东亚钳蝎毒素多肽纯化组份BmK AS-1对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠通道电流的作用

目的 研究国产东亚钳蝎（ｂｕｔｈｕｓ ｍａｒｔｅｎｓｉ Ｋａｒｓｃｈ,ＢｍＫ）毒素多肽的纯化单体组分ＢｍＫ ＡＳ－１对大鼠奶神经节（ＤＲＧ）神经元河豚素不敏感（ＴＴＸ－Ｒ）钠电流的作用。方法 采用膜片箝全细胞记录方法,观察ＢｍＫ ＡＳ－１对单个ＤＲＧ细胞ＴＴＸ－Ｒ钠电流幅值的影响。结果 ＢｍＫ ＡＳ－１剂量依赖地抑制ＴＴＸ－Ｒ钠电流,且高剂量（１０μｇ／ｍｌ）ＢｍＫ ＡＳ－１几乎完全抑制ＴＴＸ－Ｒ     

东亚钳蝎毒素多肽对河豚毒素敏感型钠电流的作用

目的:蝎毒素是一种神经毒素,其对周围神经系统钠通道的作用尚不十分清楚,仍有许多疑题待研究.文中研究东亚钳蝎毒素多肽224(BmK224)对大鼠背根神经节(DRG)神经元电压依赖性河豚毒素敏感型钠电流(TTX-S INa)的影响.方法:分离单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术观察BmK224对TTX-S INa的影响.结果:BmK224浓度依赖性地抑制TTX-S INa,40μg/ml BmK224使TTX-S INa稳态激活和失活曲线都向超极化方向移动,复活时间延长.可激活通道数增加. 结论:BmK224影响钠通道激活失活过程的作用机制可能是所含的α-蝎毒素使钠通道构象发生改变.     

蝎毒多肽提取物对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用

目的 观察蝎毒多肽提取物(PESV)对Lewis肺癌(LLC)生长及转移的影响并探讨其作用机制.方法 采用30只C57BL/6J小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,建立皮下种植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-FU治疗组、PESV治疗组,连续灌胃给PESV18d,检测肿瘤体积并计算抑瘤率.另取20只C57BL/6J小鼠,尾静脉注射Lewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌实验转移模型,随机分为荷瘤对照组和PESV组,连续灌胃给PESV28d,观察肺部转移灶数目并计算转移抑制率;采用免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清中骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 PESV抑瘤率为46.02%,肺转移抑制率76.19%;与荷瘤对照组相比,瘤组织和血清中OPN和MMP-9的表达明显降低(P<0.05).结论 PESV能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制OPN和MMP-9的表达有关.     

神经内分泌多肽7B2对T淋巴细胞的影响

观察神经内分泌多肽7B2对T淋巴细胞增殖和趋化功能的影响，当其浓度在250pg／ml和500pg／ml时，可抑制10份正常人外周血的PHA淋转率，其平均抑制率分别为26．97％、61．04％。采用微量玻片T淋巴细胞趋化试验证实．当7B2浓度在3ng／ml和5ng／ml时可抑制以白细胞介素2（IL-2）作为起化剂的6份外周血经PHA刺激的T淋巴细胞趋化率，其抑制率分别为32.78％和91．78％。表明神经内分泌多肽7B2参与T淋巴细胞的调控。     

蝎毒多肽提取物对肿瘤生长和细胞免疫功能的影响

目的：观察蝎毒多肽提取物（PESV）对大鼠W256癌肉瘤抑制作用及其对荷瘤大鼠细胞免疫功能的影响。方法：将30只Wistar荷瘤大鼠,随机分为模型组、5-FU治疗组和蝎毒治疗组,连续灌胃给蝎毒多肽提取物7d,处死,计算各组抑瘤率;流式细胞术（FCM）检测外周血T淋巴细胞亚群变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清中细胞因子INF-γ和IL-4含量。结果：蝎毒治疗组抑瘤率为55.21%。与模型组相比较,蝎毒治疗组荷瘤大鼠外周血中CD4+T细胞比例明显提高,CD8+T细胞明显降低,CD4+T/CD8+T值明显增高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;血清中细胞因子INF-γ含量明显升高,而IL-4含量显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：蝎毒多肽提取物对W256荷瘤大鼠肿瘤有明显抑制作用,通过提高细胞免疫功能,逆转荷瘤机体Th1/Th2漂移,改变荷瘤机体免疫抑制状态,发挥抗肿瘤作用。     

