当归红芪超滤膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 观察并评价当归红芪超滤膜提取物（简称中药合剂）诱导小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow derived stroma cells, BMSCs）分化为神经样细胞的效果。方法 体外培养小鼠BMSCs后加入药物并分为5组：空白组、6 g/L中药合剂组（简称低剂量组）、12 g/L中药合剂组（简称高剂量组）及3 g/L中药合剂联合0.5 mmol/L β 巯基乙醇用药组（简称联合组）、β 巯基乙醇阳性对照组（简称对照组）。通过甲苯胺蓝染色观察各组诱导分化为神经样细胞的效果,应用免疫组织化学及免疫荧光技术检测分化后细胞所表达的神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase, NSE）、巢蛋白（nestin）、神经丝蛋白（neurofilament protein, NFP）、微管结合蛋白2（microtubule associated protein 2, MAP2）及神经胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP） 5种神经特异性蛋白的差异,并应用流式细胞分析技术（flow cytometry, FCM）检测各组细胞生长周期的变化。结果 诱导后细胞形态发生神经样细胞改变,两个中药合剂组的形态特征性均弱于联合组和对照组;除空白组外,上述5种蛋白在各组的表达为阳性,表达程度均为对照组最高（P<0.05）,联合组次之（P<0.05）;经流式细胞术检测细胞增殖率比较：对照组最低（P<0.05）,高、低剂量组较高（P<0.05）,联合组次之（P<0.05）。结论 中药合剂可较为有效地诱导小鼠BMSCs分化为神经样细胞,诱导能力虽弱于对照组,但对于分化后细胞的增殖作用明显。联合组可有效诱导BMSCs分化为神经样细胞并使细胞有较高的增殖能力, 可能是用于临床研究目前较为理想的用药途径。     

当归红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠NO和CK-MB影响的实验研究

目的：观察当归、红芪及当归红芪合剂（当归：红芪=1：5）超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠血清一氧化氮（nitricoxide，NO，下同）、肌酸激酶同功酶（creatine kinase-MB，CK-MB，下同）的影响，探讨当归、红芪及其合荆对缺血心肌的保护作用及其机制。方法：以冠状动脉前降支结扎法制造急性心肌缺血模型；造模成功后，32只大鼠随机分为1、3、7、14天组，每组8只；采用拉丁方设计实验方法并对动物进行用药；用酶还原法测定血清NO含量；用全自动生化仪测定血清CK-MB含量。结果：血清NO含量与血清CK—MB含量在不同时间组大鼠之间和不同药物组大鼠之间均有显著差异（P〈0．01）。结论：当归、红芪及其舍剂超滤膜提取物具有降低心肌缺血大鼠血清NO含量和降低血清CK—MB活性的作用，且与用药时间有关。中药对缺血心肌的保护作用可能与用药时间有关。     

当归、红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠CK及CK-MB的影响

目的观察当归、红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)的影响。方法以冠状动脉左前降支结扎法结扎80只大鼠制作急性心肌梗死模型。造模成功后,随机分为1 d、3 d、7 d、14 d组,每组20只;对动物进行用药后在对应的时间点将动物处死取血。用全自动生化仪测定血清CK及CK-MB含量。结果血清CK及CK-MB含量在不同药物组大鼠之间有显著性差异(P均<0.05)。结论当归、红芪超滤膜提取物能降低急性心肌缺血大鼠血清CK及CK-MB活性,且与用药时间及剂量密切相关。     

当归、红芪超滤膜提取物对培养乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响

目的探讨当归、红芪超滤膜提取物对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法通过给原代培养乳鼠心室肌细胞进行缺氧1h/复氧1h,建立缺氧/复氧（A/R）心肌细胞损伤模型。于复氧期开始随机将心肌细胞分为正常对照组（C）、缺氧/复氧组（A/R组）、药物低剂量组（LD）、药物高剂量组（HD）,于药物作用24h后测定各组缺氧/复氧后细胞损伤指标肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）。结果LD、HD组MDA、MPO、肌酸激酶（CK）明显较A/R组降低（P〈0.01）,SOD明显增高（P〈0.01）。结论当归、红芪超滤膜提取物（10万分子量）可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

