Bcl-2家族不同分子分别介导地塞米松在不同类型人骨髓瘤细胞系上的凋亡效应

目的：研究3种Bcl-2家族抗凋亡蛋白（Bcl-2,Bcl-xl,Bcl-1)在地塞米松（dexamethasone,DEX)诱导的不同类型人骨髓瘤细胞系凋亡过程中的作用。方法：采用MTT方法观察DEX对骨髓瘤细胞生长的影响。采用碘化丙胺（propidium iodide,PI)染色和流式细胞术分析骨髓瘤细胞经DEX处理后的凋亡情况，采用免疫印迹方法检测Bcl-2家族3种抗凋亡蛋白在骨髓瘤细胞凋亡过程中的表达改变情况。结果：DEX能够诱导IL－6依赖型骨髓瘤细胞系XG－7和IL－6非依赖型骨髓瘤细胞系Sko-007发生典型的细胞亡反应。同时XG－7细胞中Bcl-XL和Mcl-1的表达在DEX处理后明显下调，而同样条件下Sko-007细胞中则出现了Bcl-2的降解。结论：Bcl-2家族不同抗凋亡蛋白可分别介导DEX在不同骨髓瘤细胞系上的凋亡效应。     

IL-6相关转录因子在人骨髓瘤细胞系IL-6信号转导中的作用

为研究IL 6在人骨髓瘤细胞系的信号传递过程中IL 6相关转录因子的活化状态。本研究在IL 6刺激前后提取人骨髓瘤细胞Sko 0 0 7的细胞核蛋白 ,分别以APRE、NF IL 6/ATF、NF κB、CRE、AP 1作为探针 ,采用凝胶阻滞电泳 (electro phoret icmobilityshiftassay ,EMSA )方法检测IL 6刺激前后Sko 0 0 7细胞中与以上DNA反应成分对应的转录因子的活化情况。结果显示 ,NF IL 6和NF κB在正常培养的Sko 0 0 7细胞中组成性激活 ;IL 6刺激前后STAT3和NF IL 6的活化状态有明显改变 ;CREB和NF κB的活化状态无明显变化 ;AP 1的激活情况与细胞的生存状态有关。表明在Sko 0 0 7细胞中与IL 6信号传递密切相关的转录因子是STAT3和NF IL 6;对细胞本身生存至关重要的转录因子是NF IL 6和NF κB。     

地塞米松对Graves病甲状腺细胞的影响

为进一步探讨地塞米松(DEX)治疗Graves病(GD)的机制, 以不同浓度DEX作用单层培养的GD甲状腺上皮细胞(TEC), 应用MTT法检测TEC的增殖抑制情况.用Tunnel法、S-P法检测DEX刺激前、后TEC的凋亡率及Fas表达阳性率. 结果表明: ①10-6-10-2mol/L的DEX可直接杀伤TEC, 对TEC具有明显的增殖抑制作用; ②DEX可时间依赖性地促进TEC Fas表达并诱导TEC凋亡; ③Fas阳性细胞百分率与凋亡细胞百分率呈正相关. 提示DEX可直接杀伤TEC及促进TEC表达Fas, 进而诱导其凋亡.     

米托蒽醌对HL-60细胞的促凋亡效应

目的 :探索米托蒽醌 (MTN)促HL 6 0细胞凋亡效应及其机理。方法 :取对数生长期HL 6 0细胞 ,不同浓度MTN作用不同时间后 ,利用MTT法、透射电镜、DNA电泳、流式细胞术观察MTN对HL 6 0细胞的抑制效应、促凋亡效应及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达情况。结果 :(1)毫微克级的MTN对HL 6 0细胞有明显的抑制效应 ,且效应具有时间、剂量依赖关系。(2 )MTN作用后的HL 6 0细胞透射电镜观察胞膜完整、出现核碎裂、凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现 2 0 0bp左右的梯形条带。 (3)Bcl 2、Bax蛋白表达 :MTN作用于HL 6 0细胞相同时间 ,Bcl 2蛋白及Bcl 2蛋白与Bax蛋白比值 (Bcl 2 Bax)随MTN作用时间延长而下降。结论 :MTN具有诱导HL 6 0细胞凋亡作用 ,此过程中伴Bcl 2下调和Bcl 2 Bax的降低。提示MTN可能通过Bcl 2途径诱导HL 6 0细胞凋亡     

胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制

目的 :探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制。方法 :将培养的妊娠早期滋养层细胞 ,分为正常对照组(细胞 +培养液 )、H2 O2 组 (细胞 +培养液 +H2 O2 )和胰岛素 +H2 O2 组 (细胞 +H2 O2 +胰岛素 )。采用透射电镜观察及流式细胞术 ,观察H2 O2 诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2 O2 诱导的细胞凋亡的抑制作用。并检测胰岛素对滋养细胞caspase 3的活性及Bcl 2蛋白表达的影响。结果 :H2 O2 可诱导培养的滋养细胞凋亡 ,透射电镜下可见特征性的细胞核改变。胰岛素可显著抑制H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,流式细胞仪检测其凋亡率较H2 O2 组显著下降 (P <0 .0 1)。H2 O2 组滋养细胞中caspase 3的活性较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的表达则较对照组显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :胰岛素可明显抑制H2 O2诱导的滋养细胞凋亡 ,其机制可能与降低caspase 3的活性和促进Bcl 2蛋白的表达有关     

MDS患者细胞因子、端粒酶活性及凋亡相关蛋白检测与意义

探讨骨髓细胞凋亡和MDS患者无效造血的分子机制。采用ELISA法检测血清细胞因子水平。PCR ELISA法测定骨单个核细胞端粒酶活性。流式细胞仪分析Fas和Bcl 2表达水平。结果 :初发各亚型MDS患者的血清TNF α水平均高于正常对照 (P <0 0 5 ) ,MDS患者骨髓单个核细胞或基质细胞分泌TNF α水平均高于正常对照组。血清IL 1α和G CSF升高者分别为10 7% (3/ 2 8)例和 5 3 6 % (15 / 2 8)。MDS患者血清IL 8和IL 6高于正常对照组 ,各亚型之间无明显差别。在MDS向恶性克隆演变的过程 ,端粒酶活性水平随着恶性演变而逐渐升高。随着MDS患者恶性类型的演变 ,Fas基因表达逐渐降低 ,Bcl 2表达则逐渐升高。负性造血因子TNF α升高和抗凋亡Bcl 2的消长与MDS骨髓细胞凋亡有关。     

狼疮性肾炎患者外周血中IL-18的表达以及FK506、CsA和DEX的抑制作用

目的 :探讨IL 18在活动性狼疮性肾炎 (LN)患者中的表达以及免疫抑制剂FK5 0 6、环孢霉素A(CsA)和地塞米松 (DEX)对其表达的抑制作用。方法 :取 16例活动性LN患者和 10例正常人空腹静脉全血 ,分为未刺激组、脂多糖 /植物血凝素(LPS/PHA)刺激组、LPS/PHA FK5 0 6组、LPS/PHA CsA组和LPS/PHA DEX组在体外培养 2 4h ,采用ELISA法检测培养上清中IL 18的水平 ,应用半定量的RT PCR检测全血培养细胞中IL 18mRNA的表达 ,以及FK5 0 6、CsA和DEX对其表达的抑制作用。结果 :活动性LN患者全血培养的细胞自发及以LPS/PHA刺激后 ,IL 18mRNA和其蛋白的表达显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ;FK5 0 6、CsA和DEX对LPS/PHA刺激的LN患者全血培养细胞IL 18mRNA及其蛋白表达的抑制作用明显大于对正常对照组的抑制作用。结论 :IL 18在活动性LN患者LN的发病机制中可能起着重要的作用 ,抑制IL 18的产生有望成为活动性LN治疗的一个新途径     

