三氧化二砷诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显向镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱发凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小,染色质固综合成斑块状,呈半月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等,AO/EB荧光染色法显示。细胞凋亡率为4.3%-9.1%.As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2umol/L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2/M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,存在治疗肝癌的潜在价值。     

Bax基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

ｂｃｌ 2及其同源类似物是凋亡调节因子中最重要的家族之一。ｂｃｌ 2家族蛋白能通过多种方式调节细胞死亡途径 :(1)与其他ｂｃｌ 2家族成员二聚化形成同源或异源二聚体 ,且可能通过相互作用改变细胞生与死平衡 ;(2 )与非同源性蛋白结合 ;(3)形成离子通道或孔洞[1] 。Ｂａｘ基因是ｂｃｌ 2家族中的一员 ,与ｂｃｌ 2家族其他成员的氨基酸同源性主要表现在高度保守的ＢＨ1和ＢＨ2 结构域。人Ｂａｘ基因位于第 19号染色体 ,ｑ13 .3～ｑ13 .4内[2 ] 。Ｂａｘ过表达能对抗ｂｃｌ 2抑制细胞死亡的活性 ,在促凋亡因素刺激下 ,ｂｃｌ 2 /Ｂａｘ比值…     

斑蝥素诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨斑蝥素（Cantharidin）对人胰腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法观察斑蝥素对人胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用。采用Hoechst33258染色、TUNNEL染色、流式细胞术检测细胞凋亡改变，并以RT—PCR和Westernblot检测凋亡调节基因p53和Bcl-2、Bax的表达。结果 5mol／L斑蝥素能明显抑制人胰腺癌SW1990细胞的生长，呈现凋亡特征。RT—PCR和Westernblot检测可见Bax、p53基因表达显著增加，而Bcl—2基因表达减少。结论 斑蝥素能诱导人胰腺癌细胞凋亡，其作用可能与上调p53、Bax基因和下调Bcl-2基因有关。     

相关基因在苦参碱诱导人肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨苦参碱对肺腺癌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 肺腺癌A549细胞进行传代培养后,分别加入30、60、120、240 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关.苦参碱可诱导A549细胞凋亡,与作用时间呈正相关.苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01),而显著升高Bax蛋白表达水平.结论 Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用.     

5-氟尿嘧啶联合热疗体外诱导Hep-2细胞凋亡及细胞周期阻滞

目的探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)联合热疗对人喉癌细胞株Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞周期进程的影响。方法应用噻唑蓝(MTT)染色法检测不同条件下Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率。结果单纯热疗组、单纯5-FU组及联合组对Hep-2细胞的增殖抑制率分别为13.7%、22.3%和46.5%,与对照组相比差异显著(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,组间比较差异显著。结论 5-FU联合热疗能显著提高Hep-2细胞的增殖抑制率,抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡。     

黄芪多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡相关基因表达的影响

目的研究黄芪多糖(APS)联合斑蝥酸钠(SCA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法实验分为对照组、SCA处理组、APS处理组、APS联合SCA处理组,采用免疫组化染色法(IH)观察APS联合斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,采用Western印迹法检测各组细胞Bcl-2基因表达的变化。结果与对照组相比,各处理组HepG2细胞中Bcl-2基因表达均明显减少,APS联合SCA处理组减少最为明显。结论 APS联合SCA可明显抑制HepG2细胞Bcl-2基因的表达。     

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用观察

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG-2细胞共同培养,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;采用Hoechst33258/PI染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果在25~100μg/ml的药物浓度作用下,细胞增殖被抑制。药物浓度在50μg/ml下作用48h,细胞抑制率达50.63%,药物浓度在75μg/ml下作用48h细胞,抑制率达77.62%。抑制率呈浓度和时间依赖性;药物浓度在50μg/ml时作用48h,可见HepG-2细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型的凋亡改变;随着黄芩苷作用浓度的增加,细胞凋亡率增高(P<0.05);随药物浓度的增加,Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量呈增加趋势,而Bcl-2表达减少。结论黄芩苷能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肝癌细胞增殖,其诱导凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

复方肝癌宁含药血清诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:观察复方肝癌宁含药血清对肝癌HepG2 细胞凋亡的诱导作用．方法:运用中药血清药理学方法,选择不同浓度的含药血清与人肝癌HepG2细胞共同孵育观察,并与阳性血清组、无药血清组作对照．结果:复方肝癌宁含药血清可显著抑制HepG2 细胞的增长;TUNEL法检测HepG2细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变,可见“凋亡小体”,高、中、低剂量含药血清组凋亡率分别为:14．50％,13．61％和10．19％,与无药血清组比较P<0．01;流式细胞仪检测可见亚G1峰, 凋亡呈含药血清浓度依赖性特点,高、中、低剂量含药血清组凋亡率分别为15．1％,12．0％, 5．5％．与无药血清组比较P<0．01或P<0．05 结论:复方肝癌宁可通过诱导肿瘤细胞凋亡, 发挥临床抗肝肿瘤、抗转移的作用．     

