IGF-1在成骨样细胞增殖中的作用及与钾离子通道的关系

目的 :研究胰岛素样生长因子 - 1(IGF - 1)促大鼠成骨样肉瘤细胞 (UMR10 6 )增殖作用及与钾离子通道活动的关系。方法 :采用磺基罗丹明 (SRB)染色法观察细胞增殖并用膜片钳技术记录细胞膜钾离子通道电流的变化。同时用3 H -TdR掺入测定DNA合成的改变。结果 :IGF - 1可以明显地促进UMR10 6细胞的增殖 ,且使3 H -TdR掺入率增加 93.5 7%。在含有生长因子IGF - 1(10 -8M)的培养液中培养 12h后 ,钾通道电流比对照有明显增加 ,而且用钾通道阻断剂后 ,3 H -TdR掺入率下降。结论 :IGF - 1可促进大鼠成骨样肉瘤的DNA合成和细胞增殖。且细胞膜钾通道的活动与此促增殖活动密切相关     

UMR106细胞膜钾离子通道的记录及鉴定方法研究

目的：建立一种研究大鼠成骨肉瘤细胞（UMR106）钾离子通道的方法。方法：采用膜片钳技术，在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。并用TTX、CdCl^2分别阻断电压依赖性钠通道和钙通道。结果：首次在URM106细胞上记录到一种电导为8.79ps电压依赖性钾通道的通道电流。并观察了开放时间、关闭时间以及开放概率随电压的变化。结论：通过使用钾通道阻断剂证实本方法记录的是一种电压依赖性内向整流型钾通道。     

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(Ⅰ)

目的：探索补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的作用。方法：用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞UMR106共同体外培养，以MTT法检测细胞的增殖。结果：在所筛选的7种补肾中药中，仙茅，地骨皮，牛膝，山茱萸对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论：补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。     

钾离子通道在EGF引起细胞增殖中的作用

目的 :研究表皮生长因子 (EGF)对大鼠成骨肉瘤细胞钾离子通道活动的影响 ,探讨这种钾通道活动与细胞增殖的关系。方法 :采用膜片钳技术 ,在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。在含有EGF(10ng/ml)的无血清培养液中培养 2 4h后记录钾通道 ,同时用3 H -TdR掺入法及流式细胞仪测定DNA合成的变化并进行细胞周期分析。结果 :含有EGF的培养液培养细胞的钾通道电流较对照实验有明显增加 ,通道开放概率也增加。同时 ,EGF加入使细胞的3 H -TdR掺入率增加 6 4 91% ;进入S期细胞增加 35 %。在EGF作用的不同时期加入钾通道阻断剂 ,可以不同程度的抑制DNA合成 ,并且阻断剂加入时间越早 ,对DNA合成的抑制越强。结论 :钾通道在细胞进入S期或在S期的活动中起重要作用。阻断钾通道可以较明显地抑制DNA合成 ,揭示出钾通道的活动与DNA合成和细胞增殖有密切关系。     

补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的影响(Ⅱ)

目的：探索补肾中药对成骨样细胞UMR106增殖的作用。方法：用各种补肾中药的醇提取物和成骨样细胞UMR106共同体外培养，以MTT法检测细胞的增殖。结果：在所筛选的15种补肾中药中，补骨脂、蛇床子、锁阳对成骨样细胞的增殖具有显著的促进作用。结论：补肾中药可通过促进成骨细胞的增殖来发挥健骨及抗骨质疏松的作用。     

内分泌和月经异常

%0844雌激素及XW630对类成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响/张志媛…//生殖医学杂志一1卯5,4(3)一146一149 本文作者鉴于雌激素可有效预防妇女绝经后骨质疏松,关于雌激素对骨形成过程的影响尚存争议。故采用成骨细胞样骨肉瘤细胞株UMR一106细胞在细胞水平探讨17月一雌二醇(EZ)对骨代谢的调节作用,同时观察新型抗骨质疏松药物XW630对成骨细胞的影响。E,10刁一10一7mol/L显著刺激U入IR一160细胞3H一TdR掺入及细胞计数,并使细胞浆及分笋的碱性磷酸酶活性显著提高。E21o一’“mol/L对UMR一106细胞增殖及活性无影响。与EZ比较,XW630…     

牛膝中胡萝卜甙对成骨样细胞的促进增殖作用及其含量测定

目的：考察牛膝中胡萝卜甙对成骨样细胞UMR106的促进增殖作用及其含量测定方法。方法：将从牛膝中提取出来的胡萝卜甙和成骨样细胞UMR106共同体外培养，用MTT法检测细胞增殖；用高效液相色谱法对胡萝卜甙进行含量测定，色谱条件为：ODS固定相、水-乙晴（70：30）作流动相，检测波长203nm、柱温30℃、非那西汀为内标。结果：牛膝中的胡萝卜甙对成骨样细胞UMR106有较强的促进增殖的活性，3次实验的最高增殖率平均为45.8%，HPLC方法回收率为94.2%，RSD为3%，在4-40μm/mL范围内线性关系良好。结论：确定了胡萝卜甙为牛膝中对成骨样细胞有促进增殖作用的活性成分之一，含量测定方法准确、快速，重复性好。     

