致泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的研究

目的：分析泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的流行情况和分子特征。方法：应用全自动细菌分析仪Microgcan WalkAway40和纸片扩散法，对40株大肠埃希菌进行抗生索敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子。对扩增产物进行测序。并分析其中的基因盒。利用脉冲场电泳（PFGE）对菌株进行分子分型。结果：22株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小为1000、1200、1700和3000bp，22株细菌各含1-2个整合子。1000bp整合子含基因盒aadA1。1200bp整合子含基因盒dfr1—OFRx，1700bp整合予含基因盒dfr17-aadA5，3000bp整合子两端分别含基因盒aadB、cmlA1，40株细菌被分为不同的基因型，在不同基因型菌株中发现了相同的整合子。结论：整合子在泌尿系统感染大肠埃希中广泛存在，整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制，基因分型结果提示整合子在细菌种内水平传播。     

健康人群大肠埃希菌Ⅰ类整合子与耐药性关系

目的 研究健康人群大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带情况及分子特征,分析其与细菌耐药性关系.方法 采用Vitek32细菌分析仪和纸片扩散法,检测150株大肠埃希菌抗生素敏感性,PCR检测总DNA中Ⅰ类整合子,扩增产物进行限制性核酸内切酶分析,测序确定携带基因盒种类,脉冲场凝胶电泳对整合子阳性菌株分子分型.结果 150株大肠埃希菌中,83株菌耐受>3种抗生素,耐多药率55.3%;超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性5株,阳性率3.3%;携带Ⅰ类整合子42株,扩增子150～3 000 bp,,有8种带型;耐药基因盒主要是dfr和aadA类,最常见基因盒排列dfr17～aadA5;整合子分布在不同基因型菌株中.结论 健康人携带的大肠埃希菌中广泛存在Ⅰ类整合子,与细菌耐多药性密切相关;分子分型结果提示整合子能在细菌种内水平传播,整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制.     

尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征及其与耐药性的关系

目的 了解尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与细菌耐药性的关系.方法 选取108株临床非重复分离自尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类及可变区启动子类型.结果 108株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有60株占56.0％检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出5种不同长度的可变区片段:8株750 bp片段不含基因盒,2株1500 bp片段为aadA2,34株2200 bp片段为dfrA 17-aadA5,4株2500 bp片段为dfrA 12-orfF-aa dA2,2株2800 bp片段为aacA4-cmlA1,其中1株大肠埃希菌同时扩增出2200、2500 bp的可变区片段,有11株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;可变区启动子大多为相对较弱的启动子PcH1、PcW;Ⅰ类整合子阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株.结论 Ⅰ类整合子及相关基因盒在尿液分离大肠埃希菌中分布广泛,与细菌耐药性关系密切,所携带的整合子具有较强的捕获外源性耐药基因盒的能力.     

临床分离大肠埃希菌整合子介导的耐药机制分析

目的了解临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药特征及整合子在大肠埃希菌中的分布情况,探讨其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性。方法收集温州地区2002年-2010年分离的大肠埃希菌,采用纸片扩散法进行药敏试验;PCR扩增3类整合子整合酶基因和整合子可变区,并测序分析整合子携带的耐药基因盒类型及att C位点。结果共收集524株大肠埃希菌,均为耐药菌,对3类或3类以上抗菌药物不敏感的多重耐药菌(MDR)占60.8%;Ⅰ类整合子的检出率为53.8%(28/524),所检出的整合子可变区分为6种类型,att C位点有16种类型,dfr A17-aad A5基因盒检出率最高(70.2%);Ⅱ类整合子阳性仅有3株;Ⅲ类整合子未检测到。结论大肠埃希菌整体耐药情况严重;Ⅰ类整合子在临床分离大肠埃希菌中分布广泛,并与大肠埃希菌的耐药性关系密切,主要介导对氨基糖苷类、磺胺类等多种抗菌药物的耐药性。     

健康人肠道大肠埃希菌整合子和耐药基因盒的研究

目的：研究健康人肠道大肠埃希菌的整合子携带情况与整合子携带的基因盒种类及其与耐药性之间关系.方法：PCR检测Ⅰ类整合子,确定细菌携带整合子的情况.整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区,分析插入基因盒的序列.结果：150株大肠埃希菌中有38株携带Ⅰ类整合子,集中分布在对3种以上抗生素耐药的菌株中.插入基因盒集中在甲氧苄氨嘧啶耐药基因（dfr）和氨基糖甙类抗生素耐药基因（aadA）.结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致,但是细菌耐药谱和其整合子无对应关系.     

尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征与耐药性的关系研究

目的了解社区感染尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的分布,并分析其与细菌耐药性的关系。方法选取114株临床非重复分离自医院门诊患者尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类。结果 114株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有50株检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出两种不同长度的可变区片段:1 700bp片段(30株)为dfrA17-aadA5,2 100bp片段(5株)为dfrA12-orfF-aadA2,有两株大肠埃希菌同时扩增出1 700bp和2 100bp的可变区片段,有17株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;114株大肠埃希菌对氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和左氧氟沙星的耐药率较高,>50.0%,对头孢替坦、亚胺培南、厄他培南、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、阿米卡星耐药率较低,<5.0%;Ⅰ类整合子阳性菌株对氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株。结论与医院感染相比,社区感染尿液中分离的大肠埃希菌受抗菌药物的选择压力相对较小,其对常用抗菌药物的耐药率、Ⅰ类整合子携带率均较低,同时Ⅰ类整合子中携带的基因盒种类也较单一。     

食品中大肠埃希菌整合子与耐药性的关系研究

目的：研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：50株大肠杆菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药性与整合子及ISCR1关系研究

目的了解临床分离耐碳青霉烯类大肠埃希菌的耐药性及其整合子和插入序列共同区(ISCR1)的分布,并分析其相关结构。方法收集2016年1月-2018年10月临床分离的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌40株。使用VITEK2 Compact全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏试验,头孢哌酮/舒巴坦采用K-B法检测。采用PCR法扩增Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,检测ISCR1基因,并分别扩增整合子和ISCR1可变区结构。对阳性产物进行基因测序,测序结果在Gen Bank中进行核酸序列比对检索。结果 40株非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌中有29株(72.5%)检测到Ⅰ类整合酶基因,未检测出Ⅱ类和Ⅲ类整合子,其中24株具有Ⅰ类整合子可变区基因盒结构,并以dfr A17-aad A5(12/24)结构为主;另有4株ISCR1阳性,但仅有1株菌株存在ISCR1可变区基因盒,其结构为ISCR1+qnr A1+ampR。未发现Ⅰ类整合子和ISCR1基因串联存在于同一菌株。结论Ⅰ类整合子及其相关基因盒在耐碳青霉烯类大肠埃希菌中广泛存在,与细菌耐药性关系密切。     

水产品中耐药大肠埃希菌整合子与耐药基因盒研究

目的:利用水产品中分离到的耐药大肠埃希菌,研究整合子与耐药性的关系。方法:PCR扩增1类和2类整合酶及整合子,将其进行序列分析。结果:85株耐药大肠埃希菌中88%含有1类整合酶基因;其中68%能扩增此基因;1类整合子可变区PCR扩增产物谱型有17种;1类整合子最常见的基因盒有4种。还发现1株大肠埃希菌同时携带1和2两类不同的整合酶和整合子。结论:大肠埃希菌耐药性与整合子有相关性。     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

鸡来源产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌携带整合子基因的研究

目的 分析鸡肠道内共生的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌整合子携带状况以及其与多重耐药性的关系.方法 从甘肃、湖北、北京、四川地区养殖场鸡粪便标本中分离的大肠埃希菌,肉汤稀释法检测菌株的耐药性,WHONET软件进行耐药性分析;筛选出的ESBLs菌株进行整合子的PCR检测和基因测序. 结果 通过药敏试验从鸡粪中分离的224株大肠埃希菌中共检出产ESBLs的菌株54株,分离率为24.1%.产ESBLs的菌株中I类整合子的携带率为63.0%,I类整合子可变区发现的耐药基因有addA1、aadA2、aadA5、aadA22,dfrA12、dfrA17、dfrI,aar-3,分别介导氨基糖苷类、磺胺类抗生素以及利福平的耐药性.aadA22是在国内菌株中首次报道.Ⅱ类整合子携带率为5.6%,携带的耐药基因包括sat、ereA、aadA1.Ⅲ类整合子酶阳性的有3株菌,但其可变区未检出任何耐药基因. 结论 I类整合子主要介导氨基精苷类抗生素和甲氧嘧啶的耐药性,在大肠埃希菌ESBLs菌株的多重耐药性中具有重要的作用,加强养殖动物大肠埃希菌耐药性以及整合子携带状况的监测,对防止耐药菌株的广泛传播,改善临床抗生素的疗效具有重要意义.     

