拉米夫定治疗慢性乙型肝炎发生YMDD变异的研究

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）发生YMDD变异的临床意义。方法分别用荧光定量PCR、ELISA检测72例用拉米夫定治疗的CHB患者治疗前（0个月）、治疗中（9、12、18个月）YMDD变异的情况、HBVDNA定量水平、两对半等指标。结果72例CHB患者中,拉米夫定治疗前未检查出YMDD变异,治疗9、12、18个月分别检出YMDD变异8例（11.1%）,17例（23.6%）,28例（38.9%）,随治疗时间的延长,YMDD变异率升高（P〈0.05）。另外用药前HBVDNA定量〉108copies/ml与HBVDNA定量〈108copies/ml相比YMDD变异率显著升高（P〈0.005）。HBeAg阳性组与HBeAg阴性组的患者在不同治疗时间YMDD变异率,差异无显著性（P〉0.05）。结论YMDD变异的发生随治疗时间的延长而增加。血清病毒载量可作为应用拉米夫定治疗YMDD变异产生的早期预测指标。     

拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒YMDD野毒株和变异株的变化

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者应用拉米夫定治疗前后,YMDD野毒株及变异株的动态变化,并分析其临床意义。方法 取5例CHB患者治疗前与治疗48周的10份血清标本,先用PCR法扩增包括YMDD基序的乙型肝炎病毒(HBV)部分核苷酸序列,然后进行DNA序列测定,同时分别进行克隆,每份标本随机挑选20～24株单克隆,用实时荧光PCR法检测YMDD野毒株及其变异株。结果 5例CHB患者治疗前PCR产物直接测序结果未检出YMDD变异,治疗48周时有4例检出YMDD变异,但对每株克隆的分别检测显示：治疗前YMDD变异株(YIDD／YvDD)所占比率分别为0％、9．5％、0％、4．5％、5．6％;治疗48周时所占比率分别为100％、100％、65％、100％、0％。其中1例患者治疗前检出YIDD变异株,而治疗48周时YVDD变异株则变成优势株。治疗52周时,4例YMDD变异患者中2例HBVDNA和血清丙氨酸转氨酶(ALT)突破,1例患者ALT突破,但HBVDNA为阴性。结论 YMDD变异株在拉米夫定治疗前的血清中已存在,在服用拉米夫定后,由于选择性抑制了野毒株,使YMDD变异株由弱势株变成优势株,部分患者可导致拉米夫定临床耐药。YVDD变异株可能比YIDD变异株的复制能力强。     

拉米夫定加肝络欣治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响

观察拉米夫定加肝络欣联合治疗慢性乙型肝炎的疗效及对慢性乙型肝炎病毒P基因(YMDD)变异的影响。收集乙型肝炎病毒(HBV)HBeAg、HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者6 7例,分为拉米夫定加用肝络欣组(A组)、单用拉米夫定组(B组)。分别检测血清HBeAg、抗-HBe、HBVDNA ,肝脏生化指标和基因YMDD变异。在治疗5 6周时,拉米夫定联合肝络欣组HBeAg/抗-HBe转换率(39. 4 % ) ,优于拉米夫定组(P <0 .0 5 )。HBVDNA阳性率及YMDD变异率都比拉米夫定组低(P <0 . 0 5 )。拉米夫定联合肝络欣能在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的疗效并可减少YMDD变异。     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒YMDD变异的相关因素分析

