增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化

目的探讨增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染前软骨干细胞(PSCs)的效果及TGFβ3诱导PSCs向成软骨方向定向分化的可行性.方法利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体-3(FGFR-3)表面标志的PSCs.采用脂质体介导法将EGFP基因转染PSCs,G418筛选得到EGFP基因修饰PSCs.用免疫组化及免疫荧光检测EGFP基因修饰PSCs的FGFR-3表达.采用藻酸盐凝胶培养,以TGFβ3诱导分离纯化的PSCs向成软骨方向定向分化.应用免疫组化、RT-PCR检测PSCs向成软骨方向分化过程中特异性软骨基质成分的表达情况.结果 EGFP基因转染PSCs后,24 h GFP开始表达,48～72 h GFP表达最强.G418筛选后,EGFP基因修饰PSCs体外培养6周仍有较强GFP表达.在含TGFβ3的藻酸盐凝胶培养7、14、21 d均有II型胶原表达;诱导21 d的PSCs免疫组化检测可见细胞及周围均有X型胶原、Aggrecan、COMP表达; RT-PCR检测显示在培养早期(8 d内)开始出现Aggrecan、X型胶原、COMP等的表达,中期(8 d后)开始出现II型胶原表达.结论 EGFP基因修饰PSCs在体外能长期稳定表达GFP,为应用组织工程技术修复骨骺损伤提供方便追踪观察的种子细胞.TGFβ3能诱导PSCs向成软骨方向定向分化.     

大鼠脂肪组织来源的干细胞向成骨方向诱导分化的初步研究

目的探索大鼠脂肪组织来源的干细胞的分离、培养的方法，以及在特定条件下向成骨细胞分化，探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。方法取4周龄SD大鼠附睾处脂肪，成骨诱导培养基培养，组织化学、免疫细胞化学染色以及组织学定量检测其分化情况。结果从成体大鼠脂肪组织中培养出脂肪组织来源的干细胞，能稳定增殖传代，CD44、波形蛋白免疫组化染色阳性，证明其中胚层来源。在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠的诱导下，脂肪组织来源干细胞的碱性磷酸酶活性增高，出现钙结节，四环素荧光染色阳性证实有新骨形成。碱性磷酸酶定量和钙定量随诱导时间延长表达增加。结论从脂肪组织中可获得具有多向分化潜能的干细胞，并能在体外稳定增殖传代，经诱导后可分化为成骨细胞，有可能成为骨组织工程较理想的种子细胞之一。     

间充质干细胞向上皮细胞的诱导分化及应用研究进展

间充质干细胞( mesenchymal stem cell,MSC)在体内外可被诱导分化为多种上皮细胞,如肺泡上皮、肾小管上皮和角膜上皮细胞等,表达上皮细胞特异性标志.MSC回输体内后,可有效修复损伤的肺上皮细胞组织,缓解炎症损伤,减轻肾小管细胞损伤、减少肾间质炎症细胞浸润,促进肾小管上皮细胞再生,并抑制细胞凋亡;也可...     

胶质细胞源性神经营养因子和神经营养素-3双基因转染大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经样细胞的研究

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和神经营养素3(NT-3)双基因修饰诱导的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的可行性以及GDNF和NT-3的表达变化.方法 全骨髓法分离培养BMSCs,流式细胞术检测BMSCs标志CD90和造血干细胞标志CD45.转染带荧光的GDNF和NT-3基因,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及细胞形态变化;免疫荧光检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)和神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达;Western blot 检测细胞中GDNF及NT-3蛋白表达.对照组为未转染GDNF和NT-3基因的BMSCs.结果 BMSCs能在体外成功分离培养,细胞高表达CD90(92.7%),不表达CD45.诱导分化后,BMSCs胞体变圆,伸出明显突起,并可见多数细胞相互交织成网状结构,呈神经细胞样形态.免疫荧光标记检测可见实验组细胞表达NSE和NF,而不表达GFAP.而对照组阴性.Western blot检测可见细胞GDNF及NT-3蛋白表达增强.结论 GDNF和NT-3双基因修饰诱导的BMSCs可分化为神经样细胞并表达神经元的标志,为基因治疗神经系统疾病如先天性巨结肠提供实验基础.