腺苷及缺血后处理对兔缺血再灌注心肌的保护作用

目的 探讨腺苷对缺血再灌注后心肌的保护作用,及其与缺血后处理的关系.方法 40只健康大耳白兔,随机分为对照组、拮抗剂组、缺血后处理组、腺苷治疗组4组,每组10只.制备在体兔心肌缺血再灌注模型,检测心肌收缩功能指标,测量心肌梗死范围,观察缺血再灌注即刻应用腺苷及缺血后处理对兔缺血再灌注后心肌的影响.结果 腺苷治疗组和缺血后处理组与对照组和拮抗剂组相比,再灌注之后左室内压峰值、左室内压最大上升速率和左室内压最大下降速率的恢复率差异有统计学意义(P＜0.05);梗死范围均明显低于对照组和腺苷受体拮抗剂组(P<0.01);心肌酶学LDH和CK含量较对照组和腺苷受体拮抗剂组明显降低(P<0.01).结论 腺苷/腺苷受体途径是缺血后处理的重要途径之一,能够减轻缺血再灌注损伤,保护心肌.     

TOLL样受体4对小鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用

目的探讨TOLL样受体4(TLR4)在脑缺血再灌注中的保护作用。方法C3H/HeJ小鼠16只采用线栓法制作TLR4先天缺损大脑中动脉缺血再灌注模型(C3H/HeJ组),以C3H/HeN小鼠16只作对照(C3H/HeN组),观察缺血6h及再灌注24h时,两组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积及血清TNF-α水平。光镜及电镜观察两者缺血再灌注脑组织损伤情况。结果与C3H/HeN组比较,再灌注24h时,C3H/HeJ组小鼠的神经功能缺损评分明显减小(P<0.05);脑含水量明显降低,脑梗死体积显著缩小(P<0.01);血清中TNF-α浓度明显降低(P<0.05);脑缺血皮质区的神经细胞超微结构改变轻于C3H/HeN组小鼠。结论C3H/HeJ小鼠脑缺血再灌注损伤明显减轻,TLR4介导了脑缺血再灌注损伤。其机制可能与炎性细胞因子减少有关。     

重组人骨形态发生蛋白-7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I组)和rhBMP-7处理组(B组),B组于再灌注开始前30 min给予rhBMP-7 250 μg/ kg尾静脉注射,C组和I组给予等量生理盐水.于血流再灌注后24 h行神经功能缺陷评分后取脑,行脑含水量和梗死体积测定,计算脑梗死体积比,并电镜下观察脑超微结构变化.结果 B组大鼠脑局灶性缺血再灌注24 h后,神经功能缺陷评分明显下降,脑含水量和梗死体积比明显低于I组(P<0.01).神经细胞的坏死程度也明显轻于I组.结论 rhBMP-7缩小梗死体积,减轻脑水肿,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时间窗的影响

目的研究辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血不同灌注时间窗的脑保护作用;探讨药物干预再灌注时间窗的可行性。方法线栓法制作大鼠缺血再灌注损伤模型,实验随机分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、缺血/再灌注组（C组）、缺血/再灌注组加辛伐他汀组（D组）。C组、D组又各分为MCAO术后2h、4h、6h再灌注组。在完成预定操作后进行神经功能评分优于B组,测梗死体积,脑组织病理变化情况。结果D组各时间点神经功能评分优于B组,梗死体积小于B组（P〈0.05或P〈0.01）,脑组织病理变化改善。结论辛伐他汀预处理可改善神经功能评分,缩小梗死体积,改善脑组织病理变化,延长再灌注时间窗。     

血管紧张素Ⅱ及受体与心脏缺血再灌注损伤

本文介绍血管紧张素Ⅱ及受体和受体拮抗剂、转换酶抑制剂在心脏缺血再灌注损伤中的作用.     