甘草酸二铵对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的 :观察甘草酸二铵 (DG)对大鼠心肌缺血再灌注 (IR)损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法 :雄性wistar大鼠2 4只 ,随机分为假手术组 ;IR组 ;DG组 ( 2 0mg/kg)。每组 8只。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带荧光的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法、westernblot法和免疫组化法检测大鼠心肌缺血 3 0min再灌注 6h心肌凋亡细胞及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的变化。结果 :与假手术组比较 ,IR组心肌细胞凋亡指数 (AI)、Bax蛋白的阳性表达明显增加 (P均 <0 .0 1) ;与IR组比较 ,DG治疗后AI和Bax蛋白的阳性表达明显下降 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的阳性表达明显上调 (P <0 .0 1)。结论 :DG具有保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用 ,其作用机制可能与其下调Bax蛋白表达 ,上调Bcl 2蛋白表达抑制心肌细胞凋亡有关     

雷利度胺单独及联合硼替佐米抑制KM3细胞生长、诱导凋亡的机制研究

目的: 观察雷利度胺(lenalidomide)单药及联合硼替佐米(bortezomib)诱导多发性骨髓瘤(MM)KM3细胞凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法: 应用台盼蓝拒染法检测单药雷利度胺及与bortezomib联合对KM3细胞生长抑制的影响;应用流式细胞术检测细胞凋亡;应用RT-PCR方法检测p65 mRNA的表达情况;应用Western blotting检测P65(protein 65)、pP65(phosphorylated p65)、PARP 及caspase-3、-8、-9蛋白的表达变化。结果: 雷利度胺可以抑制KM3细胞生长,抑制p65 mRNA及其蛋白的表达,并激活caspase-8、-3及PARP,诱导细胞凋亡。雷利度胺与bortezomib联合时有协同促细胞凋亡作用。结论: 雷利度胺单独作用于KM3细胞可以抑制其生长并诱导细胞凋亡,与bortezomib联用时有协同效应。     

let-7i通过抑制K-Ras、 Bcl2的表达降低乳腺癌细胞化疗耐药性

目的探讨微小RNA let-7i对人乳腺癌耐药细胞耐药性的影响及可能的分子机制。方法反转录PCR检测MCF-7乳腺癌细胞、顺铂(CDDP)耐药(MCF-7/CDDP)乳腺癌细胞、阿霉素(ADR)耐药MCF-7乳腺癌细胞(MCF-7/ADR)中let-7i的相对表达水平, CCK-8法检测MCF-7、 MCF-7/CDDP、 MCF-7/ADR乳腺癌细胞对ADR化疗敏感性的差异;过表达或抑制let-7i后,采用CCK-8法和平板克隆实验检测对ADR的化疗敏感性的变化;过表达let-7i后,流式细胞术检测ADR对乳腺癌耐药细胞凋亡的影响、 ELISA检测乳腺癌耐药细胞胱天蛋白酶3/9(caspase-3/9)活性,反转录PCR检测细胞Bcl2、 K-Ras的mRNA水平, Western blot法检测Bcl2、 BAX、 K-Ras蛋白水平。结果与MCF-7细胞相比, let-7i在乳腺癌耐药细胞中的表达下调,且与化疗耐药性负性相关;与阴性对照组相比,过表达let-7i可以提高乳腺癌耐药细胞的存活率和集落形成能力,促进ADR诱导的乳腺癌耐药细胞凋亡并增加caspase-3/caspase-9活性;随ADR浓度的增加, Bcl2蛋白水平降低、 BAX蛋白水平升高,且过表达let-7i后,显著抑制耐药细胞中Bcl2和K-Ras的表达。结论耐药乳腺癌细胞let-7i水平下调,与乳腺癌的化疗耐药负相关,可能通过抑制K-Ras、 Bcl2的表达进而抑制乳腺癌耐药细胞的耐药性。     