细胞外液酸碱度对主动脉平滑肌细胞电生理的影响

目的 :探讨细胞外液酸碱度 ( p H0 )的改变对主动脉平滑肌细胞电生理特性的影响。方法 :通过改变培养的乳鼠主动脉平滑肌细胞外液的酸碱度 ,应用全细胞膜片钳技术记录细胞膜的变化和钾离子通道活动的情况。结果 :p H0 降低时引起细胞膜超极化 ,外向钾电流增大 ;反之 ,p H0升高时引起细胞膜去极化 ,外向钾电流减小。这种变化可以被 TEA阻断 ,而对 4- AP不敏感。结论 :p H0 改变引起主动脉平滑肌细胞膜电位及外向电流幅值变化 ,其机制可能与钙激活性钾通道的开放几率有关     

ET—1对系膜细胞增殖和前胶原mRNA表达的影响

目的利用已构建的体外肾小球系膜细胞（MC）三维立体培养系统，研究内皮素（ET－1）是否具有刺激MC增殖和表达Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA作用。方法3H－TdR掺入法和斑点杂交方法。结果在0．5％小牛血清存在下，10－7mol／LET－1作用12h后，MC对3H－TdR摄入增加（＜0．01），呈剂量依赖方式，＜10－10mol／LET－1对MC无促增殖作用，ET－1≥10-10mol／L时，随着ET－1浓度增加。MC对3H－TdR摄人也增加；在1％小牛血清存在下，10-7mol／LET－1明显促进MC表达Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA，而10-12mol／LET－1无此作用。结论ET－1可通过刺激MC增殖和产生细胞外基质促进慢性肾小球疾病病程进展。     

中药补肾方剂对大鼠骨肉瘤细胞增殖及相关酶活性的影响

目的:探讨中药补肾方剂对成骨样细胞UMR106增殖及相关蛋白激酶活性的影响. 方法:用不同剂量的中药补肾方剂与成骨样细胞UMR106共同培养,以MTT法检测细胞的增殖,用32P-ATP参入反应底物中的摩尔数表示蛋白激酶的活性. 结果:该中药补肾方剂在1×10-1～1×10-5 g/L浓度范围均能增加成骨样细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01),1×10-4 g/L浓度处理细胞可使酪氨酸蛋白激酶(TPK)和蛋白激酶C(PKC)活性分别增高44.8%和95.1%. 结论:中药补肾方剂可活跃和增进细胞的信号传导,这可能是其促细胞增殖的一种机制.     

AngⅡ受体拮抗剂对SHR肾小球系膜细胞增殖作用

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1受体）拮抗剂Losartan（芦沙坦）对自发性高血压大鼠（SHR）肾小球系膜细胞增殖的作用。方法采用细胞培养和3H-胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）掺入技术。结果1．SHR系膜细胞血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组的3H－TdR掺入率高于对照组;2．SHR系膜细胞AngⅡ＋Losar－tan组的3H－TdR掺入率低于AngⅡ组;3．AngⅡ对SHR肾小球系膜细胞增殖的刺激作用和Losartan的抑制作用均呈剂量依赖关系;4．AngⅡ对正常血压大鼠系膜细胞的3H－TdR无影响。结论Losartan能逆转AugⅡ对SHR肾小球系膜细胞的增殖作用,从细胞水平体现其肾脏保护作用。     

鹿茸生长素对家兔关节软骨细胞代谢的影响

目的 研究鹿茸生长素对关节软骨细胞增殖的影响。方法 采用家兔关节软骨细胞体外培养和加入同位素3H—TdR标记方法，观察其对3H—TdR掺入细胞DNA合成的影响。结果 加入鹿茸生长素组的3H—TdR的掺入值与对照组有明显差异，细胞增殖作用明显。结论 鹿茸生长素能明显刺激关节软骨细胞的增殖。     

IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ受体反义基因对SMMC-7721肝癌细胞株增殖能力的影响

目的；研究胰岛素样生长因子Ⅰ受体、Ⅱ受体（IGF－ⅠR，IGF－ⅡR）反义基因对SMMC－7721细胞体外增殖能力的影响。方法：应用反义技术，在已将IGF－ⅠR反义基因转染入SMMC－7721肝癌细胞株的基础上（获得ⅠR－AS细胞），继续利用IGF－ⅡR反义基因真核表达系统，通过DOTAP^TM脂质体介导的转技术，将IGF－ⅡR反义基因导入该细胞，经G418及潮霉素双重筛选获得稳定表达IGF－Ⅰ,IGF－ⅡR反义基因的SMMC－7721细胞（Ⅰ、ⅡR－AS细胞）。结果：光镜，电镜下反义转染细胞形态学上肿瘤性有一定减弱；在软琼脂培养基中生长能力低下（P＜0．01），反义G418抗性转染细胞克隆形成能力低下（P＜0．05）；在细胞生长曲线上与对照组相比有轻度下降趋势。结论：IGF－ⅠR，IGF－ⅡR反义基因对SMMC－7721肝癌细胞株的恶性增殖有明显抑制作用。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对体外培养人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响

