2008年深圳市甲3亚型流感病毒基因特异性分析

目的了解2008年深圳市H3N2亚型流感流行及病毒变异情况。方法用狗肾传代细胞(MDCK)和鸡胚进行流感病毒分离,收获病毒后提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后送大连宝生物公司纯化及测序,测序结果用SIMMONIC软件和MEGA3.1软件进行序列分析。结果深圳2008年流行的H3N2亚型流感病毒血凝素与深圳2007年流行的差异不大,而与同期疫苗毒株A/Wisconsin/67/2005比较有一定的差异,B抗原决定簇上有1个位点发生替换,158位R替换了K;1个糖基化位点增加,在122位氨基酸由D变成了N;与世界卫生组织推荐的2009年流感疫苗毒株比较差异不大。结论深圳市2008年流行的H3N2亚型流感病毒并未形成新的变种,其漂移趋势与世界H3N2亚型流感漂移趋势一致。     

深圳市福田区2007年流感监测结果分析

目的分析深圳市福田区2007年流感流行特征。方法对深圳市福田区人民医院流感样病例进行监测，并对部分流感样病人采集咽拭子进行流感病毒分离和型别鉴定。结果2007年全年共监测样品273份，分离出流感病毒62株，阳性率22．8％，其中H1N1亚型2株，H3N2亚型41株，B（Victoria）亚型13株，B（Yamagata）亚型6株。结论2007年深圳市福田区流感流行情况较为平稳，流行优势株为H3N2亚型，与全市流行株型相同。     

海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒血凝素基因特性

目的 了解海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒血凝素基因遗传进化规律与氨基酸变异情况。方法 选取2019—2020监测年度海南省5家流感监测网络实验室分离的16株H3N2亚型流感毒株进行一代全基因组测序,利用MEGA 10.1.8构建血凝素基因系统进化树,并分析氨基酸位点替换情况,应用DNA Star 7.0.1软件进行血凝素基因同源性分析。结果 系统进化树显示,相比于疫苗株A/Kansas/14/2017 (2019—2020）,16株H3N2亚型流感病毒分离株血凝素基因在进化树上与疫苗株A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016（2018—2019）亲缘关系更近,属于3C.2a1分支,核苷酸与氨基酸同源性范围分别为98.5%~98.9%、97.9%~98.4%。16株分离株在抗原性位点发生8处氨基酸位点替换,涉及5个抗原决定簇;15株分离株在糖基化位点发生2处缺失。结论 2019—2020年监测年度海南省H3N2亚型流感病毒与2018—2019年疫苗株亲缘关系较近,血凝素蛋白抗原性位点在5个决定簇均有变异,易造成较大流行,WHO 推荐的2019—2020年疫苗株保护效果可能不理想。应密切关注H3N2亚型流感病毒的流行与基因变异情况,为流感病毒疫苗株推荐及防控提供科学依据。     

广州市A型流感病毒血凝素基因的遗传变异研究

 【目的】 了解2006-2007年广州地区流感的病原学分布,掌握 H1N1亚型流感病毒血凝素基因(HA)的遗传和进化特征。【方法】 选取2006-2007年广州市19个流感监测点的流感病毒代表株共45株,应用病原学、血清学和分子生物学方法对病毒的型别进行了鉴定;选取24株H1N1亚型流感病毒进行全长HA基因的扩增、克隆与分子进化分析。 【结果】 A型流感病毒H1N1和B型流感病毒交替成为广州地区2006年流感的优势流行株;2006-2007年广州地区H1N1亚型流感病毒流行株在HA蛋白的抗原区、受体结合位点和潜在糖基化位点均发生了点突变;遗传进化分析结果表明,24株H1N1亚型毒株间基因同源性的平均值为98.4%;与WHO推荐的疫苗株(New Caledonia/20/1999和Solomon Islands/3/2006)相比,同源性高达96.6%和97.8%。【结论】 2006年,广州地区流感的病原体为H1N1亚型流感病毒和B型流感病毒;2006-2007年广州市H1N1亚型流感病毒HA基因发生了一定程度的变异, 有必要对毒株的变异加强监测;WHO推荐的2006-2007年H1N1亚型流感病毒疫苗株适用于我国人群的免疫预防。     

