血瘀证动物细胞损伤模型的研制

[目的]探索建立血瘀证细胞损伤模型的方法。[方法]用两种方法,即用血瘀证兔模型血管内皮细胞直接培养的方法和用血瘀证兔模型血清损伤培养的血管内皮细胞方法,研制血瘀证细胞损伤模型。[结果]第一种方法原代培养物血管内皮细胞出现了病理性损伤及内分泌功能的改变,初步表明能直接反映体内的病理状态,但其病理特征并未随细胞传代得以保留;第二种方法培养的细胞同样体现了类似前者的病理状态,且更易于复制。[结论]初步表明所建立的细胞损伤模型从功能和结构上都反映了务大辩论辛整体动物模型及部分临床病人的病理特征,可应用于探讨血瘀证实质和活血化瘀作用机理的研究。     

2型糖尿病血瘀证血管内皮细胞损伤模型的研究

目的 建立2型糖尿病血瘀证的血管内皮细胞损伤模型.方法 取对数生长期的正常人脐静脉内皮细胞(ECV-304),干预分组如下:空白对照组(无血清的DMEM)、健康组(健康人血清)、糖尿病血瘀证组(糖尿病血瘀证患者血清)和糖尿病非血瘀证组(糖尿病非血瘀证患者血清).采用MTT法观察细胞活性;在倒置相差显微镜、扫描电镜和透射电镜下观察细胞形态的变化;应用放免法测定内皮素(ET)含量;硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量;利用双抗夹心ELISA法检测各组细胞培养上清液中内皮细胞蛋白C受体(EPCR)、血管内假性血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(sTM)的含量;应用激光扫描共聚焦显微镜,采用Fluo-3/AM作为荧光指示剂观察细胞内游离钙浓度的变化;并采用荧光探针标记的鬼笔环肽染色法观察细胞肌动蛋白微丝分布的差异.结果 ①10%浓度的糖尿病血瘀证组的OD值较健康组明显降低(P＜0.001);②糖尿病血瘀证组的ET水平比空白对照组和糖尿病非血瘀证组升高(P＜0.001);糖尿病血瘀证组的NO水平比空白对照组降低(P＜0.001);但和糖尿病非血瘀证组相比差异没有统计学意义(P＞0.05);③内皮细胞经过患者血清损伤后,糖尿病血瘀证组分泌的EPCR含量比空白对照组升高(P＜0.001),但低于糖尿病非血瘀证组(P＜0.001);糖尿病血瘀证组分泌的vWF和sTM含量比空白对照组升高(P＜0.001),和糖尿病非血瘀证组相比差异没有统计学意义(P＞0.05);④糖尿病血瘀证组胞浆内荧光分布不均匀,荧光强度高于正常对照组和糖尿病非血瘀证组(P＜0.001);⑤空白对照组和健康组细胞骨架微丝分布多规则清晰,保持着细胞的正常外形,糖尿病血瘀证组的细胞骨架微丝断裂且排列紊乱,糖尿病非血瘀证组细胞微丝断裂但排列较为规则.结论 应用2型糖尿病血瘀证患者血清干预ECV-304可以在体外表现出血管内皮细胞损伤的种种征象,初步建立一种病证结合的血瘀证细胞损伤模型.     

血府逐瘀汤对血瘀证大鼠血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的:研究血府逐瘀汤对血瘀证血管内皮细胞黏附分子表达的影响。方法:采用免疫组织化学和RT-PCR两种方法观察血府逐瘀汤不同剂量(高、中、低)对血瘀证(大鼠)血管内皮细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、血小板-内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。结果:模型组ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1、iNOS高表达,血府逐瘀汤能减少造模动物ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1、iNOS的表达,而且随着药物剂量的减少,各分子表达呈递增趋势,具有量效关系。结论:血府逐瘀汤能降低血瘀证大鼠血管内皮细胞黏附分子表达,且量效关系明显。     

妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘终末绒毛的光镜、电镜观察

本文对10例足月妊娠肝内胆汁淤积症胎盘和10例同期足月胎盘进行了光镜和电镜对比观察.提示妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘终末绒毛细胞滋养细胞增生、绒毛血管合体膜减少、合体芽增加.电镜下合体细胞微绒毛肿胀、稀少、粗面内质网普遍扩张,部分合体细胞线立体肿胀、溶酶体增加、胎儿毛细血管内皮细胞肿胀等改变     

血瘀证血管内皮细胞损伤的抗凝与纤溶障碍研究

【目的】探讨实验性血瘀证兔模型血管内皮细胞抗凝与纤溶功能的变化规律。【方法】复制去甲肾上腺素与牛血清白蛋白诱导的血瘀证兔模型 ,分离其主动脉血管内皮细胞进行原代和传代培养 ,检测模型动物体内血浆及体外细胞液中抗凝血酶Ⅲ (AT -Ⅲ )、组织型纤溶酶原激活物 (t -PA)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI)等抗凝和纤溶指标的变化。【结果】与正常组比较 ,血瘀证组兔血浆t-PA和AT -Ⅲ的活性降低 (P <0 .0 1) ,PAI的活性升高 (P <0 .0 1) ;血瘀证组原代培养液中的t -PA活性较正常组降低 (P <0 .0 5) ,PAI活性升高 (P <0 .0 5) ;血瘀证组传代培养液中t-PA、PAI活性与正常对照组的差异均无显著性(P >0 .0 5)。【结论】血管内皮细胞抗凝与纤溶功能障碍在血瘀证形成和发展过程中起着重要作用。     

活血化瘀方药对Poresky大鼠模型内皮细胞的影响

[目的]观察活血化瘀方药对Poresky多囊卵巢综合征（PCOs）大鼠模型内皮细胞功能及形态的影响。[方法]依照Poretsky法建立PCOS大鼠模型,随机分为中药组、模型组,并设立正常组作对照。测定各组血清FSH、LH、T、INs及血浆ET、PAI-1的水平,电镜观察内皮细胞形态及超微结构变化。[结果]模型组内皮细胞间的连接失去正常形态,基底膜不连续,细胞膜损伤、不完整;胞质内空泡明显增多,线粒体膨胀,嵴溶解、断裂、消失;细胞核聚集,异染色质增多。中药组主动脉内皮细胞间连接较紧密,线粒体无明显肿胀,嵴清晰,吞饮泡和溶酶体增多,胞质偶见空泡。模型组血浆PAI-1、ET比正常组增高,差异有显著性（分别为P〈0.01,P〈0.05）,中药组与模型组比较,ET、PAI-1降低（P〈0.05）;与正常组比较PAI-1水平无显著差异,ET增高（P〈0.05）。[结论]PCOS大鼠模型存在内皮细胞形态、超微结构改变,血浆ET、PAI-1升高,提示PCOS存在血瘀的微观病理基础。活血化瘀中药能够从形态学上修复PCOS大鼠损伤的内皮细胞,调整内皮细胞功能。     

血府逐瘀汤加减治疗冠心病血瘀证U波倒置的临床观察

[目的]观察血府逐瘀汤合黄芪加减治疗冠心病血瘀证U波倒置的疗效。[方法]72例冠心病血瘀证U波倒置患者随机分为治疗组和对照组,各36例,在常规西药治疗基础上,治疗组加用血府逐瘀汤合黄芪加减,疗程4周。[结果]治疗后,治疗组U波倒置改善情况明显优于对照组,差异具有显著性（P〈0．05）。[结论]血府逐瘀汤合黄芪加减治疗冠心病血瘀证U波倒置疗效肯定。     

慢性哮喘豚鼠及其在低氧干预下海马脑区超微结构的变化

目的 探讨慢性哮喘动物模型海马超微结构变化及其在低氧干预后的改变。方法 复制慢性哮喘动物模型，分为低压低氧(低压舱)治疗组、常压低氧吸人治疗组及不治组，并设正常对照组，电镜观察海马超微结构变化。结果 电镜下慢性哮喘豚鼠海马神经元粗面内质网扩张，线粒体脊断裂、模糊，突触小泡减少、突触后膜稍肿胀；星状、小胶质细胞增生、胞浆肿胀、空泡形成；血管周围间隙增宽、基底膜肿胀、模糊、管腔狭窄。低氧干预后海马神经元核仁明显，细胞器丰富，粗面内网轻度扩张，突触小泡较丰富，突触后膜较致密，突触间隙略显增宽，胶质细胞及血管未见明显病变。结论 反复发作的慢性哮喘可因缺氧致海马超微结构发生变化，经低压低氧及常压低氧治疗后因哮喘所致的海马超微结构损伤明显好转.     

