1800 MHz长期电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响

目的探讨长期1800 MHz电磁辐射对NIH/3T3细胞增殖能力的影响。方法采用1800MHz电磁辐射,SAR值2 W/kg,间断暴露方式(5 min on/10 min off),5 h/d。对暴露60 d和138 d的细胞,进行平板克隆和软琼脂克隆实验,并采用ELISA法检测端粒酶的表达。结果平板克隆实验中,60 d暴露组细胞的克隆形成率显著低于假暴露组(P0.05),而138 d暴露组细胞的克隆形成率与假暴露组无明显差异。软琼脂克隆实验中,60 d暴露组和假暴露组细胞均未见克隆形成,而138 d暴露组克隆形成率显著高于假暴露细胞。端粒酶检测结果,60 d暴露组细胞的端粒酶表达量与假暴露组无显著差异,而138 d暴露组细胞的端粒酶表达量显著高于假暴露组(P0.05)。结论 1800 MHz电磁辐射长期暴露至60 d,有损NIH/3T3细胞的增殖能力,而更长期的暴露后(138 d)细胞转化增殖能力增强。     

锌7—金属硫蛋白对过氧化氢引起NIH3T3细胞增殖的抑制作用

为了研究锌7-金属硫蛋白（Zn7-metallothionein,Zn7-MT）对细胞内外过氧化氢引起NIH3T3细胞增殖的影响,本文采用了MTT细胞计数法,^3H-TdR掺入实验,细胞周期时相测定等方法。结果显示低浓度的甲萘醌和氧化氢促进了NIH3T3细胞增殖,使其MTT计数增加,细胞周期S期比例增高,DNA合成率增加。锌7-金属硫蛋白本身对NIH3T3细胞增殖没有影响,但它可以抑制甲萘醌和过氧化氢对NIH3T3细胞促增殖作用。提示锌7-金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的成纤维细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

三种反义c—mycRNA对成纤维细胞NIH3T3的体外生物学效应

目的　了解反义c myc基因稳定整合对正常细胞的影响。　方法　将分别载有c myc第 1、2和 3外显子的反义片段的 3种反义c myc重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3,导入c myc正常表达的正常小鼠成纤维细胞系NIH3T3,并在基因稳定表达后进行各项检测。　结果　 3种反义载体导入明显抑制了NIH3T3c myc表达(抑制作用aM2 >aM3>aM1)、PCNA表达 (aM2 >aM1>aM3) ,使细胞体外生长增殖活性下降 (下降程度aM2 >aM1>aM3) ,aM2、aM3还使细胞周期出现了延长和DNA合成减少 ,并使NIH3T3软琼脂集落形成能力下降 (aM2 >aM3)。　结论　反义c mycRNA的导入对正常细胞的生长增殖能力有抑制作用 ,提示局部治疗和靶向治疗在反义c myc基因治疗中的必要性     

锌7-金属硫蛋白对过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的抑制作用

为了研究锌7-金属硫蛋白（Zn7-metallothionein, Zn7-MT）对细胞内外过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的影响, 本文采用了MTT细胞计数法，3H-TdR掺入实验，细胞周期时相测定等方法。结果显示低浓度的甲萘醌和过氧化氢促进了NIH3T3细胞增殖, 使其MTT计数增加，细胞周期S期比例增高，DNA合成率增加。锌7-金属硫蛋白本身对NIH3T3细胞增殖没有影响，但它可以抑制甲萘醌和过氧化氢对NIH3T3细胞促增殖作用。提示锌7-金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的成纤维细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

ErbB-3 结合蛋白 Ebpl 对 NIH3T3 细胞生长增殖的影响

目的:探讨 erbB-3 结合蛋白 Ebpl 对 NIH3T3 细胞生长增殖的影响.方法:将真核表达质粒 pEGFP-C1 和 Ebpl 基因经双酶切后用 T4 连接酶连接,并经鉴定序列正确后,用脂质体转染剂 Lipofectin Reagent 稳定转染 NIH3T3 细胞,免疫细胞化学显色,在激光共聚焦扫描显微镜下观察 Ebpl 蛋白的表达和定位;通过平板集落形成率观察细胞生长增殖能力的改变.结果:重组质粒鉴定正确,成功构建 Ebpl 稳定表达的 NIH3T3 细胞系,并在显微镜下可见绿色荧光,免疫细胞化学显色可见 Ebpl 蛋白表达;转染目的基因的细胞克隆形成率明显升高.结论:成功构建 Ebpl 稳定表达细胞系,Ebpl 融合蛋白表达于胞质,呈不均匀颗粒状、环状分布;Ebpl 在体外能增强 NIH3T3 细胞生长增殖.     

