人抑制素βB亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：人抑制素βＢ亚基单克隆抗体（单抗）的制备和鉴定。方法：以化学合成人抑制素βＢ（１－ ２８） 和（８５－１１５）多肽片段和粗提猪卵泡抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,经细胞融合与筛选,得到分泌单抗的细胞株,诱生腹水后采用特定的免疫学方法进行鉴定。结果：获得４ 株能分泌单抗的细胞株,ＥＬＩＳＡ 检测腹水效价为１ ×１０－４ ～１ ×１０－ ６,与α、βＡ亚基片段及其他多肽激素无交叉反应,３ 株ＭｃＡｂ（ 抗ＩＮＨβＢ（８５－ １１５）） 识别同一抗原位点。相对亲和力３Ｅ８＞５Ｅ１１＞７Ｂ９。腹水中的抗体能明显地被人卵泡液,猪卵泡液和βＢ（８５ －１１５）ＢＳＡ 中和而呈抑制曲线。结论：成功制备了抗人ＩＮＨβＢ亚基的单抗     

人抑制素βA亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备人抑制素βＡ（ＩＮＨβＡ） 亚基多肽单克隆抗体（单抗,ＭｃＡｂ）。方法和结果：用固相多态合成法合成了人抑制素βＡ亚基１ － ２８,８２ － １１４ 多肽片段。以粗提的猪卵泡液抑制素（ＩＮＨ） 和合成肽段纯品作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,经细胞融合与筛选,获得４ 株杂交瘤细胞株,ＥＬＩＳＡ检测腹水效价为１×１０－ ４ ～１ ×１０－ ５ ,抗体特异性试验表明与α亚基片段及其他多肽激素无交叉反应。表位分析表明３ 株ＭｃＡｂ（ 抗ＩＮＨβＡ（８２－ １１４）） 可能针对同一抗原位点。相对亲和力试验表明４Ｇ３＞ ３Ｂ７＞ ６Ｃ５ ＞２Ａ３。抗原竞争试验表明腹水中抗体能明显被人卵泡液和猪卵泡液中和, 而绝经期妇女血清不能中和抗体活性。结论：成功制备抗ＩＮＨβＡ亚基ＭｃＡｂ     

抗结核杆菌单克隆抗体的研制及初步鉴定

运用单克隆抗体技术,以结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ的培养滤液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以Ｈ３７Ｒｖ及ＢＣＧ抗原同时筛选杂交瘤细胞,得到了７析稳定分泌的抗结核杆菌的杂交瘤细胞株,并对它们的特性作了初步鉴定。在７株单克隆抗体杂交瘤中,５株（２Ｃ５、２Ｃ１１、２Ｄ１、２Ｅ１１及３Ｄ３）为ＩｇＧ１亚类,另两株（３Ｃ３及５Ｄ８）为ＩｇＭ。腹水经ＥＬＩＳＡ检测,效价可达１０＾－３～１０＾－４,同时应用ＥＬＩＳＡ及免疫印迹试     

建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应。杂交瘤细胞染色体平均为８５～１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

人睾丸和卵巢抑制素样物质的免疫组织化学定位

用人抑制素α亚基单克隆抗体（ＭｃＡｂ）腹水作为第一抗体，采用链霉卵白素－生物素－过氧化物酶（ＬＳＡＢ）免疫组织化学方法，在光镜下对人睾丸和卵巢中抑制素样免疫活性物质进行定位观察，结果显示：人睾丸Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞、Ｌｅｙｄｉｇ细胞、精原细胞、精母细胞和卵巢颗粒细胞、泡膜细胞及间质细胞等胞浆内存在人抑制素α亚基ＭｃＡｂ的阳性免疫染色反应，提示：这些细胞为抑制素的分泌来源。     

人睾丸和卵巢抑制素样物质的免疫组织化学定位

用人抑制素α亚基单克隆抗体（ＭｃＡｂ）腹水作为第一抗体，采用链霉卵白素－生物素－过氧化物酶（ＬＳＡＢ）免疫组织化学方法，在光镜下对人睾丸和卵巢中抑制素样免疫活性物质进行定位观察。结果显示：人睾丸Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞Ｌｅｙｄｉｇ细胞、精原细胞、精母细胞和卵巢颗粒细胞、泡膜细胞及间质细胞等胞浆内存在人抑制素α亚基ＭｃＡｂ的阳性免疫染色反应。提示：这些细胞为抑制素的分泌来源。     

