3种纳米颗粒对BGC-823细胞线粒体膜电位及细胞内活性氧水平的影响

目的探讨不同化学组成的纳米颗粒对人胃癌BGC-823细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）及细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的影响。方法将不同浓度纳米活性炭（activated carbon nanoparticles,ACNP）、纳米二氧化硅（SiO2）、纳米二氧化钛（TiO2）作用于BGC-823细胞24h后,用流式细胞仪以罗丹明123（Rh123）作为荧光指示剂检测细胞MMP;用ROS捕获剂双氢罗丹明123孵育细胞,通过检测细胞内Rh123的平均荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果经ACNP、纳米SiO2、纳米TiO2作用24h后,BGC-823细胞MMP呈剂量依赖性降低。0.1,0.2mg/mlACNP组细胞内ROS水平高于对照组（P〈0.05）;0.1,0.2,0.4mg/ml纳米SiO2组细胞内ROS水平呈剂量依赖性降低;0.1,0.2mg/ml纳米TiO2组细胞内ROS水平高于对照组（P〈0.05）。结论 ACNP诱导细胞发生氧化应激,生成ROS,可能进一步通过活化线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡;化学活性较强的纳米SiO2和纳米TiO2在含水介质中能够产生大量ROS,作用于细胞后能直接引起膜脂质过氧化,导致细胞膜破裂,细胞坏死。     

活性炭纳米粒子对5-Fu抗肿瘤作用的影响

目的：观察活性炭纳米粒子（activated carbonna noparticles,ACNP）吸附5-Fu在体内外对5-Fu肿瘤作用的影响,探讨ACNP的作用机制。方法：用紫外分光光度法检测ACNP对5-Fu的吸附性能;分别采用MTT实验和S180小鼠、H22小鼠动物肿瘤模型观察了ACNP在体外和体内对5-Fu抗肿瘤作用的影响;采用流式细胞术测定ACNP对细胞周期的影响;采用甲基绿-派洛宁染色法观察ACNP对细胞凋亡的影响。结果：ACNP在常温下对5-Fu有良好的吸附性能,符合经验公式M=0.295C1.919;ACNP吸附5-Fu后对BGC-823的抑制生长作用显著高于相等浓度的5-Fu组,有良好的量效及时效关系;ACNP吸附5-Fu后对S180小鼠的抑瘤率及对H22小鼠的生命延长率均显著高于含药量相等的5-Fu组;ACNP可以将BGC-823细胞阻滞在S期、与5-Fu合用可以诱导BGC-823的早期凋亡。结论：ACNP吸附5-Fu具有显著的体内外抗肿瘤活性,与5-Fu合用诱导细胞早期凋亡,将细胞周期阻滞在S期,ACNP的载体效应可能是增强5-Fu药理学作用的机制之一。     

BGC-823细胞系β线一次照射的存活效应

本文报道了胃腺癌细胞一次不同剂量β线照射后的存活效应。实验采用北医附属人民医院提供的人体胃癌细胞系BGC-823,属分化腺癌。经8MeVβ线不同剂量一次照射雷测定分裂指数、生长率、集落形成率,并将照射后的种瘤纲胞棱种于裸鼠皮下,观察其在体内生长情况。实验结果表明,胃腺癌细胞在休外培养条件下β线一次照射10～12.5Gy后,6～7天生长率趋于最低值,分裂指数趋于0,基本丧失了再增殖均能力。本实验结果为坤瘤术巾放疗选择的适宜剂母提供了依据。     

白花蛇舌草多糖诱导人胃癌细胞凋亡作用的研究

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养人胃癌7901细胞增殖抑制的影响及其作用机理。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草多糖对人胃癌7901细胞增殖的影响;流式细胞技术检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;RT-PCR方法检测药物对人胃癌7901细胞P53和Bcl-2基因表达的影响。结果白花蛇舌草多糖能明显抑制人胃癌7901细胞的增殖,其作用48 h的IC50约为116.52 mg·L-1;流式细胞检测显示40 mg·L-1白花蛇舌草多糖联合5.0 mg·L-1顺铂组总凋亡率为69.42%,明显优于顺铂组的50.85%（P〈0.01）和40 mg·L-1白花蛇舌草多糖组的26.41%（P〈0.01）;PCR结果显示高、中浓度白花蛇舌草多糖可使人胃癌7901细胞的bcl-2 mRNA表达量降低,P53 mRNA表达量增加。结论白花蛇舌草多糖能明显诱导人胃癌7901细胞的凋亡,与顺铂联合可产生协同作用,其作用机制可能与降低细胞bcl-2和增加P53基因表达量有关。     