目的 了解遵义地区HBV基因型以及拉米夫定治疗前后发生YMDD变异的相关因素,及早进行拉米夫定疗效及耐药的预测. 方法 53例慢性乙型肝炎患者分别在口服拉米夫定前及治疗后3、6、12、18、24个月进行血清HBV DNA定量、乙型肝炎标志物、ALT、AST、总胆红素,白蛋白的检测.同时在接受拉米夫定治疗前采用基因测序法检测HBV基因型及YMDD变异株,治疗后HBV DNA定量下降又反弹升高,且血清HBV DNA＞1×104拷贝/ml时,再次进行YMDD变异株检测.率的比较用卡方检验及确切概率法,两组均数之间比较采用独立样本t检验,有序变量之间的比较采用秩和检验.结果 遵义地区的HBV基因型由B、C及B+C基因型构成.拉米夫定治疗后18例检出YMDD变异株,用药1年和2年的变异率分别为15.1%和34.0%.HBV突变类型有rtL180M/M204V、rtL180M/M204I、rtM204I和rtL180M四种,其中C区rtM204V全部合并rtL180M突变(100%),C基因型中rtL180M/M204V联合突变及rtL180M/M204I联合突变明显高于B基因型(77.8%比25.0%及22.2%比12.5%);C基因型中未见点突变,而rtM204I、rtL180M的点突变仅见于B基因型.YMDD变异与未变异组性别、民族、乙型肝炎家族史及HBeAg情况差异无统计学意义(P＞0.05),病程≥2年组和年龄＜35岁组变异率明显升高(X2值分别为4.707和5.853,P值均＜0.05).不同HBV DNA滴度患者YMDD变异率差异无统计学意义(X2=0.801,P＞0.05),但HBV DNA＜105拷贝/ml者未发现YMDD变异.结论 拉米夫定治疗后YMDD变异可能与HBV基因型及P基因突变类型有关,并随治疗时间的延长而增加.为了减少YMDD变异的发生,应选用病程短、HBV DNA水平较低、肝损害较重的患者进行拉米夫定治疗,有条件的应检测HBV基因型.     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒YMDD变异的相关因素分析

Objective To identify factors associated with YMDD mutation in patients with chronic hepatitis B before and after Iamivudine treatment in Zunyi region.Methods 53 patients with chronic hepatitis B were enrolled in this study,HBV DNA,HBV markers,ALT,AST,TBil,albumin in the serum were examined at 0,3,6,12,18 and 24 months after lamivudine treatment.HBV genotype and YMDD mutation were determined by sequencing before lamivudine treatment.YMDD mutation was checked again if serum HBV DNA rebound to more than 1×104 copies/ml after the initial decrease.Results HBV genotype in Zunyi region iS constitute of B.C and B+C genotype.YMDD mutation occurred in 18 cases after lamivudine treatment.the rate of YMDD mutation was 15.1%,and 34.0% after 1 year and 2 years treatment.There are four types of mutation:nL180M/M204V,rtL180M/M2041,rtM204I,nL180M.rtM204V mutation in C gene was always acompanied by rtL180M mutation (100%). The rate of rtL180M/M204V mutation in genotype C group was significantly higher than that in genotype B group (77.8% to 25.0%),the same was true for the rtL180M/M204I mutation (22.2% to 12.5%). There was no point mutation in genotype C group. The point mutation of rtM204I and rtL180M appeared only in genotype B group. Gender,nation,family history of hepatitis B and HBeAg were not associated with YMDD mutation (P ＞ 0.05),while the mutation rate was associated with the disease course and severity of disease. YMDD mutation did not occure in patients with low HBV DNA level (＜105 copies/ml). Conclusion YMDD mutation after lamivudine therapy is associated with HBV gnnotype and P gene mutation type,and prolonged treatment increases the the mutation rate. In order to reduce the incidence of YMDD mutation,patients with shorter disease course,lower HBV DNA level,more serious liver damage should be treated with iamivudine.     

未经拉米夫定治疗的乙型肝炎病毒YMDD变异检测

乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异被认为与拉米夫定治疗有关。为证实YMDD变异是由药物所致,还是因为其本身与野生株病毒共存,在药物作用下逐渐成为优势株,对未经治     

拉米夫定耐药与HBV YMDD变异关系的研究

探讨拉米夫定耐药与HBVYMDD变异之间关系。对拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎进行肝功能、乙肝病毒血清学指标、YMDD耐药基因变异检测。 10 2例慢性乙型肝炎血清中 ,HBVDNA阴性 6 3例 (6 1 8% ) ,39例阳性 ,其中HBVYMDD变异 2 2例 ,变异率为 5 6 4 % ,并与用药时间长短有关 ,9- 17个月和 18- 30个月变异检出率分别为5 1 7%和 70 % ,HBVYMDD变异组ALT为 (5 9 94± 8 6 0 )U/L ,显著高于无HBVYMDD变异组的 (5 0 6 0± 6 12 )U/L。基因芯片技术检测HBVYMDD变异有一定的临床意义 ,YMDD变异是HBV对拉米夫定耐药的原因之一。     