分泌抗人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经人促甲状腺激素（ｈＴＳＨ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞融合，融合率６０．４％，抗体阳性率４．３％，经３－４次克隆化，筛出３株稳定分泌ＴＳＨＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。用放射免疫分析法（ＲＩＡ）检测小鼠腹水，抗体效价为１０＾－４时，抗体结合率为４５．５％。用ＥＬＩＳＡ方法检测小鼠腹水，抗体效价达１０＾－５。其中３株细胞做琼脂糖免疫双扩散试验，均显示为ＩｇＧ１，亚类。染色体计数     

抑制素α亚基单抗制备及其在卵巢癌中的免疫定位

为了制备抑制素α亚基（ＩＮＨα）单抗（ＭｃＡｂ）及研究ＩＮＨα在卵巢癌中的来源，以合成的人ＩＮＨα片段与载体蛋白（ＴＧ／ＢＳＡ）偶联复合物为抗原，采用杂交瘤技术，制备特异抗ＩＮＨα单抗，并用ＬＳＡＢ免疫组化染色程序，对人正常卵巢和卵巢癌中ＩＮＨα免疫活性进行定位。结果：①建立了３株分泌抗ＩＮＨαＭｃＡｂ的细胞株７Ａ２、１Ｇ６和１Ｇ１０；②观察到正常卵巢颗粒细胞和黄体细胞的胞浆内存在明显的强阳性着染，泡膜细胞呈弱阳性；卵巢癌细胞内也呈明显阳性，胞核内也有染色。结论：①抗ＩＮＨαＭｃＡｂ具有特异性，敏感性和实用性；②ＩＮＨα可望成为绝经后卵巢癌的一种标志物     

重组人白血病抑制因子受体α亚基细胞外区的分子克隆

纯化可溶性白血病抑制因子受体，获得特异性免疫原并利用衰变加速因子的附膜特性探讨ＬＩＦ受体的生物特性和功能。采用基因重组技术，将ＬＩＦ受体α亚基细胞外区的Ｃ－端与ＤＡＦＣ－端３７个氨基酸连接，再将该重组基因主ｐＧＥＸ－５Ｔ表达系统。结果：在Ｅ．ｃｏｌｉ ＸＬ１中可高度表达一种Ｎ－端为谷胱甘肽－Ｓ－转移酶和Ｃ－端为１９０ｓｏｌＤＡＦ的融合重组蛋白。     

甲状腺球蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经人甲状腺球蛋白免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞进行融合，融合率９０．３％，抗体阳性率３．１％，经３～４次克隆化，筛出４株稳定分泌甲状腺球蛋白（ＴＧ）ＭｃＡｂ的细胞株，用放射免疫分析方法（ＲＩＡ）检测小鼠腹水，抗体效价在１０－４时，抗体结合率为４３．２％。用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法检测小鼠腹水，抗体效价达１０－５。琼脂糖免疫双扩试验，均显示为ＩｇＧ１亚型。染色体计数证明为杂交瘤细胞。     

抑制素α、βA、βB亚基肽段的人工合成(摘要)

采用固相多肽合成法、应用Ｂｏｃ化学和Ｆｍｏｃ化学从Ｃ端逐步合成,ＤＣＣ／ＨＯＢｔ缩合,合成好的肽树脂经裂解得粗肽,粗肽经ＨＰＬＣ分离,氨基酸分析鉴定。已合成抑制素α、βＡ和βＢ亚基的５个片段：Ｉｎｈｉｂｉｎ（ＩＮＨ）α（３７－６５）,ＩＮＨβＡ（１－２８）,ＩＮＨβＡ（８２－１１４）,ＩＮＨβＢ（１－２８）,ＩＮＨβＢ（８５－１１５）。产物结构如下：ＩＮＨα（３７－６５）,２９ａａＩｌｅＳｅｒＰｈｅＧｌｎＧｌｕＬｅｕＧｌｙＴｒｐＧｌｕＡｒｇＴｒｐＩｌｅＶａｌＴｙｒＰ…     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

