实验性肾小管间质性肾炎免疫发病机理的探讨

为探讨肾小管间质性肾炎的免疫发病机制，观察Ia抗原表达与肾小管间质性肾炎损害的关系，用兔肾小管基底膜（TBM）完全福氏佐剂及百白破疫苗，免疫雌性Wistar大鼠，成功地建立了肾小管间质性肾炎（TIN）模型。我们采用免疫组化和图像分析技术，研究TIN病变中单个核细胞的特征以及Ia抗原表达和TIN之间的关系。结果显示：在TIN发生时，TBM上有线型IgG沉积，这表明有抗TBM抗体产生。肾小管间质中渗出的单个核细胞，大多数为T细胞，部分有肉芽肿形成。B细胞逐渐减少，而单核细胞由少变多。肾间质损害表现为小管萎缩和间质纤维化。这些表明细胞免疫在TIN发病过程中起着重要作用。模型组中肾小管上皮细胞和Bowman囊Ia抗原表达强度比对照组高（P＜0．01），提示Ia抗原的表达可能影响TIN的发生和发展。     

Fractalkine/CX3CR1在Ⅳ型狼疮肾炎患者肾组织中的表达

目的： 研究Ⅳ型弥漫增殖型狼疮肾炎、轻微性肾小球病变及正常肾组织中趋化因子fractalkine及其受体CX3CR1的表达，以及与CD68阳性巨噬细胞表达之间的相互关系，探讨fractalkine/CX3CR1在Ⅳ型狼疮肾炎发病中的作用。方法： Ⅳ型狼疮肾炎患者的肾活检组织21例，轻微性肾小球病变患者的肾活检组织18例，光镜下正常的肾组织标本8例。采用免疫组织化学技术检测肾组织中fractalkine、CX3CR1及CD68的表达。结果： （1）正常肾组织和轻微性肾小球病变肾组织中fractalkine基本未见阳性表达；其受体CX3CR1阳性细胞和CD68阳性巨噬细胞仅偶见于肾小球及肾皮质间质中。（2）Ⅳ型狼疮肾炎肾小球和肾皮质间质中CX3CR1阳性细胞和巨噬细胞显著增多，且两者的表达显示高度的相关性（分别为r=0.956，P＜0.01和r=0.965，P＜0.01）。（3）Ⅳ型狼疮肾炎肾组织中fractalkine高表达于皮质肾小管上，fractalkine 阳性皮质肾小管的百分比分别与肾皮质间质CX3CR1阳性细胞数和巨噬细胞数之间高度相关（分别为r=0.720，P＜0.01和r=0.770，P＜0.01）。结论： 提示fractalkine/CX3CR1在Ⅳ型狼疮肾炎的发病机制中可能占有重要地位。     

Lisofylline对肾炎鼠肾小球巨噬细胞白介素-1表达的影响

目的：观察肾小球炎症时浸润的巨噬细胞（GMO）产生白细胞介素-1（IL－1）以及细胞信号传递抑制剂Lisofyllline(LSF）的阻断作用。方法：采用加速型抗基底膜肾炎模型,分离提取肾炎鼠肾小球巨噬细胞（GMr）,腹腔Md（P－M）及正常鼠腹腔M(N－PM）作为对照,胸腺细胞增殖法固定MIL－l的活性,Northe杂交检测MIL－1βmR－NA的表达。结果：GM在脂多糖（LPS)G刺激后其IL-1活性显著高于N－IM和P－M的L-1活性（P＜0．01）;LSF可抑制GMIL-1的活性,呈剂量依赖性（15tmol/L时P＜0．01,25mol/L时P＜O．01）;GMIL-1βmRNA的表达高峰在6h,12h,24h渐下降,各时间点均高于P-M.ISF在各时间点均可抑制GMIL－1βmRNA的表达。结论：肾小球肾炎对肾小球内浸润的M在炎症状态下处于激活状态,产生IL－1,加剧炎症反应;LSF可从转录水平上抑制GMIL－1的表达,为临床防治肾小球肾炎提供了新的途径。     