cAMP对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞增殖的抑制作用

目的 研究ＰＫＡ途径激活（或胞内ｃＡＭＰ水平升高）后对人骨髓瘤细胞的ＩＬ－６信号转导功能及细胞生长的影响。方法 采用ＰＫＡ途径激动剂Ｆｏｓｋｏｌｉｎ（ＦＫ）和ｃＡＭＰ类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ刺激人骨髓瘤细胞骨－Ｓｋｏ－００７,分别通过ＭＴＴ方法和凝胶阻滞电泳（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ,ＥＭＳＡ）方法检测ＦＫ和８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对Ｓｋｏ细胞的生长及其Ｉ     

IL‐15 regulates Bcl‐2 family members Bim and Mcl‐1 through JAK/STAT and PI3K/AKT pathways in T cells

Maintenance of T cells is determined by their survival capacity, which is regulated by Bcl‐2 proteins. Cytokines signalling through the common gamma chains such as IL‐2, IL‐7 and IL‐15 are important for T‐cell survival but how these cytokines determine the expression of Bcl‐2‐family proteins is not clear. We report signalling events of cytokines that regulate expression of two key Bcl‐2 proteins, pro‐apoptotic Bim and anti‐apoptotic Mcl‐1, in resting C57BL/6 mouse T cells. IL‐2, IL‐7 and IL‐15 inhibited apoptosis but paradoxically induced the expression of Bim, countered by concomitant induction of Mcl‐1. Bim induction by IL‐15 was found at the mRNA and protein levels and depended on both JAK/STAT and PI3K signals. A new STAT5‐binding site was identified in the Bim promoter, which was occupied by STAT5 upon IL‐15 stimulation. Although it also depended on JAK/STAT‐ and PI3K signalling, Mcl‐1 regulation was independent of Mcl‐1 mRNA levels and of regulation of protein stability, suggesting translational regulation. Concurrent CD3 signals inhibited some of the IL‐7 effect but not the IL‐15 effect on Bcl‐2 proteins. The data suggest that cytokines induce Bim and prime T cells for apoptosis, but also inhibit apoptosis by stabilising Mcl‐1. Later downregulation of short‐lived Mcl‐1 may induce efficient, Bim‐dependent apoptosis.     

IL-3、G-CSF拮抗Ara-c诱导的白血病细胞凋亡的研究

目的 研究不同Ａｒａ－ｃ浓度时白血病细胞凋亡的情况和Ｇ－ＣＳＦ,ＩＬ３＋Ｇ－ＣＳＦ对其的拮抗作用,方法：分别用不同剂量Ａｒａ－ｃ诱导白血病细胞凋亡,同时加Ｇ－ＣＳＦ,ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ作为拮抗剂,分Ｇ－ＣＳＦ,ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ,Ａｒａ－ｃ三组。通过形态学,ＤＮＡ电泳,蛋白电泳免疫印迹法观察白血病细胞的凋亡情况,结果：随着Ａｒａ－ｃ剂量的增加,凋亡细胞数增高,Ｇ－ＣＳＦ能拮抗低剂量及常规剂量Ａ     

Glucocorticoids induce basophil apoptosis

BACKGROUND: Induction of apoptosis represents an important mechanism by which glucocorticoids (GCCs) exert their anti-inflammatory properties. The effects of GCCs on apoptosis have been determined in various immune cells and found to vary among different cell types. On the other hand, the effects of GCCs on apoptosis of basophils, active participants in allergic inflammation, have remained obscure. OBJECTIVE: The objective of this study was to investigate the effects of GCCs on basophil apoptosis. METHODS: Basophils were highly purified (purity, >97%) by Percoll density gradient centrifugation followed by negative selection. Cell status was determined by their ability to bind annexin V and exclude propidium iodide. DNA fragmentation was determined by flow cytometry. RESULTS: Dexamethasone (DEX) significantly accelerated the decrease in live cells and increased the number of apoptotic cells in a time-dependent fashion. Light microscopy as well as DNA fragmentation assay confirmed the induction of apoptosis by DEX. A half-maximal effect was observed in a DEX concentration range from 10(-9) to 10(-8) mol/L. Sex steroids did not induce basophil apoptosis at all. DEX also induced basophil apoptosis in the presence of low doses of IL-3. CONCLUSION: GCCs exert potent apoptogenic effects on basophils. GCC-mediated apoptogenic effects on basophils might have implications with respect to the mechanism of action of this class of drugs in allergic disorders.     

