血友病A家系的单体型基因连锁分析

目的：该研究开展温州地区血友病A（HA）家系的可变数目串联重复序列（VNTR）多态性、短串联重复序列（STR）多态性和限制性片段长度多态性（RFLP）单体型基因连锁分析,为HA遗传咨询和生育指导提供症状前、携带者基因诊断方面的依据。方法：针对HA先证者及其有关家系成员,进行单体型基因连锁分析。采用PCR检测凝血因子VIII（FVIII）基因外的DXS52（St14）位点的VNTR多态性,检测FVIII基因外的DXS15（CA）n、DXS9901（GT）n、DXS1073（GT）n位点和内含子1（GT）n、13（CA）n、22（GT）n（AG）n、24（GT）n位点的STR多态性并经毛细管电泳确证。另外采用PCR产物限制酶切检测FⅧ基因的内含子18、19、22位点的RFLP。结果：以2个HA家系为例报道研究结果。家系一先证者年幼弟弟肯定为正常人,先证者母亲、外祖母为携带者,先证者小姨肯定为携带者而其年幼儿子肯定为正常人。家系二先证者外祖母肯定不是携带者,先证者的X染色体来自外祖父,但已知外祖父不是患者,那么按照最大风险估计,母亲的那条来自外祖父的X染色体在外祖父生殖细胞中FVIII基因发生了突变,因此母亲是携带者。家系二先证者年幼妹妹是携带者,将来有生育患儿的风险,但先证者大姨及其年幼女儿不是携带者。结论：该研究的HA家系的VNTR-PCR、STR-PCR和PCR/RFLP单体型基因连锁分析,特别是对症状前男孩的诊断、对未曾有患病后代的女性携带者的检出,具有非常重要的实际意义,可以为遗传咨询和生育指导提供可靠依据。     

四个血友病乙家系携带者基因检测及产前诊断

应用凝血因子Ⅸ（FⅨ）PⅧ／Xmn IPⅧ/Taq I探针对四个血友病乙家系21人进行限制性片面多态性（RFLP）基因连锁分析。确定携带者5例，非携带者5例，对其中1例携带者的高危胎儿进行了基因产前诊断，经PCR性别鉴定及RFLP分析确定为女性携带者。     

甲型血友病产前诊断——应用DNA聚合酶链反应(PCR)进行家系RFLP连锁分析

应用PCR技术分析了7个甲型血友病家系,对其中4例做了产前基因诊断。基因诊断的方法选择应是:首先采用PCR法扩增所需的特异DNA片段,随之用Bcll的RFLPs分析;对BclI不能诊断的标本进一步用XbaI的RFLPs分析;对XbaI不能诊断的标本进行其他DNA探针的Southern印迹杂交分析,诊断率可达85％。     

PCR技术在甲型血友病基因诊断中的应用

甲型血友病是一种最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病,至今尚无满意的治疗方法,故进行有效的遗传控制,防止患儿出生十分必要.目前,国内外多采用FⅧ基因内及与FⅧ基因紧密连锁的限制酶片段长度多态性(RFLPs)为遗传标志,通过连锁分析进行携带者检出和高危胎儿出生前诊断.聚合酶链反应(PCR)技术利用一对寡核苷酸引物在体外扩增特异DNA片段,已广泛用于β地中海贫血突变基因的检测;此外,PCR还可检测限制酶位点的改变,通过RFLPs连锁分析诊断甲型血友病基因.本实验室采用PCR对4个甲型血友病家系进行基因连锁分析,其中包括3例高危胎儿的出生前基因诊断.     

DNA多态性连锁分析在血友病A家系产前诊断中的应用

目的探讨提高运用DNA多态性连锁分析对血友病A携带者进行筛查及产前诊断检出率的途径。方法对3个血友病A家系的成员进行BclⅠ、St14VNTR、Intro13(CA)n和DXS15 4个位点的连锁分析。结果家系a中II7的BclⅠ位点和Intro13(CA)n位点均呈纯合状态,无信息;St14VNTR和DXS15的连锁分析显示III6为携带者,通过对BclⅠ的进一步分析显示胎儿为患儿的可能性大。家系b中II1的BclⅠ位点和St14VNTR多态位点为纯合状态,无信息;联合应用Intro13(CA)n和DXS15进行连锁分析显示II1为携带者,胎儿为正常女性。家系c中St14VNTR、Intro13(CA)n以及DXS15位点在II4均为纯合状态,BclⅠ位点为杂合状态,连锁分析显示胎儿为正常男性可能性较大。结论联合应用多个遗传多态性位点可以提高血友病A的诊断率和携带者分析的正确率。     

