丹参酮ⅡA诱导HL—60细胞凋亡

在以往对丹参酮ⅡＡ诱导分化和抗癌作用研究的基础上，进一步研究丹参酮ⅡＡ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，以探讨其抗癌作用机理。方法：应用体外细胞培养技术，以１－１０μｇ／ｍｌ丹参酮ⅡＡ作用于培养的ＨＬ８０细胞５天后，进行光镜，电镜，琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪的观察和分析。     

BDNF对H2O2诱导人肺癌细胞YTMLC-90凋亡的抑制效应

背景与目的:已证实在神经系统内外多种细胞中均可合成神经营养因子,如神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophic factor,BDNF)和神经营养素3/4(NT-3/4).这些神经营养因子不仅能促进神经细胞的存活、增殖和凋亡,也与癌细胞侵犯神经组织的活性有关;但BDNF与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道.本文旨在研究BDNF对过氧化氢(H2O2)诱导人肺癌细胞YTMLC-90凋亡的作用.方法:用含人Ⅰ型胶原al链(COLIA1)基因启动子和增强子元件及在其3′端接BDNF cDNA的微基因pSVCEPBFCAT,转染人肺癌细胞YTMLC-90并驱动BDNF异位表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变,琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂.结果:经200 μmol/L H2O2作用24 h,转染pSVCEPBFCAT的YTMLC-90细胞生长抑制率为30.0%,而未转染YTMLC-90和转染空载体pSVCEPCAT的YTMLC-90细胞生长抑制率分别为84.60%和80.00%,实验组与两个对照组之间的差异均有显著性(P＜0.01);对照组YTMLC-90细胞可见凋亡特有的形态学及生物化学改变,如胞浆和核固缩、染色质断裂、DNA电泳呈梯状条带,而转染pSVCEPBFCAT的YTMLC-90细胞未发现上述凋亡特征.结论:BDNF促进YTMLC-90细胞增殖和拮抗H2O2诱导凋亡,抑制H2O2对人肺癌细胞YTMLC-90的细胞毒性.     

胶质瘤细胞诱导分化后的凋亡现象

目的：研究胶质瘤细胞诱导分化后的去向,籽胶质瘤诱导化疗法提供理论基础。方法：采用MTT,免疫荧光等方法鉴定二甲基甲酰胺DMF诱导胶质瘤细胞系,SHG－44的分化,用形态学,吖啶橙／溴化乙啶活细胞染色（AO／EB）,流式细胞术,Annexin V检测凋亡。结果：DMF可以引起剂量依赖性的显著诱导分化作用,从细胞形态,AO／EB染色上可以观察到细胞经1％DMF诱导分化后发生了凋亡。经流式细胞术DNA图谱定量,诱导1,5天凋记细胞占3．5％,第3天占26．8％,用检测细胞膜不对称性的Annexin V凋亡检测发现,第1．5天即可观察到12．18％,的早期凋亡细胞,并排除坏死,结论：胶质瘤细胞系SHG－44经DMF诱导分化后,将逐渐凋亡。     

选择性COX-2抑制剂Celecoxib诱导胶质瘤细胞凋亡作用机制初探

背景与目的：选择性COX-2抑制剂具有诱导多种肿瘤细胞凋亡的作用，但在胶质瘤方面研究还不多见，本研究门的是探讨选择忡COX-2抑制剂塞来昔布（Celecoxib）诱导胶质瘤C6细胞凋亡，及其在诱导胶质瘤细胞凋亡的作用机制方法：应州PGE2检测、吖啶橙染色、流式细胞仪（FCM）检测不同浓度的Celecoxib对胶质瘤C6细胞作用，通过放免法检测不同浓度Celecoxib作用于胶质瘤C6细胞后PGE2的含量，通过吖啶橙染色从形态上观察治疗组细胞的形态学变化，流式细胞仪检测各组细胞发生凋亡的情况。结果：随Celecoxib浓度增加而PGE2合成减少（P〉0．05）．吖啶橙染色荧光染色对照组细胞核DNA为均匀黄色或黄绿色的荧光，治疗组（Celecoxib 50μmol／L）凋亡细胞的细胞核或细胞质内可处致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片．Celecoxib浓度为12．5μmol／L和50μmol／L时．FCM法检测凋亡分别为5．83％和15．32％．Celecoxib对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用具有浓度依赖性．细胞凋亡随浓度增加而增多。结论：Celecoxib具有诱导胶质瘤C6细胞凋亡的作用并呈剂量依赖性，随PGE2合成下降细胞凋亡增多，PGE2途径是Celecoxib诱导胶质瘤细胞凋亡机制之一．对胶质瘤的治疗有重要意义。     

