慢性心力衰竭肾阳虚证患者代谢组学研究

目的:研究慢性心力衰竭肾阳虚证患者的代谢模式,探讨代谢组学在中医证候学研究中的应用。方法:收集慢性心力衰竭患者54例(其中肾阳虚证27例、非肾阳虚证27例)及正常人24例的空腹晨尿尿样,通过气相色谱/质谱(GC/MS)联用及模式识别为主的代谢组学方法进行研究。结果:主成分分析和正交最小二乘法分析中慢性心力衰竭肾阳虚证组、非肾阳虚证组和正常组的代谢成分积分在空间分布上明显分开,且样本均投影到2SD(标准差)的区域内,表示其值可信,说明所建模型能准确区分3者。慢性心力衰竭患者与正常人比较还发现了柠檬酸、丙氨酸、3-甲基戊烯二酸、丙胺、组胺5种差异性代谢物质。结论:慢性心力衰竭肾阳虚证患者、非肾阳虚证患者和正常人具有不同的代谢模式,以GC/MS为技术特点的代谢组学研究方法能将3者区分。代谢组学是研究中医学证本质的有效方法。     

Ⅲ期慢性肾病肾阳虚证患者尿液代谢组学特征的研究

目的:从尿液代谢组学的角度研究慢性肾病Ⅲ期肾阳虚证患者代谢物质的变化.方法:选择慢性肾病Ⅲ期患者60例(其中肾阳虚者30例,非肾阳虚者30例)及体检健康志愿者30例,运用代谢组学指纹谱方法进行观察研究.结果:代谢主成分得分值的空间分布表明肾阳虚、非肾阳虚和正常组有非常显著的差异,R2X=0.807＞0,充分说明从代谢水平上可以明显观察到慢性肾病Ⅲ期与正常样本的代谢模式差异.在PC1维上的明显分离,R2Y=0.949＞0.Q2Y=0.787＞0,显示代谢水平上慢性肾病Ⅲ期与正常样本的代谢模式差异非常显著,建立的预测能力也很强.该模型能够很好地区别肾阳虚和非肾阳虚两组病人,R2Y=0.699＞0,但是建立的预测能力也很弱,Q2Y=-0.607＜0.导致这种预测能力下降可能和肾阳虚和非肾阳虚两组病人都是慢性肾病有关.25个差异代谢物排序后,经过标准品鉴定差异性物质的关键代谢成分分别是丙氨酸、胺基丙二酸二乙酯、脯氨酸、柠檬酸、马尿酸和组胺等物质,并且明确其变化方向和代谢途径,能够很好地区分阳虚与非阳虚的差异性,是分析肾阳虚证的良好手段.结论:代谢组学方法能够很好地区分阳虚与非阳虚的差异性,是分析肾阳虚证的良好手段.     

大鼠肾阳虚证的代谢组学研究

目的 利用代谢组学技术观察糖皮质激素所造的肾阳虚证大鼠模型的内源性代谢物特征.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和模型给药组各8只;肌注氢化可的松琥珀酸钠造模;造模成功后,给予模型给药组大鼠白附片溶液灌胃,连续14 d;末次给药24 h后取血制备血浆;采用高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物.结果 正常组与模型组相比,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)和468.4m/z的未知化合物的谱峰峰形改变较为明显.发生改变的代谢物可作为肾阳虚证的生物标志物做进一步研究.结论 从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢产物,以利于深入研究中医证候的生物学本质.     

疲劳型亚健康肾阳虚证血浆代谢组学研究

目的 探讨疲劳型亚健康肾阳虚证代谢组学特征表达谱.方法 收集5例疲劳型亚健康肾阳虚证患者作为试验组,6例同龄健康人作为正常对照组.采用1H-核磁共振(1H-NMR)技术,利用MestReNova5.3.1软件对两组1H-NMR谱进行相位矫正和基线矫正,采用OPLS-DA进行分类建立模型,结果以积分矩阵图和载荷矩阵图表示,分析疲劳型亚健康肾阳虚证血浆代谢组学谱.结果 两组间代谢组学谱存在差异,31个内源性代谢产物组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),疲劳型亚健康肾阳虚证关键代谢产物为乳酸、氧化型谷氨酰胺、丙酮酸、醛固酮、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH/NADH)、苯丙氨酸、2-羟丁酸、还原型谷胱甘肽和谷氨酰胺. 结论 疲劳型亚健康肾阳虚证存在多个特征性代谢产物,可能是疲劳型亚健康肾阳虚证发生发展的基础.     

氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠尿液代谢组学研究

目的:运用代谢组学方法研究氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠尿液代谢表型的经时轨迹变化,鉴定与肾阳虚相关的代谢标志物来探讨肾阳虚相关代谢途径.方法:利用核磁共振氢谱(1H-NMR)技术建立大鼠尿液的代谢指纹谱,应用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析研究肾阳虚大鼠尿液代谢表型的经时轨迹变化,应用正交偏最小二乘判别分析研究对照组和模型组之间的代谢物谱差异,并通过变量重要性投影(VIP)在尿液中选取生物标志物.结果:氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠尿液代谢表型呈现明显的轨迹变化,在尿液中鉴定了与肾阳虚相关的13种生物标志物.肾阳虚大鼠机体能量代谢紊乱、肠道菌群受到扰动、甲基转移反应被抑制、氨转运功能受阻,同时,伴随一定程度的肾损伤.结论:该研究为探讨肾阳虚证的发生、发展及其病理机制、诊断的客观化和补肾阳中药的药效评价提供了一种新方法.     

基于卵泡液代谢组学的肾阳虚型自然流产中医证候学研究

目的:探讨与肾阳虚型自然流产发生相关的卵泡液(follicular fluid,FF)代谢物组,以期为科学预测和诊断自然流产肾阳虚证、探讨其证候本质做初步尝试。方法:利用超高效液相色谱-高分辨质谱(HPLC-MS)技术对因输卵管因素行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的肾阳虚型自然流产患者即肾阳虚流产组(n=32)及分娩者即对照组(n=40)的卵泡液进行代谢组学分析。结果:肾阳虚流产组及对照组卵泡液共计32种差异代谢物,主要有氨基酸类、胆固醇类、维生素类、脂肪酸类、胆酸类、溶血卵磷脂类以及其它等七大类,其中上调的有Dehydroepiandrosterone sulfate,LysoPC(16:0),Palmitoylglycerophosphocholine等8种,下调的有L-valine,6-Oxohexanoate,L-Phenylalanine,2-Oxoglutarate,Linoleate等24种。结论:本研究鉴定的32种特征性化合物与中医肾阳虚证存在相关性,为肾阳虚型自然流产提供可能的诊断依据和治疗靶点,从FF代谢组学层面丰富发展了中医证候学。     

基于中医方证代谢组学的男仕口服液治疗肾阳虚证的物质基础与作用机理研究

目的：基于中医方证代谢组学技术分析男仕口服液干预皮质酮诱导的肾阳虚证大鼠模型内源性代谢生物标记物的变化趋势,探索男仕口服液入血成分与其治疗肾阳虚证过程的相关代谢物及代谢通路的相关性,挖掘男仕口服液发挥治疗作用的体内直接作用物质及作用机理。方法：检测大鼠“下丘脑-垂体-靶器官轴”各激素水平并观察相应靶器官的组织形态学,评价男仕口服液对肾阳虚证的作用效果;利用模式识别分析各组大鼠尿液代谢谱,研究男仕口服液对肾阳虚证生物标记物影响,同时在显效基础上分析其入血成分与肾阳虚证生物标记物群的相关性,确定其发挥治疗作用的潜在药效物质基础。结果：模型大鼠血清的CRH、CORT、T3、T4、T和尿17-OHCS含量显著下降;男仕口服液可显著提升血清中CRH、CORT、T3、T4、cAMP和尿中17-OHCS水平,调节类固醇激素的生物合成、色氨酸代谢和酪氨酸代谢;PCMS相关分析发现男仕口服液显效剂量下与代谢标记物高度相关的入血成分主要为：水晶兰苷、没食子酸、鸡矢藤苷、莫诺苷葡萄糖醛酸化产物、甜菊苷C、甜菊双糖苷,这些成分是男仕口服液治疗肾阳虚证的药效关键物质基础。结论：本研究运用中医方证代谢组学技术建立了“肾阳虚证代谢标记物-男仕口服液体内直接作用物质-药效关键物质基础”的分析模式,发现水晶兰苷、没食子酸、鸡矢藤苷等成分通过改善多个代谢途径（激素合成途径、酪氨酸代谢中激素合成与释放途径等）,从整体上纠正代谢轮廓的改变,体现了男仕口服液治疗肾阳虚证的多途径、多靶点、整体调节的作用特点。该研究为基于临床有效性的创新药物发现提供方法学基础。     

