已分化神经干细胞修复成年鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的 观察已分化神经干细胞植入成年鼠损伤脊髓后的变化及检查修复脊髓损伤的效果.方法 以胚胎脊髓提取液(FE)诱导细胞/PGA支架复合物分化后,植入成年鼠损伤脊髓,观察分化细胞的存活和发育情况并评估动物的运动功能.结果 FE体外可诱导神经干细胞分化成神经元、星形和少突胶质细胞.植入脊髓后,分化细胞/PGA支架复合物(dNPC)内的细胞成分可以存活并继续成熟,动物BBB评分明显优于对照组.结论 dNPC含有已经分化的细胞,移植后各种细胞成分可以存活并继续成熟,对成年鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用.     

大鼠脊髓损伤亚急性期NSCs脊髓内移植对脊髓神经电生理的影响

目的 研究神经脊髓损伤的亚急性期(第7天)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)脊髓内移植对大鼠受损伤脊髓神经电生理的影响.方法 正常成年SD雌性大鼠15只,分为3组:单纯全横断组、假手术组和神经干细胞移植组.测定3组大鼠的皮层体感诱发电位(cortical somatosensory evoked potential,CSEP)、运动诱发电位(motion evoked potential,MEP)和电针刺激大脑皮质运动区.结果 神经干细胞移植组的诱发电位CSEP、MEP的潜伏期短于单纯脊髓全横断组大鼠,电针刺激大脑皮质运动区发现NSC移植组大鼠双后肢出现明显收缩,且以对侧更为明显.结论 神经干细胞脊髓内移植后能部分促进损伤脊髓的感觉和运动传导功能的恢复.     

Co-transplantation of Neural Stem Cells and Schwann Cells within Poly (lactide-co-glycolide acid) Scaffolds Facilitates Axonal Regeneration in Hemisected Rat Spinal Cord

背景 为了促进脊髓损伤后的轴突再生,已经开发了各种组织工程学方法。我们的目的是研究是否神经干细胞能在PLGA支架中存活,与雪旺细胞共移植时被诱导向神经元分化,并形成突触联系,最终促进轴突及髓鞘化和运动功能。 方法 神经干细胞和雪旺细胞种植于PLGA取向支架,然后移植于半横断大鼠脊髓。 对照组大鼠也半横断后,但移植的支架中仅有神经干细胞或无细胞。分析神经干细胞存活、迁移、分化及突触形成情况,轴突再生及髓鞘化情况和运动功能。 结果 有神经干细胞存活下来,但是大部分迁移到邻近脊髓而死亡。与雪旺细胞共移植,神经干细胞存活情况改善,并且可被诱导向神经元分化,还肯能形成突触连接。当种植细胞后,轴突再生和髓鞘化情况及运动功能改善了。实验组的运动诱发电位恢复率及波幅显著高于对照组。同侧二次半横断后运动诱发电位再次消失,运动功能消失数天后恢复。但是对侧二次半横断后双侧运动功能完全消失。 结论 神经干细胞可在PLGA支架内存活。在体内,雪旺细胞可促进神经干细胞存活,并且向神经元分化,后者甚至可能形成了突触连接。种植了细胞的支架促进了轴突再生和髓鞘化及运动功能恢复。但是再生轴突对运动功能的恢复有限。     