白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响

目的探讨白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响。方法实验分为对照组和白藜芦醇组。白藜芦醇处理NIH3T3细胞24 h。CCK-8法测定细胞活力,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-tu)、Smo和Gli-1的表达,Western blotting法检测Shh、Ptc、Smo、Gli-1蛋白的表达。结果 1.0.5和1μmol/L白藜芦醇组(0.679±0.047,0.774±0.054)细胞活力分别较对照组(0.585±0.039)明显增强(P<0.05),其中以1μmol/L白藜芦醇组最强。之后随白藜芦醇浓度(10、20、40、80μmol/L)的增高,细胞活力逐渐降低(0.428±0.043,0.395±0.031,0.373±0.017,0.361±0.016),且均较对照组明显减弱(P<0.05),而0.1μmol/L(0.602±0.065)和5μmol/L组(0.556±0.041)细胞活力与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。2.NIH3T3细胞表达Ac-tu、Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1从蛋白,有1根初级纤毛,Smo和Gli-1蛋白位于细胞质。白藜芦醇处理24 h时,Gli-1从细胞质进入细胞核,Smo从细胞质进入初级纤毛,且Shh(0.756±0.659比0.441±0.769,P<0.05)、Ptc-1(0.655±0.347比0.351±0.026,P<0.05)、Smo(0.779±0.064比0.451±0.035,P<0.05)和Gli-1(0.856±0.044比0.560±0.058,P<0.05)蛋白表达较对照组高。结论白藜芦醇可能通过激活Shh信号通路增强NIH3T3细胞的活力。     

超氧阴离子自由基对NIH3T3细胞的转化作用

首次选取ＮＩＨ３Ｔ３细胞，对比检测外源性Ｏ＾－２和致癌，促癌剂争生转化的能力。结果表明，Ｏ＾－２单独作用组较正常对照组和启动剂量Ｂ（ａ）Ｐ单独作用组之转化率提高了近３倍；当Ｏ＾－２与启动剂量Ｂ（ａ）Ｐ协同作用时，转化率上述两组分别提高约１１倍和１０倍；而用ＳＯＤ和ＣＡＴ清除胞外Ｏ＾－２时，转化率下降８２％。     

电磁脉冲辐射诱导小鼠成纤维细胞系NIH/3T3凋亡的研究

目的 研究电磁脉冲（EMP）辐射对小鼠成纤维细胞系（NIH／3T3）凋亡的影响，并探讨EMP对生物体损伤的可能机制。方法 利用场强为60kV/m的EMP对生物体损伤的可能机制。方法 利用场强为60kV/m的EMP照射细胞后，采用细胞计数，MTT比色法，流式细胞术及免疫组化染色等方法，分别观察EMP对HIN／3T3细胞的活力，凋亡以及Bcl-2和p53蛋白表达等的影响。对免疫组化染色阳性的细胞，在高倍镜下用CMIAS－Ⅱ图像－分析系统进行图像分析，所有数据均经SPSS8．0软件进行分析。结果 EMP可明显抑制NIH／3T3细胞的增殖与活力（P＜0．05）；非贴壁细胞率在辐射后明显增加，6h达高峰（33．9％），并可诱导细胞明显凋亡，6h达高峰（15．07％）。图像分析结果表明，EMP辐射后，有不同程度的Bcl-2蛋白表达的下调及p53蛋白表达的上调（P＜0．05）。结论 EMP可诱导NIH／3T3细胞凋亡及Bcl-2及p53蛋白异常表达，提示Bcl-2及p53可能参与了NIH／3T3细胞的凋亡过程。     