基于代谢组学的慢性肾功能衰竭脾肾阳虚证本质研究展望

探讨了应用代谢组学技术研究慢性肾功能衰竭脾肾阳虚证的思路,并对代谢组学自身特点、研究方法,以及代谢组学在慢性肾功能衰竭中医证候研究的优势进行了介绍.认为代谢组学作为后基因时代一种全新的组学技术,在方法学上具有融整体、动态、综合、分析于一体的特点,对于慢性肾功能衰竭中医证候研究极具意义.而脾肾阳虚证作为慢性肾脏病多发证候,应用代谢组学技术可以分析其特异性代谢产物标志物,进而促进慢性肾功能衰竭临床诊断及治疗.     

真武汤加减辅治慢性心力衰竭心肾阳虚证临床观察

目的:观察真武汤加减辅治慢性心力衰竭心肾阳虚证的效果。方法:96例随机分为对照组和观察组各48例。两组均给予西医常规治疗,观察组加用真武汤加减治疗。结果:总有效率观察组高于对照组(P<0.05)。中医证候积分观察组低于对照组(P<0.05)。观察组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)值低于对照组(P<0.05),左室射血分数(LVEF)高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:真武汤加减辅治慢性心力衰竭心肾阳虚证可提高临床疗效。     

基于代谢组学研究益心泰颗粒剂对慢性心力衰竭大鼠粪便代谢产物的影响

目的 基于代谢组学研究益心泰颗粒剂对慢性心力衰竭大鼠粪便代谢产物的影响。方法 将SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、造模组。除正常组外,造模组采用冠状动脉结扎和力竭游泳的方法建立慢性心力衰竭模型,模型建立成功后,随机分为模型组、益心泰组、曲美他嗪组,益心泰组和曲美他嗪组。分别给药治疗4周,治疗结束后,观察各组大鼠一般情况,彩超检测大鼠心功能、血清BNP、心脏病理改变、大鼠粪便代谢组学改变。结果 CHF模型大鼠LVIDs升高(P<0.01),LVEF、LVFS显著降低(P<0.05,P<0.01),大鼠血清BNP显著升高(P<0.01),经益心泰颗粒剂治疗后,大鼠LVIDs显著降低(P<0.01),LVPWd升高(P<0.01),LVPWs、LVEF、LVFS显著升高(P<0.01),大鼠血清BNP显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠粪便乙酰肉碱、左旋肉碱、肉桂醛、3-酮鞘氨醇、胆固醇硫酸盐、13-OxoODE、2-氨基-3-甲氧基苯甲酸、月桂酸等代谢物的水平降低,5-氧代庚酸酯、5a-Pregnane-3,20-dione、...     

自拟强心汤治疗慢性心力衰竭心肾阳虚证30例

目的 观察自拟强心汤治疗慢性心力衰竭心肾阳虚证型的临床疗效; 方法采用随机平行对照方法,拟符合纳入标准的患者60例分为治疗组与对照组各30例,对照组用西医常规治疗方法,治疗组在常规治疗基础上加用自拟强心汤口服,观察2组心功能、左室射血分数、6 min步行试验及肝肾功能、电解质变化情况.结果 治疗组在心功能改善、左室射血...     

基于中医方证代谢组学研究男仕胶囊治疗肾阳虚证的药效物质基础及作用机制

该研究利用中医方证代谢组学技术研究男仕胶囊治疗肾阳虚证大鼠内源性代谢物的变化,探索与肾阳虚证密切相关的代谢物、代谢通路,鉴定男仕胶囊治疗肾阳虚证的药效物质及作用机制。检测大鼠血清常规生化指标以及观察组织形态,基于中医方证代谢组学技术平台,对大鼠血液和尿液进行多变量模式识别分析,研究肾阳虚证生物标记物及男仕胶囊的治疗作用;在男仕胶囊治疗肾阳虚证有效基础上分析其入血成分与肾阳虚证生物标记物群的相关性,确定其发挥治疗作用的潜在药效物质基础。结果确定了11个与肾阳虚证大鼠模型相关的代谢标记物,涉及类固醇激素的生物合成、色氨酸代谢和酪氨酸代谢等途径。发现男仕胶囊具有调节类固醇激素的生物合成、色氨酸代谢和酪氨酸代谢的作用;PCMS相关分析发现咖啡酸、2-羟基-1-甲氧基蒽醌、1-羟基,2-甲氧基蒽醌、阿魏酸葡萄糖醛酸、木犀草苷、甜菜碱、伞形花内酯和去乙酰基车叶草苷酸为男仕胶囊治疗肾阳虚证的药效物质基础。研究发现男仕胶囊中的木犀草苷、甜菜碱、伞形花内酯等成分通过改善激素合成途径、酪氨酸代谢中激素合成与释放途径以及亚油酸代谢中亚油酸合成途径等,从整体上纠正扰动的代谢轮廓,体现了男仕胶囊治疗肾阳虚证的多途径、多靶点、整体调节的特点。中医方证代谢组学技术为解决基于临床有效性的中药创新药物发现提供方法学支撑。     

