大蒜提取液与环丙沙星杀菌活性的联合效应研究

目的:测定大蒜提取液与环丙沙星联合对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜的影响进行研究,探讨联合用药对生物被膜细菌杀菌活性的作用。方法:采用棋盘法设计,分为空白对照组、大蒜提取液组、环丙沙星组、大蒜和环丙沙星组。结果:1/16、1/4MIC的大蒜提取液单独作用并不能使BF活菌数减少,但是1/16、1/4MIC的大蒜提取液却可以增强1/4MIC、1/2MIC、1MIC的环丙沙星对BF细菌的抑制作用。结论:大蒜提取液与环丙沙星联用对PAO1、PAO-JP2生物被膜抗菌有增效作用。     

大蒜提取液与环丙沙星联合对铜绿假单胞菌PAO1与PAO-JP2的形态学影响

目的:采用银染法快速鉴定、对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜形态学的比较,应用大蒜提取液和环丙沙星抗菌药,以研究QS系统影响铜绿假单胞形成生物被膜的机制。方法:分空白对照组,大蒜组(40ug/ml、80ug/ml),环丙沙星组(0.3ug/ml、0.5ug/ml、2ug/ml),两者混合组。结果:混合组联合对PAO1生物被膜抑制作用大于PAO-JP2。而且同一剂量下联合组对单独组对PAO1、PAO-JP2比较有显著差异(P0.05),结论:大蒜提取液对环丙沙星对PAO1、PAO-JP2生物被膜抑制起增强作用,从而抑制QS系统作用而减少耐药产生。     

比较大蒜对不同真菌抑制活性的研究

目的:检测大蒜提取液对青霉菌、白假丝酵母菌及新型隐球菌的抑制作用。方法:采用K-B法(纸片扩散法),测量大蒜提取液对受试菌种的抑菌环直径大小。结果:大蒜对以上3种真菌均有较强的抑制作用,且以新型隐球菌的抑菌效果最优,白假丝酵母菌次之,青霉菌居后。     

大蒜提取液联合环丙沙星对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2浮游菌抗菌作用的研究

目的:测定大蒜提取液、喹诺酮类药物对PAO1、PAO-JP2浮游菌最低抑菌浓度,探讨两株菌对抗菌药物敏感性差异。方法:采用棋盘法设计,空白组、大蒜组、环丙沙星组、大蒜和环丙沙星组。结果:大蒜提取液对PAO1浮游菌MIC值高于PAO-JP2。结论:大蒜提取液和环丙沙星联用后,能明显降低该两种抗生素对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2的MIC值,大蒜提取液与环丙沙星联用后,抗菌效果以协同效应。     

大蒜提取液与环丙沙星对铜绿假单胞菌生物被膜弹性蛋白酶影响的研究

目的：测定铜绿假单胞菌两个主要细胞外毒性因子弹性蛋白酶的活性,比较大蒜提取液与环丙沙星对其影响。方法：将大蒜分为40ug/mL、80ug/mL、100ug/mL三组,环丙沙星分为0.3ug/mL、0.5ug/mL、1ug/mL三组及空白对照组,共8组。测定其对PA01和PAO-JP2的影响。结果：同一浓度大蒜液对PAO1弹性蛋白酶抑制幅度大于PAO-JP2,不同浓度环丙沙星的对PAO1、PAO-JP2弹性蛋白酶抑制幅度统计学显示无明显差异（P〉0.05）。结论：由此推测,大蒜液对QS系统有抑制作用,环丙沙星对QS系统无抑制作用。     

大蒜提取液对铜绿假单胞菌LAS基因转录水平影响的研究

目的：研究大蒜提取液对铜绿假单胞菌LAS基因转录水平的影响。方法：通过在铜绿假单胞菌培养的阶段加入大蒜液,观察大蒜液对铜绿假单胞菌LAS基因转录水平的影响。结果：PAO-JP2组不能有效表达LasR基因,PAO-1组可有效表达LasR基因,但随着大蒜液亚抑菌浓度的增高,反义mRNA的表达量减少。结论：大蒜提取液可能是通过抑制LasR基因的表达的方式,抑制了QS系统。     

