性差异,造模后21d和35d治疗组BBB评分均高于损伤组(P<0.05),且两组均低于对照组(P<0.05)。造模前和造模后7d三组大鼠体重无显著性差异,造模后21d和35d,对照组大鼠体重大于损伤组和治疗组(P<0.05),治疗组与损伤组比较无显著性差异(P>0.05)。造模后21d,损伤组血浆ACTH含量高于对照组,差异有显著性(P<0.05);治疗组与对照组无显著性差异(P>0.05)。损伤组与治疗组血清皮质酮均低于对照组,但无显著性差异(P>0.05)。造模后35d,损伤组和治疗组血浆ACTH含量均比21d时下降,治疗组下降有显著性意义(P<0.05),且治疗组明显低于损伤组(P<0.05);损伤组和治疗组血清皮质酮含量均比21d时升高,损伤组升高有显著性意义(P<0.05),且明显高于对照组(P<0.05)。结论:BMSCs移植可改变SCI大鼠促肾上腺皮质激素和皮质酮的分泌,从而缓解其慢性应激状态。     

Acute molecular perturbation of inducible nitric oxide synthase with an antisense approach enhances neuronal preservation and functional recovery after contusive spinal cord injury

Abstract Inducible nitric oxide synthase (iNOS) is a key mediator of inflammation and oxidative stress produced during pathological conditions, including neurodegenerative diseases and central nervous system (CNS) injury. iNOS is responsible for the formation of high levels of nitric oxide (NO). The production of highly reactive and cytotoxic NO species, such as peroxynitrite, plays an important role in secondary tissue damage. We have previously demonstrated that acute administration of iNOS antisense oligonucleotides (ASOs) 3?h after moderate contusive spinal cord injury (SCI) potently inhibits iNOS-mediated increases in NO levels, leading to reduced blood-spinal cord barrier permeability, decreased neutrophil accumulation, and less neuronal cell death. In the current study we investigated if iNOS ASOs could also provide long-term (10-week) histological and behavioral improvements after moderate thoracic T8 contusive SCI. Adult rats were randomly assigned to three groups (n=10/group): SCI alone, SCI and mixed base control oligonucleotides (MBOs), or SCI and iNOS ASOs (200?nM). Oligonucleotides were administered by spinal superfusion 3?h after injury. Behavioral analysis (Basso-Beattie-Bresnahan [BBB] score and subscore) was employed weekly for 10 weeks post-SCI. Although animals treated with iNOS ASOs demonstrated no significant differences in BBB scores compared to controls, subscore analysis revealed a significant improvement in foot positioning, trunk stability, and tail clearance. Histologically, while no gross improvement in preserved white and gray matter was observed, greater numbers of surviving neurons were present adjacent to the lesion site in iNOS ASO-treated animals than controls. These results support the effectiveness of targeting iNOS acutely as a therapeutic approach after SCI.     

大鼠脊髓损伤中的细胞凋亡及甲基强的松龙的干预作用

目的：探讨脊髓损伤（SCI）继发损伤机制,研究损伤脊髓细胞的凋亡及其意义,观察甲基强的松龙（MP）对细胞凋亡的影响。方法：使用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,实验分3组,假损伤（脊髓未受打击）,损伤组及MP治疗组,采用HE,荧光Hoechst 33342,TUNEL(末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素缺口末端标记技术）等技术观察SCI后4h,8h,3d,7d,14d,21d及28d时损伤中心及邻近节段脊髓细胞的凋亡,治疗组损伤后30min给予大剂量MP,比较MP治疗组与损伤组脊髓细胞凋亡的变化,同时平行观察大鼠神经学和组织学恢复情况及两组神经丝蛋白（NF）含量的变化。结果：假损伤组各检测方法未见脊髓细胞凋亡,损伤组大鼠急性SCI后1d开始出现脊髓细胞凋亡,3d达高峰,自损伤中心向头尾端递减分布,持续21d,MP治疗组在伤后3d及7d凋亡脊髓细胞较损伤组显著减少,神经学恢复及组织学评分较损伤组有显著性提高,结论：凋亡是SCI后脊髓神经元死亡的一种重要方式,在继发性损伤中起极为重要的作用。MP的治疗作用可能与其干预SCI后细胞凋亡有关。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响及其机理

目的研究甲基强的松龙(MP)对大鼠横断性脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响及其作用机理.方法60只成年Wistar大鼠随机分成正常对照组、脊髓损伤组和MP治疗组,每组20只,MP治疗组在横断T10脊髓组织后30min经尾静脉给予MP治疗,损伤组和对照组未予任何治疗.MP治疗组和脊髓损伤组大鼠于脊髓损伤后8h、24h、3d和1周取材,采用透射电镜、TUNEL染色观察细胞凋亡情况,采用免疫组织化学染色观察Fas、半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8和caspase-3在SCI前后的变化情况,采用改良Tarlov评分方法观察大鼠后肢运动功能.结果SCI后24h大鼠后肢运动功能逐渐恢复,MP治疗组大鼠的后肢运动功能恢复优于损伤组,7d后尤其明显.TUNEL染色和电镜检查证实SCI后8h即有凋亡细胞出现,其中既有神经元也有胶质细胞3d凋亡细胞数达到高峰;7d仍有凋亡细胞存在,但已明显减少;各时间点治疗组凋亡细胞数量明显少于损伤组(P＜0.05).治疗组和损伤组在SCI后8h可以检测到少量的Fas和caspase-8阳性神经元及胶质细胞,Fas和caspase-8的表达在SCI后3d达到高峰,7d表达下降,各时间点治疗组的Fas和caspase-8灰度值明显大于损伤组,二者有显著性差异(P＜0.05).治疗组和损伤组caspase-3的表达在SCI后8h均逐渐增加(与对照组相比),7d达到高峰,治疗组灰度值大于损伤组,但二者无显著性差异.结论MP能抑制大鼠脊髓横断性脊髓损伤后的神经细胞凋亡,但不能推迟细胞凋亡出现的高峰时间;MP抑制细胞凋亡的途径可能通过非特异性抑制Fas和caspase-8的表达来实现.     

