Caspase-9和Livin在中耳胆脂瘤中的表达及意义

目的研究凋亡相关蛋白Caspase-9和Livin在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达,揭示二者在中耳胆脂瘤发生发展中的作用。方法采用免疫组化法检测凋亡促进蛋白Caspase-9和凋亡抵制蛋白Livin在23例中耳胆脂瘤及10例正常外耳道皮肤组织中的表达,对染色结果进行量化处理和统计学分析。结果 Caspase-9和Livin蛋白在中耳胆脂瘤上皮的表达均高于在正常外耳道皮肤中的表达(P<0.01);二者在胆脂瘤中的表达呈正相关,相关系数r=0.848(P<0.05)。结论凋亡促进蛋白Caspase-9和凋亡抑制蛋白Livin在中耳胆脂瘤中的表达同步升高,提示就凋亡过程而言,二者达到了新的平衡。     

凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互关系,探讨其表达对胆脂瘤增殖能力的影响。方法运用免疫组织化学SP法检测21例胆脂瘤标本及11例外耳道骨部正常皮肤组织中Survivin、Bcl-2的表达。结果Survivin、Bcl-2在胆脂瘤上皮的表达与正常外耳道皮肤上皮比较,不仅范围广,基底上层也有表达,而且表达水平显著增高,两者比较有统计学意义(P<0.01)。胆脂瘤上皮中Survivin表达指数与Bcl-2表达指数呈正相关(r=0.553,P<0.01)。结论凋亡抑制蛋白Survivin,Bcl-2在中耳胆脂瘤的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用,它们可能参与胆脂瘤上皮的凋亡调控过程,因此适当控制Survivin,Bcl-2的表达可能会更有效地控制中耳胆脂瘤的发展。     

Caspase-8在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的 研究caspase-8(胱天蛋白酶-8)在中耳胆脂瘤上皮的表达,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的作用.方法 分别采用免疫组化法和Western Blot(蛋白质印迹法)技术检测caspase-8在36例中耳胆脂瘤组织及20例正常外耳道皮肤组织中的表达情况.结果 caspase-8在36例胆脂瘤上皮各层细胞中均有强表达,而正常外耳道皮肤表达较弱,caspase-8在胆脂瘤上皮中的蛋白表达水平较正常外耳道皮肤显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 胆脂瘤上皮中caspase-8表达较外耳道皮肤显著增高,其可能参与了中耳胆脂瘤上皮细胞的过度凋亡及增殖的调控.     

中耳胆脂瘤上皮中Livin、p73的表达与其发生关系研究

目的 观察凋亡抑制蛋白家族成员Livin及p53基因家族成员p73在中耳胆脂瘤上皮的表达情况,探讨它们在胆脂瘤发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学技术SP法(streptavidin-perosidabe,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测30例胆脂瘤标本及16例外耳道正常皮肤组织中的Livin及p73的表达情况,并结合胆脂瘤对听小骨骨质破坏程度,采用SPSS 10.0软件包进行统计学分析.结果 Livin表达于细胞核及部分细胞质,而D73表达于胞浆,上述两指标在中耳胆脂瘤中的阳性表达率分别为76.7%、40%,Livin在胆脂瘤上皮中的表达高于外耳道正常皮肤(P<0.05),而p73在胆脂瘤及外耳道皮肤中的表达差异无显著性(P>0.05),听小骨骨质破坏程度与上述指标的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 Livin在中耳胆脂瘤的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起相应作用,可能参与胆脂瘤上皮的凋亡调控过程,而p73在中耳胆脂瘤的发生和发展中的作用尚难确定.     

PTEN、 P-Akt和NF-кB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的 研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt (P-Akt)及核转录因子- κB (NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K (phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)- Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用.方法 采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin - peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF- kB蛋白的表达.结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7％,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3％ (P＜ 0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0％,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7％ (P＜0.01);NF- κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3％,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0％ (P＜ 0.01).在30例中耳胆脂瘤上皮组织中,PTEN分别与P-Akt、NF-κB蛋白的表达之间呈显著负相关(P＜0.01),而P-Akt和NF- κB蛋白的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 PTEN、P-Akt和NF- κB在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用.胆脂瘤上皮中PI3K-Akt信号通路的激活可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制.     

