骨科的蛋白质组学研究技术与进展

随着人类后基因组时代的到来,人们认识到仅通过DNA序列来解释生物功能有明显不足.而蛋白质是基因表达的最终产物,为疾病发生、发展、转归的执行者和参与者,直接对其进行研究可以更加直观地了解疾病进程.     

磷酸化蛋白质组学研究现状

蛋白质磷酸化是生命活动最重要的一项翻译后修饰，与信号转导、细胞周期、生长发育以及癌变机制等许多生物学问题有着密切的关系。蛋白质磷酸化和去磷酸化作为原核和真核细胞表达调控的关键环节，了解其对功能的影响可以深入理解生命系统在分子水平的调控状况。目前磷酸化蛋白质组研究仍是功能基因组面临的重大课题，本文对此作一综述。     

蛋白质组学技术研究

蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新的研究领域,它是对机体、组织或细胞的全部蛋白质的表达和功能模式进行研究。对蛋白质组的研究可以使我们更容易接近对生命过程的认识。本文对蛋白质组学研究所使用的主要技术和生物信息学等简要综述。     

磷酸化蛋白质组学技术及其在肿瘤研究中的应用

磷酸化蛋白质组是指机体细胞在特定时间和空间上表达的所有磷酸化蛋白质;磷酸化蛋白质组学是在整体水平上研究磷酸化蛋白质在细胞中的组成成分、表达水平、修饰状态及相互作用规律的学科.近年来,磷酸化蛋白质学技术已广泛应用于肿瘤研究,为阐明肿瘤的发生机制,提高肿瘤的诊治水平提供了重要信息.     

神经元蛋白质磷酸化修饰分析方法的初步研究

目的　建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法　培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L,对照组加入等量的培养基 ,作用不同时间后液氮终止反应。裂解细胞 ,用 Bio- Rad DC Protein Assaykit测定细胞蛋白质含量 ,双向电泳分离细胞蛋白。放射自显影。结果　 1双向电泳自显影图谱显示近数十个蛋白质斑点 ,绝大部分集中于 p H偏酸性和中性区域 ,p H4 .6～ 6 .5 ,其相对分子质量主要介于 2 0× 10 3～ 130× 10 3之间。2 EGF、胰岛素刺激不同时间后虽出现有磷酸化蛋白质斑点的增加或消失 ,但更多表现为某些磷酸化蛋白质斑点灰度的增强或减弱。 3对比分析发现 ,放射自显影图谱中只有少数斑点出现在双向电泳 Coom assie Brilliant BlueR- 2 5 0染色图谱中 ,提示神经细胞中的大多数磷酸化蛋白质为低丰度蛋白。结论　采用本研究建立的双向电泳和放射自显影技术可对神经细胞中的蛋白质可逆磷酸化修饰状态进行较为全面、动态的分析 ,方法灵敏、特异性强 ,可为细胞信息传递功能蛋白质组的研究奠定了基础     

磷酸化蛋白质组学富集策略进展及其在疾病研究中的应用

蛋白质磷酸化是生物体内重要的翻译后修饰,几乎参与调节着细胞增殖、信号转导、新陈代谢、肿瘤发生等过程在内的所有生命活动。对磷酸化蛋白质组的全面分析可以帮助人们深入了解磷酸化蛋白在生命过程中的作用,协助发现生物标志物,辅助疾病的诊疗。然而,磷酸化蛋白丰度低、信号被非磷酸化肽段所掩盖等问题限制了磷酸化蛋白质组学的发展。因此,亟需开发高效的富集策略,如设计新型纳米材料,合并多种分析方法等,以提高检测灵敏度、富集特异性,增大富集容量。本文回顾了近年来磷酸化蛋白质组学研究策略中的富集策略进展及其在疾病研究中的应用。     