缺血后处理对短暂性脑缺血后蛋白质氧化损伤的影响

目的探讨后处理对短暂性脑缺血后脑损伤及氧化应激性蛋白质损伤的影响。方法大鼠MCAO局灶脑缺血再灌注模型,分为假手术组,缺血组及后处理组。缺血后处理方法为缺血结束后恢复脑血流30 s再阻断30 s为1个循环,共3个循环。采用TTC染色计算梗死脑组织的体积。差速离心法分离线粒体。荧光测定法检测线粒体内过氧化氢含量。分光光度计法检测蛋白质氧化产物羰基化合物含量。结果缺血后处理显著降低了局灶脑缺血后脑梗死的体积;线粒体内过氧化氢的含量显著降低;蛋白质氧化产物羰基化合物的含量显著降低。结论缺血后处理能够通过降低氧化应激性蛋白质损伤保护缺血再灌注所致的脑损伤。     

高级糖化终产物受体:心肌缺血性损伤的关键调节因子

美国学者Bucciarelli等对经可溶性诱导剂处理的缺血再灌注损伤大鼠和未处理的纯合型高级糖化终产物受体(RAGE)缺陷缺血再灌注损伤的小鼠心脏行正常氧灌注及缺血再灌注实验。结果发现对具有sRAGE(RAGE受体可诱导溶解部分)的大鼠预处理可减轻缺血性损伤,改善心肌功能。RAGE缺陷小鼠对心脏缺血再灌注损伤产生强烈保护反应。在大、小鼠中,RAGE轴的激活同诱导型一氧化氮合酶表达增多、氧化亚氮、环磷鸟苷和硝基酪氨酸水平增高有关。研究显示RAGE在心脏缺血再灌注损伤中起关键的调节作用,同时也显示RAGE同高级糖化终产物的相互作用影…     

白细胞介素-9在心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型,分析白细胞介素(IL)-9在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法:用结扎小鼠冠状动脉左前降支(LAD)的方法制作IRI模型,并于再灌注前5 min颈静脉注射rIL-9,同时设立对照组。以Evan's blue和TTC双染色法来评价缺血区和梗死面积。应用电化学发光法检测血清中心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平。通过超声心动图和血流动力学检测评价心功能。结果:再灌注后24h,rIL-9干预组和对照组小鼠心肌的梗死面积、血清cTnT水平、心功能均无显著差异。结论:IL-9并不会影响小鼠心肌缺血再灌注损伤的进程。     

腺苷A2a受体/Krüppel样因子5对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响

目的：探讨腺苷A2a受体/Krüppel样因子5(KLF5)对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响。方法：42只250～300 g雄性SD大鼠随机分为4组：假手术组（Sham组,n=6）、缺血再灌注组（I/R组,n=12）、缺血再灌注+腺苷A2a受体特异性激动剂CGS21680组（I/R+CGS组,n=12）、缺血再灌注+腺苷A2a受体拮抗剂ZM241385组（I/R+ZM组,n=12）。采用结扎左冠状动脉前降支再灌注的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。I/R+CGS组于再灌注前5 min静脉注射CGS21680后持续泵注60 min,CGS+ZM组于再灌注前5 min静脉注射ZM241385。于造模前,缺血5 min,再灌注10 min、45 min及120 min时分别记录各组大鼠的心率（HR）、平均动脉压（MAP）以及心率与收缩压乘积（RPP）。再灌注结束后取血液,酶联免疫吸附测定法检测血清心肌钙蛋白I(c TnI)和成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平。再灌注结束后再次结扎左冠状动脉前降支,采用TTC染色法确定心肌梗死面积。处死大鼠,采用Western blot法检测缺血区心肌组...     

