曼氏血吸虫62kDa条带:一种放射致弱疫苗T细胞抗原和钙网蛋白

曼氏血吸虫成虫可溶性抗原(SAWA)的62/60kDa条带可被照射致弱尾蚴免疫的小鼠血清所识别,并可诱导T细胞应答。为证实并进一步研究上述发现,本研究用曼氏血吸虫SAWA 62/60kDa免疫的小鼠血清对曼氏血吸虫成虫cDNA表达文库进行筛选,并对纯化后的62kDa和60kDa蛋白进行氨基酸测序,以鉴定其作为疫苗免疫后T细胞抗原决定簇的性质和可能性。     

血吸虫22kDa表皮膜相关抗原特异性IgE抗体的诱生与其自身特性有关

最近,Webster等(1997年)的研究显示,人体感染日本血吸虫(菲律宾株)和曼氏血吸虫(Kenya株)所诱生的抗体IgE应答主要针对天然22kDa抗原。但宿主IgE为何主要识别22kDa抗原的原因尚不清楚。 Webster等(1996年)曾克隆编码曼氏血吸虫22kDa抗原的基因,并发现该基因与已克隆的曼氏血吸虫22.6kDa表皮膜蛋白基因(Sm22.6)完全一致。以后的研究进一步     

用单克隆抗体测定血吸虫病循环抗原Ⅰ.一株具有诊断意义的单克隆抗体的特异性分析

本文报道用40:B1 McAb检测曼氏血吸虫感染者血或尿中血吸虫成虫循环阴极(M)抗原具高度特异性。用曼氏血吸虫成虫排泄/分泌抗原(ESA)(含循环阴极(M)抗原)免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得数株能识别阴极(M)抗原的McAb。用IFA分别定位于成虫肠道、体部和皮层,抗体亚类分别为IgG_3,IgM或IgG_1。分析了其中一株McAb 40:B1(IgG_3,用IFA定位于成虫肠道和体部)检测血吸虫循环抗原的特异性。     

日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因的克隆和鉴定

目的　从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选并克隆日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因。　方法　用ABC ELISA法从日本血吸虫病流行区筛选出高水平抗血吸虫成虫抗原IgE抗体的个体 15人 ,采集血清并混合。混合血清经Protein G柱吸收后 ,用于日本血吸虫成虫cDNA文库的免疫学筛选。PCR扩增阳性克隆插入cDNA片段。序列分析后 ,于该序列第一开读框两端设计引物并分别引入EcoRⅠ和NotⅠ位点 ,PCR扩增并纯化目的基因片段后克隆入质粒载体pGME T ,再亚克隆入表达载体pGEX 6p 1。经IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblotting鉴定。　结果　阳性克隆插入片段约 12 0 0bp ,第一开读框长 5 0 7bp ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 3kDa。DNA序列分析显示 ,与已知序列同源性小于 4 0 %。重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B能高效表达融合蛋白 ,且能被日本血吸虫特异性IgE抗体识别。　结论　成功构建的重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B ,Sj4 3B可编码日本血吸虫特异性IgE抗体相关抗原     

不同抗原对曼氏血吸虫病酶联免疫吸附试验的适用性

本文作者在苏里南用7种不同的曼氏血吸虫抗原作酶联免疫吸附试验(ELISA)检测曼氏血吸虫病患者血清中的特异性抗体。抗原材料从感染48天的金色仓鼠体内收集成虫和虫卵,制备7种抗原:(1)成虫抗原(AWA);(2)成虫超速离心抗原(AWA-UC);(3)三氯乙酸-可溶性成虫抗原(AWA-     

日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin 2-A基因的克隆、 表达与鉴定

目的 扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因 SjTsp2。 方法 根据与曼氏血吸虫表膜蛋白 SmT-sp2 基因同源的SjTsp2 序列(编号为AY810722)设计引物, 体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a, 转化至大肠埃希菌 (E. coli) BL21株, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达, 用纯化的重组蛋白免疫小鼠, ELISA检测其血清抗体效价, 蛋白质印迹 (Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。 结果 PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为 228 bp, 与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为 52%。 SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达, 免疫小鼠可产生高滴度(最高1 ∶ 32 000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明, 纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。 结论 日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达, 其表达蛋白具有一定的抗原性。     

日本血吸虫副肌球蛋白的克隆和部分核苷酸序列:一种血吸虫病的候选疫苗抗原

副肌球蛋白是多数无脊椎动物肌肉中的主要结构蛋白,脊椎动物则无副肌球蛋白,若用作疫苗候选抗原将不会发生自身免疫反应。已证明曼氏血吸虫的副肌球蛋白(Sm97)有希望成为曼氏血吸虫病疫苗候选抗原,其部分及全部cDNA已得到。本文报告编码日本血吸虫副肌球蛋白的cDNA的克隆及测序。作者从日本血吸虫菲律宾株成虫     