拉米夫定治疗后发生YMDD变异的相关因素分析

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者在服用拉米夫定后发生YMDD变异的相关因素.方法用聚合酶链反应（PCR）荧光定量法测定CHB患者治疗前的HBV DNA,用PCR荧光定量法联合溶解曲线法和杂交探针检测YMDD变异,并对其结果进行分析.结果61例CHB患者基因型检测结果为B型27例占44.2%,C型34例占55.7%,其中22例变异者中B型为9例,占40.9%（9/22）,C型13例占59.1%（13/22）.30例未变异者中B型为14例占46.7%（14/30）,C型为16例占53.3%（16/30）.YMDD变异与基因型无明显相关性（χ^2=0.17,P＞0.05）.发生YMDD变异的22例患者在12个月和18个月发生变异的HBV DNA水平明显高于未变异组（t=2.33,P＜0.05和t=4.19,P＜0.01）,发生YMDD变异组与未变异组之间在治疗前的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、HBeAg状态、患者的病程、年龄等方面没有显著性差异.结论HBV YMDD变异与基因型之间无明显相关性;高滴度的HBV DNA（＞10^8拷贝/毫升）是发生YMDD变异的相关因素.     

拉米夫定治疗与乙型肝炎病毒YMDD变异的动态观察

拉米夫定是核苷类似物，对乙型肝炎病毒(HBV)的复制有很好的抑制作用。其主要抗病毒机制是抑制HBV多聚酶的逆转录酶活性，有效阻止病毒核酸的复制合成，但它不能清除病毒的共价闭合环状DNA(cccDNA)。HBV多聚酶具有逆转录酶、DNA聚合酶、RNA酶H的活性，计算机模拟分析表明，HBV多聚酶有A到E共5个活性部位，     

HBV P基因YMDD变异的检测及临床应用的研究

目的　采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测 ,对其临床意义进行初步的研究。方法　应用分子克隆方法 ,构建YMDD、YVDD、YIDD变异的阳性质粒 ,并进行敏感性及特异性试验。对 44例经拉米夫定治疗 1年HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果　经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD、YIDD质粒构建成功 ,且该方法具有较好的敏感性和特异性。 44例拉米夫定治疗 1年HBVDNA持续阳性的乙型肝炎患者存在YMDD变异 ,半年出现变异 5例 ,变异率为 11 . 3 6%:1年出现变异 7例 ,变异率为 15 . 91%。结论　本检测方法简便、实用 ,抗病毒药物压力是导致HBVYMDD变异的重要因素。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV发生YMDD变异的检测

目的建立乙型肝炎病毒Ｐ基因区ＹＭＤＤ变异的检测方法,对用拉米夫定治疗５２周出现耐药的病人进行检测。方法从８８例治疗病人中选择１０例服用该药后ＨＢＶＤＮＡ转阴（＜１．６ｐｇ／ｍｌ）,５２周时又反跳≥２０ｐｇ／ｍｌ的病人,用 ＰＣＲ后直接测序的方法,分别对 ０周和 ５２周标本进行 ＨＢＶ ＤＮＡ聚合酶活性区域的测序。结果 １０例服药５２周后ＨＢＶ ＤＮＡ反跳病人中７例测得ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异。其变异分为两种类型：第一种类型为ＹＶＤＤ有５例,有核苷酸Ａ７４１→Ｇ,均伴有Ａ６６９→Ｃ的变异。第二种类型为ＹＩＤＤ有２例,有核苷酸Ｇ７４３→Ｔ,其中１例还有Ｔ７８１→Ｃ。结论少数病人在拉米夫定治疗过程中出现耐药,可能和ＨＢＶ ＹＭＤＤ变异有关。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者YMDD变异及影响因素的研究

目的 探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎(简称慢乙肝)患者过程中YMDD变异的发生率及影响因素。 方法 对采用拉米夫定治疗的249例慢乙肝和64例乙型肝炎肝硬化(简称乙肝肝硬化)患者采用错配聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析的方法检测了乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶YMDD变异,并应用SPSS统计软件对YMDD变异发生率和影响YMDD变异发生的因素进行统计学分析。 结果 随治疗时间的延长,YMDD变异的累计发生率逐渐升高;慢乙肝和乙肝肝硬化患者YMDD变异率于12、24、36、48个月分别达8.84％和17.19％、20.91％和32.40％、26.92％和39.56％、26.92％和58.79％。时序检验及Cox回归分折的结果均表明:未联台干扰素治疗,基线丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平较低、HBV DNA水平较高和治疗前诊断为肝硬化者均与YMDD变异的较早出现有关(P<0.05)。 结论 拉米夫定治疗慢乙肝患者,未联合干扰素治疗、基线ALT水平较它低、HBV DNA水平较高和乙肝肝硬化可作为YMDD变异发生的预测因子.     