卒中的再灌注损伤

思考题1在下列细胞因子中,已证实哪种外周应用能缩小梗死体积AIL-8BIL-1ra(IL-1受体拮抗剂)CIL-12DIL-18E以上均不是2卒中患者血浆IL-6水平何时达高峰?A最初30minB12h左右C7~10dD14~21dEIL-6水平不会增高3业已证实,抗内皮细胞连接(抗ICAM-1)治疗能缩小急性缺血性卒中动物模型的梗死体积A正确B错误4预防白细胞黏附能减轻缺血再灌注神经元损伤A正确B错误5在大样本临床试验中,恩莫单抗(临床抗ICAM-1治疗)的主要不良反应是白细胞减少A正确B错误卒中的再灌注损伤@Wayne M.Clark$From the Oregon Stroke Center,Department of …     

ERαKO小鼠缺血模型中雌激素的作用机制研究

目的通过对ER-α受体缺乏小鼠大脑中动脉梗死模型(MCAO)的研究,进一步了解雌激素的作用机制.方法用生理盐水、25 μg/mL及50μg/mL β-雌二醇分别处理雄性野生型小鼠(WT)和α基因敲除型小鼠(ERαKO),制成MCAO模型后进行行为学评分,缺血2 h后再灌注22 h取脑测定梗死面积.结果WT中雌激素处理后的小鼠梗死面积明显减少(P＜0.05),ERαKO小鼠中雌激素同样有效(P＜0.05).结论雌激素对缺血性脑组织损伤具有保护作用,去除雌激素α受体后并不影响雌激素的脑保护作用.     

缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12的影响

目的探讨心肌缺血再灌注损伤大鼠使用缺血后处理对内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP)78及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12表达的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(心肌缺血再灌注损伤组)、C组(心肌缺血后处理组),每组10只,分别进行假手术、心肌缺血再灌注损伤及心肌缺血后处理操作,分析3组大鼠心肌的缺血面积及梗死面积百分比,对比心肌内质网应激相关蛋白GRP78及caspase-12的表达,并对3组大鼠的神经行为进行评估。结果 A组大鼠心肌组织无缺血及梗死病灶,C组大鼠心肌组织的缺血面积及梗死面积百分比均显著低于B组,差异有统计学意义(P0.05);A组相应部位心肌组织GRP78及caspase-12蛋白表达均显著低于B组及C组,C组caspase-12蛋白表达显著低于B组,而GRP78蛋白表达高于B组,差异均有统计学意义(均P0.05);神经行为学评估结果显示3组各项神经运动功能量化数值之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠心肌缺血再灌注损伤使用缺血后处理能够抑制心肌细胞的凋亡,同时能够增加内质网的应激反应,其与心肌细胞凋亡减少及心肌梗死面积减少相关。     

N-甲基-D-天门冬氨酸受体-1反义寡核苷酸对大鼠脑缺血性损伤的保护作用

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)反义寡核苷酸(ASODN)对局灶性脑缺血再灌注损伤后的影响。方法将90只雄性Wistar大鼠随机分为3组:缺血再灌注组30只:采用Longa改良方法制作大鼠可复流大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在缺血2h后进行再灌注;对照组30只:MCAO模型成功后立即向侧脑室内注入10μl灭菌PBS,在缺血2h后进行再灌注;ASODN组30只:MCAO模型成功后立即向侧脑室注入10μlNMDAR1反义寡核苷酸。以上3组依缺血2h后再灌注时间0、6、24、48、72h分为5个亚组,除再灌注72h时间点10只外,其余每个亚组5只。在相应时间点取脑,行HE染色、NMDAR1免疫组织化学检测及脑梗死体积测定。结果ASODN组神经功能缺损评分(1.4±0.5)显著低于缺血再灌注组(2.4±0.6)和对照组(2.5±0.4),P<0.05;ASODN组缺血周边区NMDAR1阳性细胞数(36±10)显著少于缺血再灌注组(46±20)和对照组(50±16),P<0.05。ASODN组平均脑梗死体积百分比(28±4)%显著低于缺血再灌注组(42±3)%和对照组(43±5)%,P<0.01。结论局灶性脑缺血后侧脑室内注入NMDAR1反义寡核苷酸可缩小梗死体积,具有脑保护作用。     

