铅对三叉神经细胞胞内游离钙[Ca^2＋]i及电压依赖性钙通道ICa的影响

目的 观察铅对SD大鼠三叉神经细胞内游离钙的影响及其对电压依赖性钙通道作用,以探讨铅对三叉神经细胞毒性作用的机制.方法 用全细胞膜片钳方法检测铅对三叉神经细胞电压依赖性钙通道的作用,并用激光共聚焦和FLUO-3/AM荧光探针标记技术,从单个细胞水平检测铅对胞内游离Ca2 瞬间动态变化的影响.结果 铅可致三叉神经细胞内游离钙[Ca2 ]i升高,铅又可抑制三叉神经细胞电压依赖性钙通道电流ICa.结论 铅致三叉神经细胞内游离钙[Ca2 ]i升高作用与胞内钙库释放有关;铅抑制三叉神经细胞电压依赖性钙通道ICa作用与其抑制高电压激活(HVA)钙通道有关.     

刺尾鱼毒素对LLC-PK1细胞的毒性及钙通道阻滞剂的拮抗效应

目的研究刺尾鱼毒素(MTX)的细胞毒性及钙通道阻断剂的拮抗效应,为探讨可能的防治途径提供依据.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测MTX对细胞的毒性效应及荧光分光光度法测定胞浆内游离Ca2+的浓度.结果 MTX对LLC-PK1细胞的毒性效应有良好的剂量和时间效应关系.MTX 8 ng/ml作用3 h已呈现明显的毒性效应,随着MTX剂量的增加,细胞存活率明显降低,与对照组相比差异有极显著性.随着MTX剂量的增加和作用时间的延长其毒性逐渐增大.Ca2+通道拮抗剂维拉帕米5(10-5 mol/L、硝苯吡啶1(10-4 mol/L能明显拮抗MTX所致LLC-PK1细胞的Ca2+内流;维拉帕米和硝苯吡啶 1(10-5 mol/L、5(10-5 mol/L、1(10-4 mol/L均能够明显降低MTX引起的细胞毒性死亡,提高细胞的存活率.结论 MTX的细胞毒性可能是由于细胞内Ca2+浓度升高引起,Ca2+通道拮抗剂对MTX引起的细胞损伤有一定的保护作用.     

心肌细胞钙调节与心力衰竭

钙离子在心肌细胞的功能与代谢活动中发挥着关键性的调节作用。静息状态下 ,心肌细胞内游离Ca2 +浓度约 0 .1 μmol/L ,心肌收缩时 ,胞浆游离Ca2 +浓度可达 1 0 μmol/L。胞浆游离Ca2 +浓度随着心动周期的变化是依靠胞膜和胞内多个钙转运系统的共同调节来维持的 ,钙转运失常可引起心功能障碍甚至心力衰竭。本文着重介绍心肌细胞钙转运的调节机制及其在心力衰竭时的变化。1　心肌钙转运及其调节1 1　心肌细胞膜 (sarcolemma ,SL)的钙转运系统1 1 1　钙通道 (Ca2 +channel)　 (1 )L型 (longlast ing)钙通道 :①分布 :L型钙通道广泛分布…     

钙通道与妊娠期高血压疾病关系的研究进展

血管平滑肌细胞膜上钙通道的正常活动是其兴奋舒缩过程的关键,并参与维持血管的基本紧张度。有研究表明妊娠期高血压疾病患者胞浆内游离Ca2 浓度升高,这可能与钙通道的开放增加引起细胞外Ca2 内流增多有关。另外,缺氧、内源性血管收缩物质、蛋白激酶及环磷酸腺苷等亦可通过对钙通道的间接作用升高胞浆内Ca2 浓度,引起血管收缩,血压升高。故推测妊娠期高血压疾病的发生与平滑肌细胞膜上钙通道的改变相关。     

钙通道与妊娠期高血压疾病关系的研究进展

血管平滑肌细胞膜上钙通道的正常活动是其兴奋舒缩过程的关键，并参与维持血管的基本紧张度。有研究表明妊娠期高血压疾病患者胞浆内游离Ca2^2 浓度升高，这可能与钙通道的开放增加引起细胞外Ca2^2 内流增多有关。另外，缺氧、内源性血管收缩物质、蛋白激酶及环磷酸腺苷等亦可通过对钙通道的间接作用升高胞浆内Ca2^2 浓度，引起血管收缩，血压升高。故推测妊娠期高血压疾病的发生与平滑肌细胞膜上钙通道的改变相关。     