复合雪旺细胞的小肠黏膜下层修复急性脊髓损伤的研究

目的应用复合雪旺细胞(SC)的小肠黏膜下层(SIS)修复大鼠急性脊髓损伤。方法选取健康的SD大鼠36只,随机分成实验组和对照组,每组各18只。实验组用复合SC的SIS移植修复损伤区,对照组原位植入原先切除的脊髓组织。术后4、8、12周进行一般情况观察、组织形态学检查、体感诱发电位检查和计算机图像分析。结果实验组移植区炎性细胞浸润不明显,有大量再生的有髓神经轴突,无明显变性坏死和胶质瘢痕增生现象,明显优于对照组。计算机图像分析示实验组与对照组相比,轴突的平均直径较大,单位面积的轴突数量较多,且有显著性差异(P<0.05)。结论复合SC的SIS具有促进急性脊髓损伤修复的作用。     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的：探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的新方法，为治疗脊髓功能障碍性疾病打下基础，方法：制作脊髓横断大鼠模型，造成大鼠下肢瘫痪，分别在损伤急性期和损伤3周后移植胎鼠组织神经干细胞，观察移植后的动物行为变化，脊髓神经电生理变化和脊髓组织形态学变化，结果：细胞移植后第8d即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复，2－3周后可出现爬行，4周后后肢活动沃跃；对照组瘫痪的肢体无任何恢复。脊髓诱发电位部分出现，动作电位波幅较高，对照组未出现诱发电位，且动作电位波幅明显减低，脊髓移植肉眼可见有增生的组织充填，镜下有大量新生的细胞，表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色，结论：神经干细胞移植可使脊髓横断大鼠运动功能恢复，有望成为治疗脊髓损的有效手段。     

复合雪旺细胞的小肠黏膜下层修复急性脊髓损伤的研究

目的 应用复合雪旺细胞(SC)的小肠黏膜下层(SIS)修复大鼠急性脊髓损伤.方法 选取健康的SD大鼠36只,随机分成实验组和对照组,每组各18只.实验组用复合SC的SIS移植修复损伤区,对照组原位植入原先切除的脊髓组织.术后4、8、12周进行一般情况观察、组织形态学检查、体感诱发电位检查和计算机图像分析.结果 实验组移植区炎性细胞浸润不明显,有大量再生的有髓神经轴突,无明显变性坏死和胶质瘢痕增生现象,明显优于对照组.计算机图像分析示实验组与对照组相比,轴突的平均直径较大,单位面积的轴突数量较多,且有显著性差异(P<0.05).结论 复合SC的SIS具有促进急性脊髓损伤修复的作用.     

康复训练对脊髓损伤后大鼠脊髓内再生微环境的影响

目的:观察运动训练对脊髓损伤后大鼠运动功能的影响,以及脊髓内脑源性神经营养因子(BDNF)、诱导轴突分化因子Slit2、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达规律,研究康复训练对损伤后脊髓微环境的影响.方法:雄性成年SD大鼠70只,随机分为10个实验组和4个对照组,每组5只.以改良Allen's撞击法制作脊髓损伤模型.从损伤后7天起,实验组分别进行1-4周活动平板训练,对照组不训练.训练结束时(即损伤后14、21、28、35天)分别进行运动功能评估,免疫组织化学二步法结合图像平均光密度分析观察大鼠脊髓内BDNF、Slit2以及GFAP的表达.结果:各不同训练时程后,大鼠运动功能评分均有改善(P<0.05);训练后,大鼠脊髓内BDNF以及Slit2的表达较对照组均有明显增加(P<0.05),GFAP的表达高峰延迟.结论:康复训练可能通过上调脊髓内BDNF和Slit2的表达水平,延迟星型胶质细胞的增生,使脊髓内神经元再生微环境朝有利方向变化来促进神经通路重建,改善运动功能.     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响

目的观察神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响。方法建立脊髓损伤动物模型,脊髓内注射神经干细胞,采用改良Gale联合评分法评价神经功能,通过H—E染色及尼氏体染色观察脊髓灰白质及神经元的组织学改变。结果脊髓损伤神经干细胞移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显（P〈0．05）;灰、白质中出现小片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少程度较脊髓损伤组轻,损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多（P〈0．05）。结论使用神经干细胞移植能减轻神经细胞坏死程度,减轻脊髓损伤,并使损伤坏死区胶质细胞增多,促进脊髓损伤的修复,对脊髓损伤大鼠感觉、运动功能的恢复有促进作用。     