AMP-活化蛋白激酶对局灶性脑缺血再灌注小鼠皮质胱天蛋白酶-8、-3表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨抑制AMP-活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活性对局灶性脑缺血再灌注小鼠梗死体积、缺血皮质胱天蛋白酶-8、-3表达以及细胞凋亡的影响.方法 72只雄性C57BL/6小鼠,随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组和AMPK抑制剂组.线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型.AMPK抑制剂组在MCAO即刻腹腔注射Compound C(20 mg/kg),假手术组及缺血再灌注组在相同时间点腹腔注射等量生理盐水.应用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测量脑梗死体积,免疫组化染色法检测胱天蛋白酶-8、-3表达水平,TUNEL染色法检测细胞凋亡.结果 假手术组未见梗死灶,无胱天蛋白酶-8、-3以及凋亡阳性细胞.与缺血再灌注组比较,AMPK抑制剂组梗死体积显著缩小[(45.34±7.20)mm3对(22.71±4.93)mm3;t=5.730,P=0.037],大脑皮质胱天蛋白酶-8[(17.58±8.62)个/HP对(6.87±4.32)个/HP;t=3.631,P=0.023]、胱天蛋白酶-3[(16.21±5.46)个/HP对(8.22±4.64)个/HP;t=2.630,P=0.021]和凋亡[(78.44±8.32)个/HP对(55.73±6.71)个/HP;=5.541,P=0.042]阳性细胞数量均显著减少.结论 抑制AMPK活性可缩小局灶性脑缺血再灌注小鼠梗死体积,其机制可能与下调胱天蛋白酶-8、-3表达和减少细胞凋亡有关.     

CXCR3在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及对Th细胞亚群的调节

目的研究趋化因子受体CXCR3在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法建立小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,共计48只小鼠,分为手术处理组及假手术组,分别按照手术后3、6、12、24 h取样(每组6只),利用实时荧光定量PCR、Western Blot以及流式细胞仪检测趋化因子CXCL9-11及其受体CXCR3的表达,利用CXCR3的特异性阻断剂C6阻断CXCR3的作用,通过组织形态,肝酶活性评价肝损伤程度,通过流式细胞仪检测浸润炎症细胞的亚群分布等,阐述CXCR3的作用机制。所有数据均以均数±标准差(x±s)为表示,各组之间比较应用单因素方差分析。结果与假手术组相比较,趋化因子CXCL9-11及其受体CXCR3在缺血再灌注后各时间点表达显著增高(P0.05),阻断CXCR3能够显著保护肝功能及肝脏形态(P0.05)。CXC3R特异性抑制剂C6能够显著降低Th1细胞的浸润(P0.01),同时增强Treg细胞的浸润(P0.01)。结论 CXCR3是一个理想的用于保护肝脏缺血再灌注损伤的治疗靶点,其机制与免疫调节有关。     