2007年深圳市第四人民医院流感监测结果分析

目的了解深圳市福田区2007年流感病原学和流行特征。方法每周采集流感样病例的咽拭子10～40份,用MDCK细胞培养法进行流感病毒分离,采用血凝抑制试验鉴定流感病毒型别。结果2007年全年共监测样品273份,分离出流感病毒62株,阳性率为22.8%,其中H1N1亚型2株,H3N2亚型41株,B(Victoria)亚型13株,B(Yamagata)亚型6株。6月流感分离率(51.52%)最高。结论2007年深圳市福田区流感流行情况较为平稳,有明显季节性,在6月出现流感病毒分离高峰,流行优势株为H3N2亚型,与全市流行株型相同。     

2002年广东省H3N2亚型流感病毒流行的分子基础

目的 了解广东省2002年H3N2亚型流感病毒流行及抗原性变异情况。方法 用狗肾传代细胞(MDCK)和鸡胚进行流感病毒分离，用交叉血凝抑制实验对毒株进行抗原性分析；提取病毒RNA，用一步法RT-PCR扩增血凝素基因(H3A)，产物纯化后，并将其克隆到pMD18—T Vector，进行序列测定和分析。结果 2002年1-10月共获得流感病毒246株，其中H3N2亚型210株，占85．4％，H1N1亚型2株，占0．8％，B型34株，占13．8％；2002年流感流行的高峰是6月；抗原性分析显示，2002年广东省H3N2亚型流感病毒A／粤/236/2002和2001年流行株A／粤／448／2001以及目前国内代表株A／闽／151／2001的抗原比分别是5．6和4．0；其HAl区氨基酸序列和国际代表株A／悉尼／5／97同源性为94．2％，有19个氨基酸差异，其中发生在抗原决定族A、B、E上的有6个，受体结合部有3个。结论 2002年广东省流感病毒以H3N2亚型为主，其流行的分子基础是基因变异导致抗原性发生漂移。     

江西省2004-2005年流感病原学监测结果分析

目的 对流感病毒进行病原学监测，进一步了解流感病毒的变异特点，探索流感流行的规律。方法 采集国家级监测哨点医院流感样病人的鼻咽拭子标本，用MDCK细胞分离流感病毒。结果 2004年共采集标本551份，分离出流感病毒65株，分离率11．81％，其中H3N2亚型53株；B型（Yamagata系）12株。2005年共采集标本926份，分离出流感病毒140株，分离率15．12％，其中H1N1亚型36株；H3N2亚型85株；B型（Yamagata系）28株。结论 2004年江西省有H3N2亚型和B型（Yamagata系）流感病毒流行，H3N2亚型流感病毒为流行优势株。2005年江西省有H3N2亚型、H1N1亚型和B型（Yamagata系）流感病毒流行，虽然于3月出现HlNl亚型流感病毒，但H3N2亚型流感病毒仍然为全年的流行优势株。     

2010—2012年深圳市龙岗区流感病原学监测分析

目的分析2010-2012年深圳市龙岗区流感流行特点和流感病毒优势株的情况。方法对区内监测哨点流感标本进行狗肾传代细胞（MDCK）病毒分离与血凝试验鉴定,描述性分析区内流感的流行情况。选取B型流感优势病毒株进行RT-PCR扩增HA1片段并测序。测序结果与WHO流感疫苗株进行同源性比对,绘制系统发生树。结果2010—2012年共采集流感样病例咽拭子1014份,流感病毒分离率为30．6％（310／1014）,其中新甲型H1N1亚型80株（25．8％）,季节性H1N1亚型I株（0．3％）,季节性H3N2亚型85株（27．5％）,B型流感Victoria亚型138株（44．5％）,Yamagata亚型6株（1．9％）。不同年龄组病毒阳性率差异有统计学意义（X^2=21．194,P〈0．05）,以25-岁年龄组阳性率（35．5％）最高。2010—2012年龙岗区流感优势流行株依次为B型流感Victoria型、新甲H1N1型、甲型H3N2型。系统进化树显示2013年WHO推荐流感疫苗与本区流感病毒同处一个分支。结论龙岗区同时存在多种流感病毒交替流行现象,但新预测流感疫苗可有效覆盖本区流感病毒。     