当归红芪超滤膜提取物对阿霉素致心肌细胞凋亡的影响

目的:研究当归红芪超滤膜提取物(UFE-AH)对阿霉素所致心肌细胞凋亡的影响.方法:取新生1～2d的Wistar乳鼠,用差速贴壁法原代提取心肌细胞,调整细胞密度1×106/mL,于37℃5％ CO2培养箱中密闭培养48 h.用2.5 mg·L-1阿霉素作用于心肌细胞24 h成功建立心肌细胞凋亡模型.实验分5组:正常对照组、阿霉素组(2.5 mg·L-1)、UFE-AH低、中、高剂量干预组(阿霉素造模前2h预先分别给予3.75,7.5,15 g·L-1当归红芪超滤膜提取物).四氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞生长抑制率,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,Western blot(蛋白印迹法)检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bel-2),Bel-2相关X蛋白(Bax)表达水平.结果:与正常组相比,阿霉素组心肌细胞生长抑制率明显增加,且头部DNA含量占总含量的百分数(HDNA％),尾部DNA含量占总含量的百分数(TDNA％),尾长(TL),尾短(TM),尾距(OTM)均明显升高,Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax表达水平升高,均有统计学意义(P＜0.01);UFE-AH干预组的心肌细胞生长抑制率明显降低,且HDNA％,TDNA％,TL,TM,OTM数值均降低,Bcl-2蛋白表达水平上调,Bax表达水平下调,有显著性差异(P＜0.01).结论:UFE-AH可减轻阿霉素对心肌细胞DNA的损伤,上调Bcl-2/Bax而抑制心肌细胞的凋亡,具有抗心肌细胞凋亡的保护作用.     

当归、红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠平均动脉压和肌酸激酶同工酶的影响

目的观察当归、红芪及其合剂超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠平均动脉压(MAP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的影响。方法以冠状动脉前降支结扎法32只大鼠制造急性心肌缺血模型;造模成功后,将随机分为1 d、3 d、7 d1、4 d组,每组8只;采用拉丁方设计实验方法对动物进行用药;应用Power Lab多道生理记录仪测定大鼠MAP,用全自动生化仪测定血清CK-MB含量。结果MAP和血清CK-MB含量在不同时间组大鼠之间和不同药物组大鼠之间均有显著性差异(P<0.05和P<0.01)。结论当归、红芪及其合剂超滤膜提取物有促进急性心肌缺血大鼠MAP回升和降低血清CK-MB活性的作用,且与用药时间密切相关。     

当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的探讨当归红芪合剂超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法以体外培养的ECV-304细胞为模型,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,半定量反转录-聚合酶链反应法检测ECV-304细胞VEGFmRNA表达的变化。结果当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞有促增殖的作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);当归红芪合剂超滤膜提取物能够诱导VEGFmRNA的表达,其作用与剂量呈正相关。结论当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞的促增殖作用机制是通过诱导ECV-304细胞VEGFmRNA表达实现的。     

当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞增殖周期的影响

多年来,人们一直在研究如何使已有严重冠状动脉病变的心肌增加血供,从而更有效的改善患者的临床症状,应用生长因子直接注射或其基因转染诱导血管新生以重建心肌血运即"治疗性血管新生"(therapeutic angiogenesis),从而达到"自身冠脉搭桥"的目的,已成为治疗心肌缺血的一个新策略和新热点[1,3].     

当归红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠AST、LDH和LDH1的影响

目的:探讨当归红芪超滤物对急性心肌梗死大鼠天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotrans-ferase,AST),乳酸脱氢酶(actate dehydrogenase,LDH)和乳酸脱氢酶同工酶(lactate dehydrogenase,LDH1)活性的影响,阐明当归红芪超滤物对缺血心肌的保护作用。方法:结扎左前降支建立大鼠心梗模型。将80只雄性Wistar大鼠随机分成5组,每组16只,分别为造模组(myocardial infarction,MI)、假手术组(sham-operation,SH)、低剂量组(low-dose drug,LD)、中剂量组(middle dose group,MD)、高剂量组(high-dose drug,HD),分别检测给药24h和72h后外周血AST、LDH和LDH1的活性。结果:与SH组比较,MI组大鼠可见血清AST、LDH及LDH1活性明显增高(P0.05);与MI组比较,药物各剂量组AST、LDH及LDH1活性明显降低(P0.05),且峰值前移。结论:当归红芪超滤物可通过抗氧化作用降低AST、LDH及LDH1活性从而抗心肌缺血损伤,对大鼠心肌有明显的保护作用,且与用药时间及剂量密切相关。     