不同转移潜能的肝癌细胞系定量磷酸化蛋白质组学研究

目的 研究具有不同侵袭转移能力的肝癌细胞系的磷酸化蛋白质组的动态变化.方法 首先用含有重稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-L进行重稳定同位素标记氨基酸的细胞培养(SILAC);用含有轻稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-H进行SILAC标记.将完成标记的两种肝癌细胞系的蛋白质按照1∶1混合,并用trypsin进行溶液消化;对消化得到的肽段进行除盐,并通过固相金属离子亲和色谱(IMAC)的方法进行磷酸化肽段的富集.磷酸化肽段通过质谱进行检测,并通过MaxQuant进行鉴定和定量.最后通过Z检验进行统计学分析,并对差异调控的磷酸化肽对应的蛋白质进行基因本体(GO)分析和STRING网络分析.结果 最终鉴定了918个磷酸化肽段,其中806个磷酸化肽段的磷酸化位点可以定位和定量.通过Z检验,共得到了91个磷酸化修饰水平发生变化的肽段,对应25个磷酸化蛋白质.通过对这25个蛋白质进行GO分析发现,细胞骨架重塑过程中的蛋白质在MH-CC97-L和MHCC97-H中磷酸化修饰形式严重失调.通过STRING分析发现,NES和PRKCA处于网络的重要节点位置.结论 细胞骨架重塑这一生物学过程与肝癌侵袭转移能力密切相关;参与细胞骨架重塑的NES蛋白和参与MAPK信号通路和黏合斑信号通路的PRKCA蛋白磷酸化修饰水平的变化是影响低转移潜能MHCC97-L细胞向高转移潜能细胞MHCC97-H变化的重要调控机制.     

磷酸化蛋白质检测技术研究进展

蛋白质的磷酸化修饰是生物体内重要的共价修饰方式之一,其磷酸化和去磷酸化这一可逆过程,受蛋白激酶和磷酸酶的协同作用控制.酶蛋白的磷酸化是在蛋白激酶的催化下,由ATP提供磷酸基及能量完成的,而去磷酸化则是由磷蛋白磷酸酶催化的水解反应.在哺乳动物细胞生命周期中,大约有1/3的蛋白质发生过磷酸化修饰;在脊椎动物基因组中,有5%的基因编码的蛋白质是参与磷酸化和去磷酸化过程的蛋白激酶和磷酸(酯)酶[1].真核细胞的蛋白质磷酸化位点主要发生在丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)残基侧链的羟基上,不同的蛋白激酶可识别和修饰不同蛋白质的不同位点,生物体内能被磷酸化修饰的蛋白质组成磷酸化蛋白质组(phos-phoproteome),磷酸化蛋白质组将是蛋白质翻译后修饰的研究热点.     

人肾组织磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳的建立与优化

目的:利用二维凝胶电泳法分离人肾组织磷酸化蛋白质组.方法:利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集人肾组织磷酸化蛋白.样品浓缩除盐后,进行一维等电聚焦分离和二维SDS电泳分离提取人肾组织磷酸化蛋白.结果:成功提取了人肾组织磷酸化蛋白,并得到了磷酸化蛋白的双向凝胶电泳图谱.结论:磷酸化蛋白富集技术与二维凝胶电泳技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步研究人肾组织磷酸化蛋白奠定基础.     

小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离

目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。     

CREB磷酸化在心肌肥厚作用中的研究进展

cAMP反应元件结合蛋白是位于细胞核内的转录因子。生理状态下,cAMP反应元件结合蛋白在多种刺激因素作用下被激活,参与真核生物靶基因的转录调控,发挥许多生物学效应。近年来对cAMP反应元件结合蛋白在神经元再生、突触形成和学习等方面的作用研究有了很大进展。最近发现,核转录因子cAMP反应元件结合蛋白磷酸化异常也在心肌肥厚基因转录调节中发挥重要作用。     