IgA类鼠抗人A血型单抗的研制和临床应用

应用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术，以Ａ血型物质ＭＳＳ１０％２×（Ａ１）为抗原，经ＰＥＧ细胞融合，获得两株分泌ＩｇＡ类鼠抗人Ａ血型单抗杂交瘤细胞，细胞培养上清液效价为１０２４～２０４８，亲和力２～３ｓ。其中２Ｈ１０Ｅ１１杂交瘤细胞经血凝特异性试验、血凝抑制试验、吸收放散试验、红细胞标准谱细胞试验，表明２Ｈ１０Ｅ１１单抗仅对Ａ血型红细胞特异。２Ｈ１０Ｅ１１细胞置液氮中贮存３年，复苏传代后分泌抗体能力不变。单抗置５６℃水浴３０ｍｉｎ，－２０℃和３７℃反复冻融３次，效价不变。临床试用近百万人次，无一例错型，准确率１００％。证明可以替代标准血清，用于临床血型定型。     

建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应，杂交瘤细胞染色体平均为８５－１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

抗纤维蛋白-抗尿激酶双特异性单克隆抗体的体内外溶栓效果的研究

目的研究抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单克隆抗体在体内外的溶栓效力。方法通过分泌抗纤维蛋白单抗的杂交瘤细胞（变异株）与尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，获得分泌双特异性单抗（ｂｓＭｃＡｂｓ）杂交－杂交瘤细胞。采用ＥＬＩＳＡ法检测该ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶的结合力。用１３１Ｉ血浆－血浆凝块溶解率法测定体外溶栓效力。用兔血栓模型测定体内溶栓效力。结果获得８株分泌抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单抗的杂交－杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶均有很强的结合力。体外溶栓实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ可使尿激酶的溶栓效力增强１５．５％。体内溶栓实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ的溶栓效力为尿激酶的１．６～２．１倍。结论单抗导向溶栓剂具有高度特异性和局部溶栓效力强等优点，值得进一步研究。     

抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定

用纯化的人肌红蛋白（Ｍｂ）抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠通过细胞杂交技术。获得１０株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株．其中３株分泌ＩｇＧ_１亚类抗体，２株为ＩｇＧ_（２ａ），５株为ＩｇＧ_（２ｂ）．间接ＥＬＩＳＡ法证明单抗腹水与Ｍｂ起特异性反应，与人血红蛋白（Ｈｂ）．人白蛋白（Ａｌｂ）无交叉反应．免疫印迹检测结果表明，６株单抗腹水能特异性识别分子量１７ＫＤ的Ｍｂ，抗Ｍｂ单克隆抗体的制备，对于急性心肌梗塞早期诊断很有应用价值．     

抗脆弱类杆菌单克隆抗体的研制与鉴定

目的：为了获得高效价和高特异性的抗Ｂｆ抗体。方法：以脆弱类杆菌的标准株免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,采用杂交瘤技术选择能稳定分泌抗脆弱类杆菌的杂交瘤细胞株。结果：建立了３株稳定的杂交瘤细胞株,ＥＬＩＳＡ法测定腹水ＭｃＡｂ效价分别为１：６０００,１：６０００和１：１２０００,敏感性为１０＾２～１０＾３ｃｆｕ,与其它杆菌、梭菌无交叉反应,竞争抑制试验表明３株ＭｃＡｂ作用于细胞表面不同的抗原决定簇。将３株单克隆     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

抗ENA单克隆抗体的研制

目的：制备与分析抗可提取性核抗原（ＥＮＡ）单克隆抗体;方法：以ＥＮＡ为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,经反复筛选和再克隆化,建立能稳定分泌抗ＥＮＡ单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的杂交瘤细胞株;结果：共获得１１株能稳定分泌抗ＥＮＡ的杂交瘤细胞株。对其中的５种单克隆抗体（ＩＧ５,２Ｅ５,２Ｃ６,４Ｃ１０和４Ｅ６）进行了初步分析,结果如下：小鼠腹水抗体效价范围２×１０－５～３×１０－６;免疫球蛋白亚类鉴定,１株为ＩｇＧ２ａ,１株为ＩｇＧ２ｂ,其余３株均为ＩｇＧ１;结论：ＥＮＡ作为弱免疫原可用于制备单克隆抗体