免疫聚合酶链反应检测方法初探

为了提高抗原抗体检测的灵敏度，利用生物素亲和素系统对免疫聚合酶链反应（免疫－ＰＣＲ）检测方法的建立做了初步探索。结果表明，免疫－ＰＣＲ可检测到少至１００ｆｇ的抗原，比酶联免疫吸附试验平行对照高１０００倍。该法仅限于实验模型的建立，其实际应用价值还有侍于深入研究。     

单链DNA标记免疫探针的构建用于免疫聚合酶链反应的初步研究

免疫聚合酶链反应 (免疫ＰＣＲ)是近年出现的全新的标记免疫分析技术。它以一段ＤＮＡ作为标记物来代替酶等常规标记物 ,标记在抗体或抗原上 ,在抗原抗体反应完成后 ,用ＰＣＲ技术对标记的ＤＮＡ进行扩增将信号放大 ,然后 ,根据ＰＣＲ产物的有无及量的多少测定待测抗原或抗体。本研究以碳化二亚胺为连接分子构建单链ＤＮＡ标记的免疫探针 ,并将其用于免疫ＰＣＲ中 ,现将结果报道如下 :一、材料和方法1 .ｓｓＤＮＡ标记的羊抗人ＩｇＧ免疫探针的构建 :(1 )以 5′ ＴＴＧＡＴＣＴＴＣＡＴＧＧＴＧ (ＧＣＡ )ＴＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＧＣＡ 3′…     

免疫聚合酶链反应检测方法初探

为了提高抗原抗体检测的灵敏度，利用生物素亲和素系统对免疫聚合酶链反应（免疫－ＰＣＲ）检测方法的建立做了初步探索，结果表明，免疫－ＰＣＲ可检测到少至１００ｆｇ的抗原，比酶联免疫吸附试验平行对照高１０００倍，该法仅限于实验模型的建立，其实际应用价值还有待于深入研究。     

一种简便的重组克隆筛选方法——克隆聚合酶链反应法

分子克隆常用 4种方法来鉴定含重组质粒的细菌菌落 :限制性内切酶分析、互补、插入失活、杂交筛选 ,这几种方法均较为费时费力。我们介绍一种克隆聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法 ,只需数小时即可筛选数百个细菌菌落 ,费时少 ,且灵敏度高、准确性好。一、材料和方法日本血吸虫磷酸丙糖异构酶 (ｔｒｉｏｓｅｐｈｏｓｐｈｓｔｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ,ＴＰＩ)引物由上海生工生物工程公司合成 ,ＴａｑＤＮＡ聚合酶、Ｔ4ＤＮＡ连接酶等购自上海生工生物工程公司 ,小量质粒ＤＮＡ纯化试剂盒、ＰＣＲ产物纯化试剂盒购自上海华美生物工程公司 ,重组质粒ＴＰＩ…     

聚合酶链反应联合地高辛标记探针诊断病毒性心肌炎分析

目的：评价基因检测手段在病毒性心肌炎（VM C）病原学诊断中的作用。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、地高辛标记CBV-cDNA探针检测了120例心肌炎患者血标本中的柯萨奇B组病毒（CBV）。结果：RT-PCR阳性检出率：心肌炎组为48.33%,对照组4.41%（P〈0.01）。斑点杂交阳性检出率：心肌炎组为51.67%,对照组4.41%（P〈0.01）。结论：PCR联合地高辛标记探针诊断病毒性心肌炎,不失为一种敏感、特异、简便、可靠的方法。     

通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

为了能一次性分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型、爱泼斯坦巴尔病毒、人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法。敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，相当于６个病毒颗粒，且引物仅对４种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ法和酶切分型法检测病毒性脑炎患者脑脊液和慢性宫颈炎患者宫颈分泌物中的疱疹病毒，取得较好结果。该法的建立为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、判定药物疗效和流行病学研究等提供了有效的手段。     

通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

为了能一次分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ｉ型，ＩＩ型，爱泼斯坦巴尔病毒，人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到ｉｆｇＤＮＡ相当于６个病毒     

标记免疫分析方法学的研究进展

各种类型的标记免疫分析方法进展很快,与分子生物学相结合是其重要表现。如应用基因重组技术制备双功能抗体,融合标记物及免疫PCR的出现等,使检测限达amol(10~(19)),zepto-mole(10~(-21))以至yoctomole(10~(-24)),1.7ymol等于1个分子。标记免疫分析法已能达到分子水平,现将其主要进展分述如下:     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速，准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法，根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率，快速，简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌，应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪例标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速、准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率、快速、简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪便标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致，粪便标本阳性率为４．２％（３８／９０９）；水样标本为２２．２％（４／１８），其中１份粪便标本和１份水样标本，是经过第２次增菌培养后，检出用性，而ＰＣＲ方法未见假阳性及假阴性结果。表明ＰＣＲ方法准确、快速、灵敏，并可在２、３小时内检测出含３个菌细胞的标本。因此，该方法可广泛应用于检测各种临床、环境标本中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。     