双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道电流影响

目的 探讨双酚A对大鼠背根神经节(DRG)神经元钙离子通道影响。方法 SD大鼠,周龄4～6周,采用酶消化法急性分离大鼠背根神经节神经元,分别采用全细胞膜片钳技术和激光共聚焦技术记录钙电流和KCl激发钙瞬变的变化。结果 双酚A(0.1、1、10、100μmol/L)呈浓度依赖性抑制大鼠背根神经节神经元钙电流,对钙通道的半数最大抑制浓度(IC50)为11.41μmol/L;10μmol/L双酚A显著改变Ca²⁺通道的激活特性,电流激活曲线去极化方向移动(P<0.05),该浓度双酚A同样可以抑制50 mmol/L KCL激发瞬时胞内钙浓度增加。结论 双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道具有抑制作用。     

甲基汞诱导海马神经细胞凋亡及其机制研究

目的 研究甲基汞对海马神经元的损伤及致凋亡作用,并初步探讨甲基汞神经毒性的机制.方法 以5 d内新生SD大鼠海马神经元为实验对象,用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测甲基汞对培养的海马神经细胞活性的影响,原位末端标记(TUNEL)法和流式Annexin V-FITC-PI法检测甲基汞诱导海马细胞凋亡细胞数和凋亡百分率,并用激光共聚焦技术,从单个细胞水平检测甲基汞对胞内游离Ca2 瞬间动态变化的影响.结果 MMT法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h对培养的海马神经细胞杀伤率为(22.90±2.77)%(n=7).TUNEL法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h组海马神经元凋亡指数[(34.45±1.30)%,n=10]高于溶剂对照组[(6.01±0.64)%,n=10],差异有统计学意义(P＜0.01).流式Annexin V-FITC-PI法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h诱导海马神经细胞凋亡率为(51.20±4.98)%(n=5).即时染毒0.01、0.1、1 μmol/L甲基汞,使海马神经元细胞内游离钙离子浓度分别增加(5.58±2.37)%(n=5),(82.71±20.42)%(n=4)和(246.38±64.77)%(n=4).预孵育硝苯的平可延缓甲基汞升钙作用的起效时间并降低胞内钙离子浓度增加的幅值.结论 甲基汞对培养的海马神经细胞的急剧升钙作用可能参与了甲基汞的致细胞损伤和诱导凋亡作用,并且可能与细胞膜上的电压门控钙通道有关.     

某些环境和生产性粉尘颗粒对大鼠背根神经元HVA钙通道的影响

目的分析呼吸系统感觉神经细胞、肺泡巨噬细胞在不同粉尘颗粒作用下HVA钙通道电流的变化,探讨它在粉尘性炎症中可能发挥的作用。方法用呼吸性粉尘采样器采集焦炉逸散物、钢铁厂、城区大气和清洁区大气颗粒物,加上标准石英,共5种粉尘配成浓度为0、5、15、45、135μg/ml的悬液,对大鼠背根神经元(DRG)和肺泡巨噬细胞(AM)体外染尘;运用膜片钳技术记录全细胞高电压激活(HVA)钙通道电流。结果石英组DRG HVA最大激活钙电流(Ica)增大,且随浓度增加而升高,当浓度达到135μg/ml时,Ica为-95.89±38.82 pA/pF,明显高于阴性对照组和低剂量组(P<0.05),存在一定的剂量反应关系(R2=0.99)。焦炉逸散物5μg/ml组和钢铁厂粉尘颗粒135μg/ml组HVA钙电流最大激活斜率明显高于对照组(P<0.05);石英、城区和东湖大气颗粒物对HVA钙电流最大激活斜率的影响不明显。5种尘均能引起V1/2显著增大(P<0.05),向正值方向移动约4~6 mV。本研究未能记录到AM电压依赖性钙电流。结论各粉尘颗粒导致DRG HVA钙通道的电流变化不一,它可能作为信号而引发不同的后续生物效应。     

双酚A对高电压激活钙通道亚型电流的影响

目的探讨双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道各亚型的影响。方法选择50只健康4~6周龄清洁级SD大鼠,采用Ⅰ型胶原酶(4 mg/L)和Ⅰ型胰蛋白酶(1.5 mg/L)消化法分离背根神经节(DRG)神经元,以L、N、P/Q型钙通道阻断剂硝苯地平(nifedipine,10μmol/L)、乙酸齐考诺肽(ω-conotoxin MVIIA,2μmol/L)、ω-芋螺毒素(ω-contoxin MVIIC,2μmol/L)预孵育神经元20 min,特异性阻断通道电流,记录电流前即时通过灌流系统加入10μmol/L BPA,采用全细胞膜片钳方法记录钙电流。结果双酚A对各亚型通道均有抑制作用,其中,以L型钙通道为主。阻断L型钙通道,10μmol/L BPA对钙电流的抑制率由(53.22±11.00)%降低至(14.02±5.51)%,差异有统计学意义(P0.05);BPA使L型钙通道电流密度(p A/p F)峰值由-30.54±3.92减小到-20.7±3.92,差异有统计学意义(P0.05)。阻断N、P/Q型钙通道,对钙电流的抑制率由(53.22±11.00)%分别降低至(26.90±12.33)%和(25.66±5.99)%,差异有统计学意义(P0.05)。结论双酚主要通过抑制L钙通道亚型,抑制钙离子电流。     