PTEN、P-Akt和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt(P-Akt)及核转录因子-κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)-Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin-peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF-κB蛋白的表达。结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7%,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3%(P<0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0%,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7%(P<0.01);NF-κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3%,...     

细胞外凋亡途径与中耳胆脂瘤细胞凋亡

目的 研究细胞外凋亡途径在中耳胆脂瘤上皮的表达及意义,探讨与中耳胆脂瘤上皮细胞凋亡的关系.方法 实验采用免疫组化SP技术和原位末端标记法(TUNEL)检测20例中耳胆脂瘤组织和10例外耳道正常皮肤组织中Fas/APO-1和caspase-3的表达情况及细胞凋亡情况.结果 Fas/APO-1和caspase-3在胆脂瘤上皮中由基底层向外至角质层逐渐增加,与正常外耳道皮肤表达比较,不仅范围广,而且表达水平也明显增强,两种组织中Fas/APO-1阳性表达的平均积分吸光度分别为7.05±1.14和2.30±0.83(t=11.72,P＜0.01),两种组织中caspase-3阳性表达的平均吸光度分别为9.61±1.83和2.65±0.43(t=11.75,P＜0.01),两者比较有统计学意义.原位细胞凋亡检测实验(TUNEL染色法)在胆脂瘤上皮组织中和正常外耳道皮肤组织中可见阳性细胞的平均积分吸光度分别为31.63±27.51和7.44±2.01(t=2.76,P＜0.05),两组比较有显著性差异,且Fas/APO-1和caspase-3表达部位与TUNEL阳性细胞分布基本一致.Fas/APO-1和caspase-3阳性表达与TUNEL的阳性表达呈正相关,相关指数分别为r=0.544和r=0.501,P=0.000.结论 Fas/APO-1和caspase-3之间以及与凋亡细胞存在正相关,Fas/APO-1和caspase-3在中耳胆脂瘤的发生发展过程中也起着重要作用.     

蛋白酪氨酸磷酸酶基因和磷酸化蛋白激酶B在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的 检测蛋白酪氨酸磷酸酶基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-AKT)在人类中耳胆脂瘤上皮组织中的表达情况及其相关性,探讨他们在中耳胆脂瘤上皮细胞形成机制中的重要作用.方法 应用免疫组织化学SP法检测40例人中耳胆脂瘤组织标本及15例正常皮肤标本中PTEN、P-AKT蛋白的表达.结果 免疫组化显示细胞质PTEN主要在胆脂瘤组织和正常皮肤组织的上皮细胞浆着色,阳性表达率为50.0％,明显低于正常皮肤组的86.6％ (x2=5.075,P＜0.01);P-AKT蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织和正常皮肤组的上皮细胞浆着色,阳性表达率分别为72.5％和26.7％,两者差异具有显著性(x2=7.605,P=0.006,P＜0.01),15例外耳道正常上皮组织中,PTEN与P-AKT蛋白的表达之间呈显著负相关(r=-0.689,P＜0.0001,P＜0.01).结论 PTEN和P-AKT蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中的异常表达可能与胆脂瘤上皮的高度增殖和抗凋亡状态密切相关.PTEN蛋白表达缺失导致其抑制作用减弱,使P-AKT蛋白表达过度,继而引起胆脂瘤上皮细胞凋亡受抑制.     

中耳胆脂瘤中热休克蛋白70和细胞周期素依赖蛋白p27的表达及病理意义

目的 探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)和细胞周期素依赖蛋白p~(27)在中耳胆脂瘤中的表达及病理意义。方法 应用免疫组织化学SP法和原位杂交技术,检测40例中耳胆脂瘤上皮中Hsp70、Hsp70mRNA和p~(27)的表达,选用20例正常外耳道皮肤作对照,应用全自动图像分析仪分析各张切片的平均吸光度值。结果Hsp70、Hsp70mRNA和p~(27)在中耳胆脂瘤上皮中表达均明显高于在正常外耳道皮肤中的表达(P<0.05)。而Hsp70和p~(27)二者间在中耳胆脂瘤上皮中表达无相关性(P>0.05)。结论 Hsp70和p~(27)二者可能独自参与了中耳胆脂瘤上皮的增殖、分化及胆脂瘤形成。     

