肺癌中热休克转录因子2促进热休克蛋白的表达

目的 探讨HSF2通过促进热休克蛋白 (heat shock protein, HSP) 的表达对肺癌发生以及肿瘤细胞增殖的影响.方法 选取肺癌旁组织, 构建过表达HSF2真核载体 (p IRES2-EGFP-HSF2) , 分别转染BEAS-2B、A549, 检测其对细胞增殖及HSP表达的影响;转染p IRES2-EGFP-HSF2质粒的同时, 共转染HSP27、HSP90的si RNA, 检测其对细胞增殖的影响.结果 过表达HSF2可增加BEAS-2B和A549细胞增殖速度 (P<0.01) , 促进HSP27和HSP90的表达;转染HSP27、HSP90的si RNA均可减弱HSF2诱导的BEAS-2B和A549细胞增殖 (P<0.01) .结论 HSF2促进肺癌细胞增殖的作用可能主要是通过促进热休克蛋白的表达来实现.     

BRCA1和人线粒体转录终止因子3在非小细胞肺癌组织中的表达情况

目的 探讨BRCA1和人线粒体转录终止因子3(hMTERF3)在非小细胞肺癌组织中的表达情况.方法 选取70例非小细胞肺癌患者,术中收集癌组织标本以及癌旁组织标本.检测并比较癌组织与癌旁组织BRCA1、hMTERF3蛋白表达水平,以及不同病理特征患者的癌组织中BRCA1、hMTERF3蛋白表达水平.结果 非小细胞肺癌癌...     

Na~ /H~ 交换蛋白-1基因的反义寡聚脱氧核糖核苷酸片段诱导人肺癌细胞的凋亡

目的观察Ｎａ＋／Ｈ＋交换蛋白－１（ＮＨＥ－１）基因在肿瘤细胞增殖／凋亡调控中的作用,探索新的抗癌策略。方法采用活细胞计数、原位细胞死亡检测和显微镜观察与ＮＨＥ－１基因的反义寡聚脱氧核糖核苷酸片段（ｓａＯＤＮ）共孵育后诱导的人肺鳞癌细胞系ＳＰＣ细胞的增殖抑制、凋亡及其形态学改变。结果ｓａＯＤＮ能显著抑制ＳＰＣ细胞的增殖并导致死亡。原位细胞死亡检测和电镜观察发现大量ＳＰＣ细胞经历了凋亡。结论反义抑制ＮＨＥ－１基因的表达能诱导肿瘤细胞的凋亡,ＮＨＥ－１基因可能在肿瘤细胞增殖／凋亡的调控中起重要作用。     

C/EBPε增强U937细胞中PI3Kγ基因的表达

目的 研究过量表达转录因子CCAAT-增强子结合蛋白ε(CCAAT／enhancerbinding proteins，C／EBPε)对磷脂酰肌醇-3激酶γ(phosphoinositide 3-kinase，PI3Kγ)基因的影响。方法 将C／EBPε基因的真核表达载体pcDNA3．1-C／EBPε电穿孔转染U937细胞，G418筛选出稳定转染的混合细胞克隆后，用RT-PCR与Western blot的方法，分别检测转染细胞与对照细胞中C／EBPε与PI3Kγ基因的表达水平。结果 过量表达转录因子C／EBPε后，可以显著提高U937细胞中PI3Kγ基因的表达水平。结论 核内转录因子C／EBPε可能参与了PI3Kγ基因的转录调控。     