树突状细胞诱导抗胃癌作用体外实验研究

目的 :研究负载患者自体胃癌抗原后的树突状细胞 (DC)在体外诱导的特异性细胞毒性淋巴细胞 (CTL)对胃癌细胞的杀伤效应。方法 :以组合酶消化法从胃癌手术标本中获取胃癌细胞 ,冻融制备胃癌抗原。GM -CSF、IL - 4体外诱导外周血单个核细胞 (PBMC)获得DC并负载胃癌抗原 ,继而以其刺激自体T淋巴细胞制备胃癌抗原特异性CTL ;用CytoTox 96 TM检测CTL对患者自身胃癌细胞体外杀伤效应。结果 :负载胃癌抗原DC诱导的特异性CTL对患者自身胃癌细胞的杀伤率达 88 17% ,显著高于淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK)细胞的杀伤率 ,P <0 0 5。且其对同种不同分化类型的胃癌细胞株MGC80 3、MNK2 8也有较高的杀伤效应 ,而对LOVO及HepG2 肿瘤细胞无显著杀伤作用 ,P<0 0 1。结论 :负载胃癌抗原的DC体外可诱导出高效而特异的抗胃癌效应 ,揭示以DC为中心的肿瘤生物治疗可望提高胃癌综合治疗水平     

纳米炭吸附氟尿嘧啶对胃癌组织及转移淋巴结细胞凋亡的影响

目的探讨纳米炭吸附氟尿嘧啶淋巴靶向化疗对胃癌转移淋巴结、胃癌组织及正常胃组织中细胞凋亡率(apoptosis index,AI)的影响。方法我院36例胃癌患者分为淋巴靶向化疗(lymph node-targeted chemotherapy,LNTC)组和对照组,每组18例。LNTC组先以纳米炭吸附氟尿嘧啶行淋巴靶向化疗后再行手术,对照组直接手术。术毕即取胃癌组织、转移淋巴结及正常胃组织,以Tunel-AP法检测其中的细胞凋亡率情况。结果 LNTC组胃癌组织及转移淋巴结中AI为(17.30±3.50)%及(32.64±4.72)%,对照组胃癌组织及转移淋巴结中AI为(4.81±2.76)%及(7.03±2.15)%。LNTC组胃癌组织及转移淋巴结中AI均高于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05).LNTC组正常胃组织中AI为(13.73±3.60)%,对照组正常胃组织中AI为(14.10±3.87)%,两组间AI无明显差异(P>0.05)。结论纳米炭吸附氟尿嘧啶能靶向作用于胃癌组织及转移淋巴结,使其凋亡率升高,促进肿瘤细胞死亡,而对正常胃组织的细胞凋亡无明显影响。     

红藤脂酸钠对人肝癌细胞系SMMC-7721体外抑瘤作用的实验研究

目的研究中药制剂红藤脂酸钠在体外对人肝癌细胞系SMMC-7721的生长抑制作用并初步探讨其作用机制。方法MTT法测定SMMC-7721细胞生长的抑制百分率,并运用AnnexinV法和TUNEL法检测凋亡发生率。结果MTT法测得对照组与红藤脂酸钠处理组吸光值(A值)分别为:对照组(0.385±0.03),红藤脂酸钠处理组中的250μg/ml组(0.31±0.019)、500μg/ml组(0.199±0.022)、1mg/ml组(0.15±0.033)和2mg/ml组(0.048±0.026);各组间比较有显著性差异(P<0.01)。AnnexinV法测定红藤脂酸钠(1mg/ml作用1h)处理后细胞凋亡90%,对照组细胞凋亡17.36%。TUNEL法测定红藤脂酸钠(1mg/ml作用1h)处理后细胞凋亡(60.3±6.0)%,与对照组细胞凋亡(6.6±3.5)%相比,差异有显著性(P<0.01)。结论红藤脂酸钠在体外对7721细胞生长有明显的抑制作用,其作用机制可能主要是诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