茶多酚对甲基汞致大鼠脑皮质神经元钙超载及N-甲基-D-天冬氨酸受体异常表达的拮抗作用

目的探讨茶多酚(tea polypheonols,TP)对甲基汞(methylmercury,Me Hg)所致大鼠大脑皮质神经元钙超载及N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体异常表达的拮抗作用及机制。方法进行大鼠大脑皮质原代神经元培养,细胞成熟后给予0.01、0.1、1、2μmol/L Me Hg Cl分别染毒0.5、1、3、6、12 h,通过测定细胞活力选择1μmol/L Me Hg Cl暴露6 h作为Me Hg Cl染毒组进行TP预处理及其他指标测定。通过测定细胞活力选择5、10、20μmol/L TP预处理3 h作为TP预处理组,并测定神经元内ROS和游离Ca2+水平、钙蛋白酶活力及NR1、NR2A、NR2B m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,随着Me Hg Cl染毒剂量的升高,神经元细胞活力逐渐降低,呈剂量-效应关系,其中1μmol/L Me Hg Cl暴露6 h组的细胞活力为对照组的53.15%,接近IC50。TP预处理后,与1μmol/L Me Hg Cl暴露6 h组比较,10、20μmol/L TP预处理组细胞活力明显升高(P0.05或P0.01)。Me Hg Cl导致神经元ROS、细胞内游离Ca2+水平及钙蛋白酶活力升高,NR1、NR2A m RNA及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);TP预处理对上述指标的拮抗呈剂量-效应关系,与1μmol/L Me Hg Cl组比较,神经元ROS、细胞内游离Ca2+水平及钙蛋白酶活力降低,NR1、NR2A m RNA及蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 TP对Me Hg所致大鼠脑皮质神经元毒性、细胞内钙超载及NMDA受体异常表达均有一定的拮抗作用。     

甲基汞对大脑皮层神经细胞内游离钙的影响

目的　研究甲基汞对急性分离的大脑皮层神经细胞内游离Ca2 水平的影响。方法　采用钙离子指示剂Fura 2双波长荧光检测技术。结果　 (0 10～ 5 0 0 )× 10 -6mol/L甲基汞可使大脑皮层神经细胞内游离Ca2 水平显著升高 ,且有剂量 效应关系。甲基汞升高神经细胞内游离Ca2 的作用与胞外Ca2 大量内流和胞内储Ca2 释放有关 ,且以胞外Ca2 内流为主。胞外Ca2 内流与N 甲基 D 天冬氨酸受体门控Ca2 通道以及电压门控Ca2 通道有关 ,而与电压依赖性Na 通道无关。结论　甲基汞可使神经细胞内游离Ca2 浓度异常升高 ,且与Ca2 通道有密切关系。     

2,5-己二酮对运动神经元钙稳态的影响

目的 研究正己烷代谢产物2,5-己二酮对运动神经元钙稳态的影响,探讨正己烷中毒致周围神经损伤的机制.方法 对运动神经元细胞系VSC4.1细胞不同浓度的2,5-己二酮体外染毒,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活性的变化;同时检测Ca^2＋-Mg^2＋ATP酶和Na^＋-K^＋-ATP酶活力.以Fluo-3/AM为荧光指示剂,激光共聚焦方法检测细胞内游离钙浓度的瞬时变化状况;用流式细胞仪检测细胞内钙平均浓度的变化.结果 经2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 mmol/L浓度的2,5-己二酮对VSC4.1细胞染毒后与对照组比较,Ca^2＋-Mg^2＋ATP酶和Na^＋-K^＋-ATP酶的活力均下降.33.5 mmol/L的2,5-己二酮可在10 s内引起VSC4.1运动神经元细胞内钙浓度升高,40s后恢复到基线水平.VSC细胞与2,5-己二酮接触后即刻引起细胞内钙水平的增加,10 min后达到最高.结论 2,5-己二酮可能通过干扰细胞钙稳态产生神经毒性.     

铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响。结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关。与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P<0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高。结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高。     

铅抑制大鼠背根神经元外向延迟整流钾通道

目的观察铅对电压依赖性外向延迟整流钾通道的作用。方法运用膜片钳技术，在急性分离的成年大鼠背根神经节细胞（DRGs）上进行。结果记录到DRG神经元外向延迟整流K+电流（IK），并观察到铅对IK的明显影响，1.0、2.0、4.0、8.0μmol/LPb2+作用后，IK平均分别减少（8.6±0.8）％、（38.6±6.2）％、（63.0±5.1）％和（89.0±8.8）％。Pb2+作用起效甚快，在Pb2+充分作用后，以普通外液冲洗，IK可得到不同程度的恢复。结论铅在较高浓度可阻断成年大鼠背根神经元电压依赖性外向延迟整流钾通道，这种阻断作用是剂量依赖性的、可逆的。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠肾组织钙离子浓度的影响及与肾小动脉重建的关系研究

目的探讨钙超负荷与高血压。肾小动脉重建的关系及氯沙坦（Losartan）的治疗作用。方法正常血压Wistar-Kyoto（WKY）大鼠和同种的16周龄自发高血压大鼠（spontaneously hyperten—siverat,SHR）大鼠随机分为WKY对照组、SHR对照组、高剂量losartan组（SHR＋HL）、低剂量losar—tan组（SHR＋LL）。每组6只动物。给予正常饮食,饲养至24周。losartan溶于10ml生理盐水中灌胃,余组等量生理盐水灌胃。测量尾动脉血压、肾组织钙离子浓度、肾小动脉内羟脯氨酸含量并观察肾脏病理测量肾人球小动脉中膜厚度、血管内径及中膜厚度与内径比值（MT／LR）。结果SHR组肾组织钙离子浓度[（18．42±2．34）μ mol／g]、肾小动脉内羟脯氨酸含量[（8．26±2．02）mg／g]均大于WKY组[（11．83±1．98）μmoL／g,（5．16±0．98）mg／g]（t=3．116,3．258,P〈0．05）,但两治疗组均有所降低,小于SHR组（t：2．946,P〈0．05）。SHR组肾内小动脉的壁厚[（5．25±1．13）μm]、壁厚内径比[（9．57±1．78）％]均大于WKY组相应比值[（4．03±0．16）斗m,（7．12±1．35）％]（t=2．836,3．425,P〈0．05）,但两治疗组壁厚内径比[（7．64±1．29）％,（7．85±1．32）％]小于SHR组（t=3．512,3．648,P〈0．05）。结论losartan可以通过抑制细胞内钙超负荷、降低纤维化程度来改善肾小动脉的血管阻力,对高血压大鼠的。肾小动脉重建有逆转作用。     

三甲基氯化锡引发低血钾症的机制探讨

目的　探讨三甲基氯化锡(trimethyltinchloride,TMT)引发低血钾症的机制。方法　给SD大鼠腹腔注射TMT,观察血浆钾、钠、氯及红细胞内钾的水平,红细胞膜Na     

硬膜外阻滞治疗短暂失明1例报告

病例资料 患者李某某,女,56岁,63公斤,血压120/80mmHg,HR89次/分,R20次/分,因椎管狭窄腰痛,拟行硬膜外阻滞治疗。CT示L4至L5椎管狭窄。一般情况可。     

马兜铃酸致血管内皮细胞毒性及羟苯磺酸钙的拮抗作用

目的证实马兜铃酸（AA）能使血管内皮细胞（VEC）胞内钙离子（[Ca^2＋]i）超载,致VEC损伤,而羟苯磺酸钙有拮抗作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系（HUVEC）,用马兜铃酸钠（AA—Na）和羟苯磺酸钙处理,设对照组、AA组、干预组三组。倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构改变,ELISA法测定细胞培养上清液中血栓调节蛋白（TM）,FLuo-3钙离子探针检测HUVEC（[Ca^2＋]i）浓度变化。结果与对照组相比,AA组TM值和平均（[Ca^2＋]i）浓度明显升高（P〈0．05）。与AA组相比,干预组羟苯磺酸钙浓度为25、50μM时,TM值和平均（[Ca^2＋]i）浓度明显降低（P〈0．05）;与对照组相比,AA组细胞内质网池状扩张。线粒体嵴缺损。而干预组细胞内质网、线粒体形态均有改善。结论AA—Na能使VEC钙超载,致内皮细胞破坏,TM增加,内质网和线粒体破坏;羟苯磺酸钙可以通过保护内质网、线粒体,减少VEC钙超载,保护VEC。