甲状腺转录因子-1、表面活性蛋白-B及细胞角蛋白对鉴别肺原发和转移性腺癌的意义

目的　研究鉴别肺原发腺癌和肺转移性腺癌的一组免疫组化标记物。方法　对 72例肺叶切除标本 ,包括 4 2例肺原发腺癌和 30例肺转移性癌进行常规福尔马林固定 ,石蜡包埋切片 ,用免疫组化方法检测了甲状腺转录因子 1(TTF 1)、表面活性蛋白 (SP B)及细胞角蛋白 (CK7、CK2 0 )的表达。结果　TTF 1和SP B在肺原发腺癌中的表达率分别为 74 %和 5 2 %。两种抗体相结合 ,在肺原发腺癌中表达的阳性率和特异性分别为 79%和 94 %。肺原发腺癌CK7染色全部为阳性 ,CK7阳性 /CK2 0阴性者 2 4例 (5 7% ) ,CK7阳性 /CK2 0阳性者 18例。肺转移癌以结肠腺癌及乳腺癌为主。结肠腺癌CK2 0染色全部为阳性 :CK7阴性 /CK2 0阳性者 11例 (92 % ) ,CK7阳性 /CK2 0阳性者1例。乳腺癌对细胞角蛋白染色结果与肺原发腺癌相似 :CK7阳性 /CK2 0阴性者 4例 ,CK7阳性 /CK2 0阳性者 4例。联合 4种抗体染色结果 :肺原发腺癌以CK7阳性 /TTF 1或SP B阳性为主(79% ) ,肺转移性乳腺癌以CK7阳性 /TTF 1和SP B阴性为主 ,肺转移性结肠癌以CK2 0阳性 /CK7阴性 /TTF 1和SP B阴性为主 ,P均 <0 0 0 1。结论　联合使用TTF 1、SP B、CK7和CK2 0这一组抗体有助于鉴别肺原发腺癌和转移性腺癌 ,以及提示某些常见肺转移性腺癌的原发部位。     

贯叶金丝桃通过减量调节转录因子-1α信号转导蛋白和激活蛋白的活性抑制人iN-OS的表达

作者研究了贯叶金丝桃提取物抗炎作用的分子机理。     

儿童脓毒症患儿血清可溶性髓样细胞触发受体-1、可溶性CD14亚型、前降钙素和超敏C反应蛋白水平的变化

目的 探讨儿童脓毒症患儿血清可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、可溶性CD14亚型(sCD14-ST)、前降钙素(PCT)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的变化。方法 选取2015年1月～2018年8月儿科住院治疗儿童脓毒症患儿50例作为观察组,根据其病情程度分为严重脓毒症18例与非严重脓毒症32例。另选择同期在我院体检中心检查的正常健康儿童30例为对照组。比较对照组与观察组、严重脓毒症及非严重脓毒症血清sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平。结果 观察组患儿血清sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);严重脓毒症患儿sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平明显高于非严重脓毒症患儿,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 血清sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平不仅可用于儿童脓毒症早期诊断,而且可评估患儿病情严重程度。     

转录因子Sp1在人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1基因转录中的作用

目的 明确转录因子Sp1在人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressed lipopolysiccharide-associated factor 1,EOLA1)基因转录调控中的作用.方法 定点突变EOLA1基因核心启动子- 734～- 666序列中推断的Sp1结合位点,观察启...     

缺血和再灌注心肌NHE－1mRNA表达的变化

目的探讨缺血再灌注心肌钠氢交换蛋白-1(NHE-1)mRNA表达的变化.方法成年大鼠心脏Langendorff离体灌流,随机分为六组(n=6),给予(1)正常灌流30min;(2)低灌流缺血60min;(3)低灌流缺血60min及再灌注30min;(4)预处理后低灌流缺血60min(5)预处理后低灌流缺血60min再灌注30min;(6)老龄大鼠离体心脏低灌流缺血60min等不同条件处理.保留心肌,使用RT-PCR方法对比不同处理条件下心肌NHE-1表达的变化.结果(1)缺血组心肌(Ⅰ)NHE-1mRNA水平(0.734±0.053)较正常对照组(N)(0.300±0.007)明显升高(P＜0.05),再灌注组心肌(R)NHE-1的mRNA水平(0.281±0.019)较缺血组降低(P＜0.05),与正常组无明显差异(P＞0.05);(2)预处理缺血组心肌(Pi)NHE-1 mRNA水平(0.256±0.011)较缺血组心肌(0.734±0.053)明显降低(P＜0.05),预处理再灌注组心肌(Pr)NHE-1 mRNA水平(0.135±0.011)较再灌注组心肌(0.281±0. 019)降低(P＜0.05);(3)老龄大鼠低灌流缺血心肌(S)NHE-1的mRNA表达(0.787±0.021)与成年大鼠低灌流缺血心肌(Ⅰ)NHE-1的mRNA表达无明显统计学差异.结论低灌流缺血心肌NHE-1表达较正常灌流心肌明显升高,预处理可以明显降低缺血及再灌注心肌NHE-1的表达.     