痰热清注射液的药敏试验

目的评价痰热清注射液的体外抑菌活性。方法采用平板稀释法测定痰热清注射液对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌、福氏志贺氏菌、肺炎克雷伯氏菌和白色假丝酵母菌的抑菌浓度(MIC)。结果痰热清注射液对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌、福氏志贺氏菌、肺炎克雷伯氏菌和白色假丝酵母菌的MIC分别为10,10,20,50,200,10,100,50,100和200p·g-1·L-1。结论痰热清注射液对上述10种常见的细菌有明显的抑制作用;平板稀释法是较为理想的一种测定中(成)药药敏的方法。     

穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的影响

目的:采用激光共聚焦显微镜(CLSM)技术考察穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的影响,进一步揭示穿心莲内酯的抗菌机制。方法:使用玻璃爬片生物被膜培养法,在不同浓度穿心莲内酯(10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml和0.01μg/ml)条件下孵育PAO1,并分别于24h、48h及72h取出玻璃爬片,用硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白和碘化吡啶双重免疫荧光染色,采用激光共聚焦显微镜技术观察穿心莲内酯对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响,并测量生物被膜的厚度。结果:断层图像显示和空白对照组比较,用药后PAO1生物被膜生长不完全,出现多种形态,其中在0.1μg/ml剂量下,生物被膜呈破碎絮状;与空白对照组比较,穿心莲内酯在0.1μg/ml、0.01μg/ml剂量下,可明显影响PAO1生物被膜的生长厚度。结论:穿心莲内酯可能具有干扰铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的作用。     

麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的研究麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法微量倍比稀释法测定麻杏石甘汤、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法评价二者对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC(SMIC50、SMIC80)的影响,镀银染色法观察麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响。结果麻杏石甘汤SMIC50和SMIC80分别为250,1 000 mg.ml-1;500 mg.ml-1的麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的形态有显著影响。结论麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜有较强的抑制作用。     

急性脑卒中合并医院获得性肺炎的病原菌分布及药敏分析

目的探讨急性脑卒中患者并发医院获得性肺炎(HAP)的发病率、病原菌分布及对抗生素的敏感性。方法对2004年12月—2006年12月本院收治的66例急性脑卒中合并HAP的患者资料进行回顾分析。结果共分离出细菌136株,其中革兰阴性菌占53.7%,以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌最常见;革兰阳性菌占31.7%,主要是金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、表皮葡萄球菌等;真菌占14.7%,依次为白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、中间假丝酵母菌。致病菌对常用抗生素都不同程度地产生了耐药性,对青霉素、氨苄西林的耐药率最高,对亚胺培南、β-内酰胺酶抑制剂复合剂的耐药率较低,未发现万古霉素耐药革兰阳性球菌。结论革兰阴性杆菌为主要致病菌,其次为革兰阳性菌,多为条件致病菌,且细菌耐药性严重,真菌感染率较高。     

急性脑卒中合并医院获得性肺炎的病原菌分布及药敏分析

目的探讨急性脑卒中患者并发医院获得性肺炎（HAP）的发病率、病原菌分布及对抗生素的敏感性。方法对2004年12月-2006年12月本院收治的66例急性脑卒中合并HAP的患者资料进行回顾分析。结果共分离出细菌136株，其中革兰阴性菌占53．7％，以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌最常见；革兰阳性菌占31．7％，主要是金黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、表皮葡萄球菌等；真菌占14.7％，依次为白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、中间假丝酵母菌。致病菌对常用抗生素都不同程度地产生了耐药性，对青霉素、氨苄西林的耐药率最高，对亚胺培南、β-内酰胺酶抑制剂复合剂的耐药率较低，未发现万古霉素耐药革兰阳性球菌。结论革兰阴性杆菌为主要致病菌，其次为革兰阳性菌，多为条件致病菌，且细菌耐药性严重，真菌感染率较高。     