芬太尼联合高压氧处理对裸鼠胃癌AGS细胞的抑制作用

目的:探讨高压氧(HBO)处理联合芬太尼(FEN)对裸鼠胃癌模型AGS细胞的抑制作用。方法:6周龄SPF级BALB/c雄性裸鼠20只,构建裸鼠移植瘤模型。按照实验要求分为4组：对照组、HBO组、FEN组及HBO+FEN组,对照组造模成功后正常饲养,HBO组每天0.20 MPa稳压吸氧60 min;FEN组给予10 mg...     

肿瘤引流淋巴结细胞对瘤细胞杀伤作用的体外实验研究

为认识肿瘤引流淋巴结(TDLN)细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤作用及其机制,用光镜、扫描电镜和透射电镜,观察了重组白细胞介素2(rIL—2)诱导下TDLN细胞体外杀伤K562细胞1～48h的形态变化。效靶细胞共育后,光镜和扫描电镜下见TDLN细胞包围瘤细胞,以伪足与瘤细胞紧密接触、粘附,二者形成花环状;有的TDLN细胞嵌入瘤细胞胞体,而后瘤细胞退变、崩解。透射电镜下,见瘤细胞胞质肿胀,内质网扩张,线粒体肿胀、空化或结构消失;核染色质凝集、边移、核膜破裂致细胞溶解。结果表明,rIL—2诱导下TDLN细胞有较强的杀伤瘤细胞作用,杀瘤过程主要为对癌细胞的直接攻击和促使瘤细胞发生退变、凋亡。     

高表达鞘氨醇激酶对胃癌细胞生物学特性的影响

目的研究高表达鞘氨醇激酶（SPK）对人胃癌细胞增殖、迁移和凋亡等细胞生物学行为的影响。方法以重组腺病毒为载体,将人野生型（rAd—SPK^WT）及突变体（rAd—SPK^DV）SPK基因导入人胃癌细胞BCC-823。以Western blot检测外源SPK基因的表达,以[γ^82P]ATP掺入法测定SPK酶活性,用迁移扩散盒技术测定细胞的迁移能力。结果重组腺病毒可有效介导SPK在人胃癌细胞BGC-823中的表达。酶活性分析表明野生型SPK基因可增强SPK活性,而突变体SPK基因抑制SPK活性;高表达野生型SPK可以促进胃癌细胞的迁移,抑制5-FU对胃癌细胞的细胞毒作用,而高表达突变体SPK可以抑制胃癌细胞的迁移,增强5FU对胃癌细胞的细胞毒作用。结论SPK可以抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞迁移,有可能成为胃癌新的治疗靶点。     

小剂量化疗药合用维拉帕米对体外人结肠癌细胞的影响

 目的观察无毒剂量钙拮抗剂维拉帕米(VPM)与小剂量化疗药阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(CDDP)合并用药前后对结肠癌细胞SW-480的影响.方法用MTT法观察其对体外培养的人结肠癌细胞SW-480在VPM与ADM、5-FU和CDDP合并用药前后对细胞存活率的影响,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,透射电镜观察细胞超微结构变化.结果VPM与ADM、CDDP、5-FU合用与单独应用化疗药相比细胞存活率明显下降,当ADM 10 ng/ml细胞存活率为81.46%,CDDP 100 ng/ml 80.06%,5-FU 100ng/ml54.12%;合并用药后分别下降至48.43%,49.22%,30.89%.其增效倍数为单独用药的2.40～3.95倍(P＜0.01),细胞生长停止在S期,抑制细胞有丝分裂及DNA合成,细胞超微结构显示:细胞核固缩、空泡形成、微绒毛减少、线粒体及内质网肿胀.结论本研究表明无毒剂量VPM与小剂量化疗药合用,可获得化疗药单独用药相同疗效,VPM增加化疗药对肿瘤细胞的细胞毒作用,增加敏感性,减少药物副作用.     