苦参碱诱导胶质瘤C6细胞凋亡及其可能的基因机制

摘 要 目的: 探讨苦参碱诱导C6胶质瘤细胞凋亡的作用特点和可能的基因作用机制。 方法：MTT法测定不同浓度苦参碱对C6细胞增殖的抑制率，求出IC50值；倒置显微镜及透射电镜观察苦参碱诱导C6细胞凋亡的形态学改变；Annexin/FITC染色流式细胞术检测不同浓度苦参碱诱导C6细胞的凋亡率；实时定量PCR芯片（Realtime PCR Array）检测苦参碱作用后C6细胞凋亡相关基因的差异表达；免疫细胞化学及Western blotting方法检测苦参碱对C6细胞caspase3表达的影响。结果：苦参碱对C6细胞增殖的抑制率随着药物剂量的增加（0.1~1.0 mg/ml）而增加（P<005），其IC50为0.715 mg/ml。倒置显微镜观察显示苦参碱可诱导胶质瘤细胞出现凋亡改变，透射电镜观察显示苦参碱诱导胶质瘤细胞出现凋亡的超微形态改变，流式细胞术检测显示胶质瘤细胞的凋亡率随着药物剂量的增加（0.2~1.0 mg/ml）而增大[(3.56±0.73)%~(27.55±1.92)%](P<0.05)。胶质瘤细胞经苦参碱作用后出现显著表达差异基因共68个，其中57个基因表达明显上调、11个基因表达明显下调，其中有22个基因与诱导凋亡的死亡受体相关，15个基因与线粒体途径有关；ICC及Western blotting检测都显示苦参碱可诱导C6胶质瘤细胞caspase3表达的上调(P<0.05)。 结论：苦参碱能诱导C6胶质瘤细胞的凋亡，其机制与死亡受体途径和线粒体途径的众多基因有关。     

SEA诱导Hep—2细胞凋亡的机制研究

目的：观察葡萄球菌肠毒素A（SEA）对Hep-2细胞株诱导凋亡机制。方法：应用ＭＴＴ比色法和流式细胞术检测ＳＥＡ对Ｈep-2细胞增殖抑制率和对细胞增殖周期的影响。同时应用同位素法检测Ｈep-2细胞内ＣＡＭＰ水平。结果：ＳＥＡ对Ｈep-2细胞株有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。流式细胞术分析,ＳＥＡ能阻止Ｇ１期细胞向Ｓ期的过程,Ｇ１期细胞规程。同位素分析,Ｈep-2细胞内ＣＡＭＰ水平下降。结论：ＳＥＡ能诱导Ｈep-2细胞凋亡,抑制Ｈep-2细胞增殖,具有细胞毒性效应。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(SIM)对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin和Bax mRNA表达的变化。结果①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93.12%,IC_(50)为(11.33±0.16)μg/ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G_1-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,Bax mRNA表达逐渐升高。结论SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

LGI1基因对胶质瘤细胞作用的研究

目的:研究富亮氨酸胶质瘤失活基因1(LGI1)与胶质瘤细胞生长及胶质瘤细胞凋亡的关系。方法:构建pcDNA3.1/LGI1质粒,采用脂质体介导的方法转染LGI1缺失的胶质瘤细胞系。RT-PCR法和免疫组化法检测转染细胞的LGI1基因表达,MTT法检测转染细胞的增殖活性,AnnevinV-FITC法检测转染细胞的凋亡。结果:pcDNA3.1/LGI1转染胶质瘤细胞系A172后,A172细胞LGI1mRNA和蛋白表达阳性;细胞增殖活性受到抑制,MTT吸收值在转染后24和48小时下降,与正常对照组相比有统计学意义(P<0.05);转染后24小时早期凋亡细胞较多,48小时后早期凋亡减少。结论:LGI1基因可抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀（SIM）对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法：用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐（MTY）测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测survivin和BaxmRNA表达的变化。结果：①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93．12％,IC50为（11．33±0．16）μg／ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,BaxmRNA表达逐渐升高。结论：SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