一种血吸虫病循环抗原的特性

Berggren等曾报道重感染曼氏血吸虫的小白鼠和大白鼠具有来自血吸虫的循环抗原。本文报道循环抗原也发现于埃及血吸虫、曼氏血吸虫和日本血吸虫的盐水浸出液以及重感染日本血吸虫的小白鼠血清中,并对该种抗原的特性进行了研究。作者从重感染日本血吸虫的小白鼠获得血清,另外制备曼氏血吸虫匀浆以免疫家兔,并用各种免疫扩散与免疫电泳技术测定其血清的特性;还提取曼氏血吸虫匀浆三氯醋酸可溶部分氯仿浸出液,测定其成分并试验其     

水牛感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

目的 筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法 用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum，Sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选，将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后，将7个阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切并PCR扩增显示，插入的日本血吸虫cDNA片段大小在0．8～2．0kb之间，选取其中4个经DNA测序分析，发现2个未曾报道过的日本血吸虫新基因，分别命名为Sj-IB1和Sj-Rho GTPase-like gene，并在Gene Bank登记注册。结论 水牛感染血清可识别日本血吸虫的特异性抗原分子，这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究。     

血吸虫病循环免疫复合物

许多学者曾报道感染动物和人的血清以及人尿中存在着血吸虫的循环抗原。本文作者用I~(125)标记Clq试验,补体结合试验及光密度测定法检测循环抗原。以巴西的56份经寄生虫学和血清学证明为曼氏血吸虫感染的血清作试验。临床分型,40例为轻型,16例为肝脾型。同时以14份正常人血清为对照。另以100只感染100条尾迹的黑鼠作试验,每5天取血一次,直至第95天;以30只正常鼠为对照。从感染的仓鼠获得曼氏血吸虫,制备全抗原浸出液。另以亲和层析法制备特异性抗原,再行放射碘化标记。     

日本血吸虫P7抗原的克隆表达、虫期特异性分析以及早期诊断价值的研究

目的克隆表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)P7抗原片段(GenBank登录号为EU121231),研究各虫期中该目的片段的转录和表达情况,初步评价其作为早期诊断抗原的潜力。方法将日本血吸虫童虫cDNA文库中免疫筛选出的阳性克隆P7进行体外扩增,将目的基因亚克隆至原核表达载体pET28a中。用双酶切的方法鉴定重组质粒,将阳性重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。用蛋白质印迹(Western blotting)分析初步鉴定表达产物的免疫诊断价值。利用逆转录PCR和Westernblotting分析检测P7片段在日本血吸虫各个虫期中的转录和表达情况。以P7重组蛋白为抗原用间接ELISA检测感染日本血吸虫后14 d的兔血清(18份),日本血吸虫病(28份)、华支睾吸虫病(30份)和卫氏并殖吸虫病(20份)患者血清,以及健康人血清(30份),计算特异性和敏感性。结果成功构建了重组表达载体P7/pET28a,并在E.coli中表达。Western blotting分析结果显示P7重组蛋白能被感染日本血吸虫后...     

曼氏血吸虫病患者乳汁中的寄生虫‘M’抗原(初步报告)

在人体血吸虫病中有一种对曼氏血吸虫抗原起反应的迟发性变态反应,可从感染过血吸虫的母亲生下的未感染儿童得到证明,其原因推测为母体循环抗原通过胎盘或乳汁转移其子代。血吸虫病人的血清及/或尿中已经发现有某些循环抗原存在。并证明曼氏血吸虫病患者的尿中有一种耐热的寄生虫抗原,称之为‘M’抗原。此抗原与感染程度及对曼氏血吸虫的迟发性变态反应有关。     

曼氏血吸虫尾蚴特异性钙结合蛋白的免疫化学研究

作者曾报道编码曼氏血吸虫8kDa尾蚴特异性的钙结合蛋白(CaBP)基因的克隆、定序及表达。本文对此蛋白的有关功能进行了免疫化学研究。 成虫取自感染曼氏血吸虫7周的小鼠肝脏。每4天收集一次光滑双脐螺逸出的尾蚴。胞蚴按两个时间取自双脐螺的肝脏(HP):     

存在于曼氏血吸虫童虫表面的一种28,000道尔顿抗原的体外合成

制备抗曼氏血吸虫成虫的疫苗,首先是要鉴定存在于血吸虫表面的并在体外虫RNA的翻译产物中的靶抗原。经过大量研究,已证实了感染鼠的或人的血清能识别一组30～40千道尔顿(KDa)的抗原分子。本文作者报道了他们在得到了具有很高抗曼氏血吸虫抗原特性的多克隆抗血清后,发现其中有     

曼氏血吸虫——排泄分泌多肽表现出对光滑双脐螺胞浆成分的选择性结合

当抗性株螺感染曼氏血吸虫时,血吸虫的毛蚴被循环的血细胞包裹,在感染后的24—48h被消灭,而其它易感株螺对毛蚴感染几乎没有细胞反应,使血吸虫能在宿主螺中定居。螺宿主对血吸虫毛蚴易感性的确切机制尚不清楚,可能是:1)易感螺缺乏引起有效的抗血吸虫应答的特异性识别分子;2)毛蚴通过逃避螺体内的防御反应而存活。而不能识别异己的机制可能是血吸虫产物与螺血淋巴成分的特异性结合所介导。以往的研究     