整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转化中的作用

目的观察整合素连接激酶（ILK）在单侧输尿管梗阻小鼠（UUO）肾脏中的表达,并探讨其在肾小管上皮细胞转化中的作用。方法将10周龄健康雄性CD-1小鼠随机分为假手术组（C,n=20）和UUO组（n=40）,分别于术后1、3、7、14d处死小鼠。采用Masson染色观察肾间质纤维化程度;用免疫组织化学（sP法）的方法观察ILK、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Westernblot半定量分析梗阻侧肾组织ILK的蛋白水平;用即时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测ILK、E-cadherin和α-SMA mRNA的表达。结果免疫组织化学显示ILK在假手术组只有微量表达,主要位于肾小球脏层上皮细胞,UUO术后1d ILK蛋白表达显著增多（t=16．5,P＜0．01）,7d达高峰。术后3d肾小管上皮细胞及肾间质α-SMA阳性细胞数显著增多（t=21．0,P＜0．01）,肾小管上皮细胞表达E-cadherin明显减少（t=5．6,P＜0．01）。根据免疫组织化学结果分析,术后1～7d,ILK蛋白表达与α-SMA蛋白表达呈正相关（R=0．88,P＜0．01）,与E-cadherin表达呈负相关（R=-0．87,P＜0．01）。Westernblot结果显示ILK蛋白表达于术后1d明显增加,7d达高峰,14d表达不再增加（P＞0．05）。RT-PCR结果显示术后1d ILK mRNA表达增多（t=141．6,P＜0．01）,E-cadherin mRNA表达于术后3d显著减少（P＜0．01）,α-SMA mRNA表达于术后3d开始增多（P＜0．01）。结论UUO模型早期整合素连接激酶表达增高,可能通过介导肾小管上皮细胞．间充质转化而参与肾脏纤维化的发生发展。     

CPI对糖尿病大鼠血浆载脂蛋白的影响

目的 探讨中药复方植物胰岛素（CPI）对糖尿病大鼠血浆载脂蛋白的影响。方法 按1％浓度将链脲佐菌素（STZ）溶于0．1M枸橼酸缓冲液中注入原发性高血压大鼠腹腔,建立糖尿病大鼠模型。分三组：（1）HC组：无糖尿病的原发性高血压大鼠;（2）HM组：由STZ诱导出糖尿病的HC大鼠;（3）HP组：CPI治疗的HM大鼠。3组大鼠分别在喂养后1、4、8、16、24周抽取尾动脉血测血浆Ap-A1和Ap-B100。结果 血浆Ap-A1水平HM组较HC组明显升高（P＜0．01）,用CPI治疗的HM大鼠血浆Ap-A1于24周后显著高于HM组（P＜0．01）。血浆Ap-B100水平HC组显著低于HM组（P＜0．01）,用CPI治疗的HM大鼠血浆Ap-B100于24周后低于HM组（P＜0．01）。结论 糖尿病大鼠用CPI喂养后有升高血浆Ap-A1和降低Ap-B100水平的作用。     

主动性Heymann肾炎中NF-κB p65在肾间质病变中的作用

目的 :探讨主动性Heymann肾炎 (AHN)肾间质内NF -κBp6 5的活化及意义。方法 :8- 10周龄Wis tar雌性大鼠 2 0只均分为 2组 ,肾炎组予皮下免疫Fx1A/CFA ;对照组予皮下注射CFA。免疫组化染色观察大鼠肾组织NF -κBp6 5的活化及其与肾组织病理改变、尿蛋白量和血清白蛋白水平变化的相互关系。结果 :肾炎组大鼠肾间质病变评分、肾小管 -间质NF -κBp6 5的活化均明显高于对照组 (P <0 0 1) ;肾小管NF -κBp6 5阳性数与尿蛋白水平和肾间质病变评分呈明显正相关 (r分别为 0 7138和 0 6 376 ,P <0 0 5 )。结论 :NF -κBp6 5的活化可能参与AHN的小管 -间质的病理损害过程     

肾炎患者尿液巨噬细胞FcγRⅢ的表达及其临床意义

本文采用流式细胞仪测定增生性肾炎、非增生性肾小球病变及其它肾病变患者单个核细胞血和尿液巨噬细胞FcγRⅢ的表达水平,结果表明前两组患者急性期血液单个细胞FcγRⅢ的表达水平均增高,两组间无差异,但均显著高于其它肾病变组（P＜0．01）。增生性肾炎患者急性期尿液巨噬细胞FcγRⅢ的表达显著高于非增生性肾小球病变组及其它肾病变组（P＜0．01）,但大多数增生性肾炎缓解期患者上两种细胞FcγRⅢ呈阳性表达者,激素减量后病情无反复,而尿液巨噬细胞FcγRⅢ阳性表达者,激素减量后病情反复。结论认为尿液巨噬细胞FcγRⅢ的表达不仅是增生性肾炎及急性肾小球损伤的重要指标,而且是增生性肾炎激素减量的监测指标。     