血管紧张素Ⅱ及受体与心脏缺血再灌注损伤

本文介绍血管紧张素Ⅱ及受体和受体拮抗剂、转换酶抑制剂在心脏缺血再灌注损伤中的作用。     

不同品系来源的骨髓间充质干细胞对小鼠肾缺血-再灌注损伤作用的对比性研究

目的 探讨不同品系的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对各自小鼠肾缺血-再灌注损伤是否有促修复作用,为临床治疗肾脏疾病提供思路.方法 取健康3 w龄C57BL/6J小鼠和ICR小鼠的骨髓细胞悬液,进行BMSCs体外扩增培养.将8 w龄C57BL/6J小鼠和ICR小鼠各随机分为假手术组、平行对照组和细胞移植组,每组12只小鼠.建立肾缺血-再灌注损伤模型,将BMSCs移植到细胞移植组小鼠中,平行对照组注射生理盐水.2 w后,检测肾功能和肾形态学变化,观察不同品系的BMSCs对各自小鼠肾缺血-再灌注损伤是否有促修复作用.结果 分离培养的BMSCs增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好.BMSCs移植C57BL/6J小鼠后,细胞移植组小鼠整体状态良好,与平行对照组相比肾功能指标明显改善(P＜0.05),组织形态学好转.而BMSCs移植ICR小鼠后,细胞移植组小鼠整体状态差,肾功能指标与平行对照组相比没有差异或者明显高于平行对照组(P＞0.05),肾病理性改变没有得到改观.结论 经尾静脉移植BMSCs后,可提高肾缺血-再灌注损伤后宿主C57BL/6J小鼠的恢复;但不能改善ICR小鼠肾缺血-再灌注造成的损伤,甚至加剧了ICR小鼠肾损伤的程度.     

离子型谷氨酸受体拮抗剂对大鼠脑缺血再灌注后海马齿状回5-溴脱氧尿核苷表达的影响

目的　观察选择性离子型谷氨酸受体 (iGluRs)拮抗剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤后齿状回神经发生的调控作用 ,探讨谷氨酸 离子型谷氨酸受体通路在神经发生中的作用。方法　采用 5 溴脱氧尿核苷 (BrdU)标记分裂细胞 ,比较大鼠全脑缺血再灌注损伤后 7d和 14d时各iGluRs拮抗剂处理组与相应对照组之间海马齿状回神经前体细胞的增殖速度。结果　腹腔注射N 甲基 D 天门冬氨酸 (NMDA)受体阻滞剂 5 甲基二氢二苯丙环庚烯亚胺后显著抑制了大鼠全脑缺血后 7d和 14d时齿状回神经发生水平的升高 ,BrdU免疫阳性细胞数较缺血再灌注 +生理盐水组各时间点明显减少 ;而α 氨基羟甲基恶唑丙酸和 (或 )红藻氨酸受体阻滞剂二硝基喹喔啉对全脑缺血后不同时间点齿状回神经发生的增强基本没有影响。结论　全脑缺血再灌注损伤后NMDA受体通路的激活可能促进了齿状回神经发生。     

小鼠缺血再灌注损伤后海马齿状回Wnt1、Wnt3a的表达变化

目的 探讨Wnt/β-catenin相关因子在缺血再灌注小鼠海马中的表达变化.方法 将80只1月龄健康雄性昆明小鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注1、3、7、14、21、28 d组,通过夹闭小鼠双侧颈总动脉0.5h再通的方法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核甘(BrdU)检测海马齿状回区神经干细胞(NSCs)增殖规律及通过原位杂交法和免疫组织化学染色方法检测Wnt/β-catenin信号通路重要信号分子Wnt1 、Wnt3a的表达变化.结果 BrdU检测显示正常组和假手术组小鼠海马齿状回区可见少量BrdU阳性细胞,缺血再灌注后3 d BrdU阳性细胞开始增高(P＜0.01),缺血再灌注后7d达高峰(P＜0.01),随着灌注时间的延长呈下降趋势,缺血再灌注后28 d,BrdU阳性细胞数降至正常水平(P＞0.05).原位杂交法结果显示正常组、假手术组海马齿状回颗粒细胞下层均无明显Wnt1、Wnt3a阳性表达.缺血再灌注各组均可见Wnt1、Wnt3a阳性细胞,再灌注后1d表达开始增加,14 d达高峰,28 d减少至正常水平.与正常组和假手术组比较,缺血再灌注各组Wnt1、Wnt3a阳性细胞数明显增多(P＜0.05).结论 小鼠脑缺血再灌注损伤可激发内源性NSCs的增殖.当Wnt/β-catenin途径被激活时,Wnt1、Wnt3a在海马齿状回颗粒细胞下层的表达,为进一步研究Wnt信号通路在脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制奠定了基础.