日本血吸虫CuZn-SOD基因全长cDNA的识别及真核表达载体的构建

目的　识别日本血吸虫大陆株铜锌超氧化物歧化酶 (SjCuZn SOD)基因 ,构建SjCuZn SOD的真核表达载体。方法　将曼氏血吸虫 (Sm )的CuZn SOD全长cDNA序列上网比对 ,寻找Sj相关EST。设计特异性引物从尾蚴cDNA文库扩增相应序列 ,经双酶切、连接、转化 ,克隆入 pcDNA3 .0真核表达质粒 ,并鉴定阳性克隆。　 结果　找到Sj相关EST(登录号BU794891) ,核酸阅读框 (ORF)分析和BLAST比对分析等方法判断为SjCuZn SOD完整的cDNA编码序列 ,含462bp完整阅读框 ,编码 15 4aa。经单双酶切、PCR扩增、核酸测序鉴定 ,验证成功构建了 pcDNA3 .0 SOD真核重组表达载体。　结论　成功构建真核重组表达载体 pcDNA3 .0 SOD ,为在真核表达系统研究SjCuZn SOD基因功能奠定了基础     

了本血吸虫CuZn-SOD基因全长cDNA的识别及真核表达载体的构建

目的 识别日本血吸虫大陆株铜锌超氧化物歧化酶(Sj CuZn-SOD)基因，构建Sj CuZn-SOD的真核表达载体。方法 将曼氏血吸虫(Sm)的CuZn-SOD全长cDNA序列上网比对，寻找Sj相关EST。设计特异性引物从尾蚴cDNA文库扩增相应序列，经双酶切、连接、转化，克隆入pcDNA3.0真核表达质粒，并鉴定阳性克隆。结果 找到Sj相关EST(登录号BU794891)，核酸阅读框(ORF)分析和BLAST比对分析等方法判断为Sj CuZn-SOD完整的cDNA编码序列，含462 bp完整阅读框，编码154aa。经单双酶切、PCR扩增、核酸测序鉴定，验证成功构建了pcDNA 3．0-SOD真核重组表达载体。结论 成功构建真核重组表达载体pcDNA3．0-SOD，为在真核表达系统研究Sj CuZn-SOD基因功能奠定了基础。     

日本血吸虫肌动蛋白cDNA的克隆表达及其免疫保护功能

根据曼氏血吸虫肌动蛋白cDNASmAct2设计一对引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR法扩增出一大小为1131bp的cDNA片段.测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框cDNA,与SmAct2cDNA序列同源性为92%.将其克隆到表达载体pET28a(+)中,在大肠杆菌BL21中获得了较高量的表达,融合表达产物分子量约为43kDa.利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明所克隆的cDNA表达产物具有良好的抗原性.用该表达产物免疫昆明系小鼠,攻击血吸虫尾蚴以进行保护性实验,结果其减虫率为28.4%,减卵率为29.2%,初步结果显示血吸虫肌动蛋白具有一定的免疫保护功能.     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究Ⅸ曼氏血吸虫吡喹酮抗性的遗传学分析

目的　探索曼氏血吸虫吡喹酮抗性的遗传性状和传播规律。方法　以 W1特异性序列为引物 ,采用直接 PCR技术鉴别出单性克隆尾蚴的性别 ;用曼氏血吸虫吡喹酮抗性株和敏感株单性尾蚴感染远交系 CD1 鼠 ,进行血吸虫抗性株与敏感株的杂交实验 ;采用体外虫卵、毛蚴和尾蚴吡喹酮敏感性检测法 ,评价 F1 和 F2 代虫体吡喹酮抗性水平。结果　吡喹酮抗性株和敏感株杂交 F1 和 F2代均表现出抗性株特征。结论　曼氏血吸虫吡喹酮抗性性状可能系显性遗传     

日本血吸虫肌动蛋白cDNA的克隆表达及其免疫保护功能

根据曼氏血吸虫肌动蛋白cDNA SmAct2设计一对引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT－PCR法扩增出一大小为1131bp的cDNA片段,测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框cDNA,与SmAct2 cDNA序列同源性为92％。该其克隆到载体pET28a( )中,在大肠杆菌BL21中获得了较高量的表达,融合表达产物分子量约为43kDa。利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白所得抗血清对该表达产物进行Western印迹检测,在预测位置出现了明显的识别条带,说明所克隆的cDNA表达产物具有良好的抗原性。用该表达产物免疫昆明系小鼠,攻击血吸虫尾蚴以进行保护性实验。结果 其减虫率为28.4%,减卵率为29.2%,初步结果显示血吸虫肌动蛋白具有一定的免疫保护功能。