肿瘤坏死因子-α在妊高征发病中的作用

目的：通过比较妊高征孕妇血清与肿瘤坏死因子－α（TNF－α）对血管内皮细胞的影响，探讨TNF－α在妊高征发病中的作用。方法：将培养的内皮细胞随机分为6个组：1组为正常培养基对照组，2组为TNF－α对照组（TNF－α的含量为400u/mL)。3组为正常孕妇血清对照组，4，5，6组分别为培养基中加有轻，中，重度妊高征孕妇血清组（孕妇血清的含量为30％ vol/vol)。然后观察各组的生长曲线，细胞DNA含量图像分析，2细胞形态，超微结构以及细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达情况。结果：（1）妊高征孕妇血清及TNF－α（400u/mL)抑制血管内皮细胞增殖的作用均是从加入这些因素第3天后开始，并且妊高征病情越重，抑制血管内皮细胞增殖越明显。3天内二者均表现为促增殖的作用。（2）光镜，电镜观察可看出行高征孕妇血清及TNF－α对血管内皮细胞有损伤作用（血管内皮细胞拉长，微绒毛变短甚至成泡状以及内质网扩张，线粒体凝聚等改变）。（3）妊高征孕妇血清和TNF－α还可使血管内皮细胞ICAM－1表达增强。结论：妊高征孕妇血清对血管内皮细胞有明显的损伤作用，这种损伤作用与孕妇血清中的TNF－α可能有关。在妊高征发病中TNF－α有重要的作用。但其确切的作用还有待进一步研究。     

补肾安胎冲剂对复发性自然流产小鼠蜕膜组织超微结构的影响

目的 观察补肾安胎冲剂对复发性自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）小鼠蜕膜组织血管、细胞形态及血管内皮细胞超微结构的影响。方法 采用DBA/2×CBA小鼠,按照Clark经典方法复制RSA小鼠模型。按妊娠顺序将小鼠随机分为正常妊娠组,模型组,西药组,补肾安胎冲剂高、中、低剂量组,每组10只,分别进行药物干预。光镜下观察蜕膜组织的血管和细胞形态,电镜下观察血管内皮细胞超微结构。结果 光镜下见模型组血管数量减少,蜕膜细胞胞浆明显水肿,部分核消失,细胞核固缩;补肾安胎冲剂高剂量组血管丰富且管壁完整,由多个血管内皮细胞环绕而成,小部分蜕膜细胞水肿,细胞核基本无坏死;补肾安胎冲剂中、低剂量组血管数量少于补肾安胎冲剂高剂量组,血管内皮细胞排列不整齐,部分蜕膜细胞胞浆水肿,空泡变,少数细胞核消失。电镜下见模型组血管壁不完整,血管内皮细胞结构不完整,细胞核呈梭形,粗面内质网、核糖体减少,部分线粒体已破坏;补肾安胎冲剂高剂量组血管壁完整,血管内皮细胞结构完整,核膜完整;胞浆中可见丰富粗面内质网及核糖体,线粒体结构完整、无肿胀变性,染色质分布均匀;补肾安胎冲剂中、低剂量组血管壁完整,部分血管内皮细胞肿胀,核膜完整,胞浆中粗面内质网扩张,核糖体轻度减少,部分线粒体肿胀、空泡变。结论 RSA模型小鼠存在母胎界面血管生成的障碍,补肾安胎冲剂可以修复RSA小鼠蜕膜组织中破坏的细胞结构,改善血管生成和细胞器完整度,发挥安胎作用。     