胸腺肽促进人肝癌细胞HepG2凋亡机制的研究

将对数生长期的人肝癌细胞H epG 2(3×104/m l)随机分为1、2、3、4组,1、2、3组分别用浓度为400、200、100μg/m l的胸腺肽1m l处理,4组用相同体积RPM I-1640培养液处理。免疫组化法检测H epG 2中p53、B c1-2、B ax蛋白的表达,用流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡及死亡率。结果1、2、3组细胞凋亡率及死亡率均显著高于4组;随胸腺肽浓度升高,细胞死亡率升高。胸腺肽作用于H epG 2细胞24h后,琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA梯形条带,大约相当于180~200bp的整倍数,对照组无DNA梯形条带出现。荧光显微镜下可见H epG 2细胞缩小、染色质固缩,细胞核裂成碎片,但细胞形态仍完整。1、2、3组p53、B ax表达显著高于4组,P均<0.05;B c1-2表达显著低于4组,P均<0.05。提示胸腺肽可诱导人肝癌H epG 2细胞凋亡,其机理是上调p53、B ax表达,抑制B c1-2表达。     

土贝母制剂联合热疗对Hep-2细胞凋亡及细胞周期各时相的影响

目的 探讨土贝母制剂联合热疗对人喉癌细胞株(Hep-2细胞)增殖抑制率、细胞周期各时相的影响及亚细胞结构改变.方法 应用MTT比色法检测Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化及凋亡率,电子显微镜观察亚细胞结构改变.结果 单纯热疗组、土贝母组,联合组与对照组相比差别非常显著(P<0.01);且Hep-2细胞周期进程发生明显改变:G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高.电子显微镜显示染色质趋边凝集,线粒体肿胀,可见凋亡小体.结论 土贝母制剂联合热疗可提高Hep-2细胞增殖抑制率,抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

miRNA-130a与乙型肝炎后肝癌患者临床特征的相关性及对HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究miRNA-130a与乙型肝炎相关性肝癌(HBV-HCC)患者临床特征的相关性以及对HepG2细胞凋亡的影响。方法:选择60例HBV-HCC患者、30例对照者的miRNAs血清样品。应用RNA试剂盒对血清中的RNA进行提取和逆转录,应用实时定量PCR法对miRNA-130a进行定量。应用p-Genesil-NC和p-Genesil-miRNA-130a试剂对HepG2细胞进行转染,应用MTT法对各组细胞的增殖力进行检测;应用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;应用Western blot法检测细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果:相对于对照者,HBV-HCC患者血清miRNA-130a的表达量升高(P<0.05);单用miRNA-130a时的曲线下面积(AUC)为0.858(95%CI:0.812～0.903),敏感性为83.5%,特异性为83.2%;单用AFP时的AUC为0.852(95%CI:0.801～0.902),敏感性为72.1%,特异性为93.6%;联合两个指标时的AUC为0.899(95%CI:0.846～0.952),敏感性为89.6%,特异性为96.4%。...     

迷迭香精油诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的 研究迷迭香精油诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用.方法 以不同浓度的迷迭香精油作用于体外培养的HepG2细胞,MTF法测定迷迭香精油对HepG2细胞的生长抑制率,Hoechst-33258荧光染色观察细胞凋亡时形态学变化.结果 迷迭香精油可显著抑制HepG2细胞生长,诱导其凋亡,呈现明显的量-效和时-效关系,1.5625mg/L迷迭香精油72h抑制率达90%以上,IC50为0.0637mg/L,荧光显微镜下观察到核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征.结论 迷迭香精油能诱导HepG2细胞凋亡,表明其可能成为新的高效的抗肝癌药物.     