蛋白质羰基化与疾病关系的研究进展

多种疾病的病理过程伴随着蛋白质的氧化,同时,蛋白质的氧化产物在一定程度也反映并影响着疾病的发生与发展状态。蛋白质的羰基化水平是评价蛋白总的氧化程度的常用方法,深入研究蛋白质羰基化与疾病的关系,有望为相关疾病的预防和治疗提供有效的科研依据。     

雌激素对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化的影响

目的研究雌激素对冈田酸诱导的人神经母细胞瘤系(SH-SY5Y)细胞tau蛋白磷酸化的影响。方法四甲基偶氮唑盐观察冈田酸对SH-SY5Y细胞活力的影响,模拟AD时tau蛋白过度磷酸化细胞模型;Western blot检测冈田酸及雌激素对Thr231 tau蛋白磷酸化的影响。结果四甲基偶氮唑盐结果表明,当冈田酸浓度>40 nmol/L时,细胞活力受到明显抑制,<40 nmol/L的冈田酸对细胞活力没有明显的影响;Western blot结果表明,SH-SY5Y细胞经冈田酸处理后,tau蛋白磷酸化的水平明显增加,这种作用可被雌激素所抑制。结论雌激素抑制了冈田酸诱导的SH-SY5Y细胞的tau蛋白磷酸化水平。     

蛋白激酶C神经保护作用的研究进展

蛋白激酶C属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员,在各种生命现象中发挥着重要的作用。它调控细胞整个生长周期,表达异常会对神经细胞造成毒性,甚至导致细胞凋亡。本文介绍蛋白激酶C在调控神经细胞增殖与凋亡、发挥神经细胞损伤保护及抑制神经毒性中的作用,进一步探讨其可能的分子作用机制,为了解蛋白激酶C在神经系统疾病中的作用提供参考。     

蛋白聚集体在神经退行性疾病中的研究进展

错误折叠蛋白被认为是许多神经退行性疾病发病机制中的始动因素,易形成蛋白聚集物,干扰细胞正常的生理功能。因此,错误折叠蛋白及其聚集物的降解对于细胞的生存至关重要。目前,在蛋白降解通路中,除了已知的泛素-蛋白酶体系统这一重要通路外,蛋白聚集体通路也越来越受到研究者的重视。现就近年来蛋白聚集体在神经退行性疾病发病机制中的研究进展予以综述。     

体内蛋白转导的研究进展

简要综述了几种能够携带药物跨越血脑屏障和细胞生物膜屏障的蛋白结构域的研究进展。     

蛋白激酶抑制剂在类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎（Rheumatoidarthritis,RA）的发病率高、患病人口多,目前抗风湿性关节炎疾病缓解药物（disease-modifyingantirheumaticdrug,DMARD）主要是针对关键细胞因子靶点的生物制剂,但生物制剂面临着患者需要反复注射、价格昂贵等不足而不能满足RA的治疗。新开发DMARD药物已有针对Janus激酶（Januskinase,JAK）、脾酪氨酸激酶（spleentyrosinekinase,Syk）、p38激酶的抑制剂进入临床试验研究,蛋白激酶抑制剂的研发将为RA的治疗带来新的方法。     

Protein kinases in cardiovascular diseases

Cardiovascular disease (CVD) remains the leading cause of death worldwide. Therefore, exploring the mechanism of CVDs and critical regulatory factors is of great significance for promoting heart repair, reversing cardiac remodeling, and reducing adverse cardiovascular events. Recently, significant progress has been made in understanding the function of protein kinases and their interactions with other regulatory proteins in myocardial biology. Protein kinases are positioned as critical regulator...     

蛋白C的研究新进展

血栓栓塞性疾病是常见病、多发病，随着医学科学的发展，医务工作者逐渐认识到天然蛋白C在体内起到抗炎、抗凝作用。蛋白C的缺乏可以引起栓塞性疾病。人重组蛋白C治疗严重脓毒血症、预防血栓栓塞性疾病的初步尝试，使其成为现在研究的热点。现就近几年来人们对蛋白C的研究发现及新进展做一综述。