右美托咪定对口腔鳞癌细胞生长和运动能力的调节

目的 探究右美托咪定 ( dexmedetomidine, DEX) 对口腔鳞癌 ( oral squamous cell carcinoma, OSCC) 细胞生长和运动的调节作用。 方法 人 OSCC 细胞 CAL27 分为 DEX0、 5、 10 及 20 nmol / L 组。 运用 克隆形成实验和 BrdU 实验评估细胞增殖; Transwell 法检测细胞侵袭; 流式细胞术检测细胞凋亡率; ELISA 检测超氧化物歧化酶 (SOD) 和丙二醛 (MDA) 水平; 微管形成实验评估细胞微管形成能力; Western 印 迹检测血管内皮生长因子 (VEGF)、 纤连蛋白 ( FN)、 B 细胞淋巴瘤 2 ( Bcl-2) 和 Bcl-2 相关 X 蛋白 (Bax) 的表达。 结果 与对照组比较, DEX 处理可显著降低 CAL27 细胞克隆形成率和 BrdU 阳性细胞率, 减少侵袭细胞数和微管结节数, 下调 VEGF 和 FN 表达水平。 同时 DEX 处理可促进氧化应激, 提高 Bax / Bcl-2 比率。 结论 DEX 处理可抑制 CAL27 细胞增殖、 侵袭和微管形成能力, 并促进其氧化应激和凋亡。     

Molecular mechanisms of 3,3′‐dichlorobenzidine‐mediated toxicity in HepG2 cells

3,3′‐Dichlorobenzidine (DCB) (CAS 91–94‐1), a synthetic, chlorinated, primary aromatic amine, is typically used as an intermediate in the manufacturing of pigments for printing inks, textiles, paints, and plastics. In this study, we found that DCB could significantly inhibit the cell viability of HepG2 cells in a concentration‐dependent manner. Flow cytometry revealed that DCB induced G2/M‐phase arrest and apoptosis in HepG2 cells. DCB treatment dramatically induced the dissipation of mitochondrial membrane potential (Δψ_m) and enhanced the enzymatic activities of caspase‐9 and caspase‐3 whilst hardly affecting caspase‐8 activity. Furthermore, Western blotting indicated that DCB‐induced apoptosis was accompanied by the down‐regulation of Bcl‐2/Bax ratio. These results suggested that DCB led to cytotoxicity involving activation of mitochondrial‐dependent apoptosis through Bax/Bcl‐2 pathways in HepG2 cells. Furthermore, HepG2 cells treated with DCB showed significant DNA damage as supported by the concentration‐dependent increase in olive tail moments as determined by the comet assay and by concentration‐ and time‐dependent increase in histone H2AX phosphorylation (γ‐H2AX). Two‐dimensional‐difference gel electrophoresis (2D‐DIGE), combined with mass spectrometry (MS), was used to unveil the differences in protein expression between cells exposed to 25 µM or 100 µM of DCB for 24 hr and the control cells. Twenty‐seven differentially expressed proteins involved in DNA repair, unfolded protein response, metabolism, cell signaling, and apoptosis were identified. Among these, 14‐3‐3 theta, CGI‐46, and heat‐shock 70 protein 4 were confirmed using Western blot assay. Taken together, these data suggest that DCB is capable of inducing DNA damage and some cellular stress responses in HepG2 cells, thus eventually leading to cell death by apoptosis. Environ. Mol. Mutagen. 55:407–420, 2014. © 2014 Wiley Periodicals, Inc.