骨髓间充质干细胞移植促进大鼠损伤脊髓的功能恢复

 目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠脊髓损伤的作用。方法将大鼠MSCs移植到大鼠脊髓损伤处,移植后评估大鼠行为学改变,免疫组织化学染色法观察BrdU标记的MSCs在脊髓损伤处存活情况,辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,观察脊髓损伤处神经通路的重构建,皮层体感诱发电位(CSEP)测定脊髓损伤处神经通路传导功能的恢复。结果术后移植组评分均高于损伤组,移植组大鼠脊髓损伤区远端检测到BrdU阳性细胞,脊髓损伤近侧端检测到HRP阳性细胞,CSEP波形恢复但波幅减低,潜伏时延长。结论MSCs可在损伤区存活并分化为神经元,在损伤局部形成神经元通路,使损伤脊髓的远端和近端建立联系,神经纤维传导功能部分恢复。     

Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells and Schwann cells

Background The most important objective of transplant studies in the injured spinal cord has been to provide a favorable environment for axonal growth. Moreover, the continuing discovery of new grafts is providing new potentially interesting transplant candidates. Our purpose was to observe the morphological and functional repair effects of the co-transplantation of neural stem cell （NSC）, Schwann ceils （SCs） and poly lactide-co-glycolide acid （PLGA） on the spinal cord injury of rats.Methods A scaffold of PLGA was fabricated. NSCs and SCs were cultured, with the NSCs labeled with 5-bromodeoxyuridine, and the complex of NSC/PLGA or NSC＋SCs/PLGA were constructed. Thirty-six Wistar rats were randomly divided into three groups： group A （transplantation of PLGA）, group B （transplantation of NSC/PLGA） and group C （transplantation of NSC＋SCs/PLGA）. The 3 mm length of the right hemicord was removed under the microscope in all rats. The PLGA or the complex of PLGA-celIs were implanted into the injury site. Basso-Beattie-Bresnahan （BBB）locomotion scores, motor and somatosensory evoked potential of lower limbs were examined to learn the rehabilitation of sensory and motor function at 4 weeks, 8 weeks, 12 weeks and 24 weeks after injury. All the recovered spinal cord injury （SCI） tissues were observed with HE staining, immunohistochemistry, and transelectronmicroscopy to identify the survival, migration and differentiation of the transplanted cells and the regeneration of neural fibres at 4 weeks, 8 weeks,12 weeks and 24 weeks after injury.Results （1） From 4 weeks to 24 weeks after injury, the BBB locomotion scores of cell-transplanted groups were better than those of the non-cell-transplanted group, especially group C （P 〈0.05）. The amplitudes of the somatosensory evoked potential （SEP） and motor-evoked potential （MEP） were improved after injury in groups B and C, but the amplitude of SEP and MEP at 4 weeks was lower than that at 12 weeks and 24 weeks after injury. Compared with group B, the amplitude of SEP and MEP in group C was improved. The amplitude of SEP and MEP was not improved after injury in group A. （2） HE staining revealed the volume of the scaffold decreased and the number of cells in the scaffold increased. Newly-grown capillaries also could be seen. Immunohistochemistry staining showed the transplanted NSCs could survive and migrate until 24 weeks and they could differentiate into neurons and oligodendrocytes. The regenerated axons were observed in the scaffold-cell complex with transelectronmicroscopy. The above manifestations were more extensive in group C.Conclusions The transplanted NSC can survive and migrate in the spinal cord of rats up to 24 weeks after injury, and they can differentiate into various neural cells. Co-transplantation of cells/PLGA can promote the functional recovery of the injured spinal cord. The effect of co-transplanting NSC＋SCs/PLGA is better than transplanting NSC/PLGA alone.     