聚合酶链反应检测淋球菌

聚合酶链反应检测淋球菌浙江省丽水市医院检验科（３２３０００）邱敏，陈爱萍，王伟性传播疾病是世界上广泛流行的传染病，其中淋病发病率最高。近年我国淋病发生率呈上升趋势。实验室检查在淋病诊断中具有十分重要的作用，常规检测方法的敏感性和特异性均不理想，我们采...     

通用型免疫-聚合酶链反应系统的建立及应用

目的构建基因探针，建立通用型免疫－聚合酶链反应（ＰＣＲ）系统，检测极微量抗原抗体。方法以聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）作交联剂，构建成ＳＰＡ－ＤＮＡ基因探针，直接把生物素（Ｂｉｏ）与ＤＮＡ连接构建成Ｂｉｏ－ＤＮＡ基因探针，应用于免疫－ＰＣＲ中，分别对抗原抗体进行检测分析。结果建立了通用型抗体抗原免疫－ＰＣＲ检测系统。分别用于人血清蛋白（ＨＳＡ）抗体抗原检测，ＨＳＡ抗体检测的最高稀释度可达１１０９，ＨＳＡ抗原检测极限可达１０－１０ｍｇ／ｍｌ，分别比类似条件下的酶联免疫吸附测定灵敏度高１０５和１０６倍。结论建立的免疫－ＰＣＲ系统灵敏度高，可用于各种极微量抗原抗体的检测。     

通用型免疫—聚合酶链反应系统的建立及应用

目的 构建基因探针，建立通用型免疫－聚合酶链反应（ＰＣＲ）系统，检测极微量抗原抗体方法 以聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）作交联剂，构建成ＳＰＡ－ＤＮＡ基因探针，直接把生物素（Ｂｉｏ）与ＤＮＡ连接构建成Ｂｉｏ－ＤＮＡ基因探针，应用于免疫－ＰＣＲ中，分别对抗原抗体进行检测分析。结果 建立了通用型抗体抗原免疫－ＰＣＲ检测系统，分别用于人血清蛋白（ＨＳＡ）抗体抗原检测，ＨＳＡ抗体检测的最高稀释度可达１：１０＾９。Ｈ     

定量聚合酶链反应测定技术

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)现已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。由于ＰＣＲ是对原始待测模板核酸的一个扩增过程 ,任何干扰ＰＣＲ指数扩增的因素都会影响扩增产物的量 ,使得ＰＣＲ扩增终产物的数量与原始模板数量之间没有一个固定的比例关系 ,通过检测扩增终产物很难对原始模板进行准确定量。近年来 ,研究人员为克服上述影响因素 ,研究了各种相对准确的定量ＰＣＲ方法[1 3] 。一、ＰＣＲ扩增的理论模式在ＰＣＲ中 ,随着扩增周期的增加 ,模板以指数方式进行扩增。每一扩增周期后产物的量可用下式表达 :Ｙｎ=Ｙｎ - …     

聚合酶链反应检出痰中结核杆菌

结核杆菌的快速检出与鉴定是结核病防治工作中的重要课题。最近发展的聚合酶链反应(PCR)可将结核菌基因组的一个片段在体外进行几何级数量扩增,从而使检出快速、灵敏。本文用PCR进行101例结核病人痰中结核杆菌检出,并与传统的浓缩、培     

酶免疫法检测丙型肝炎病毒RNA的聚合酶链反应产物

目的建立一灵敏、快速的检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录－套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物的酶免疫法。方法对第２次ＰＣＲ所用的引物进行双标记，使扩增产物同时被修饰有生物素和荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）成分，再经过固相的链亲合素进行捕获、辣根过氧化物酶标记的抗－ｆｌｕｏｒｅｓ－ｃｅｉｎ反应后显色测定。结果所建立的方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比灵敏、快速、准确，结果判断客观，重复性也较好；所测结果可反映ＰＣＲ产物量的多少，但不能准确表示模板量的大小。结论建立的方法可取代电泳法而成为ＨＣＶＲＮＡ常规ＰＣＲ反应产物的检测技术。