血瘀证兔血清对培养的血管内皮细胞活性因子基因表达的影响

【目的】探索血瘀证形成和发展过程中血管内皮细胞活性因子内皮素和一氧化氮 (NO)改变的分子机理。【方法】用半定量RT -PCR方法 ,观察血瘀证兔模型血清对体外培养的血管内皮细胞内皮素 (ET)和组成型NO合成酶 (constitutivenitricoxidesynthase ,cNOS)基因表达的影响。【结果】血瘀证动物模型血清导致体外培养的内皮细胞中ET - 1mRNA表达升高 (P <0 .0 1) ,cNOSmRNA表达下降 (P <0 .0 1) ,两者呈显著负相关 (r=- 0 .857,P <0 .0 1)。【结论】血管内皮细胞中ET基因高表达及cNOS基因低表达导致的二者平衡失调在血瘀证形成和发展过程中起着重要作用。     

川芎嗪对家兔血管内皮细胞修复的影响

【目的】观察川芎嗪对血管损伤后内皮细胞修复的作用 ,探讨其作用机理与环节 ,为显微血管外科提供新的用药依据。【方法】新西兰大耳白兔 2 4只 ,行右侧股动脉切断后即刻端端吻合造模 ,术后随机分成川芎嗪治疗组、肝素治疗组及空白对照组予处理 ,术后 1、 3、 7、 14d分别切取大白兔吻合段动脉 ,作电镜扫描检测 ,观察内皮细胞的生长情况并作组间比较。【结果】在促进血管吻合术后血管内皮细胞的修复 ,促进血流通畅方面川芎嗪组与肝素组相当 (P >0 .0 5) ,两者均优于空白组 (P <0 .0 5)。【结论】川芎嗪能促进血管损伤后内皮细胞的修复 ,在显微血管外科具有肯定的使用价值。     

血瘀证兔模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶 的基因表达及其分泌一氧化氮的变化

【目的】了解实验性血瘀证动物模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶(NOS)的基因表达及其分泌NO的变化。【方法】用半定量RT-PCR方法检测模型组体内血管内皮细胞及体外培养的细胞中组成型一氧化氮合酶mRNA的表达,并相应测定分泌的NO水平。【结果】与对照组比较,模型组兔体内血管内皮细胞中组成型NOS(cNOS)基因表达以及血浆和原代培养液中NO水平皆明显下降(P＜0.01),同期血浆中NO含量与内皮细胞中cNOSmRNA的表达水平呈正相关(r=0.739,P＜0.01)。两组间体外培养的传代细胞中cNOS基因表达及培养液上清中NO含量无明显差异(P＞0.05),但NO水平都比各自原代培养液中的明显升高(P＜0.01,P＜0.05)。【结论】短期内血瘀证兔模型体内内源性NO水平降低主要是cNOS基因表达下降导致的,随时间的延长,不排除诱导型NOS(iNOS)及体内其他因素对分泌NO的综合影响。     

丹参对兔脊髓损伤段钙、水含量改变的保护作用

目的 :了解复方丹参对损伤的脊髓组织的保护作用。方法 :采用改良Allen氏WD装置以 15 .0g冲击棒打击致伤兔L1 脊髓节段。术后实验组用复方丹参注射液静脉注射 ,对照组等量生理盐水静脉注射。术后 2h及 12h、2 4h取脊髓损伤段标本 ,分别采用干湿法、原子吸收光谱法测量脊髓损伤段水、钙含量。结果 :损伤脊髓后 ,伤区水和钙含量增高 ,应用复方丹参后水和钙含量得到改善。结论 :复方丹参对受伤脊髓段水、钙含量改变有一定保护作用     

依达拉奉对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨依达拉奉注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法：实验大鼠分为假手术对照组（A组）、缺血再灌注组（B组）和依达拉奉3个不同剂量治疗组（C1、C2、C3组）,观察各组大鼠肾脏缺血再灌注24h后血清及肾组织匀浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、血肌酐、血尿素氮和肾组织超微结构的改变。结果：同A组比较,B组缺血再灌注24h后,血清及肾组织匀浆MDA、血肌酐、血尿素氮显著升高（P〈0．01）,血清及肾组织匀浆SOD显著下降（P〈0．01）。使用依达拉奉治疗后,C组各组血清和肾组织匀浆MDA、血肌酐均低于B组（P〈0．01）;C组各组血清和肾组织匀浆SOD均高于B组（P〈0．01）;C组血尿素氮同B组血尿素氮之间无明显差异（P〉0．05）。透射电镜观察发现,依达拉奉治疗后肾组织超微结构的损伤明显减轻。结论：依达拉奉注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用。     