东亚钳蝎毒素多肽对ＰＣ１２细胞膜电位的影响及其与钠通道的关系

目的:研究东亚钳蝎毒素多肽对PCI2细胞膜电位的影响及其与钠通道的关系.方法:分别用终浓度为10、20、40μg/ml的毒素多肽作用于荧光染料DiBAC4(3)标记的PC12细胞,在激光共聚焦显微镜上监测细胞膜电位的实时动态变化,并观察钠通道阻断剂TTX(tetrodotoxin)预处理对毒素多肽膜电位效应的影响.结果:加入毒素多肽后PC12细胞膜电位呈去极化改变,3 min后达到最大水平,5 min内趋于稳定.各浓度组毒素多肽作用细胞3 min后,所测得的标准化荧光强度值分别为1.375±0.048、1.504±0.034、1.839±0.022,和对照组相比差异均有显著性(P＜0.01).而1 μmol/L TTX与PC12细胞共孵育20 min后再加入40μg/ml毒素多肽所测值为1.035±0.028,与对照组相比无显著差异(P＞0.05),提示毒素多肽的膜电位效应可被TⅨ完全抑制.结论:东亚钳蝎毒素多肽可引起PC12细胞膜电位去极化,且其效应在一定范围内随浓度增加而增大,钠通道可能参与了这一过程.     

高频电刺激对神经动作电位阻断作用的研究

目的:研究了高频交流电信号对神经动作电位的阻断作用?方法:采用离体的蟾蜍坐骨神经进行实验,对神经施加高频的正弦信号,观察动作电位的幅度和肌肉的状态来确定阻断的效果?结果:在一定频率下,高频正弦信号能完全阻断神经传导,阻断的阈值随阻断信号频率的增加而增加?给肌肉一小段时间高于阻断信号频率的刺激,肌肉对高频信号的强直效应会消失,之后肌肉的收缩也能被高频信号阻断?结论:高频电刺激对神经动作电位阻断作用为临床局麻?镇痛和解痉探索提供了新的依据?     

关于肽类生长因子对神经发育作用及其机制的认识

肽类生长因子对神经系统发育发挥着重要的调控作用，与神经退行性疾病的发生和发展也密切相关，在研究过程中要运用哲学原理作指导，充分认识肽类生长因子结构和功能的多样性、其受体及其作用机制的复杂性，处理好基础研究与实践的辨证关系，从单纯分析研究走向系统研究。     

鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用

目的：探讨鹿茸多肽（VAP）联合胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的雪旺细胞（SCs）对β淀粉样蛋白25-35（Aβ_25-35）诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制。方法：制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ_25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组（正常脊髓神经元）、诱导凋亡组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元）、SCs组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs）、GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF）、SCs+GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs）和VAP联合组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs）。流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数。结果：胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形。流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低（P<0.05）;与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少（P<0.05）。结论：VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现。     

一项对3例肌萎缩侧索硬化症及类似CIDP的多发性神经病变患者的研究

本文报道3例符合慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经根神经病变（CIDP）临床及实验室诊断标准的患者，患者使用免疫抑制剂治疗无效，并逐渐进展为肌萎缩侧索硬化症（ALS）。患者死亡前的平均病程为23个月（13—38），2例患者有ALS家族史，但无SOD1基因突变，1例患者的尸检结果显示，腰部神经根、远端及近端周围神经的单核细胞神经内膜浸润，表现为有髓鞘神经纤维的脱髓鞘及轴突缺失，与CIDP的表现一致。脊髓表现为前角神经元缺失、皮质脊髓柬轴突缺失以及前柬与侧柬的大量吞噬细胞，提示为ALS。在上述患者中，脱髓鞘性多发性神经病变与ALS同时发生还是与运动神经元变性互为因果尚有待于阐明，上述两种疾病同时发生异常少见，可能为解释部分患者ALS的发病机制提供重要线索。     

载奥沙利铂类弹性蛋白多肽水凝胶的制备及其对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用

目的 制备担载奥沙利铂（OXA）的类弹性蛋白多肽（ELPs）水凝胶,研究其体外药物释放情况及对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用。 方法 利用大肠杆菌（E.coli）系统表达ELPs原核蛋白,利用可逆相变循环法（ITC）进行蛋白纯化,将ELPs蛋白溶液与交联剂四羟甲基氯化磷（THPC）混匀制备水凝胶,扫描电子显微镜（SEM）观察水凝胶的超微结构,CCK-8法检测不同浓度ELPs水凝胶处理后CT26细胞和小鼠成纤维NIH3T3细胞存活率,活/死细胞染色法观察30和40 g?L^－1 ELPs水凝胶作用48 h后CT26细胞存活情况。制备载OXA的ELPs水凝胶,检测其在不同pH值（6.5和7.4）缓冲液中的药物释放情况,CCK-8法检测加入载不同浓度（0.25、1.00、4.00、16.00和64.00 mg?L^－1）OXA的ELPs水凝胶浸泡液后各组CT26细胞存活率和处理不同时间各组CT26细胞存活率。 结果 凝胶电泳分析,E.coli诱导后在预计相对分子质量38 000附近出现明显加粗的蛋白条带,ITC纯化后泳道中无明显杂蛋白存在。ELPs蛋白溶液中加入THPC后由透明液体状态转变为不透明的白色水凝胶,SEM观察显示出排列整齐的孔隙和三维结构;CCK-8法检测,经不同浓度ELPs蛋白处理后CT26细胞和NIH3T3细胞存活率仍接近100%;活/死细胞染色,ELPs水凝胶处理后的CT26细胞在荧光显微镜下呈现明亮的绿色荧光。载OXA的ELPs水凝胶能在体外持续释放OXA,在pH值6.5条件下OXA的释放速度较pH值7.4条件下稍快;CCK-8法检测,载不同浓度OXA的ELPs水凝胶浸泡液呈剂量依赖性抑制CT26细胞增殖,且随孵育时间的延长CT26细胞存活率逐渐降低。 结论 载OXA的ELPs水凝胶具有持续释放OXA的特性,能够高效且持续地杀伤小鼠结肠癌CT26细胞,可作为一种安全有效的药物递送载体用于抗肿瘤研究。     