基于代谢组学的冠心病患者气虚证识别模式

目的:筛选冠心病气虚证相关特征性代谢产物,尝试建立冠心病气虚证在代谢层面的识别模式。方法:氢核磁共振检测45例冠心病患者及15名正常人的血浆代谢产物,对数据进行PLS-DA、VIP及t检验/非参数检验分析,筛选出气虚证相关特征性代谢产物,聚类分析验证特征性代谢产物对气虚证的识别效果。结果:检测到冠心病患者和正常组血浆内源性代谢成分39种。PLS-DA积分矩阵图显示:冠心病患者与正常组,冠心病气虚证与非气虚证的分布区沿第一主成分t(1)轴方向完全分开。气虚证的特征性代谢产物包括乙酰谷氨酸、赖氨酸、缬氨酸和肉碱。结论:冠心病患者的异常代谢过程包括了氨基酸、糖、脂质及能量代谢、凝血过程及其他代谢过程;筛选出的4种生物标志物基本上实现了对冠心病气虚证的有效识别。     

巴戟天补肾阳作用的血清代谢组学研究

目的:运用代谢组学方法研究氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠血清代谢组变化及巴戟天补肾阳作用的机制。方法:通过核磁共振氢谱(1H-NMR)技术分析氢化可的松及巴戟天作用下的大鼠血清代谢物谱。应用正交偏最小二乘判别分析法研究对照组和模型组之间的代谢物谱差异,并通过变量重要性投影(VIP)在血清中发现了12种潜在生物标志物。采用主成分分析法研究巴戟天对大鼠肾阳虚证的干预效果。通过比较潜在生物标志物的含量差异,探讨巴戟天补肾阳作用的机制。结果:氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠机体能量代谢、氨基酸代谢和肠道菌群都受到不同程度的影响,甲基转移反应被抑制。巴戟天可增强阳虚机体甲基转移反应、改善能量代谢和逆转氨基酸代谢紊乱,但对肠道菌群无明显作用。结论:代谢组学研究能较全面地反应生物体的生理及代谢状态,为中医"证"的本质研究及药物药效评价提供了一种新方法。     

肾阳虚水肿证代谢组学的研究

目的揭示肾阳虚水肿证的代谢组学。方法采用"阿霉素+氢化可的松"复合造模法建立肾阳虚水肿模型后,UPLC-Q/TOF-MS法检测正常组、肾阳虚水肿模型组、阳性药组大鼠尿液代谢物,在主成分分析和正交偏最小二乘判别分析的基础上,筛选出与肾阳虚水肿模型相关的生物标志物。然后,通过MeV软件对标志物水平进行热度图绘制,结合MBRole、KEGG等在线数据库进行通路富集分析和代谢网络构建。结果共鉴定了40个生物标志物,有3条显著相关的代谢通路(苯丙氨酸代谢、色氨酸代谢、嘧啶代谢)。在肾阴虚、阳虚水肿证共有标志物中,苯乙酰甘氨酸等7种代谢物变化趋势相同,4,6-二羟基喹啉等10种代谢物变化趋势相反。结论肾阳虚水肿模型大鼠体内多种代谢紊乱与其肾脏功能损伤、水肿发生、耗竭症状、免疫功能紊乱密切相关,而肾阴虚、阳虚水肿模型在动物形态、免疫功能紊乱中的差异可能与色氨酸、嘧啶、组氨酸代谢紊乱有关。     