肿瘤坏死因子受体1在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在中耳继发性胆脂瘤上皮的表达，探讨其在胆脂瘤型中耳炎的发病机制中的作用。方法 分别采用免疫组化法和Western blot技术检测TNFR1在36例中耳胆脂瘤组织及20例正常外耳道皮肤组织中的表达情况。结果 TNFR1在36例胆脂瘤上皮各层细胞中均有强表达，定位于胞膜和胞质，而外耳道皮肤表达较弱甚至没有表达，TNFR1在胆脂瘤上皮中的蛋白表达水平较外耳道皮肤显著增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 胆脂瘤上皮中TNFR1表达较外耳道皮肤显著增高，肿瘤坏死因子可能通过与TNFR1相结合而导致胆脂瘤上皮细胞的过度增殖及凋亡。     

HGF在中耳胆脂瘤中的表达和意义

目的 研究肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)在中耳胆脂瘤上皮中的表达及与中耳胆脂瘤的血管形成的关系和对胆脂瘤侵蚀行为的影响.方法 采用免疫组织化学SP法检测HGF、微血管计数(Ⅳ型胶原蛋白染色)在34例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道组织中的表达.结果 HGF主要表达于胆脂瘤上皮层和上皮下基质细胞,在正常外耳道皮肤中仅表达于上皮基底层;胆脂瘤基质周围微血管计数均数高于正常外耳道皮肤,二者差异具有显著性(P＜0.05).结论 HGF在中耳胆脂瘤中高表达且与炎症程度呈正相关;微血管计数随着胆脂瘤基质周围炎症程度的增加而增加.HGF诱导的新生血管形成可能是中耳胆脂瘤侵蚀性行为的主要原因之一.     

核转录因子κ-Bp65在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的检测核转录因子-κBp65（nuclear factor kappa Bp65,NF-κBp65）在中耳胆脂瘤上皮中的表达和活化,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中NF-κBp65蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白阳性表达定位于上皮细胞核。NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中阳性表达率为63.3%,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0%（P〈0.01）。结论NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用。胆脂瘤上皮中NF-κBp65的活化可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制。     

金属硫蛋白2及白细胞介素1α和6在中耳胆脂瘤组织中的表达及意义

目的 观察金属硫蛋白2( metallothionein 2,MT-2)及白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素6(IL-6)在中耳胆脂瘤组织中的表达及相关性,探讨其在中耳胆脂瘤发生发展过程中的作用.方法 采用免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测25例中耳胆脂瘤组织和7例正常外耳道皮肤组织中MT-2及IL-1α、IL-6蛋白和MT-2 mRNA的表达情况并分析其相关性.进一步以胆脂瘤鳞屑刺激人角质细胞系HaCaT,观察细胞MT-2 mRNA和蛋白质的表达变化.结果 MT-2、IL-1α及IL-6在中耳胆脂瘤中的表达明显高于正常外耳道皮肤,差异具有统计学意义(P值均＜0.05);MT-2mRNA在中耳胆脂瘤和正常外耳道皮肤中的表达差异具有统计学意义(t=15.38,P＜0.05).中耳胆脂瘤组织中MT-2与IL-1α的表达呈正相关关系(r=0.856,P＜0.05),与IL-6的表达亦呈正相关关系(r=0.714,P＜0.05).在胆脂瘤鳞屑刺激下,HaCaT细胞MT-2的mRNA和蛋白质表达均有明显增强,其表达变化与鳞屑组织呈浓度依赖关系.结论 MT-2和IL-1α、IL-6的异常表达可能在中耳胆脂瘤的发生、发展过程中起一定的作用.胆脂瘤鳞屑组织可能通过促进MT-2的过量表达而参与了胆脂瘤上皮的过度增殖.     