外周血单个核细胞在乙肝相关性肾炎发病机制中的作用研究

目的通过观察外周血单个核细胞（PBMc）对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的影响,探讨PBMC在乙肝相关性肾炎发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测HBVDNA阳性血清与人近端肾小管上皮细胞（HK-2）培养时HK．2凋亡率作为对照,分别观察健康人及HBVDNA阳性患者PBMC对HK-2凋亡的影响。结果健康人PBMC组HK-2凋亡率明显低于对照组和HBVDNA阳性患者PBMC组（P〈0．01）。结论健康人PBMC能抑制HK-2凋亡,而HBVDNA阳性患者PBMC此抑制作用降低,提示HBVDNA阳性患者PBMCs功能缺陷,可能是乙型肝炎相关肾炎（HBV—GN）的发病机制之一。     

原发性肝癌患者手术治疗前后检测可溶性白细胞介素2受体和肿瘤坏死因子的临床意义

应用双抗体酶联夹心法和放射免疫分析法检测了30名正常人和33例原发性肝癌患者血清中sIL-2R和TNF含量。结果表明：原发性肝癌患者手术前sIL－2R、TNF非常显著地高于正常人（P＜0．001，P＜0．01）；术后2周，血清中sIL－2R与正常人比较有差异（P＜0．01），而TNF则无差异（P＞0．05）。AFP含量高低与sIL－2R和TNF含量无关（r＝0．3826，0．3725；P＞0．05）。     

细胞外基质在人系膜增生性肾小球肾炎病变中的变化

肾小球细胞外基质（尤其系膜基质）的过量聚积是肾小球硬化的主要变化之一。我们应用免疫酶标技术及计算机图像分析系统，检测了系膜增生性肾小球肾炎病变过程中细胞外基质的变化。结果表明：增生扩张的系膜基质中含有Ⅳ型胶原，层粘连蛋白等多种正常肾小球细胞外基质成分，并随病变进展明显增加。Ⅲ型胶原在中，重度系膜增生性肾小球肾炎时也出现于增多的系膜基质中，说明正常时不存在于肾小球的间质胶原在肾小球过程中也起重要作用     

Norcantharidin inhibits the expression of extracellular matrix and TGF-β1 in HK-2 cells induced by high glucose independent of calcineurin signal pathway

Norcantharidin (NCTD) was shown in our previous studies to attenuate renal tubulointerstitial fibrosis in rat models with diabetic nephropathy (DN). The aim of this study was to determine the effects of NCTD on the expression of extracellular matrix (ECM) and TGF-β1 in HK-2 cells stimulated by high glucose and on calcineurin (CaN)/NFAT pathway. Whether or not the antifibrotic effect of NCTD on renal interstitium was dependent on its inhibition of CaN pathway was also investigated. Experimental concentrations of NCTD were verified by cytotoxic test and MTT assay. HK-2 cells were transfected with CaN small interference RNA (siRNA). The mRNA and protein expressions of FN, ColIV, TGF-β1, and CaN in HK-2 cells were detected by real-time PCR and western blot. The CaN/NFAT pathway was examined by indirect immunofluorescence and western blot. Our study revealed that NCTD concentrations over 5?mg/l had overt cytotoxicity on HK-2 cells. Meanwhile, both 2.5 and 5 mg/l NCTD inhibited HK-2 cell proliferation (P < 0.05). NCTD inhibited the upregulation of FN, ColIV, and TGF-β1 of HK-2 cells stimulated by high glucose (P < 0.05), and also significantly downregulated the expression of CaN mRNA and protein in HK-2 cells (P < 0.05). In addition, not only was the nuclear translocation of NFATc inhibited, but its protein level in the nucleus was also reduced. Following CaN siRNA transfection, CaN mRNA and protein expression were significantly decreased. In contrast, the protein levels of FN, ColIV, and TGF-β1 increased in HK-2 cells stimulated by high glucose (P < 0.05). However, NCTD treatment downregulated their expression. These results indicated that NCTD could decrease the expression of ECM and TGF-β1 in HK-2 cells stimulated by high glucose, downregulate CaN expression, and block the CaN/NFAT signaling pathway. However, the effect of NCTD on inhibition of the expression of ECM and TGF-β1 was not associated with its inhibition of the CaN/NFAT pathway.     