亚健康脾虚证的尿液代谢组学研究

目的:探讨亚健康脾虚证的尿液代谢组学特征,阐述脾虚证的生物学本质。方法:对12例健康人和12例亚健康脾虚证患者的尿液样本进行氢核磁共振(1H-NMR)检测。将所得NMR数据通过正交信号校正处理后再采用PLS分析方法,研究健康组与亚健康脾虚证组之间尿液代谢产物谱的差异。结果:两组尿样核磁共振氢谱的OSC-PLS(ctr)分析结果显示,健康人与亚健康脾虚证患者能够被区分,两组尿液样本之间的代谢物含量有明显差异。脾虚证组尿液中3-羟基丁酸(δ1.18,1.22)、乳酸(δ1.34,4.14)、甘氨酸(δ3.58)、肌酐(δ3.06、4.06)、马尿酸(δ3.98、7.54、7.58、7.62、7.66、7.82、7.86)的含量低于正常组,而氧化三甲胺(δ3.26)、柠檬酸(δ2.54、2.66)的含量则高于正常组,其谱峰相对积分面积明显增高。结论:运用代谢组学研究方法可以成功区分亚健康脾虚证和正常人的尿液,初步得到其证型的代谢表型与差异性代谢物,尿液代谢组学的变化可在一定程度上阐释亚健康脾虚证的发生机制,从而阐述亚健康脾虚证的生物学本质。     

脾气虚证代谢综合征大鼠血清脂质代谢生物标志物代谢组学研究

目的:通过脾气虚证代谢综合征大鼠血清样本脂质代谢物进行非靶标脂质组学分析,寻找脾气虚证代谢综合征早期诊断相关的特征性脂质生物标志物,探索其微观物质基础。方法:将30只大鼠随机分为正常组、模型组,每组15只。模型组通过劳倦加饮食不节法造模。运用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)检测模型组和正常组生物样本血清的代谢轨迹,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)寻找各组代谢物差异,筛选潜在内源性标志物。结果:潜在生物标志物主要有溶血磷脂酰胆碱、2-羟基丁酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸、亚油酸、花生四烯酸等。结论:脾气虚证代谢综合征大鼠模型存在明显脂质代谢紊乱,游离脂肪酸是脂质代谢中最活跃的成分。     

基于代谢组学探讨加参方对慢性心力衰竭模型大鼠的作用及机制

[目的] 在加参方治疗慢性心力衰竭（CHF）的药效基础上,利用代谢组学技术探究其抗心力衰竭的作用机制。[方法] 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成CHF模型,连续给药4周,通过超声检测心脏功能、苏木精-伊红（HE）染色检测心肌病理变化、马松（Masson）染色检测心肌纤维化、酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测心肌组织N-末端脑利钠肽原（NT-proBNP）水平,探究加参方对CHF的药效作用;采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF-MS）技术对大鼠血清和尿液中小分子代谢物进行非靶向代谢组学检测并进行多元统计分析,寻找疾病发生的代谢标志物,最后采用MetaboAnalyst代谢组学分析平台构建加参方治疗CHF的代谢通路。[结果] 加参方可显著升高CHF大鼠心脏左室射血分数（EF）和左室短轴缩短率（FS）,减轻CHF大鼠心肌病理损伤和心肌纤维化,降低心肌胶原容积分数（CVF）,降低CHF大鼠心肌组织NT-proBNP水平。CHF大鼠血清得到33个代谢标志物,主要为脂质和氨基酸及其衍生物,尿液得到38个代谢标志物,主要为氨基酸及其衍生物、长链脂肪酸和核苷类;与模型组比较,加参方组大鼠血清和尿液中分别有21个和29个代谢物有回调趋势。加参方主要通过甘油磷脂代谢、鞘脂代谢及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路干预血清代谢标志物,通过泛酸和CoA生物合成、组氨酸代谢及嘌呤代谢通路干预尿液代谢标志物。[结论] 加参方主要通过脂质代谢、氨基酸代谢、能量代谢和嘌呤代谢通路改善CHF。     

基于代谢组学的肾阳虚证本质研究设想

20世纪50年代开始的肾阳虚证现代研究在取得诸多成果的同时也出现很多问题，如何克服“还原论”方法在处理复杂系统问题方面遇到的挫折，成为中医证候研究面临的问题之一，引入具有全面、系统特点的代谢组学思想和方法是解决办法之一。代谢组学具有的在体观察、代谢产物检测以及根据时间变化动态观测的方法与中医学“整体观念”的特点和“司外揣内”的思维模式有相通之处。而且与传统中医学的“四诊”相比，可以引入科学技术的最新方法，使其更具优势。在此基础上，采用临床和实验研究结合的方式，运用色谱与质谱联用等方法来获取指纹谱，应该可以更清晰准确地描述肾阳虚证存在的裹些特定的代谢组分模式。