辛伐他汀促进脊髓损伤后神经功能修复的实验研究

目的:探讨脊髓损伤后急性期应用辛伐他汀对大鼠脊髓神经功能修复的影响。方法:成年雌性SD大鼠32只,假手术组(A组)8只,只做椎板切除,不损伤脊髓,不给药,重物坠落法制作脊髓损伤模型24只,损伤大鼠随机分为三组:羧甲基纤维素钠溶液组(B组)、5mg/kg辛伐他汀治疗组(C组)和10mg/kg辛伐他汀治疗组(D组)(n=8)。术后1d开始灌胃给予辛伐他汀每天一次,连续治疗5周。术后1d、3d以及1～8周,进行BBB评分、斜板试验评价大鼠脊髓神经功能,在第8周时电生理检测大鼠运动及感觉功能的恢复情况,随后处死取材,病理学检查(Luxol fast blue染色)观察残余髓鞘情况。结果:术后2周时,BBB评分D组高于B组(P<0.05);建模3周～8周,BBB评分D组及C组均高于B组(P<0.05),且D组最高(P<0.05)。建模3周时,斜板试验D组及C组均大于B组(P<0.05),且4周～8周,D组角度均大于C组(P<0.05)。感觉诱发电位检查发现,D组,C组的潜伏期小于B组(P<0.05),且D组波幅高于B组(P<0.05)。病理学检查,D组,C组比B组有更多的髓鞘残余(P<0.05)。结论:辛伐他汀急性期治疗脊髓损伤可以促进大鼠损伤脊髓神经功能修复。     

大鼠脊髓损伤后Wnt信号分子的表达变化

目的:探讨大鼠脊髓损伤后不同时期Wnt信号分子Wnt-1、β-连锁蛋白(β-catenin)及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在脊髓损伤局部的表达情况.方法:50只成年雌性SD大鼠随机均分为对照组和实验组,麻醉下手术显露T9～T11椎板,切除T10全椎板,实验组大鼠用NYU打击器以10g×5cm的打击能量致伤T10脊髓,对照组只行全椎板切除,不致伤脊髓.分别于术后1d、3d、5d、7d、14d每组各取5只大鼠,取以损伤区为中心共15mm范围内(对照组取相应部位)脊髓组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR的方法检测脊髓组织中Wnt-1、β-catenin及GSK-3β的mRNA表达量.结果:脊髓损伤后1d和3d时Wnt-1和β-catenin出现高表达,5d后其表达逐渐减弱,14d左右其表达基本恢复到正常水平,而在脊髓损伤后1d和3d时GSK-3β呈低表达,5d后其表达逐渐增强,各时间点之间差异有显著性(P<0.05).对照组中Wnt-1和β-catenin及GSK-3β均呈低表达,各时间点表达无显著差异(P<0.05).结论:大鼠脊髓损伤后损伤局部脊髓组织中Wnt-1,β-catenin及GSK-3β的表达发生变化,提示Wnt信号在脊髓损伤后的早期被激活,其可能与脊髓损伤后的修复再生有关.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后氧化应激的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后氧化应激的影响。方法取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代。参照Taoka方法制作30只大鼠脊髓压迫损伤模型,随机分为3组,损伤组（SCI）、假移植组（SCI＋生理盐水）、移植组（SCI＋BMSCs）。脊髓损伤30 min时,假移植组和移植组于损伤周围相应注射生理盐水和BMSCs。在损伤后第3天、7天、14天和28天,进行BBB（Basso-Beattie-Bresnahan,BBB）行为学评价。应用MTT方法检测血清中超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平。结果脊髓损伤后,BMSCs移植第14天即可观察到大鼠后肢运动功能明显改善,第28天BBB评分有明显提高。与损伤组和假移植组大鼠相比,第7天、14天和28天移植组血中MDA水平降低（P〈0.05）;血中SOD水平较高（P〈0.05）。结论 BMSCs移植对SCI神经功能恢复有促进作用,其机制可能与其抑制氧化应激有关。     

苦参素对大鼠急性脊髓损伤后热休克蛋白47表达的影响

目的探讨苦参素治疗大鼠急性脊髓损伤(SCI)的机制。方法用30只Wistar大鼠制作钳夹型SCI模型,随机分成正常组、假手术组、SCI组、对照组和治疗组,在SCI后3d及每周评价BBB评分,并在第8周用免疫组化方法分析脊髓中热休克蛋白47(HSP47)的表达情况。结果正常组和假手术组Wistar大鼠脊髓组织低表达胶质细胞酸性蛋白(GFAP)和HSP47,高表达神经丝蛋白(NF),在SCI后GFAP和HSP47表达明显提高(P<0.05),NF表达明显降低(P<0.05)。苦参素治疗后,GFAP和HSP47表达降低(P<0.05),NF表达升高(P<0.05)。结论苦参素对Wistar大鼠SCI具有治疗作用,很可能通过抑制HSP47的表达发挥治疗作用。