胶质源性神经营养因子对损伤的培养大鼠背根神经节的作用

目的　应用体外培养海人藻酸 (KA)兴奋性毒素损伤的细胞模型 ,研究 GDNF对损伤的背根节神经元的不同作用 ,为进一步研究 GDNF对神经元作用机制 ,表达产生及检测方法提供思路 .方法　采用原代培养的方法 ,用 N1无血清分离培养背根节神经元 ,再用 5μm ol· L- 1 KA作用 6～ 8h ,加上含有 GDNF的无血清培养基 ,继续培养 2 4h,然后用MTT法检测反映细胞的活性 ,胎盘蓝染色记数、细胞总蛋白测定以及形态学观察突起的生长状况 .结果　 1细胞活性 A值 :GDNF+KA(0 .0 32 8± 0 .0 0 6 ) ,KA(0 .0 2 85± 0 .0 0 75 ) ,GDNF (0 .0 398± 0 .0 0 2 ) ,Blank(0 .0 41± 0 .0 0 2 ) (P<0 .0 5 ) ;2活细胞数相应为 GDNF+KA (6 0± 4.4) ,KA(35 .7±2 .2 ) ,GDNF (5 9.3± 3.6 ) ,Blank (5 7.7± 2 .9) ;3细胞的总蛋白分别为 GDNF+KA (70 .3± 9.2 ) (P<0 .0 1) ,KA (49.0± 3.7) ,GDNF (75 .0± 7.3) ,Blank (6 8.0± 5 .5 ) (P<0 .0 1) ;4突起长度 :实验组与对照组不明显 ,GDNF组与空白对照组不明显 .结论　在正常无血清体外培养情况下 GDNF对DRG神经元作用不明显 ,在 KA兴奋性毒素损伤后 ,对细胞的活性、存活及总蛋白合成有明显的保护作用 ,但对突起的生长则没有明显的促进作用 .     

乙酸盐预处理对MPTP诱导亚急性帕金森病小鼠的神经保护作用

目的 初步探索乙酸盐(Ace)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导亚急性帕金森病小鼠的神经保护作用及可能机制.方法 将24只小鼠随机分为对照组、MPTP组、MPTP+Ace组,每组8只,对照组和MPTP组饮用正常饮用水,MPTP+Ace组饮用水中添加1 mol/L Ace,连续7 d后,MPT...     

联合应用神经营养素-4胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用研究

目的研究周围神经损伤后经蛛网膜下腔置管局部联合应用神经营养素（NT）-4和外源性胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法成年SD大鼠随机分为3组,GDNF组、NT-4组和GDNF联合NT-4组。切断大鼠坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元损伤,于第5、6腰椎椎间隙行蛛网膜下腔置管,并注入外源性GDNF（10μg/mL）和NT-4,不同时间处死动物并取材,对L4～6节段脊髓标本冰冻切片,行苏木素-伊红染色、尼氏体染色、胆碱酯酶染色。结果 GDNF联合NT-4组脊髓前角运动神经元的存活率、胆碱酯酶阳性颗粒面积均比前2组有明显提高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论周围神经损伤后通过蛛网膜下腔联合注入NT-4、GDNF较两者单独使用更有利于保护脊髓运动神经元。     

内吗啡肽-1对神经源性疼痛镇痛作用的实验研究

目的:观察内吗啡肽-1(endomorphin-1,EM-1)对神经源性疼痛动物的镇痛作用.方法:用大鼠单侧坐骨神经部分结扎制成神经源性疼痛动物模型,采用钾离子透入法和辐射热-缩腿法两种测痛方法,观察腹腔注射EM-1(50μg/kg)的作用.结果:EM-1对神经源性疼痛急性期和慢性期的痛阈均有提高作用,并且EM-1的作用可被纳络酮逆转.结论:EM-1对神经源性疼痛急性期和慢性期的痛觉过敏均有镇痛作用.