ErbB-3结合蛋白Ebp1对NIH3T3细胞生长增殖的影响

目的：探讨erbB-3结合蛋白Ebp1对NIH3T3细胞生长增殖的影响。方法：将真核表达质粒pEGFP—C1和Ebpl基因经双酶切后用T4连接酶连接，并经鉴定序列正确后，用脂质体转染剂Lipofectin Reagent稳定转染NIH3T3细胞，免疫细胞化学显色，在激光共聚焦扫描显微镜下观察Ebp1蛋白的表达和定位；通过平板集落形成率观察细胞生长增殖能力的改变。结果：重组质粒鉴定正确，成功构建Ebp1稳定表达的NIH3T3细胞系，并存显微镜下可见绿色荧光，免疫细胞化学显色可见Ebp1蛋白表达；转染目的基因的细胞克隆形成率明显升高。结论：成功构建Ebp1稳定表达细胞系，Ebp1融合蛋白表达于胞质，呈不均匀颗粒状、环状分布；Ebp1在体外能增强NIH3T3细胞生长增殖。     

Smad7过度表达抑制3T3细胞增殖和TGF-β1基因表达

研究Smad7过度表达对TGF β1基因表达的调控和对 3T3细胞增殖的影响。实验将Smad7质粒 ,通过脂质体介导转染NIH3T3细胞 ,应用RT PCR方法鉴定转染结果和检测TGF β1mRNA的表达 ,以及用免疫细胞化学检测TGF β1蛋白的表达情况 ,并观察基因转染对细胞增殖的影响。结果显示转染Smad7后 ,NIH3T3细胞中TGF β1mRNA的表达显著减少 (P <0 0 5 ) ,TGF β1蛋白的表达下降 ,细胞增殖明显减缓 (P <0 0 5 )。提示Smad7过度表达能够抑制 3T3细胞的增殖和TGF β1基因的表达 ,可以通过阻断TGF β细胞内信号传导来调控TGF β1的生物学行为。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血小板洐生生长因子介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对血小板洐生生长因子（PDGF）介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用。方法：采用MTT法和免疫组化法检测NIH3T3细胞增殖和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：在10^-10～10^-8mol／L浓度范围内。AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖均有抑制作用。并在10^-9mol／L浓度时其抑制作用最佳。PDGF对NIH3T3细胞PCNA的表达具有增强作用．而AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞PCNA的表达有显著抑制作用。结论：AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖有明显抑制作用。     

稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析

目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅡ-Iex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性。方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,得到多个细胞克隆。采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆。选取高表达EG-FRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性。结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex。用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10-5。Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFR-vⅢex特异结合。结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达,以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清。     

Tumorigenic conversion of NIH 3T3 cells by transfection with shope fibroma virus DNA

The properties of NIH 3T3 cells transfected with Shope fibroma virus (SFV) DNA were investigated. Six focus-derived cell lines were established that display the following properties: a) They all contained SFV DNA sequences at early passages, b) five of them also expressed SFV RNA at early passages and induced tumors in nude mice, and c) four lines were anchorage independent. Transfection with cloned DNA fragments containing terminal sequences did not induce foci, except with fragment C, which contains the growth-factor gene. However, these transfected cells failed to cause tumors, suggesting that the growth factor alone may not be responsible for tumorigenesis.     

桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fos、c-Myc表达的影响

目的： 研究肉桂主要成分桂皮醛刺激NIH3T3细胞后c-Fos、c-Myc蛋白在不同时点表达的规律，探讨桂皮醛促进NIH3T3细胞增殖的机制。方法: 采用 MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响；并采用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞c-Fos、c-Myc蛋白表达的影响。结果: 桂皮醛浓度在（8.8×10^-2）-（8.8×10）μg/L浓度范围内对NIH3T3细胞具有促增殖作用。当其浓度为5.5 μg/L时，促增殖作用最显著。在此浓度下，经桂皮醛刺激后，c-Fos和c-Myc蛋白均在2 h开始表达，3 h时表达明显增加。结论: 桂皮醛可以上调c-Fos、c-Myc蛋白的表达，提示桂皮醛促进细胞增殖可能与其能促进c-Fos、c-Myc快速表达有关。     

人类重组酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过对人类重组型和野生型酸性成纤 维细胞生长因子（raFGF，waFGF）的比较研究，探讨raFGF与促分裂性有关的生物学作用。 方法：应用NIH3T3细胞株，用MTT法通过细胞增殖实验检测waFGF和raFGF 的促分裂性，通过流式细胞术检测细胞凋亡、细胞膜通透性和线粒体膜电位。同时检测肝素 （HS）对aFGF生物学作用的影响。结果：raFGF对细胞增殖 作用明显低于waFGF。raFGF对细胞凋亡的抑制作用及其对细胞膜通透性的增强作用也明显低 于waFGF，对线粒体膜电位的增强作用明显低于waFGF。HS对aFGF的生物学作用具有促进作用 。结论：raFGF的促分裂作用低于waFGF，而对细胞凋亡的影响不明显。     