Rsa Ⅰ与Sma工多态性寡核苷酸阵列检测法的建立及其与血栓性疾病的相关性研究

目的建立血管性血友病因子(vWF)基因Bsa Ⅰ、Sma Ⅰ多态性寡核苷酸阵列检测方法,对基因芯片在单核苷酸多态性(SNP)检测上的应用进行探讨;研究两位点多态性与血栓性疾病的发生有无相关关系.方法设计、合成两组寡核苷酸探针,使用3甲氧基氨基丙基硅烷、戊二醛等化学物质,实现探针与固相支持物玻片的连接.应用不对称PCR方法扩增Rsa Ⅰ、Sma Ⅰ多态性片段,在扩增体系中掺入荧光标记dUTP,获得被测片段的单链标记产物.对核酸杂交反应的温度、动力学和离子浓度变化进行研究,获得最佳的杂交鉴别条件.对20名正常人,酶切法确定多态性基因型,再用寡核苷酸阵列法检测,以验证该方法的准确性.使用该方法对50例血栓病人进行检测,探讨血栓性疾病的发生与vWF基因Rsa Ⅰ、Sma Ⅰ多态性的关系.结果寡核苷酸阵列法和酶切法对20例标本检测的符合率为100%;血栓病人与正常人Bsa Ⅰ、Sma Ⅰ两位点多态性的基因型GG、GA、AA和CC、CT、TF分别为4.0%、12.0%、84.0%和24.0%、44.0%、32.0%,正常人分别为1.4%、11.8%、86.8%和8.8%、57.4%、33.8%,血栓病人等位基因频率G、A和C、T分别为10.0%、90.0%和46.0%、54.0%,正常人分别为7.4%、92.6%和37.5%、62.5%,血栓病人与正常人之间两位点多态性的基因型和等位基因频率的差异均无显著意义(P>0.05).结论成功建立vWF基因RsaⅠ、Sma Ⅰ多态性寡核苷酸阵列检测方法,为基因芯片技术在SNP检测上的应用提供依据.未获明确证据表明Rsa Ⅰ、Sma Ⅰ多态性与血栓的发生有关.     

成都汉族ACTBP2位点多态性研究及三个位点的复合扩增

目的：获得中国成都地区汉族人群中短串联重复序列ACTBP2（SE33）位点的多态性分布，建立DHFRP2、FIBRA和ACTBP2三个STR位点的复合扩增方法。方法：用Amp-FLP、聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染技术，对147个成都汉族无血缘关系个体进行分析。结果：发现ACTBP2位点的等位基因为20个；基因型86种；观察杂合度（h)0.9728;个体鉴别机率（DP）0．986；多态性信息量（PIC）0．9310；非父排除率（EP）0．8203。基因型分布皆符合Hardy-Weinberg平衡，家系调查结果证明符合孟德尔遗传法则。结论：ACTBP2位点多态性好，灵敏度高，可用于人类遗传分析及法科学中的亲子鉴定和个人识别，三个STR位点的复合扩增方法简便，结果可靠。     

嗜肺巴氏杆菌蛋白及抗原图谱初步分析

为了应用ＲＦＬＰ分析猪线粒体ＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ的多态性。应用ＰＣＲ对西双版纳近交系小耳猪、广西巴马小型猪、贵州小型香猪、大约克夏猪、荣昌猪和长白猪血液总ＤＮＡ样品中线粒体ＤＮＡ控制（ｍｔＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ）进行扩增,２３种限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳检测。结果发展ｍｔＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ酶切多态性贫乏。因此根据现用酶,应用ｍｔＤＮＡ Ｄ－ｌｏｏｐ ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析,尚不能做猪品种品系鉴     

用等位基因特异性PCR检测β纤维蛋白原-1420G/A、-993C/T多态性的研究

目的建立分析β纤维蛋白原(Fbg)基因启动区-1420G／A、-993C／T多态性等位基因特异聚合酶链反应(AS-PCR)的方法，并分析海南汉族人群中这两个多态性位点的基因型和等位基因频率。方法应用AS-PCR和核苷酸序列测定技术分析130例海南籍汉族人群Fbg β-1420G／A、β-993C／T多态性的基因型和等位基因频率。结果Fbg β-1420多态性位点有GG、GA、AA等3种基因型，频率分别为0．577、0．362、0．062，G和A的等位基因频率为0．758和0．242；β-993多态性位点有CC、TT等2种基因型，频率分别为0．623、0．377，C和T的等位基因频率为0．812和0．189。结论AS-PCR为一种简便、快速、准确的检测Fbg β-1420G／A和β-993C／T多态性的方法。     