海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因特性

目的 分析海南省2019—2020年H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化特征与关键氨基酸位点变异情况。 方法 从海南省流感监测网络实验室分离的流感毒株中按照不同时间选取16株H3N2亚型分离株进行一代全基因序列测定,应用DNA Star 7.0.1软件进行神经氨酸酶基因同源性分析,应用MEGA 10.8.1软件构建神经氨酸酶基因系统进化树,并分析耐药性位点与抗原决定位点氨基酸替换情况。 结果 神经氨酸酶基因同源性分析与系统进化分析显示,16株分离株与疫苗株A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016（2018—2019）核苷酸与氨基酸相似性分别为98.5%~99.1%、98.3%~98.7%,进化上属于3c.2a1分支。14株分离株发生神经氨酸酶抗原性位点N329S变异,11株分离株发生E344K变异,未发生耐药性位点氨基酸替换。 结论 2019—2020年海南省流行的H3N2亚型流感病毒属于3c.2a1分支,与2018—2019年疫苗株亲缘关系较近;大部分分离株在神经氨酸酶抗原决定位点发生了一定的改变,但变异程度不大,未发生耐药位点变异。今后应持续加强流感病毒病原学监测,密切关注H3N2亚型流感病毒耐药性基因变异,及时跟踪关键氨基酸位点替换情况,为科学防控提供理论依据。     

深圳南山区2005年流行性感冒病原学监测分析

目的了解流感病毒的流行情况，探讨流感流行规律，为制订流感控制措施提供依据。方法对辖区监测门诊及疫情点的疑似流感样病例采集咽拭子标本，接种狗肾传代细胞（MDCK）培养进行流感病毒分离及进行血凝试验，并对阳性者进行血凝抑制试验进行分型鉴定。结果全年检测流感样标本与咽拭子标本共480份，分离出流感病毒64株，分离率13．33％。分别为H1N1亚型9株、H3N2亚型44株、B型11株。结论2005年深圳市南山区是以H3N2亚型流感病毒流行为主，九月份以H3N1亚型和B型流感流行为主。     

季节性流感疫苗免疫血清与H7N9禽流感病毒交叉反应研究

目的分析接种季节性流感疫苗人群是否具有对新发H7N9流感病毒具有交叉保护,并反向检测了雪貂产生H7N9抗血清与H1／H3／H5不同亚型流感病毒的免疫反应。方法利用血凝抑制试验和微量中和实验检测疫苗免疫后人群转阳血清对A／Anhui／1（H7N9）病毒中和作用及雪貂H7N9抗血清与A／California／07／2009（H1N1）、A／PR／8／34（H1N1）、A／Brisbane／59／2007（H1N1）、A／Brisbane／10／2007（H3N2）、A／Shenzhen／406H／2006（H5NI）和A／Vietnam／1203／2004（H5N1）等不同亚型病毒的中和作用。结果季节性流感疫苗受众者转阳血清与H7N9病毒反应HI及中和抗体反应均为阴性,雪貂H7N9抗血清与H1／H3／H5不同亚型流感病毒反应HI及中和抗体反应均为阴性。结论季节性流感疫苗接种人群不具有对新发H7N9流感病毒交叉保护,并且反向验证了H7N9病毒抗血清与H1／H3／H5亚型流感病毒亦无交叉免疫反应。     

Generation and characterization of a cold-adapted attenuated live H3N2 subtype influenza virus vaccine candidate

Background H3N2 subtype influenza A viruses have been identified in humans worldwide, raising concerns about their pandemic potential and prompting the development of candidate vaccines to protect humans against this subtype of influenza A virus. The aim of this study was to establish a system for rescuing of a cold-adapted high-yielding H3N2 subtype human influenza virus by reverse genetics, Methods In order to generate better and safer vaccine candidate viruses, a cold-adapted high yielding reassortant H3N2 influenza A virus was genetically constructed by reverse genetics and was designated as rgAA-H3N2. The rgAA-H3N2 virus contained HA and NA genes from an epidemic strain A/Wisconsin/67/2005 （H3N2） in a background of internal genes derived from the master donor viruses （MDV）, cold-adapted （ca）, temperature sensitive （ts）, live attenuated influenza virus strain A/Ann Arbor/6/60 （MDV-A）. Results In this presentation, the virus HA titer of rgAA-H3N2 in the allantoic fluid from infected embryonated eggs was as high as 1：1024. A fluorescent focus assay （FFU） was performed 24-36 hours post-infection using a specific antibody and bright staining was used for determining the virus titer. The allantoic fluid containing the recovered influenza virus was analyzed in a hemagglutination inhibition （HI） test and the specific inhibition was found. Conclusion The results mentioned above demonstrated that cold-adapted, attenuated reassortant H3N2 subtype influenza A virus was successfully generated, which laid a good foundation for the further related research.     