热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响

目的探讨热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡相关基因Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)的影响。方法培育NSCLC细胞株,分为热疗组、依托泊苷组、热疗联合依托泊苷组(联合组)和对照组,干预结束后提取RNA,用RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的相对表达量和mRNA表达水平。结果热疗组、依托泊苷组及联合组Bcl-2、HSP70水平明显低于对照组(P均<0.01),Bax水平明显高于对照组(P<0.01)。结论热疗、依托泊苷均可一定程度地诱导NSCLC细胞凋亡,二者联合应用具有一定的协同作用,可进一步诱导NSCLC细胞的凋亡。     

Staurosporine诱导乳鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax的关系

目的 探讨staurosporine（STS）诱导心肌细胞凋亡过程中,凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化及意义。方法 以STS诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,检测半胱天冬蛋白酶(caspase)-3的活性及用Hoechst-33258荧光染色观察细胞凋亡。用免疫印迹法（Western blot）检测Bcl-2和Bax表达的变化。用免疫荧光共聚焦显微镜和免疫印迹法观察Bax在细胞内的分布。结果 以4 μmol/L STS处理心肌细胞,随着处理时间的延长,细胞中caspase-3的活性逐渐增加,与对照组比较,8 h达到峰值（P<0.01）。Hoechst-33258荧光染色显示,多数细胞核呈现核分叶。STS诱导心肌细胞凋亡过程中,Bcl-2和Bax的水平与对照组比较无显著变化。正常细胞内的Bax均匀分布于细胞质中,在STS处理的细胞中,Bax明显聚集于线粒体上,呈现明显的线粒体的转位。STS诱导心肌细胞凋亡过程中,胞质片段Bax的水平明显下降,而线粒体片段Bax的水平明显升高,进一步证实STS诱导细胞凋亡过程中伴有明显的Bax线粒体转位。结论 STS诱导细胞凋亡中,伴有明显的Bax由胞质向线粒体的转位。     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

土贝母制剂联合热疗诱导Tca8113细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 探讨土贝母制剂联合热疗诱导Tca8113细胞(人舌癌细胞株)增殖抑制率及其对细胞周期各时相的影响,以确定联合方案是否具有协同效应.方法 应用MTT比色法检测Tca8113细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化,电子显微镜观察亚细胞结构改变.结果 单纯土贝母组与联合热疗组相比,Tca8113细胞增殖抑制率明显升高(P＜0.01),且Tca8113细胞周期进程发生明显改变(G1期细胞增多,S期细胞减少,凋亡率升高);电子显微镜下可见细胞染色质趋边凝集、线粒体肿胀,可见凋亡小体.结论 土贝母制剂联合热疗可提高Tca8113细胞增殖抑制率,抑制Tca8113细胞G1期向S期转化进程,细胞凋亡率升高及亚细胞结构改变.     

Bcl-2家族在冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨部分Bcl-2家族成员基因表达变化在冬凌草甲素（Ori）诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡过程中的作用。方法采用MTT法和流式细胞术检测0ri作用后ARH-77细胞的活力和凋亡情况,相差显微镜观察细胞形态改变,RT-PCR法检测Bcl-2家族成员的基因表达变化。结果Ori能明显抑制ARH-77细胞的生长,且呈时间一剂量依赖性。10μmol／LOri作用于ARH-77细胞24h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体。流式细胞仪检测显示,细胞凋亡率随Ori作用时间的延长而逐渐增加（P〈0．05）。Ori诱导ARH-77细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl、BaxmRNA水平改变有关（P〈0．05）。结论Ori能通过调节ARH-77细胞Bcl-2家族成员的表达而诱导其发生凋亡。     

心肌梗塞与细胞凋亡关系的初步探索

探索人类心肌梗塞时心肌细胞凋亡的证据。选用TUNEL的方法对 2 2例急慢性心肌梗塞的心肌标本及 14例无心血管疾病的心肌标本进行检测。应用免疫组化的方法对细胞凋亡的相关基因Bcl 2和Bax进行检测。急性梗塞区及梗塞周边区凋亡细胞明显增多 ,以周边区域最为明显 (P <0 .0 0 1) ;陈旧梗塞区仍能见到凋亡细胞 ,较急性区域明显减少 (P <0 .0 0 1) ;在梗塞组正常区域及对照组偶见有凋亡细胞 ,2组间无显著差异。在人类心肌梗塞的细胞学检测中发现有大量的凋亡细胞 ,为认识心血管疾病展示了新的视野     

金雀异黄素诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素(Genistein,Gen)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡调控的作用.方法将Gen分为5.0、10.0、20.0 μg/ml 三个浓度处理组和对照组(未加金雀异黄素),作用SMMC-7721细胞不同时间后,透射电镜观察细胞超微结构变化;免疫组化法检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,Gen处理组可使细胞核内异染色质呈块状凝集、胞质内线粒体肿胀空化,随着作用浓度增加,细胞核呈固缩状,核内异染色质趋边凝集,细胞质空化明显;免疫组化显示,随着Gen浓度增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,并呈剂量依赖性(P＜0.01).结论 金雀异黄素可以诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡.上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的作用机制.