HSP27和Caspase-3在中耳胆脂瘤中的表达及意义

目的 探讨抑凋亡蛋白HSP27和促凋亡蛋白Caspase-3在中耳胆脂瘤发生发展中的可能作用及意义。方法 采用Western blot免疫印迹法检测锦州医科大学附属第一医院2021年1月～2021年8月期间20例中耳胆脂瘤标本及11例正常皮肤标本中HSP27、Caspase-3及内参GAPDH的表达情况；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测13例中耳胆脂瘤标本及11例正常皮肤标本中HSP27和Caspase-3 mRNA的表达；比较结果。结果 Western blot结果示，在中耳胆脂瘤中HSP27(t=3.92,P<0.01)和Caspase-3(t=4.02,P<0.01)的表达显著高于正常皮肤，差异有统计学意义。qRT-PCR结果示，中耳胆脂瘤中HSP27的mRNA(t=4.85,P<0.01)和Caspase-3的mRNA表达量(t=3.70,P<0.01)明显高于正常皮肤，差异有统计学意义。(3)在中耳胆脂瘤标本中，HSP27和Caspase-3表达呈显著负相关(r=-0.615,P<0.01)。结论 HSP27和Caspase-3在...     

端粒酶催化亚单位和c-Myc蛋白在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的:观察端粒酶催化亚单位(TERT)和癌基因cMyc的表达产物(cMyc蛋白)在中耳胆脂瘤上皮中的表达情况,分析其在胆脂瘤上皮增殖演变过程中的作用。方法:应用SP法和计算机图像分析系统,检测TERT、cMyc蛋白在32例胆脂瘤组织和14例胆脂瘤患者外耳道皮肤中的表达情况,并进行比较。结果:TERT和cMyc蛋白在所有胆脂瘤上皮各层细胞均存在较强表达,外耳道皮肤表达较弱。各组间胆脂瘤上皮各指标平均阳性细胞率和平均吸收度(平均灰度的倒数),均高于外耳道皮肤,差异有统计学意义(P<0.05);皮下结缔组织伴有大量的炎症细胞,如:淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞和巨噬细胞;胆脂瘤上皮中TERT和cMyc蛋白之间存在正相关关系(P<0.01)。结论:TERT和cMyc蛋白在胆脂瘤上皮的表达从不同方面反映了胆脂瘤上皮的过度增生和角化,二者在胆脂瘤的发病过程中有协同作用;上皮下炎症反应可能是角化细胞过度增殖的一个原因。     

两种基质金属蛋白酶在胆脂瘤和中耳癌中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMP)的MMP－2和MMP－9的胆脂瘤和中耳癌中的表达差异及其在骨浸润作用。方法 采用免疫组织化学方法检测36例胆脂瘤上皮，10例胆脂瘤外耳道皮肤、16例中耳癌组织及正常组织中MMP－2和MMP－9的表达。结果 ①MMP－2和MMP－9在胆脂瘤上皮染色最强。而且在上皮组织的各层细胞均有表达，基底膜染色最强。②胆脂瘤上皮中的MMP－2和MMP－9的表达明显高于其对应的外耳道皮肤和正常外耳道上皮。MMP－2阳性表达在胆脂瘤上皮中为83％，胆脂瘤外耳道上皮为50％，正常外耳道皮肤2例有微弱表达。③16例中耳鳞癌组织中，MMP－9的阳性达率为50％（8／16），MMP－2的阳性表达率为56.25%(9/16)，表达水平与肿瘤的病理分级和临床分期有关。④中耳癌组织中MMP－2的表达与MMP－9表达不致，而胆脂瘤组织中MMP－2和MMP－9的表达密切相关。结论 胆脂瘤向周围骨质侵袭的特性与中耳癌相似，MMPs家族及其抑制剂之间的平衡紊乱所致的蛋白水解酶活性增高是引起中耳胆脂瘤骨吸收的原因之一。     