三叶青黄酮诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡的作用.方法 通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测三叶青黄酮对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析三叶青黄酮对肝癌细胞的诱导凋亡作用.结果 三叶青黄酮能显著的抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并具有浓度依赖性.光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰.结论 三叶青黄酮对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,有抗肝癌的药用价值.     

莪术挥发油抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究

[目的]探讨莪术挥发油对肝癌细胞生长抑制的作用机制。[方法]用荧光显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化，采用噻唑氮蓝(MTT)法检测莪术油对细胞生长的抑制作用，并用流式细胞仪检测细胞周期的阻滞及凋亡率。[结果]MTT结果表明莪术油浓度与细胞生长抑制率成正比。荧光显微镜观察结果显示，1．0mg／mL的莪术挥发油作用24h后可有效诱导肝癌细胞凋亡，细胞形态产生明显的凋亡特征，细胞核凹陷或固缩成均一的致密物。流式细胞仪检测结果表明，莪术油作用后细胞凋亡率可达28.15％，细胞周期被阻滞在S期。[结论]莪术挥发油可抑制肝癌细胞SMMG772l的生长，诱导凋亡及阻滞细胞周期是其抑制生长的重要机制。     

芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察芪参清肝汤对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.方法 制备芪参清肝汤,体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为药物干预组及对照组,药物干预组分别加入0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/ml芪参清肝汤处理12h、24 h、48 h,对照组不加药.采用四甲基偶氮唑兰（MTT）比色法检测2组细胞抑制率,采用流式细胞术检测2组细胞凋亡率.结果 0.135、0.27、0.54、1.08、2.16 g/m1芪参清肝汤对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用12h的OD值分别为0.89±0.05、0.85±0.05、0.80±0.06、0.78±0.02、0.69±0.07; 24 h的OD值分别为0.77±0.07、0.74±0.07、0.59±0.07、0.50±0.09、0.39±0.08; 48 h的OD值分别为0.78±0.05、0.61±0.08、0.44±0.10、0.39±0.08、0.34±0.07,并呈剂量、时间依赖性,与对照组（1.14±0.06、1.24±0.03、1.31±0.06）比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）; 0.27、0.54 g/ml芪参清肝汤能明显诱导SMMC-7721细胞凋亡（11.19±2.23、15.69±2.51）,与对照组（1.41±0.22）比较有统计学意义（P＜0.05）,1.08 g/ml芪参清肝汤诱导肝癌细胞凋亡（41.83±7.11）,与对照组（1.41±0.22）比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 芪参清肝汤能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,可能通过诱导肝癌细胞凋亡发挥其作用.     

莪术黄芪超滤膜提取物诱导人SGC7901胃癌细胞凋亡的研究

目的:观察莪术黄芪超滤膜提取物对人SGC7901细胞是否具有凋亡诱导作用。方法:四氮唑蓝比色法(MTT法)观察莪术黄芪超滤膜提取物对人SGC7901细胞细胞的抑制率;应用流式细胞术,DNA凝胶电泳方法检测细胞凋亡的发生。结果:(1)莪术黄芪超滤膜提取物对人SGC7901细胞的生长有明显的抑制作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),抑制作用与剂量及时间呈显著性正相关。(2)莪术、黄芪超滤膜提取物诱导人SGC7901细胞发生凋亡,1.6g/L处理,72h效果最佳。结论:莪术黄芪超滤膜提取物抑制人SGC7901细胞生长并促其凋亡。     