人脑髓鞘碱性蛋白对H2O2诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的抑制作用

背景与目的：人脑髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）广泛分布于神经系统及多种非神经组织之中,而且在肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤等多种肿瘤细胞中均检查到MBP的表达。但MBP与癌细胞侵犯神经组织的活性是否相关、与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道。本研究主要探讨MBP对过氧化氢（H2O2）诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的影响。方法：实验分为MBP cDNA微基因pSVCEPMBPCAT转染组（试验组）、空质粒pSVCEPCAT转染组和未转染组（对照组）。将含人1型胶原al链（COLⅠA1）基因启动子和增强子元件、并在其3’端接MBP cDNA的微基因,转染YTLMC-90细胞,并驱动MBP异位表达：采用MTT法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果：200μmol／L H2O2作用24h后、转染组、未转染组和空载体pSVCEPCAT转染组YTLMC-90细胞的生长抑制率分别为36．67％、84．00％和78．67％（P〈0．001）;对照组YTLMC-90细胞普遍可见凋产细胞特有的形态学及生物化学改变,如胞核固缩、染色质断裂,DNA电泳呈梯状条带;而MBP cDNA微基因转染的YTLMC-90细胞未发现上述凋亡特征。结论：MBP促进YTLMC-90细胞增殖和拮抗H2O2诱导的凋亡,明显减少H2O2对YTLMC-90的细胞毒作用。     

Inhibition of glioma cell line A-172 MMP activity and cell invasion in vitro by a nutrient mixture

Standard multimodality therapy of gliomas is associated with poor patient survival and significant toxicity. Abnormal expression of matrix metalloproteinases is associated with tumor growth and invasion. Based on reported antitumor properties, we investigated the effect of a combination of natural compounds (NM), primarily composed of lysine, proline, ascorbic acid, and green tea extract in vitro on glioma cell line A-172, by measuring MMP secretion, invasion through Matrigel, and cell proliferation. Glioma cells A-172 (ATCC) were grown in modified Dulbecco’s Eagle medium with 10% fetal bovine serum and antibiotics and treated with NM at 0, 10, 50, 100, 500, and 1000 Μg/mL concentration in triplicate at each dose. Cell proliferation was assayed by MTT, MMP secretion by zymography, invasion through Matrigel, and morphology by H&E staining. Zymography showed one band corresponding to MMP-2, which was inhibited by NM in a dose-dependent fashion, with virtual total inhibition at 500-Μg/mL concentration. Invasion through Matrigel was completely inhibited at 1000 Μg/mL NM. NM was not toxic to glioma cell line A-172 at lower concentrations and exhibited toxicity of 50% over the control at 1000 Μg/mL. NM significantly inhibited MMP secretion and invasion-important parameters for cancer prevention, suggesting a possible therapeutic role.     

过氧化氢与胶质瘤细胞凋亡相关性研究进展

胶质瘤发病率、复发率、病死率高,治愈率低。目前治疗以手术治疗为主,辅助以放疗和化疗等综合治疗。过氧化氢（H2O2）是需氧生物普遍具有的细胞氧代谢中间产物,在胶质瘤细胞增殖、浸润、转移的各个阶段都必不可少。研究H2O2的产生及作用、细胞凋亡的机制及H2O2与胶质瘤细胞的关系,可为寻找治疗胶质细胞瘤的靶基因提供相应的指导。     

碱性成纤维细胞生长因子小分子干扰RNA对胶质瘤细胞株U251增殖与凋亡的影响

背景与目的:碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)家族中的重要一员,bFGF是多功能细胞因子,参与创伤愈合、组织修复、未成熟神经细胞的增殖和分化过程.本课题组前期对bFGF在胶质瘤中的表达做过研究,证实bFGF在胶质瘤细胞中过表达,并刺激胶质瘤细胞的增殖和新生血管生成.本研究检测bFGF小分子干扰RNA对胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响.方法:用化学法合成四条针对bFGF的siRNA和一条阴性对照siRNA,并用脂质体法转染胶质瘤细胞系U251;以Opti-MEM I无血清培养基培养的U251细胞作为正常对照.通过RT-PCR和免疫组化的方法检测bFGF的表达,并用流式细胞术、MTT法检测转染后U251细胞的凋亡和增殖活性的变化.结果:转染48 h后,正常对照、阴性对照、siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4组U251细胞中的bFGF mRNA水平分别为0.95 0.02、0.95±0.02、0.85 0.02、0.76±0.04、0.65±0.04和0.56±0.03;转染72 h后,分别为0.95±0.04、0.89±0.05、0.81±0.05、0.80±0.05、0.77±0.04和0.53±0.05.四条bFGF siRNA中,siRNA-4作用最显著.转染48 h后,siRNA-4和阴性对照组细胞增殖抑制率分别为(66.4±1.2)%和(56.3±1.4)%;转染72 h后,分别为(40.0±2.6)%和(14.7±0.6)%,siRNA-4与阴性对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:理想的bFGF小分子干扰RNA 能够抑制该基因的表达并抑制胶质瘤细胞的增殖活性.     