P-EGFR、P-ERK和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的研究磷酸化表皮生长因子受体(P-EGFR)、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)和细胞核转录因子κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达情况,探讨EGFR/ERK/NF-κB信号通路在中耳胆脂瘤发病机制中的作用。方法应用免疫组织化学SP法及Western blot(WB)免疫印迹法检测30例中耳胆脂瘤标本及15例正常外耳道皮肤组织中P-EGFR、P-ERK和NF-κB蛋白的表达。结果(1)P-EGFR蛋白阳性表达主要定位于细胞质和(或)细胞膜,在胆脂瘤组的阳性表达率为63%,明显高于正常外耳道皮肤组的20%(P<0.05);P-ERK蛋白阳性表达主要定位于细胞质和(或)细胞核,在胆脂瘤组的阳性表达率为70%,明显高于正常外耳道皮肤组的20%(P<0.05);NF-κB蛋白阳性表达主要定位于细胞核,在胆脂瘤组的阳性表达率为60%,明显高于正常耳道皮肤组的13.3%(P<0.05)。在30例中耳胆脂瘤组织中,P-EGFR、P-ERK和NF-κB两两之间呈正相关关系(P<0.05)。(2)Western blot免疫印迹法检测结果显示:中耳胆脂瘤组中P-EGFR、P-ERK和NF-κB的表达量明显高于正常外耳道皮肤组的表达量。结论 P-EGFR、P-ERK和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中表达增强,EGFR/ERK/NF-κB信号通路可能在中耳胆脂瘤组织的形成和发展过程中起重要作用。     

中耳胆脂瘤上皮PTEN基因的表达及意义

目的探讨PTEN基因在中耳胆脂瘤形成机制中的作用。方法应用免疫组化染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测32例中耳胆脂瘤组织和10例正常外耳道皮肤组织中PTEN的表达情况。结果中耳胆脂瘤组织和正常外耳道皮肤组织均有PTENmRNA和蛋白的表达,且两组间无统计学差异(P>0.05)。结论在胆脂瘤形成过程中,PTEN的作用更趋向于维持上皮细胞的正常生理状态,而不是发生基因异常导致细胞非正常增殖。     

两种基质金属蛋白酶在胆脂瘤和中耳癌中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP）的MMP-2和MMP-9在胆脂瘤和中耳癌中的表达差异及其在骨浸润作用。方法采用免疫组织化学方法检测36例胆脂瘤上皮,10例胆脂瘤外耳道皮肤、16例中耳癌组织及正常组织中MMP-2和MMP-9的表达。结果①MMP-2和MMP-9在胆脂瘤上皮染色最强。而且在上皮组织的各层细胞均有表达,基底膜染色最强。②胆脂瘤上皮中的MMP-2和MMP-9的表达明显高于其对应的外耳道皮肤和正常外耳道上皮。MMP-2阳性表达在胆脂瘤上皮中为83%,胆脂瘤外耳道上皮为50%,正常外耳道皮肤2例有微弱表达。③16例中耳鳞癌组织中,MMP-9的阳性表达率为50%（8/16）,MMP-2的阳性表达率为56.25%（9/16）,表达水平与肿瘤的病理分级和临床分期有关。④中耳癌组织中MMP-2的表达与MMP-9表达不一致,而胆脂瘤组织中MMP-2和MMP-9的表达密切相关。结论胆脂瘤向周围骨质侵袭的特性与中耳癌相似,MMPs家族及其抑制剂之间的平衡紊乱所致的蛋白水解酶活性增高是引起中耳胆脂瘤骨吸收的原因之一。     

热休克蛋白70在中耳胆脂瘤中的异常表达

目的研究热休克蛋白(HSP70)在中耳胆脂瘤组织中的异常表达,探讨HSP70与胆脂瘤的关系及其作用.方法采用免疫组化SABC染色法、计算机图像定量分析法,对25例中耳胆脂瘤和10例正常外耳道皮肤中HSP70的表达情况进行观察.结果在25例胆脂瘤上皮组织的全层及上皮下结缔组织中炎性细胞和成纤维细胞的胞浆中均有HSP70强表达,部分核中也有强表达.10例正常外耳道皮肤中HSP70为弱表达.计算机图象分析仪定量分析,结果显示胆脂瘤上皮中HSP70阳性细胞的平均光密度为0.3309±0.0070,正常外耳道上皮为0.1798±0.0020,胆脂瘤上皮中HSP70的含量显著高于外耳道皮肤(P＜0.001).结论HSP70可能参与了胆脂瘤的形成和发展.