上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上调microRNA- 150 (miR- 150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染).采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(p＜0.01).CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P＜0.0l).流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36％±1.78％)与阴性对照组(5.12％±0.54％)及空白对照组(4.68％±0.35％)相比明显增加(P＜0.01).结论 上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因.     

Caspase-3对5-ALA诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响

 目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)对光敏剂5-氨基酮戊酸(5-ALA)诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响。方法 取对数生长期的Colo-16细胞用于实验,将细胞分为对照组、5-ALA-光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)组和Caspase-3抑制剂组(Z-DEVD-FMK),对照组不给予光敏剂和照光处理,5-ALA-PDT组给予0.4 mg/ml的5-ALA避光孵育4 h后,采用(功率密度10 mW/cm²,能量密度2.5 J/cm²)激光照射3 min,之后继续培养12 h。Caspase-3抑制剂组除孵育时同时加入Z-DEVD-FMK(终浓度40 μmol),其余处理与5-ALA-PDT组相同。实验后收集各组细胞,通过免疫荧光观察各组细胞胞内Caspase-3荧光强度的变化,通过流式细胞术检测活性Caspase-3阳性细胞百分率和细胞凋亡率。结果 免疫荧光结果发现对照组和Caspase-3抑制剂组Colo-16细胞胞浆中有微弱绿色荧光,表明Caspase-3表达量低,而5-ALA-PDT组中绿色荧光显著增强,表明其胞浆内Caspase-3含量显著增高。流式细胞仪的检测结果显示,对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组active-Caspase-3阳性细胞百分率分别为(2.26±0.16)％、(32.16±1.31)％和(3.36±0.31)％,5-ALA-PDT组高于对照组和Caspase-3抑制剂组,差异有统计学差异(P<0.05)。对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组的凋亡率分别为(2.35±0.22)％、(31.55±3.68)％和(11.46±2.25)％,三组之间两两比较,差异都有统计学意义(P<0.01)。结论 5-ALA-PDT可以诱导Colo-16细胞发生凋亡,且这种效应与caspase-3的激活密切相关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡及其机制

目的研究去乙酰化酶转移酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用及其机制。方法利用细胞计数、流式细胞仪及末端脱氧核苷酸转移酶生物素dUTP切口末端标记法(TUNEL)研究TSA对胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用。利用蛋白印迹法、基因芯片及实时定量PCR研究TSA对胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡;TSA可增加胃癌细胞SGC-7901p53,bax等基因的表达,降低BCL-2、生存素和半胱天冬酶的表达;TSA可使凋亡诱导因子抗侵袭因子(AIF)和核酸内切酶EndoG从线粒体释放并转移到细胞核内;TSA可通过调控多个凋亡相关基因的表达诱导胃癌细胞发生凋亡,且该凋亡是半胱天冬酶非依赖性的。结论TSA可通过调控多个凋亡相关基因来实现其诱导胃癌细胞凋亡的作用,这种凋亡诱导作用是通过半胱天冬酶非依赖途径进行的。     

干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

 目的 探讨干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 选择FoxM1高表达食管癌细胞株,构建FoxM1-shRNA干扰质粒转染食管癌细胞,观察干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果 成功转染后细胞中FoxM1蛋白水平表达明显降低(t=13.17, P<0.01),细胞增殖明显受抑并呈时间依赖性,72 h抑制效果最显著(68.0%±6.4%,P<0.05);干预组细胞增殖周期发生G₁期阻滞(59.14%±1.69% vs 40.51%±1.45%,t=14.23,P<0.01)、细胞凋亡增加(2.48%±0.49% vs 35.37%±0.56%,t=76.56,P<0.01)。结论 干预FoxM1表达使细胞周期发生G1期阻滞并能促进细胞凋亡,从而抑制TE1细胞增殖,FoxM1可能是食管癌基因治疗潜在的有效靶点。