脑源性神经营养因子mRNA在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的变化

观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）在胚胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１、３、５、７、１０、１５和３０天，用原位和斑点分子杂交技术对胚胎脊髓和正常脊髓内ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达变化作了定性和定量观察。结果在正常脊髓内，ＢＤＮＦｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主；脊髓损伤后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；胚胎脊髓移植后，除移植物本身继续维持表达外，正常脊髓阳性反应神经元和胶质细胞数量进一步增加。损伤组原位和斑点分子杂交的反应强度明显高于正常组，而移植组的分子杂交反应又在很多时相点上显著高于损伤组。结论移植的胚胎脊髓除为自身和宿主脊髓提供神经营养外，也诱发了正常脊髓在发生过程中曾经拥有的合成机制，以增强神经营养因子表达的方式为自身的再生提供营养，同时也为移植物的发育分化提供合适的营养环境。     

Human neural stem cells promote corticospinal axons regeneration and synapse reformation in injured spinal cord of rats

Background Axonal regeneration in lesioned mammalian central nervous system is abortive, and this causes permanent disabilities in individuals with spinal cord injuries. This paper studied the action of neural stem cell （NSC） in promoting corticospinal axons regeneration and synapse reformation in rats with injured spinal cord. Methods NSCs were isolated from the cortical tissue of spontaneous aborted human fetuses in accordance with the ethical request. The cells were discarded from the NSC culture to acquire NSC-conditioned medium. Sixty adult Wistar rats were randomly divided into four groups （n=15 in each）： NSC graft, NSC medium, graft control and medium control groups. Microsurgical transection of the spinal cord was performed in all the rats at the T11. The NSC graft group received stereotaxic injections of NSCs suspension into both the spinal cord stumps immediately after transection; graft control group received DMEM injection. In NSC medium group, NSC-conditioned medium was administered into the spinal cord every week; NSC culture medium was administered to the medium control group. Hindlimb motor function was assessed using the BBB Locomotor Rating Scale. Regeneration of biotin dextran amine （BDA） labeled corticospinal tract was assessed. Differentiation of NSCs and the expression of synaptophysin at the distal end of the injured spinal cord were observed under a confocal microscope. Group comparisons of behavioral data were analyzed with ANOVA. Results NSCs transplantation resulted in extensive growth of corticospinal axons and locomotor recovery in adult rats after complete spinal cord transection, the mean BBB scores reached 12.5 in NSC graft group and 2.5 in graft control group （P〈 0.05）. There was also significant difference in BBB score between the NSC medium （11.7） and medium control groups （3.7, P〈 0.05）. BDA traces regenerated fibers sprouted across the lesion site and entered the caudal part of the spinal cord. Synaptophysin expression colocalized with BDA positive axons and neurons distal to the injury site. Transplanted cells were found to migrate into the lesion, but not scatter along the route of axon grows. The cells differentiated into astrocytes or oligodendrocytes, but not into the neurons after transplantation. Furthermore, NSC medium administration did not limit the degree of axon sprouting and functional recovery of the injured rats compared to the NSC graft group. Conclusions Human embryonic neural stem cells can promote functional corticospinal axons regeneration and synapse reformation in the injured spinal cord of rats. The action is mainly through the nutritional effect of the stem cells on the spinal cord.     

MK-801并胚胎脊髓移植促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的研究胚胎脊髓移植同时应用NMDA受体拮抗剂MK-801观察其是否能够促进半切洞脊髓损伤运动功能恢复.方法将成年大鼠分为三组,A组单纯脊髓半切洞损伤组.B组脊髓半切洞损伤+胚胎脊髓移植组,C组脊髓半切洞损伤+胚胎脊髓移植+MK-801组.手术后应用联合行为评分(CBS)、感觉诱发电位(SEP)、运动诱发电位(MEP)检查.结果三组CBS得分A组＞B组＞C组,SEP和MEP潜峰时A组＞B组＞C组,统计学分析有显著差异性.结论通过分析CBS、SEP、MEP结果表明胚胎脊髓移植和NMDA受体拮抗剂MK-801能够促进脊髓损伤后功能恢复.     