新型甲型H1N1流感病毒深圳分离株HA基因的克隆与进化

目的 分析2009年新型甲型H1N1流感病毒深圳分离株A/Shenzhen/71/09血凝素(Hemagglufinin,HA)基因序列,探讨其基因变异与分子进化.方法 采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09 HA基因片段并进行测序,利用Cluster和Mega3.1软件对不同亚型毒株HA基因核苷酸序列进行分析,绘制发育进化树. 结果 A/Shenzhen/71/09毒株HA基因包含HA1和HA2两个片段,长度分别约为1 032bp和669bp,HA蛋白裂解位点为VPSIQSR↓ GLF,不含连续碱性氨基酸.进化分析表明该病毒株与其它亚型病毒株遗传距离较远,而与深圳地区同期分离的其它H1N1毒株高度同源,同源性在99.0％以上.结论 新型甲型H1N1流感病毒HA基因不具备高致病流感病毒序列特征,深圳地区同期分离的毒株变异率低,但仍需密切关注新型甲型流感的传播情况.     

深圳市南山区2007～2009年流行性感冒监测分析

目的监测深圳市南山区流感流行动态和病原学特征,为预防和控制流行提供科学依据。方法以2007～2009年广东医学院附属南山医院流感监测系统积累的数据为基础,对流感样病例占监测门急诊就诊总数比例、流感病毒型别按月进行分析。结果 3年监测共报告ILI病例130 101例,ILI占监测门急诊就诊总数8.62%,夏季高峰明显;2007年优势毒株为A/H3N2亚型,2008年优势毒株为A/H1N1及B（Yamagata）,2008年季节性流感以A/H3N2为主要流行株,9月份后以新型A/H1N1为主要流行株。流感样病例以15岁以下儿童占比最高,病毒分离以5～岁组分离率最高。结论本区全年都有流感病人,每年7月都是季节性流感的流行高峰,15岁以下儿童是流感的高危人群。     

A(H1N1)疫苗免疫的血清中和抗体的交叉免疫反应分析

目的分析接种A(H1N1)疫苗人群血清的中和抗体对2009年A(H1N1)的抗病毒作用和相关病毒的交叉免疫保护作用。方法利用MDCK细胞的细胞病变检测接种A(H1N1)疫苗的人血清和未免疫的对照血清对甲型流感病毒A/Brisbane/10/2007(H3N2),A/Brisbane/59/2007(H1N1),A/California/07/2009(H1N1)和A/Shenzhen/406H/2006(H5N1)等病毒的中和作用。结果通过细胞病变观察,证实接种A(H1N1)疫苗的人血清稀释度为1∶40时,30份免疫血清可以中和H3N2(Brisbane),H1N1(Brisbane)和H1N1(CA7)而不产生细胞病变,中和保护率分别均为100%,而相同稀释度的未免疫对照血清的中和保护率分别为100%,100%,40%;而当稀释度为1∶400时,30份免疫血清分别有13,20和21例未出现细胞病变,中和保护率分别为43%,67%,70%,10份对照血清的中和保护率分别为80%,70%,0%。两种稀释度的免疫血清和未免疫对照血清均不能中和H5N1引起细胞病变,中和保护率均为0%。结论接种2009年A(H1N1)疫苗可以诱导能中和CA7 H1N1的抗体产生,但该中和抗体对H3N2(Brisbane),H1N1(Brisbane),H5N1(SZ)高致病禽流感病毒等甲型流感病毒无交叉保护作用。     

2010年深圳市流感流行病学分析

目的 对2010年深圳市流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据.方法 收集全市31家监测单位的流感样病例数据、病原学检测结果和暴发疫情资料进行分析.结果 2010年深圳市的流感样病例百分比(ILI％)为5.43％.2010年全市共采集日常监测ILI咽拭标本4 031份,分离出445株流感病毒,阳性率为11.0％,其中14株季节性H1N1亚型(3.1％),42株季节性H3N2亚型(9.4％),171株甲型H1N1亚型(38.4％),213株B(Victoria,47.9％)亚型,5株B(Yamagata,1.1％)亚型.2010年全市报告了89起ILI暴发疫情,发病总人数741人,流感PCR检测阳性79起,其中季节性甲型6起(6.8％),乙型67起(75.3％),甲型H1N1流感6起(6.8％).结论 2010年深圳市流感活动较低,未出现明显的高峰.