大蒜提取物的体外抗真菌作用

目的：检测大蒜提取物蒜氨酸，蒜酶及蒜氨酸和蒜酶复合物对红色毛癣菌、絮状毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、白假丝酵母菌和新生隐球菌的最小抑真菌浓度(minimal inhibitory fungal concentration，MIC)，最小杀真菌浓度(minimal fungicidal concentration，MFC)；观察其体外抗真菌作用。方法：采用沙保培养基(Sabouraud Dextrose Agar，SDA)液体稀释培养法和琼脂平板稀释培养计数菌落法分别测定蒜氨酸，蒜酶及蒜氨酸和蒜酶复合物对红色毛癣菌、絮状毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、白假丝酵母菌和新生隐球菌的MIC和MFC。结果：蒜氨酸和蒜酶复合物：红色毛癣菌的MIC为1：256，MFC为1：128；絮状毛癣菌的MIC为1：256，MFC为1：128；石膏样小孢子菌的MIC为1：512，MFC为1：256；犬小孢子菌的MIC为1：512，MFC为1：128；白假丝酵母菌的MIC为：1：128，MFC为1：64．；新生隐球菌的MIC为1：．512；MFC 1：2560结论：蒜氨酸仅对白假丝酵母菌有抑制作用，对其它试验菌无抑制作用；蒜酶对所有试验菌均无抑制作用；蒜氨酸和蒜酶复合物则具有明显的抗真菌作用。     

四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用及机制研究

目的:研究中药四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用并探讨其作用机制。方法:将四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养,观察四季青水煎液在亚抑菌浓度下对细菌生长的影响;将铜绿假单胞菌培养3天构建生物被膜模型,加入不同浓度的四季青水煎液共同培养,于不同时间取样,经结晶紫染色后570 nm处测定生物被膜的光密度(OD值);将不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养18 h,经氯仿提取后于540 nm处测定绿脓菌素光密度(OD值),与刚果红反应后,492 nm处测定弹性蛋白酶光密度(OD值);用荧光定量PCR法检测四季青水煎液作用于铜绿假单胞菌后Las I/R和Rhl I/R基因的表达;用LC-MS/MS法测定不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养48h,72 h后培养液中细菌信号分子3-oxo-C12-HSL和C4-HSL的浓度及与生物被膜生长及毒力因子分泌的关系。结果:在亚抑菌浓度下四季青水煎液不影响铜绿假单胞菌的生长,但能显著抑制铜绿假单胞菌生物被膜生成和毒力因子分泌。其减毒作用机制可能是四季青中含有铜绿假单胞菌群体感应系统抑制成分,抑制了该系统中上游信号分子3-oxo-C12-HSL与LasR基因的结合,从而阻断了下游基因的启动。结论:四季青水煎液能通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中信号分子对相关基因进行调控,从而降低铜绿假单胞菌的致病性。     

商陆提取物抑菌活性评价研究

目的:探讨商陆的有效抑菌活性成分。方法:采用琼脂扩散法测定不同商陆提取物对临床常见的15株病原菌的抑菌圈;采用液体稀释法测定最小抑菌浓度。结果:商陆不同粗提物对病原菌有不同程度的抑制作用,商陆水煎液仅对不动杆菌、白假丝酵母、新生隐球菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度分别为500.0,500.0,62.5mg.mL-1,抑菌作用不明显;多糖提取物仅对产气荚膜梭菌、痢疾志贺菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度为60.0,7.5mg.mL-1;商陆皂苷30%乙醇提取物抑菌效果较明显、抗菌谱较广,对产气荚膜梭菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、志贺菌、甲型副伤寒菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌、白假丝酵母均有抑菌作用,最小抑菌浓度范围为17.6～70.0mg.mL-1;商陆皂苷60%和90%乙醇提取物无抑菌活性。结论:商陆抑菌活性主要有效部位为极性较大的皂苷类提取物。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌黏附的清除作用及对生物被膜形成的影响

目的:研究鱼腥草素钠(houttuyfonate sodium,SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)黏附的清除作用及对生物被膜(biofilm,BF)形成的影响。方法:用96孔板孔建立铜绿假单胞菌黏附生物被膜,MTT法检测膜内菌的代谢变化、评价药物对黏附菌的最小清除浓度(minimum eliminateing concentration,MEC)及最小抑膜浓度(sessile minimal inhibitoryconcentration,SMIC);菌落计数法观察药物对黏附、膜内菌量影响;扫描电镜观察药物对受试菌黏附作用及生物被膜的形态结构影响。结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MEC80为500 mg·L-1,MEC50为125 mg·L-1,对铜绿假单胞菌早期生物被膜和成熟生物被膜SMIC80均为500 mg·L-1,早期生物被膜、成熟生物被膜SMIC50分别为31.25,1.95 mg·L-1。250 mg·L-1药物浓度使载体上黏附的及初步生物被膜、成熟生物被膜内的活菌数明显减少,和对照组比较差异显著(P<0.05),扫描电镜观察黏附载体上的细菌明显减少,连续用药后,成熟生物被膜阶段载体上未见有生物被膜结构,菌量明显减少并且细菌形态发生变异,由杆状变为球杆状。结论:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的黏附有较强的清除活性,通过连续给药能抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成。     

黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌生物被膜 及与阿奇霉素协同抗菌作用

目的:研究黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌牛物被膜及与阿奇霉素协同抗菌作用.方法:微量倍比稀释法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定黄连解毒汤和阿奇霉素协同抗菌作用,MTT法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC),显微镜下观察药物对生物膜形态的影响.结果:黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的MIC 100 g·L-1,阿奇霉素200 mg·L-1,两药联合后MIC分别为25 g·L-1和25 mg·L-1抑菌分级指数(FIC)0.1875,提示两药协同作用明显.黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的SMIC5.1,3d均为15.6 g·L-1,7 d31.25 g·L-1;SMIC801,3,7d均为250 g·L-1,形态观察提示黄连解毒汤SMIC80浓度对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制作用明显.结论:黄连解毒汤具有抗铜绿假单胞菌生物被膜作用,与阿奇霉素有协同抗菌作用.     

清热解毒滴眼液体外抗菌作用的研究

目的：研究清热解毒滴眼液对53株临床分离细菌及6株细菌标准菌株的体外抗菌活性。方法：采用琼脂稀释法，用MH琼脂对清热解毒滴眼液进行定量抗菌实验。结果：清热解毒滴眼液对革兰氏阳性菌中的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌以及革兰氏阴性菌中的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌都有较强的抑制作用，其中对铜绿假单胞菌的抑制作用最强。结论：清热解毒滴眼液对引起眼部感染的常见细菌具有良好的抑制作用。     

鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用

目的研究鱼腥草水提液体外对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用。方法应用微量倍比稀释法测定鱼腥草水提液、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法测定鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的影响,镜下观察该药对铜绿假单胞菌生物被膜的形态影响。结果实验结果提示,鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌的MIC为250 g.L-1,协同实验表明与阿奇霉素有抗菌相加作用。鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的SMIC501,3,7d分别是31.25,62.5,62.5 g.L-1,SMIC80分别是250,250,250 g.L-1。SMIC80药物浓度显示对铜绿假单胞菌生物膜形态形成有干扰作用。结论鱼腥草水提液与阿奇霉素抗菌相加作用明显,并能抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成,为鱼腥草治疗由生物膜引起的慢性感染提供了依据。     

穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS毒力因子的影响

目的:观察穿心莲对铜绿假单胞菌QS系统调控的毒力因子的影响。方法:分别测定12.5 mg.mL^-1穿心莲内酯对铜绿假单胞菌生长曲线、绿脓菌素、胞外蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性的影响,同时检测穿心莲内酯对QS系统双突变株PAO-JP2株绿脓菌素、蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性的作用。结果:穿心莲内酯对铜绿假单胞菌生长无明显影响。穿心莲内酯能明显抑制绿脓菌素的分泌、胞外蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性。穿心莲内酯对PAO-JP2绿脓菌素、胞外蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性无明显影响。结论:穿心莲内酯可能通过抑制铜绿假单胞菌毒力因子产生而实现抗感染作用。     

三七对铜绿假单胞菌密度感应相关毒力因子表达的影响

目的：通过观察三七对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）密度感应（Quorum sensing,QS）相关毒力因子表达变化的影响,探讨其作用机制。方法：用不同浓度三七与细菌共培养,采用弹性蛋白-刚果红降解试验测定弹性蛋白酶活性;采用紫外分光光度法测定绿脓菌素分泌量;结晶紫染色法观察生物被膜形成量;检测细菌在含三七琼脂平板中的集群运动与泳动能力。结果：三七在25mg/ml、12.5mg/ml和6.25mg/ml浓度下对弹性蛋白酶活性、绿脓菌素分泌有显著抑制作用,并能减少生物被膜形成。12.5mg/ml三七作用后细菌泳动能力受到抑制而集群运动无显著变化。结论：三七对铜绿假单胞菌密度感应相关毒力因子表达均有抑制作用,提示三七可以抑制铜绿假单胞菌密度感应功能,三七可能是铜绿假单胞菌密度感应抑制剂。