血清甲状腺转录因子-1蛋白的变化特点及在肺癌诊断中的意义分析

目的检测血清中甲状腺转录因子-1(TTF-1)蛋白的变化特点,探讨其在肺癌诊断中的意义。方法应用免疫酶斑点法结合Leica Q500MC图像分析系统定量检测正常成年人、肺良性病变、肺癌及肺外肿瘤(甲状腺癌和非甲状腺来源癌)血清标本中TTF-1蛋白的表达强度。结果本试验方法的灵敏度、特异度、标准化阳性预告值、标准化阴性预告值、标准化准确度和标准化错诊率(SWDR)分别为90.91%、82.22%、83.64%、90.04%、86.57%和13.43%;健康成年人血清TTF-1蛋白PU值的正常截断值为36.39,此时ROC值为0.95。肺腺癌、肺鳞癌和甲状腺癌患者血清TTF-1蛋白的PU值均大于正常成年人、肺良性病变和非甲状腺来源癌(P=0.000);肺腺癌、肺小细胞癌、肺大细胞癌和甲状腺癌血清TTF-1蛋白的PU值基本相同(P=0.744,P=0.677,P=0.333);肺腺癌、肺鳞癌、肺小细胞癌、肺大细胞癌和甲状腺癌血清TTF-1蛋白的PU值均大于其癌组织匀浆(P=0.000);肺癌组织匀浆和血清TTF-1蛋白的PU值与肺癌患者TNM分期有关(P=0.000),与性别、肿瘤大体类型、分化程度和有无淋巴结转移均无关。结论免疫酶斑点法结合图像定量分析技术敏感、特异、可靠,适于血清中TTF-1蛋白的检测。血清TTF-1蛋白的PU值若高于36.39,则提示可能为肺腺癌、肺鳞癌或甲状腺癌;血清TTF-1对于区分肺癌类型及甲状腺癌无意义,在排除甲状腺癌后,血清TTF-1对于肺癌的检测具有辅助作用;不同类型肺癌和甲状腺癌患者血清TTF-1蛋白的表达均高于其癌组织匀浆;肺癌患者血清及组织匀浆TTF-1蛋白的表达随肺癌患者TNM分期的进展而升高。     

大鼠双侧输尿管梗阻后肾脏钠通道的改变

目的 :探讨泌尿系梗阻后肾脏功能的改变机制。方法 :2 0只大鼠随机分为实验组 (n =10 )及对照组 (n =10 )。实验组双侧输尿管梗阻 2 4h后解除梗阻 ,对照组手术同实验组 ,但不结扎。所有大鼠于术前 3d及术后 4d测量饮水量、食量、体重及尿量 ;术后 4d抽取动脉血化验 ,同时取出双侧肾脏 ;右肾全肾快速放入液氮冰冻备份 ,左肾分离出内髓 (IM)、外髓内带 (ISOM)、外髓外带加肾皮质 (OSOM +C) ,免疫杂交法检测 3型钠氢交换通道 (NHE3)、钠钾ATP酶 (Na -K -ATPase)和钠 -钾 - 2氯协同转运通道蛋白 (BSC - 1)。结果 :实验组输尿管梗阻 2 4h后引起肾脏水钠排泄异常 ,机体水电解质紊乱 ;肾脏不同部位NHE3、Na-K -ATPase及BSC - 1表达均较对照组降低 (P均<0 .0 1)。结论 :NHE3、Na-K -ATPase及BSC - 1水平降低可能是泌尿系梗阻后肾小管性钠回吸收障碍、低渗性尿量增多的主要原因之一     

p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控

目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。     

转录因子Sp1和Sp3对Jurkat T细胞端粒酶活性的调节作用

目的探讨转录因子Sp1、Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)的调节作用.方法用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入Jurkat T细胞,用Westem blotting方法检测蛋白表达水平;用端粒酶PCR-ELSA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度;用RT-PCR方法检测hTERTmRNA水平.结果Sp1、Sp3载体转化36 h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59.6%(P〈0.01)和36.8%(P〈0.05);随着Sp1表达水平的增加,端粒酶活性和hTERT mRNA水平明显增加,增加率分别为38.5%(P〈0.05)和25.4%(P〈0.05).而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERT mRNA水平无明显影响.结论转录因子Sp1通过调节hTERT mRNA转录水平而调节Jurkat T细胞端粒酶活性,Sp3无此作用.     