臂丛根性撕脱伤后脊髓前角神经干细胞移植分化

目的 观察臂丛根性撕脱伤后在脊髓前角移植神经干细胞的存活、迁移、分化情况。方法 取新生鼠脊髓。分离获得脊髓源性神经干细胞，在体外培养、扩增、鉴定，并用5-溴2-脱氧尿苷（Brdu）标记。取SD大鼠40只。随机分成臂丛神经根性撕脱伤移植灭活神经干细胞组（对照组）、臂丛神经根性撕脱伤移植神经干细胞组（实验组）。先将C5～C7神经根经后路撕脱，实验组把体外培养的神经干细胞移植于损伤侧C6脊髓前角，对照组则移植灭活神经干细胞。术后1，2，4，8，12周取脊髓标本进行组织学与免疫组织化学染色观察。结果 臂丛根性撕脱伤后在脊髓前角移植神经干细胞不仅能存活，并可向二端迁移达一个脊髓节段，分化为神经元以及星型胶质细胞。结论 神经干细胞在植入臂丛根性撕脱伤的脊髓节段前角后不仅能存活。并能迁移和分化。     

兔分级脊髓损伤后运动诱发电位的变化

目的 了解不同程度脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)与运动诱发电位(motor evoked potential,MEP)变化之间的关系以及MEP在判断运动预后功能中的作用。方法 对21只兔采用改良Allen,打击法分别用60、120gcf gram×centimeter×force(gcf)冲量打击兔T10-11脊髓,建立不同程度SCI模型,并在伤前及伤后24 h连续记录兔双侧腓肠肌MEP,用Tarlov’s评分衡量兔下肢运动神经功能。结果 脊髓轻度打击伤时,兔MEP波幅明显降低,但恢复良好;中度打击伤时,MEP波幅的下降更明显,且不能完全恢复;重度打击伤时,MEP波均无法引出,至24 h也不能恢复MEP波形。结论 MEP可敏感而准确地反映脊髓损伤后中枢神经功能的损伤程度,可作为一种有效的监护脊髓功能的手段,并可作为判断运动神经功能预后的可靠指标。     

诱发电位改变与脊髓受压程度关系的实验研究

目的 :探索脊髓电生理的改变与大鼠脊髓慢性受压程度的相关关系。方法 :切除 T9椎板后置入慢性渐进性压迫装置 ,多次渐进旋入螺钉 ,在 3个月内造成大鼠胸段脊髓不同程度的慢性渐进性压迫 ,脊髓受压程度根据椎管侵占率分为轻度 ( <30 % )、中度 ( 30 %～ 60 % )、重度压迫 ( >60 % )三组 ,定期进行 CBS、MEP和 SEP等检查。结果 :重度压迫组后肢全瘫的 5只动物 MEP和 SEP均测不到 ;中度压迫组有 2只 SEP测不到。术后 90 d,实验组 SEP和 MEP的潜伏期明显高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;中度损伤组、轻度损伤组和对照组SEP和 MEP均存在显著差异 ( P<0 .0 5 )。实验组动物的 CBS与 MEP和 SEP改变呈显著正相关。结论 :神经诱发电位检查可以作为反映脊髓受压损伤程度的参考指标     

胚胎脊髓移植对损伤脊髓修复作用的病理组织学和超微结构观察

目的：观察胚胎脊髓在缓解损伤脊髓的病理反应及其发生发展中的作用，方法：将妊娠１４ｄ大鼠胚胎脊髓植入半切洞损伤的成鼠脊髓后１、３、５、７、１０、１５、３０、４５和６０ｄ时，取材做光镜和电镜观察，结果：单纯脊髓损伤后，发生了出血水肿，变性坏死以及囊腔成胶质细胞增生和神经纤维再生，胚胎脊髓植入后，明显减轻了神经元和神经纤维的坏死变性程度，并能对损伤元实施挽救，有效抑制了病理囊腔的形成，也可填补原发损伤造