顺铂诱导A549细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂诱导肺癌细胞凋亡的规律，机制以及在肿瘤化疗中的作用。方法 应用形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，原位DNA断裂点的末端标记法和流式细胞仪分析技术，检测顺铂诱导A549细胞的凋亡作用。结果 3mg/L顺铂诱导的细胞凋亡在12-72h持续存在并逐渐增强，呈时间依赖性；顺铂浓度分别为1、3、5、7mg/L时均诱导了细胞凋亡，呈浓度依赖性，在顺铂作用下，细胞被阻滞于G1期。结论 诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制。     

Upregulation of LRIG1 suppresses malignant glioma cell growth by attenuating EGFR activity

Activated epidermal growth factor receptor (EGFR) has emerged as an important therapeutic target for a variety of solid tumors, particularly malignant gliomas. A recently discovered transmembrane glycoprotein, LRIG1, antagonizes the activity of epidermal growth factor receptor family receptor tyrosine kinases and acts as a negative feedback loop of EGFR and proposed tumor suppressors. The aim of this study was to investigate the impact of LRIG1 on the biological features of glioma cells and the possible mechanisms of enhanced apoptosis induced by upregulation of LRIG1. We observed that the expression of LRIG1 was decreased, while the expression of EGFR was increased in the majority of astrocytomas, and the ratio of EGFR/LRIG1 was increased by sixfold in tumors versus corresponding non-neoplastic tissue. Upregulation of LRIG1, followed by a decrease of EGFR on the cytomembrane of the cells, induced cell apoptosis and cell growth inhibition, and further reversed invasion in glioma cell lines and primary glioma cells. Our study now clearly indicates that LRIG1 indeed affects cell fate and biology behaviors of the cells in vitro by inhibiting phosphorylation of downstream MAPK and AKT signaling pathway, and the elevated release level of caspase-8 might contribute to the enhanced apoptosis in LRIG1 transfected glioma cells. Taken together, these findings provide us with an insight into LRIG1 function, and we conclude that LRIG1 evolved in gliomas as a rare feedback negative attenuator of EGFR and could offer a novel therapeutic target to treat patients with malignant gliomas. Fei Ye and Qinglei Gao contributed equally to this work.     

Expression of hepatocyte growth factor and matrix metalloproteinase-2 in human glioma

Hepatocyte growth factor (HGF) has a stimulatory effect on the synthesis of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), which is involved in glioma invasion. In this study, to clarify the correlation between the expression of HGF and MMP-2 in glioma tissues, immunohistochemical analysis of HGF and MMP-2 was performed in 11 cases of astrocytoma, 10 cases of anaplastic astrocytoma, and 9 cases of glioblastoma. As a result, expression of HGF and MMP-2 was correlated with the grade of malignancy (P=0.0181 and 0.0001, respectively), and a significant correlation between the immunoreactivity of HGF and that of MMP-2 was observed (P<0.05). Immunofluorescence study revealed the concomitant expression of HGF and MMP-2 in glioma tissue. In cultured glioma cell lines (SNB-19, U87MG, and U373MG), exogenous recombinant HGF effectively acted on the production of the active and latent forms of MMP-2 protein in a dose-dependent manner. Active MMP-2 increased more effectively than the latent form. Taken together, these results suggest that HGF may promote glioma invasion in vivo by production of MMP-2.     

拓扑替康诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的初步研究

背景与目的:拓扑替康(topotecan,TPT)是新一代水溶性、半合成喜树碱类衍生物,系拓扑异构酶I抑制剂、细胞周期特异性抗肿瘤药物;肝癌为我国发病率居第三位的恶性肿瘤,现有治疗方法的临床疗效均不理想。本文研究TPT诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用,及其细胞毒作用。方法:运用MTT、HE染色、透射电镜、流式细胞仪、免疫组化技术等实验方法,对TPT杀伤HepG2细胞的程度进行了测定并观察了其诱导凋亡的过程。结果:TPT能通过诱导HepG2细胞凋亡的方式,杀伤HepG2细胞,TPT对HepG2细胞具有较强的体外杀伤作用,并存在明显的剂量、时间依赖关系,IC50约为95μg/L。TPT将HepG2细胞阻断在S期,并进一步诱导其凋亡。凋亡形态特征表现为典型的间期凋亡:细胞核染色质固缩,呈新月形聚集于核膜周缘,胞质浓缩,出现空泡。在TPT诱导HepG2细胞凋亡的过程中,不影响bcl-2基因蛋白正常表达(P>0.05)。结论:TPT能诱导HepG2细胞凋亡,细胞毒性较强。