活化T细胞核因子2 可抑制高迁移率蛋白1 的释放

目的探讨活化T细胞核因子2（NFAT2）对炎症因子高迁移率蛋白1（HMGB1）释放的抑制效应。方法观察脂多糖刺激可
增加HMGB1向胞外释放,在脂多糖刺激的不同时间点收集细胞及其培养上清,应用蛋白印迹法及酶联免疫法检测细胞内及培
养上清中HMGB1蛋白水平的变化;另一方面,探讨脂多糖刺激对NFAT2与HMGB1在胞浆中的结合的影响,在脂多糖刺激的
不同时间点收集THP-1细胞,提取蛋白后应用免疫共沉淀观察二者的结合情况;应用小RNA干扰技术抑制NFAT2的表达,检测
对HMGB1 合成释放的影响。结果脂多糖刺激THP-1 细胞时间越长,细胞培养上清的HMGB1 浓度增加,而细胞浆内与
NFAT2 结合的HMGB1 水平下降,细胞核内没有检测到二者的相互作用。NFAT2 的小RNA干扰质粒转染后,THP-1 细胞内
NFAT2浓度下降,同时细胞上清中HMGB1的水平上升。结论NFAT2可抑制HMGB1的合成释放。
     

The determination and significance of C/EBP in cells of liver cancer and different liver tissues

C/EBP is a sequence-specific DNA-binding protein.In order to identify its distribu-tion,localization and function,immunocytochemical technique(ABC method)was done usinganti-C/EBP polypeptide antibodies 1103~#,425~# in liver specimens from 20 normal adult,5neonatal,6 patients with hepatitis,25 patients with liver cirrhosis,80 patients with hepatocellu-lar carcinoma(40 cases were associated with surrounding nontumorous tissues)and 26 patientswith cholangiocarcinoma(15 cases were associated with surrounding nontumorous tissues).Theresults showed that C/EBP was diffusely distributed in nuclei and cytoplasm of differentiated liv-er cells and very low or undetectable in liver cancer cells.The expression of C/EBP was in pro-portion to differentiated degree of tumor cells,and was obviously weaker than that in surround-ing nontumorous tissues.C/EBP positive staining has also been found in regenerating epithelialcells of bile ductules.The results suggested that C/EBP might play an important role in estab-lishing and maintaining the differentiation of liver cells and might exert an inhibiting effect againsttransformation of liver cells and proliferation of neoplastic tissue.     

肺癌及其转移癌甲状腺转录因子-1 mRNA表达的定量测试及分析

目的 观察甲状腺转录因子-1(TTF-1)mRNA在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶及淋巴结转移灶癌细胞中的表达,从mRNA水平探讨其在肺癌发生、发展及转移中的意义.方法 应用组织芯片和原位杂交技术检测1320点阵石蜡组织芯片中TTF-1 mRNA的表达.用Leica Q500MC图像分析系统定量测试TTF-1 mRNA表达强度.结果 胚胎肺TTF-1 mRNA的表达强度小于正常成人肺(P=0.000);肺腺癌、鳞癌、小细胞癌和大细胞癌TTF-1mRNA的表达强度均小于胚胎肺和正常成人肺(P=0.000);肺腺癌和小细胞癌TTF-1mRNA的表达强度均大于肺鳞癌和大细胞癌(P=0.000);肺腺癌与小细胞癌TTF-1 mRNA的表达强度基本相同(P=0.068);肺鳞癌TTF-1 mRNA的表达强度大于大细胞癌(P=0.018);肺腺癌、鳞癌和大细胞癌淋巴结转移灶TTF-1 mRNA的表达强度均大于其原发灶(P=0.003,P=0.000,P=0.019);肺小细胞癌淋巴结转移灶TTF-1 mRNA的表达强度大于其原发灶(P=0.078);有淋巴结转移组TTF-1 mRNA的表达强度大于无淋巴结转移组(P=0.026);TNM分期Ⅱ-Ⅳ期TTF-1 mRNA的表达强度大于TNM Ⅰ期(P=0.010);肺癌TTF-1 mRNA的表达强度与患者性别、肿瘤大体类型和分化程度无关.结论 TTF-1 mRNA的表达强度在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、胚胎肺泡上皮细胞和肺癌细胞中具有差异性并依次减少;肺癌TTF-1 mRNA的表达具有癌组织类型差异性,腺癌和小细胞癌相对较高,鳞癌和大细胞癌极少;TTF-1 mRNA高表达的肺癌易发生转移,TTF-1 mRNA高表达的肺腺癌、鳞癌和大细胞癌为具有明显转移能力的肺癌细胞的重要标志之一.