目的：观察胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）对体外培养的人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响,以探讨IGF－Ⅰ在人牙周膜细胞向成骨样细胞分化中的作用。方法：体外培养牙周膜细胞,放免法测定人牙周膜细胞骨钙素分泌量。实验分为空白对照组、IGF－Ⅰ3．125ng/ml组、IGF－Ⅰ6．250ng/ml组,IGF－Ⅰ2．500ng/ml组、IGF－Ⅰ25．000ng/ml组。结果：在含β－甘油磷酸钠和L－抗坏血酸的的下,人牙周膜细胞体外培养可产生并分泌骨钙素;随着培养时间的延长,骨钙素分泌增加,在第3周时分泌量达最大。加入生长因子IGF－Ⅰ,骨钙素分泌量呈剂量依赖性增加,结论：IGF－Ⅰ可增加人牙周膜细胞骨钙素的分泌。     

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子—2（IGF—2）

目的；研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子－2（rhIGF-2)。方法：将14kD hIGF-2前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒（BmNPV)转移载体pBakPAK8中，经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后，通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF-2。以BmNPV/IGF-2感染5龄家蚕幼虫，分别在蚕染后24，48，72，96，108，120h提取家蚕血淋巴液，以ELISA法测定不同时家蚕血中IGF－2浓度，采用Westernblot分析鉴定IGF－2免疫学活性，MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果：ELISA测定显示，BmNPV/IGF-2感染家蚕幼虫96h后IGF－2表达率最高，每毫升血淋巴中约含IGF－2 14μg，Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成7.0kD成熟hIGF-2，并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应，其促细胞生长能力明显优于来源于E.coli的IGF－2标准品。结论；本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rhIGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达。     

胰岛素样生长因子2的基因组印迹及与肿瘤关系的研究进展

胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor，IGF）是一种胚胎性生长因子，包括IGF1和IGF2，在生物体的胚胎发育和细胞生长等诸多生理过程中具有促分裂作用。IGF的结构和功能与胰岛素类似，     

生长因子（IGF—Ⅰ、TGF—β1和BMP—2）对兔关节软骨细胞体外增殖的作用

目的 观察IGF－Ⅰ、TGF-β1和BMP－2对培养兔关节软骨细胞增殖的作用。方法 采用体外培养2兔关节软骨细胞的方法，利用^1H-TdR掺入反映软骨细胞增殖。结果 IGF－Ⅰ和TGF-β1均可促进软骨细胞^3H-TdR掺入增加，并有一定的协同作用。面BMP－2对软骨细胞^3H-TdR掺入无显著影响，但与TGF-β1和IGF－I合用时却有抑制^3H-TdR掺入的作用。结论 生长因子之间的不同组合可以协同或拮抗方式影响软骨细胞的增殖，提示生长因子在关节软骨退变和防治上可能有重要的意义。     

槲皮素对人白血病HL—60细胞DNA和细胞周期的影响

以人白血病HL－60细胞为实验对象，利用3H-脱氧胸苷（3H－TdR）掺入实验，JAM实验法及流式细胞仪观察槲皮素对HL－60细胞DNA和细胞周期的影响。结果显示，槲皮素15μmol／L～120μmol／L可显著抑制HL－60细胞的DNA合成及诱发DNA链断裂；槲皮素主要是阻滞G1期向S期移行，使G1期细胞蓄积，S期细胞减少。槲皮素的作用呈明显的剂量依赖关系。     

几种生长因子在人表皮细胞无血清培养中的作用

目的为生长因子在烧伤创伤面的应用提供理论依据。方法采用无血清培养系统,以3H－TdR掺入法测定表皮生长因子（EGF）、牛垂体提取物（BPE）和乙醇胺（Etha）对人表皮细胞DNA合成的影响。结果EGF和BPE在无血清培养基中对培养表皮细胞DNA合成有明显的促进作用（P＜0．01）;Etha对培养表皮细胞DNA合成也有促进作用（P＜0．05）;EGF和Etha在本培养体系中具有协同作用（P＜0．05）。结论生长因子在烧伤创面的治疗中具有应用价值。     

佛波酯对促进人绒毛膜癌AJR细胞侵入机制的研究

目的：探讨佛波酯（PMA）是否通过改变细胞因子的生成而影响滋养细胞的侵袭性。方法：用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测人绒毛膜癌JAR细胞与侵袭力调节有关的多种细胞因子基因表达的变化。结果：JAR细胞表达肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）、转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素1β（IL－1β）和血管内皮生长因子（VEGF），且VEGF的表达以VEGF121和VEGF165为主，而不表达IGF－I。100nmol/L PMA处理细胞24h可显著上调IL－1β、HGF、IGFⅡ mRNA的表达，同时抑制TGF－β2、TGF－β3 mRNA的表达，而对TGF－β1、VEGF mRNA的表达未见有明显变化。结论：HGF、IL－1β、IGF－Ⅱ对滋养细胞的侵入起促进作用，而TGF－β2、TGF－β3具有抑制效应。说明丝裂原PMA可能通过调节这几种细胞因子的自分泌机制，从而增强JAR细胞的侵袭能力。