当归-红芪超滤膜提取物对老龄大鼠记忆功能和神经递质的影响

目的： 探讨不同相对分子质量当归-红芪（当归:红芪 1:5）超滤膜提取物对老龄大鼠记忆功能和神经递质的影响。方法： 本实验选3月龄Wistar大鼠12只作为青年对照组（A组）,24月龄Wistar大鼠48只随机分为老年空白对照组（B组）、当归-红芪超滤膜提取物相对分子质量5万Da（C组）、相对分子质量10万Da（D组）、20万Da组（E组）,用药组分别给予相对分子质量为5万Da（1.87 g·kg^-1·d^-1）、10万Da（2.14 g·kg^-1·d^-1）、20万Da（2.47 g·kg^-1·d^-1）的当归-红芪超滤膜提取物,其余2组给予同体积生理盐水,连续灌胃70 d,观察各组大鼠学习记忆功能,显微镜下海马,大脑皮质组织形态改变,检测脑组织中枢神经递质乙酰胆碱（Ach）,单胺类神经递质5羟色胺（5-HT）,多巴胺（DA）,去甲肾上腺素（NE）含量。结果： 老年组大鼠与青年组大鼠相比学习能力下降;海马,大脑皮质组织形态改变存在差异, 神经递质Ach,DA,NE,5-HT含量显著降低（P<0.05）;与衰老组大鼠相比,当归红芪超滤膜提取物组大鼠脑组织中Ach,DA,NE,5-HT含量增高,有显著差异（P<0.05）;与10万Da相对分子质量组相比,5万Da,20万Da相对分子质量组大鼠脑组织神经递质含量的影响不及10万Da相对分子质量组明显（P<0.05）。结论： 当归红芪超滤膜提取物可以通过提高神经递质Ach,DA,NE,5-HT含量来改善老龄大鼠记忆功能,尤以10万Da相对分子质量组为优。     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

央芪汤对胃癌细胞凋亡影响的实验研究

目的：观察央芪汤对胃癌细胞凋亡的影响。方法：培养人胃癌细胞SGC-7901细胞株,用MTT法评价央芪汤对胃癌细胞增殖的抑制作用,确定央芪汤对胃癌细胞的IC50值,采用流式细胞术检测央芪汤对胃癌细胞凋亡的诱导作用,免疫细胞化学法检最4胃癌细胞中bel-2及caspase-3蛋白的表达情况。结果：央芪汤可以显著促进胃癌细胞SGC-7901的凋亡（P〈0．01）。明显增加胃癌细胞SGC-7901凋亡蛋白caspase-3的表达（P〈0．01）,并可明显抑制抗凋亡蛋白bel-2的表达（P〈0．01）。结论：央芪汤可以通过促进胃癌细胞的凋亡,达到抗肿瘤的目的。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

秦皮乙素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的机制研究

目的探讨秦皮乙素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制。方法不同浓度秦皮乙素(1.12、2.24、4.48 mmol/L)处理人肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪检测线粒体膜电位,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性,蛋白印迹法和免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Caspase-9蛋白的表达。结果秦皮乙素显著降低SMMC-7721细胞线粒体膜电位,提高Caspase-3、Caspase-9的活性,而对Caspase-8的活性无显著影响;升高Bax/Bcl-2比例,进而活化Caspase-9,并呈良好的剂量依赖关系。结论秦皮乙素可通过线粒体途径,启动下游的效应Caspase,诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。     

当归红芪超滤物对过氧化氢致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70及内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨当归红芪超滤物对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70(HSP70)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 H2O2诱导ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡制备模型,实验分为正常对照组、模型组、单纯药物组、药物干预组,并给予相应药物干预,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度,RT-PCR法检测HSP70、eNOS的基因表达,蛋白印迹法检测HSP70的蛋白表达,硝酸还原酶法及分光光度法检测一氧化氮(NO)的含量。结果与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率明显增加、细胞内Ca2+浓度明显上升(P0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达下调及NO含量降低(P0.05);与模型组比较,药物干预组细胞凋亡率、细胞内Ca2+浓度明显降低(P0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达上调及NO含量升高(P0.05)。结论当归红芪超滤物通过上调HSP70、eNOS的表达及NO含量,降低细胞内钙超载,发挥抗H2O2致ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。