Evolution of wild type and mutants of the YMDD motif of hepatitis B virus polymerase during lamivudine therapy

BACKGROUND AND AIM: Long-term lamivudine treatment for chronic hepatitis B virus (HBV) infection induces the emergence of lamivudine resistant HBV YMDD mutant strains. The aim of the present study was to observe the clone evolution of YMDD wild type and mutant strains in pretreatment and post-treatment samples during lamivudine therapy and analyze their clinical significance. METHODS: Ten serum samples (five before and five after 48 weeks of therapy) obtained from five patients chronically infected with HBV and treated with lamivudine were studied. Part of the HBV polymerase gene flanking the YMDD motif was sequenced after polymerase chain reaction (PCR) amplification. Meanwhile, 20-24 clones were selected at random from each sample and YMDD wild type and mutant strains were detected by real-time fluorimetry PCR established in our laboratory. RESULTS: The YMDD mutants were not detectable in all five patients before treatment and were found in four patients after 48 weeks of therapy by sequencing directly on PCR products. Analysis of individual clones showed that the ratios of mutant strains in each of the five patients were 0, 9.5, 0, 4.5 and 5.6%, respectively, before therapy and 100, 100, 65, 100 and 0%, respectively, after 48 weeks of therapy. M552I was detected before therapy in one patient but M552V became the domain strain after therapy. Until 52 weeks of therapy, serum HBV DNA and alanine aminotransferase (ALT) breakthrough were found in two of the four patients with YMDD mutations. The fifth patient experienced breakthrough of ALT but HBV DNA remained undetectable. CONCLUSIONS: The mutant strains of YMDD motif of HBV polymerase could be found in patients before lamivudine treatment, indicating that antiviral therapy allows the rapid selection of resistant strains. The replication ability of the M552V mutant strain might be stronger than that of the M552I mutant strain.     

未接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者多聚酶P基因YMDD变异检测

目的 了解未经拉米夫定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBV多聚酶YMDD变异情况。方法 应用错配PCR扩增方法检测病人血清HBV的YMDD位点，选择65例病史超过半年以上、肝功能异常、HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者。结果 在65例患者中，YMDD变异阳性6例(9．07％)，阴性59例，6例变异中2例为YIDD阳性，其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在，4例为YYDD阳性，其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在。结论 本检测方法简便、实用，在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中可存在YMDD变异株，其与野生株一样是自然存在的。     

阿德福韦酯治疗YMDD变异慢性乙型肝炎患者96周疗效观察

目的观察阿德福韦酯联合拉米夫定治疗酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸（YMDD）变异感染慢性乙型肝炎患者的疗效。方法选择56例在拉米夫定治疗后发生YMDD变异的慢性乙型肝炎患者,随机分为治疗组28例,给予阿德福韦酯联合拉米夫定治疗;对照组开始治疗与治疗组相同,但在12周后停用拉米夫定,继续服用阿德福韦酯治疗,观察96周的疗效。结果在治疗96周时,两组ALT和HBV DNA水平均显著下降;治疗组HBV DNA转阴率为96.4%,对照组为75.0%（P〈0.05）;治疗组ALT复常率为96.4%,对照组为85.7%（P〉0.05）;两组均未发现与药物相关的不良反应发生。结论阿德福韦酯联合拉米夫定治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎患者疗效优于单用阿德福韦酯治疗。     