Transforming Growth Factor Beta Stimulates Mitogenically Mouse NIH3T3 Fibroblasts and Those Cells Transformed by the EJ-H-ras Oncogene

Abstract

TGF-β1 stimulates thymidine incorporation and the growth rate of mouse NIH3T3 fibroblasts and of those cells transformed by the EJ-H-ras oncogene (TR15 cells), in the presence and the absence of serum. Thymidine incorporation, in serum-deprived cells, is stimulated to a higher degree by 0.1-1 ng/ml of TGF-β in NIH3T3 than in TR15 cells, which have a 10-fold higher basal level of incorporation. In both cell types TGF-β1 is as active, or more active than other mitogens (TGF-α, PDGF-AB, bFGF) at the same concentration. The growth rate of NIH3T3 cells, in low serum or serum-free (S^?) medium, is stimulated by only 10 picograms/ml of TGF-β1, and that of TR15 cells, in S^? medium, by only 1 picogram/m1. In contrast, TGF-β1 inhibits mitogenically unestablished mouse embryo fibroblasts and these fibroblasts immortalized spontaneously and able to grow in S^? medium. It also inhibits the anchorage-independent growth of TR15 cells. NIH3T3 and TR15 cells respond, similarly, to TGF-β activated by acification of their culture medium. The kinetics of thymidine incorporation and of activation of the c-myc proto-oncogene, observed already after 1 hr, in treated NIH3T3 and TR15 cells, suggests a direct mitogenic stimulation. The level of activated c-myc RNA is 2-fold higher at 2 hr, and subsequently decreases relatively less in the TR15 cells.     

碱性成纤维细胞生长因子在低氧大鼠肺动脉的表达及其对肺动脉张力的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在低氧性肺动脉高压发病中的可能作用。方法:应用逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)技术观察低氧大鼠肺动脉bFGF的表达水平,并观察bFGF对离体大鼠肺动脉环收缩功能的影响。结果:①低氧时,肺动脉bFGFmRNA表达明显增加,bFGF与β-actin的RT-PCR反应产物的放射强度(counts·min^-1)之比由对照的0.5074上升到0.9182(低氧1周)和0.7812(低氧2周)(P均＜0.05)。②bFGF能收缩离体大鼠肺血管环,收缩强度与剂量相关(r=0.695,P＜0.05),其EC₅₀为2.62×10^-7mol/L。结论:提示bFGF可能参与低氧性肺动脉高压的发病过程。     

携带人多药抗性基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

从ｐＨａｍｄｒｌ／Ａ质粒用ＸｈｏⅠ和ＳａｃⅡ将ｍｄｒｌ基因切下后克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒的相应酶切位点获得测序质粒ｐＢＳｍｄｒｌ，测定了ｍｄｒｌ基因的两端序列。用ＥｃｏⅠＣＲＩ和ＸｈｏⅠ从ｐＢ－Ｓｍｄｒｌ切下ｍｄｒｌ基因，定向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ和ｐＭＳＣＶ２．１，得到携带ｍｄｒｌ基因的逆转录病毒载体ｐＬｍｄｒｌＳＮ和ｐＭＳＣＶｍｄｒｌ。用ＰＡ３１７病毒包装细胞包装后三种携带ｍｄｒｌ基因的病毒具有相似的滴度。用此三种病毒分别感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞后，以ｐＨａｍｄｒｌ／Ａ载体ｍｄｒｌ基因产物表达量最高。提示Ｈａｒｖｅｙ肉瘤病毒的启动子可能具有较高的强度。     

核内M-CSF对NIH3T3细胞内微丝的影响

目的建立M-CSF核内稳定表达的NIH3T3细胞系,探讨核内M-CSF对细胞骨架的影响。方法经脂质体介导核内定位表达重组体pCMV/M-CSF转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用Rt-PCR、免疫细胞化学鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用考马斯亮蓝染色细胞微丝测定M-CSF进入细胞核后对细胞骨架的影响。结果RT-PCR结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSFmRNA;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。考马斯亮蓝染色结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。结论核内M-CSF可引起NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。