上调miR-200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成

目的探讨miR-200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs,免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs;取新鲜培养的第2代PSCs,设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组、TGF-β1+miR-200a mimic组,Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达,荧光定量PCR检测α-SMA、collagenⅠmRNA及miR-200a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P0.05),且呈时间依赖性;转染miR-200a mimic后,在相同浓度的TGF-β1刺激下,α-SMA和collagenⅠ的蛋白和mRNA表达明显降低(P0.01)。结论上调miR-200a的表达,可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用,其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。     

P13K/Akt信号通路在白蛋白诱导肾小管上皮细胞转化生长因子β1表达中的作用

目的 研究白蛋白对人肾小管上皮细胞(HK-2)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,以及P13K/Akt信号通路在这一过程中的作用.方法 体外培养HK-2细胞,分为对照组、白蛋白(BSA)组和白蛋白加抑制剂(BSA+Ly294002)组.分别于培养12、24、48 h后,用MTT法检测HK-2细胞的增殖;RT-PCR检测HK-2细胞TGF-β1 mRNA的表达;Western印迹测定HK-2细胞TGF-β1和磷酸化的PI3K(p-PI3K)、Akt(p-Akt)蛋白分泌.结果 白蛋白可明显诱导HK-2细胞增殖(P<0.05),诱导后12 hBSA组与对照组比较,TGF-β1 mRNA表达明显上调(0.472±0.025比0.233±0.021,P<0.05);TGF-β1蛋白明显上调(296±20.1比100±13.2,P<0.05);p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增加(P<0.05).加Ly294002 12 h时HK-2增殖受抑制;48 h时TGF-β1 mRNA、蛋白和p-PI3K、P-Akt蛋白的表达也受到抑制(均为P<0.05).结论 白蛋白通过活化PI3-K/Akt信号转导通路诱导肾小管上皮细胞产生TGF-β1.     

Galectin-3 modulates rat mesangial cell proliferation and matrix synthesis during experimental glomerulonephritis induced by anti-Thy1.1 antibodies

Galectin-3 is a β-galactoside-binding protein synthesized by macrophages and other inflammatory cells and expressed in various branching epithelia, including the developing kidney. The expression of galectin-3 has been studied in a rat model of acute mesangial proliferative glomerulonephritis in which a single injection of anti-Thy1.1 antibodies leads to destruction of mesangial cells expressing a Thy1.1 epitope on their surface. The glomerular lesion is characterized by expansion of the mesangial matrix, especially laminin and collagen type IV, and mesangial hypercellularity. Galectin-3 expression, which is sparse in mature rat kidney and confined to the apical face of some distal tubules, is increased within 1–3 days following antibody administration, with the recruitment of glomerular macrophages and pronounced neo-expression in the cytoplasm and at the basal face of distal tubules. At later times, galectin-3 is detected immunohistochemically in the repopulating mesangial cell mass, preceding the extensive mesangial deposition of laminin and collagen type IV. Mesangial cells in culture do not produce appreciable amounts of galectin-3 but do bind and endocytose exogenously added lectin. Addition of galectin-3 to primary cultures of mesangial cells prepared from normal rats induces a 1·5-fold increase in the synthesis of collagen type IV and it also acts in synergy with a quantitatively similar stimulatory effect of transforming growth factor β (TGF-β) on matrix synthesis. Exogenous galectin-3 prolongs the survival of mesangial cells in serum-free cultures and also protects these cells against cytotoxic effects of TGF-β. The data support the notion that the increased expression and secretion of galectin-3 in infiltrating macrophages and in distal tubular epithelia, together with up-regulation of IL-1β and TGF-β genes, play a role in mesangial hypercellularity in the progression of one model of inflammatory renal disease. Copyright © 1999 John Wiley & Sons, Ltd.     

转化生长因子β及其信号转导分子Smad4在肾小球硬化中的作用研究

目的：探讨转化生长因子β（TGF-β1）及其信号转导分子Smad4在肾小球肾炎中的表达及其意义。 方法： 以20例正常肾组织为对照组,对38例各种不同组织学类型肾小球肾炎的肾活检标本,分别行免疫组化方法观察TGF-β1、Smad4、胶原Ⅰ（collagen type Ⅰ）在肾小球中的染色强度,并对其检测结果作图像分析处理;以体外培养的人系膜细胞为对象，观察TGFβ1对系膜细胞表达Smad4、胶原Ⅰ的影响，Smad4、胶原Ⅰ的基因表达用RT-PCR检测，蛋白表达用Western blotting检测。 结果： 所有增生、硬化病理类型肾炎中病变肾小球TGFβ1、Smad4、胶原Ⅰ蛋白表达均高于对照组（P<0.05）,且TGFβ1、Smad4两者在肾小球中的表达与胶原Ⅰ在肾小球中的堆积呈多重相关（P<0.05）；外源性TGFβ1刺激人肾系膜细胞后，细胞的Smad4基因表达和蛋白表达增高（P<0.05）；胶原Ⅰ的基因表达和蛋白表达也相应增高（P<0.05）。 结论： TGFβ1及其信号转导分子Smad4可能参与病变肾小球ECM的过量堆积，在肾小球硬化过程中起重要作用。     