拉米夫定治疗2年时乙肝病毒的YMDD变异情况

观察核苷类似物拉米夫定治疗慢性乙肝病人２年时ＹＭＤＤ变异情况及其与血清ＨＢＶＤＮＡ，ＡＬＴ水平等指标的关系。第一阶段（１－１２周）为随机、双盲、安慰剂对照研究，７２名ＨＢｓＡｇ．ＨＢｅＡｇ阳性至少６个月，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性的慢性乙肝患者分别口服拉米夫定１００ｍｇ／ｄ（ｎ＝５４）或安慰剂（ｎ＝１８）；第二阶段（１３－１０４周）所有患者均服用拉米夫定 １００ｇ／ｄ。５２周和 １０４周检查病毒的 ＹＭＤＤ变异．其总变异率分别为 １３．７％（８／５８）和 ３９．７％（２３／５８）。１０４周时变异组血清 ＨＢＶＤＮＡ，ＡＬＴ水平高于无变异组（３９４．９±７２７．９比 １６．３±５０．９，Ｐ＝０．００４８；６２．７±５７．９比２６ ４±２７．５，Ｐ＝０．００３），ＨＢＶＤＮＡ阴转率低于未变异组（１７．４％比４８．６％，Ｐ＜０．０５）；服用拉米夫定的慢性乙肝患者的ＹＭＤＤ发生率与服药时间长短有关，血清ＨＢＶＤＮＡ及ＡＬＴ水平与ＹＭＤＤ相关。     

慢性乙型肝炎患者在YMDD变异后停用及继续使用拉米夫定的临床后果分析

目的　探讨YMDD变异后停用及继续使用拉米夫定对临床预后的影响。方法　观察 17例服用拉米夫定过程中出现YMDD变异而肝功能异常及 9例出现YMDD变异后停用拉米夫定肝功能异常而入院患者的临床过程。结果　前组患者的血清总胆红素、谷丙转氨酶、HBVDNA和HBeAg峰值分别为 43 .2± 61.4μmol/L、3 5 9.4± 2 66.6u/L、2 .7× 10 7± 2 .8× 10 7copies/ml和 1660 .2± 2 2 97.4PEIU/ml。经过 0 .5～ 4个月治疗 ,17例患者肝功能正常或接近正常出院 ,只有 1例发展为慢性重型肝炎。后组患者的血清总胆红素、谷丙转氨酶、HBVDNA和HBeAg峰值分别为 2 70 .6± 14 1.0 μmol/L、72 9.9± 3 97.1u/L、1.7× 10 8± 2 .4× 10 8copies/ml和 14 0 5 .4± 2 0 45 .5PEIU/ml。经过 1～ 7个月治疗 ,6例患者肝功能正常或接近正常出院 ,6例发展为慢性重型肝炎 ,其中 3例患者死亡。结论　YMDD变异后继续服用拉米夫定 ,虽有部分患者出现严重肝功能损害 ,但整体治疗难度远较停药患者容易、预后也较好。YMDD变异株转变为野生株的时间越短 ,其预后可能越差。两组患者中各有 1例使用阿德福韦取得了很好疗效     

拉米夫定治疗乙型肝炎时其病毒发生YMDD变异的临床影响及处理

目的　研究拉米夫定治疗慢性乙型肝炎时病毒发生ＹＭＤＤ变异对临床的影响及处理措施。方法　随机选择６６例病人用拉米夫定治疗（１００ｍｇ／ｄ）４８周,２０例病人服用安慰剂作对照共１２周,１２周结束后继续服用拉米夫定１００ｍｇ／ｄ共３６周。每隔４周检测一次血清ＨＢＶ　ＤＮＡ、ＡＬＴ和ＹＭＤＤ变异,到治疗４８周为止。结果　治疗４８周结束时,共有１８例病人出现ＹＭＤＤ变异,变异率为２０．９％。其中２例在服药３６周时发生变异,其余１６例在服药４８周时发生。服药４８周时,变异者和非变异者的ＡＬＴ和ＨＢＶ　ＤＮＡ的检测结果：变异者分别为（３６．２±４６．１）Ｕ／Ｌ和（１４．３ ± ２７．２）ｐｇ／ｍｌ,非变异者分别为（２０．４ ± １２．５）Ｕ／Ｌ和（２．５ ± ６．１）ｐｇ／ｍｌ,经Ｗｉｌｃｏｘｓｏｎ检验均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。发生变异的１８例病人继续服药,其中２例病人出现病情的急性发作,分别于８０周和９２周停药。经临床对症治疗,ＡＬＴ均恢复正常。其余１６例病人继续服药至１０４周。结论　拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中,必须严密观察ＹＭＤＤ变异,一旦病人因ＹＭＤＤ变异出现病情急性发作,应停用拉米夫定。