中国汉族人群中PRNP基因第219位氨基酸多态性分布及临床特征分析

目的研究人类PRNP基因第219位氨基酸多态性在中国汉族人群中的分布及临床特征。方法从送检病例外周血中提取DNA,进行聚合酶链反应获得PRNP基因片段,通过测序的方法分析第219位氨基酸多态性的分布,并且结合临床资料分析其临床特征。结果在收集的467例汉族人群中,219E/E型分布频率为98.3%(459/467),219E/K型分布频率为1.7%(8/467)。在这些病例中,散发型克雅氏病患者临床及疑似诊断病例的首发症状最多见的为快速进行性痴呆,在临床症状中临床诊断病例比疑似诊断病例具有更多典型的临床表现。结论中国汉族人群中PRNP基因第219位氨基酸多态性分布以219E/E型为主,散发型克雅氏病临床诊断病例具有更多的临床表现。     

淋病奈瑟菌PCR检测的临床应用研究

为评价淋病奈瑟菌ＰＣＲ检测的临床效果,建立了对标准淋病奈瑟菌的ＤＮＡＰＣＲ检测技术。结果显示,ＮＧ ＰＣＲ技术的灵敏度约为３个菌的基因组拷贝。对８种菌株进行ＮＧ ＰＣＲ,只有标准淋病奈瑟菌显示阳性,其余７株非淋球菌菌株均阴性,说明有很好的特异性。对４９例淋病患者同时进行涂片镜检法、细菌培养法和ＰＣＲ法检测的比较,其阳性检出率分别为７６．６％、５２．２％和９５．９％。提示ＮＧ ＰＣＲ方法比涂片和培养法更为敏感,且特异性强,在淋病的诊断,特别是早期诊断中有重要参考价值。     

猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用

目的 建立一种新型的猪附红细胞体病PCR诊断方法.方法 根据猪附红细胞体部分CDS基因序列(AJ504999)设计引物,建立一种新的猪附红细胞体病PCR诊断方法.通过实验室染毒实验,建立感染猪附红细胞体病的小鼠模型,并应用研制的PCR方法进行实验室验证.应用建立的PcR诊断方法对辽宁5个城市的385个猪样本进行猪附红细胞体病流行病学情况调查,确定猪附红细胞体病的感染率.结果 成功建立猪附红细胞体病PCR诊断方法,通过染毒模型验证了该方法具有快速、特异性强、敏感性高的特点.并估计出辽宁省猪群中附红细胞体总体感染率95%的可信区间为(82.50%,89.44%).结论 本研究建立的猪附红细胞体病PCR诊断方法及临床应用,为辽宁地区乃至全国附红细胞体病的防治工作提供了科学理论数据.     

流产后关爱服务在计划生育门诊的应用

目的：流产后关爱服务在妇科门诊的应用的效果。方法：对行人工流产术的2260例妇女进行流产后关爱服务,观察实施后的效果。结果：2000例患者人工流产顺利,流产关爱服务让她们了解人工流产的原理也认识到它的危害能知情选择一种适合自己的避孕方法。术后恢复良好,并对流产关爱表示认同和对进行宣教的人员表示感谢,重复人工流产率降低。无一例纠纷发生。结论：流产关爱服务对于促进生殖健康,降低重复流产率有积极作用,在计划生育门诊应用具有重要的意义,急需推广。     

循证医学教学模式在计划生育临床实习中的应用

目的运用循证医学理念指导学生计划生育临床实习,提高教学质量。方法将临床实习的七年制31名学生分为两组：实验组和对照组,实验组（A组）用循证医学理念带教,对照组（B组）用传统教学方法。实习结束后对两组学生进行相应的基础知识和病案分析问卷,并发放不记名问卷调查表,自我评价计划生育实习效果。结果病案分析总分A组明显高于B组（P〈0．05）,而基础知识两组比较无显著性差异（P〉O．05）。A组学生对自己查阅文献能力及目前教学方法的满意程度与B组学生比较有显著性差异（P〈O．05）。结论循证医学教学（EMBL）教学模式增加学生学习的动力、兴趣和解决实际问题的能力,并不影响学生对基础知识、知识要点和难点的掌握。     

急性白血病RAD50基因多态性研究

目的研究温州地区急性白血病与RAD50基因多态性的关系。方法选取2018年6月～2019年6月来我院血液科就诊治疗的温州地区急性白血病100例患者为研究对象,并将其纳入急性白血病组(n=100)。100名体检正常者为对照组。采用PCR技术确定两组RAD50第4号内含子(rs17166050)基因分型(GA型、GG型),比较健康对照组与急性白血病组基因型频率。结果健康对照组与急性白血病组的RAD50(rs17166050)基因型GA型和GG型出现的频率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论温州地区急性白血病与RAD50第4号内含子(rs17166050)的G等位基因的易感性相关。     

家属参与式临床护理在高血压危象患者中的应用

目的:探讨家属参与式临床护理在高血压危象患者中的应用效果.方法:选择2018年10月—2019年10月间于河南省永城市人民医院治疗的高血压危象患者共110例,按照随机数字表法分为观察组(n=55)及对照组(n=55).对照组采用常规临床护理,观察组采用家属参与式临床护理.比较两组患者护理前后生活习惯(自制量表评估,包括...