幽门螺杆菌对体外感染胃黏膜上皮细胞TGF-β1 B7-H1表达的影响

目的 探讨适当菌量幽门螺杆菌(H.pylori)对体外感染胃黏膜上皮细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、B7-H1 mRNA表达的影响及其诱导TGF-β1表达的菌体因素,为支持H.pylori通过诱导胃黏膜上皮细胞表达TGF-β1及B7-H1,抑制宿主免疫功能,参与H.pylori免疫逃逸提供依据.方法 (1)选用1.0×109CFU/ml(低浓度)、4.0×109 CFU/ml(中浓度)、8.0×109 CFU/ml(高浓度)H.pylori国际标准毒力菌株NCTC 11637活菌悬液分别感染体外培养胃黏膜上皮细胞,建立不同共孵育时间(0 h、0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h)H.pylori体外感染细胞模型,设立未加H.pylori的胃黏膜上皮细胞对照组,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测感染及对照细胞各时间点培养上清TGF-β1含量,原位杂交法检测不同浓度感染及对照细胞共培养12 h B7-H1 mRNA的表达.(2)同时用H.pylori中浓度灭活菌悬液与体外培养胃黏膜细胞共孵育,测定共孵育细胞2 h、12 h培养细胞上清的TGF-β1含量.(3)用超声粉碎并经离心获取的H.pylori菌体成分上清、沉淀以及煮沸后上清、沉淀分别作用体外培养胃黏膜细胞,测定2 h、12 h培养细胞上清TGF-β1含量.结果 (1)H.pylori活菌悬液3种浓度各时间组胃黏膜上皮细胞培养上清TGF-β1含量均较对照组明显增高(P<0.05),各浓度时间组TGF-β1表达量有栩似的动态趋势,但尤以中浓度组TGF-β1表达量最高(P<0.05).(2)中浓度H.pylori灭活菌株组与同浓度活菌组细胞培养上清TGF-β1含量差异无统计学意义(P>0.05).(3)H.pylori菌体成分上清组较对照组和沉淀组细胞培养上清TGF-β1表达增高(P<0.01);上清煮沸组较未煮沸组明显降低(P<0.01);沉淀煮沸组与未煮沸组差异无统计学意义(P>0.05).(4)高、中、低浓度组感染细胞12 h B7-H1 mRNA的表达均较对照组增高(P<0.05),以中浓度组表达最高,并与高、中、低浓度组12 h感染细胞上清TGF-β1含量呈正相关(rs=0.628,P<0.01).结论 H.pylori可直接诱导胃黏膜上皮细胞分泌TGF-β1,其诱导因素为可溶性不耐热菌体成分;H.pylori同样可诱导胃黏膜上皮细胞B7-H1 mRNA表达增高,且B7-H1 mRNA表达与TGF-β1呈正相关.推测H.pylori通过诱导TGF-β1、B7-H1高表达,抑制宿主免疫应答,参与H.pylori免疫逃逸.     

Effects of emodin on the proliferation of the glomerular mesangial cell and correlative cytokines in rats

Objective:To investigate the effects of emodin(EMD) on cell proliferation and correlative cytokines secretion of glomerular mesangial in rats. Methods:The effects of EMD on cell proliferation and IL-6 , TGF-β1 secretion of glomerular mesangial in rats were observed. Cell proliferation was measured by MTT method. IL-6 and TGF-β1 secretion was detected with ELISA. Results:EMD was able to inhibit the cell proliferation and down-regulate the IL-6 and TGF-β1 secretion of glomerular mesangial, as compared to the model group in rats (P＜0.05). Conclusion:EMD could significantly inhibit the cell proliferation, and reduce the creation of extracellular matrix(ECM), this indicated that it could play an important role in alleviation and prevention of glomerular sclerosis. The mechanism may be that EMD can reduce the IL-6 and TGF-β1 secretion of glomerular mesangial cell in rats.     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。