雌二醇对内皮损伤后血管重塑的影响

目的 :观察雌二醇对血管内皮损伤后血管重塑的作用及可能机理。方法 :将雌性家兔行卵巢切除术后随机分为A、B、C组 ,A组每日注射 17 β雌二醇 40 0 μg/kg ,B组注射等量生理盐水 ,C组不注射。注射雌二醇 1周时3组均行右侧髂动脉近端内皮剥脱术 ,远端保持血管内皮完整 ,术后测量髂动脉管腔面积 (LA) ,内膜面积 (IA)、内弹力板环绕面积 (IEMA)、外弹力板环绕面积 (EEMA)。测定血管壁内皮剥脱处胶原纤维含量及分析Ⅰ /Ⅲ胶原比。结果 :A组较B、C组LA、IEMA、EEMA显著增大 ,负性血管重塑率显著减小。A组内皮剥脱处胶原含量较B、C组显著减少 ,三组之间Ⅰ /Ⅲ胶原比无显著差异。结论 :雌二醇能够改善血管重塑 ,减轻内皮损伤后的血管狭窄 ,这种良性血管重塑作用可能与雌激素可减少血管壁胶原含量 ,改善细胞外间质 (ECM)的代谢有关。     

温脉通对高脂致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究温脉通对高脂损伤血管内皮细胞的保护作用,以探讨其治疗动脉硬化闭塞症(ASO)的机制。方法用高脂血清造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型,以温脉通及其温经益气拆方和活血通脉拆方含药血清进行干预。光镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性;取细胞上清液,以分光光度计比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)含量,硝酸还原酶法测定NO含量;放射免疫测定法测定内皮素(ET)含量。结果温脉通及其拆方均能使高脂损伤的HUVEC形态趋于正常,活性增强,细胞膜损伤减轻;并能使HUVEC培养上清中NO含量增加而ET含量减少。两拆方单独的作用均比全方弱。结论温脉通对高脂损伤的血管内皮细胞有保护作用,这可能是其治疗ASO的机制之一。温脉通全方对内皮细胞损伤的保护作用比其温经益气拆方和活血通脉拆方强,说明组方具有合理性。     

低能量激光对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响

目的 观察低能量激光照射对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响.方法 传代的兔角膜内皮细胞分为两组:一组为处理组,采用低能量激光照射,1次/d,连续7 d;另外一组为对照组,不行激光照射.通过扫描电镜及透射电镜等检测观察兔角膜内皮细胞经激光照射前后形态学超微结构的变化.结果 扫描电镜和透射电镜检测表明,与对照组相比,激光照射组内皮细胞表面可见丰富的微绒毛,细胞核较大,细胞核膜结构清晰,核仁明显且数目较多,染色质丰富,胞浆内细胞器发达.结论 角膜内皮细胞经低能量激光照射后的超微结构变化表明其增殖活性提高.     

兔胚胎卵巢细胞团同种异体移植研究

本实验随机将18只NZW雌兔分为4组。A组(5只):系内移植,供、受体同系,B组(5只):系间移植,供体为NZW封闭群,受体为NZW近交系;C组(5 只);系间移植,供、受体情况同B组,移植物预培养2～3天;D组(3只):移植部位注射等体积培养液,其余条件同前。实验结果显示;①A、B、C3组受体兔在卵巢细胞团移植后,血浆E2水平明显上升(P<0.01),提示移植物有E2分泌;移植后30天内,A组较B、C组E2水平高(P<0.05或<0.01),提示同系移植卵巢功能恢复校好;移植后30～60天,C组E2较B组高(P<0·01),提示培养后移植优于未培养直接移植。②同期移植部位有生长卵泡存在,生殖道组织学也与此结果吻合。