致病菌耐药因子分布及特征分析

目的 对临床菌株中的整合子分布及其携带耐药基因盒的结构特征进行分析。方法 应用多重PCR方法检测55株临床菌株中的3类整合酶基因intⅠ。并对intⅠ阳性菌株耐药基因盒进行测序及序列分析。结果 55株临床菌株均为第1类整合酶基因阳性（100％）。耐药基因盒特异PCR扩增发现，27株革兰阳性菌株和22株革兰阴性菌株均得到1913bp的扩增产物，携带基因盒为dhfr、orfF和aadA2；6株革兰阴性菌得到1664bp的产物．携带基因盒为aadA5和dfrl7。aadA2和aadA5均为编码对氨基糖苷类抗生素产生耐药的基因盒。dhfr和dfr17均为编码对磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶产生耐药的基因盒；orfF为未知功能的开放阅读框。结论 临床致病革兰阳性菌和革兰阴性菌株均广泛存在着整合子结构．应加强对耐药基因在细菌种属间水平转移的监测工作。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系

目的 研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1，2，3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果69株沙门菌中25株携带1类整合子。集中分布在对4种以上抗生索耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr（甲氧氨嘧啶）和aadA（氨基糖甙类）基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfrl-aadA1。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

食品中沙门菌整合子与耐药性关系研究

目的：研究食品中沙门菌的整合子携带情况及整合子与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。整合子阳性菌档进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：69株大肠菌中25株携带1类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr(甲氧苄氨嘧啶)和aadA(氨基糖甙类)基因盒，各种基因盒组合中最常见的是difrl—aadA1。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

临床分离大肠埃希菌耐药性分析及I型整合子研究

目的了解临床分离大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药状况;研究整合子在大肠埃希菌中的分布情况,探讨其与大肠埃希菌耐药性之间的相关性。方法收集广东省3所医院2010-2012年分离的大肠埃希菌,采用K B纸片扩散法进行药敏试验;聚合酶链反应（PCR）法扩增3类整合子整合酶基因和整合子可变区,测序分析整合子所携带的耐药基因盒类型。结果共收集156株大肠埃希菌,其对青霉素类、头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类等的大多数抗菌药物的耐药率＞50%;耐药率＜10%的抗菌药物有头孢哌酮/舒巴坦（0）、亚胺培南（3.85%）、头孢替坦（4.35%）、厄他培南（7.69%）和哌拉西林/他唑巴坦（8.97%）;I类整合子的检出率为57.69%（90/156）,多重耐药菌与非多重耐药菌的整合子检出率分别为66.00%（66/100）和64.71%（22/34）,两组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但分别与敏感菌组（9.09%,2/22）相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）。所检出的整合子可变区分为9种类型,大部分都含有aadA和dfrA耐药基因盒。结论大肠埃希菌整体耐药情况严重;I类整合子在临床分离大肠埃希菌中分布广泛,并与大肠埃希菌的耐药性关系密切,主要介导对氨基糖苷类、磺胺类、β 内酰胺类等多种抗菌药物的耐药性。     

Antimicrobial resistance and class 1 integrons in pathogenic Escherichia coli from dairy farms

The goal of this study was to assess the prevalence of antimicrobial resistance and class 1 integrons, including integron-associated genes, in 24 Escherichia coli isolates from dairy farms. Escherichia coli isolates (n = 14) from dairy cows with mastitis (ECDM), Shiga toxin-producing (STEC) O157:H7 from cull dairy cow fecal samples (n = 9) and bulk tank milk (n = 1) were evaluated for sensitivity to 19 antimicrobial agents used commonly in human and/or veterinary medicine. Multiplex PCR was used to determine presence of genes associated with class 1 integrons (intI1, qacEDelta1, and sulI1). Class 1 integrons were found only in eight of 10 isolates (one STEC O157:H7 and seven ECDM) that demonstrated antimicrobial resistance, and seven of these were resistant to two or more antimicrobial agents. Eight of 10 STEC O157:H7 and six of 14 ECDM were susceptible to all commonly used antibiotics. Five ECDM demonstrated multiple resistances to four or more antibiotics. Most of the 24 isolates examined exhibited resistance against sulfamethoxazole, followed by streptomycin and tetracycline. STEC O157:H7 strains had less prevalence of antibiotic resistance and integron carriage than ECDM. The multiplex PCR method developed for detection of intI1, qacEDelta1, and sulI1 can be used routinely for monitoring presence of these genes. Class 1 integrons were found in eight of 10 E. coli strains that demonstrated antimicrobial resistance; seven of these were resistant to two or more antibiotics. It appears that integrons played a role in the incidence of antimicrobial resistance of the strains used in this study.     

Class 1 integrons in resistant Escherichia coli and Klebsiella spp., US hospitals

We examined Escherichia coli and Klebsiella spp. from US hospitals for class 1 integrons. Of 320 isolates, 181 (57%) were positive; association of integrons with resistance varied by drug and organism. Thus, determining integron epidemiology will improve understanding of how antibacterial resistance determinants spread in the United States.