茶多酚对牙周膜细胞的影响

茶多酚(TP)是从茶叶中提取的多酚类物质,是茶叶药效的主要活性成分,具有抗氧化、抗脂质过氧化、清除自由基、抗基因突变和抗肿瘤形成等生物学活性和药理效应.此外,TP还有较强的抗炎和抑制免疫炎症反应的作用,对牙周炎有较强的抑制作用.牙周膜细胞(PDLC)是牙周组织中重要的细胞成分,能合成胶原并将其释放于细胞外基质进一步形成胶原纤维,而胶原纤维对牙体组织有重要的作用.笔者下面就TP对PDLC的作用作一综述,以进一步探讨其对PDLC附着和增殖的影响.     

盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞生物活性的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对原代培养的人牙周膜细胞(PDLC)生物活性的影响。方法:采用细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)比色法、考马斯亮蓝法、酶动力学方法观察盐酸小檗碱对PDLC增殖活性、蛋白合成及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。结果:①与对照组比较,作用24h,盐酸小檗碱(0.005～0.030g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05);作用48h,盐酸小檗碱(0.005～0.020g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05);作用72h,盐酸小檗碱(0.010～0.020g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05)。②盐酸小檗碱(0.005～0.020g/L)细胞培养液中蛋白总含量均明显高于对照组(P<0.05)。③盐酸小檗碱(10～20g/L)细胞培养液中ALP活性均明显高于对照组(P<0.05)。结论:盐酸小檗碱在0.010～0.020g/L浓度范围内有促进PDLC的增殖及生物合成作用,能增强牙周膜细胞ALP活性。     

牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究牙周优势菌牙龈卟啉菌、中间普氏菌、具核梭杆菌的内毒素对人牙周膜细胞（PDL细胞）增殖和碱性磷酸酶活性（ALP）的影响。方法：采用MTT比色试验及酶动力学方法，测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果：内毒素在10μg/mL、100μg/mL高浓度时，可显著抑制PDL细胞增殖，而在0.01μg/mL、0.1μg/mL低浓度时，则促进PDL细胞增殖；在10μg/mL、100μg/mL可呈浓度依赖性方式抑制PDL细胞ALP活性。结论：内毒素对牙周膜细胞的抑制作用主要和其浓度有关，不同来源内毒素差异并不显著；内毒素可能通过影响PDL细胞功能而影响牙周组织的代谢和修复过程。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨釉基质蛋白对于牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用细胞培养技术,噻唑盐比色测定（MTT）法和酶动力学方法,观察釉基质蛋白对牙周膜细胞的作用。结果：釉基质蛋白组的牙周膜细胞,其增殖活性显著提高,以50mg/L浓度为最佳;其ALP活性也较对照组明显增加,以200mg/L浓度的效果最佳。具有一个合适的剂量范围。结论：釉基质蛋白可促进人牙周膜细胞的增殖和ALP活性。     

茶多酚对内毒素作用下人牙周膜细胞分泌和表达Toll样受体4的影响

目的:观察茶多酚(tea polyphenol,TP)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)分泌和表达Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的影响。方法:体外分离及培养PDLCs,实验组分别为LPS和不同质量浓度的TP的不同组合,对照组为仅含1% FBS的DMEM培养液。培养24 h、48 h和72 h后,通过酶联免疫吸附测定法检测TLR4的分泌量,荧光实时定量PCR法检测TLR4的表达。结果:100 mg/L LPS组PDLCs TLR4分泌量显著高于其它各组(P<0.05),加入TP进行干预后实验组与对照组TLR4的分泌量和表达量无显著差异(P>0.05)。结论:TP对LPS作用下PDLCs TLR4的分泌和表达有一定的抑制作用。     

纤维蛋白粘合胶对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨纤维蛋白粘合胶（FG）对牙周膜细胞（PDLCs）增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：应用细胞培养技术,噻唑盐比色测定法（MTT法）和酶动力学方法,观察FG对PDLCs的增殖作用和时间效应以及ALP活性的作用。结果：FG组的PDLCs增值和ALP活性较对照组均有显著升高,且在作用的第1天就显著促进了细胞的增殖。结论：FG可促进PDLCs的增殖和ALP活性。     

Emdogain和辛伐他汀联合应用对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察Emdogain、辛伐他汀联合应用对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法取培养至第五代的人牙周膜细胞,分别用含50μg/mL Emdogain、含0.125μmol/L辛伐他汀、同时含50μg/mL Emdogain和0.125μmol/L辛伐他汀以及不含上述药物的4组无血清DMEM培养液培养,3 d后酶标仪检测各组细胞的碱性磷酸酶活性。结果仅含Emdogain、仅含辛伐他汀以及不含上述药物的培养液培养的人牙周膜细胞碱性磷酸酶光密度值分别为0.193±0.002、0.197±0.003及0.166±0.002。同时含Emdogain和辛伐他汀的培养液培养的细胞碱性磷酸酶光密度值为0.325±0.002,与其他3组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 Emdogain和辛伐他汀联合应用对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性有促进作用,提示可能有利于牙周组织的再生。     

乏氧对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性表达的影响

目的: 探讨不同氧张力对牙周膜细胞的增殖碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase activity,ALP)影响.方法:采用组织块法体外培养人牙周膜细胞,取第5代培养细胞分别在210 mL/L(对照组)和10mL/LO2浓度(乏氧组)下培养1～3 d,复氧组在相同的乏氧环境下培养1 d和2 d后分别移到常氧条件下继续培养1～2 d后检测牙周膜细胞增殖能力与分泌碱性磷酸酶情况.结果:所有组别的细胞增殖率随培养时间呈依赖性的增高.乏氧组乏氧第2,3 d与对照组有统计学差异.所有组别细胞的ALP活性随时间而降低,但乏氧第1,2,3天和复氧1 d与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义.结论:乏氧对牙周膜细胞的生物学有较大的影响,提示临床牙周炎及正畸所导致的缺氧环境对牙周膜细胞活性与功能有一定的影响.     

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同程度缺氧对人牙周膜成纤维细胞(HPLFS)增殖、分化的影响.方法:随机将HPLFS分为4组;210mL/LO2对照组、100、50、20mL/LO2缺氧组(轻中重缺氧组),用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒分别检测HPLFS的增殖和碱性磷酸酶(ALP)的活性.结果:第24小时,重度缺氧可促进HPLFS细胞增殖,第48、72小时,重度缺氧则明显抑制r细胞增殖;中、重度缺氧对细胞碱性磷酸酶活性表达随缺氧时间则明显受到抑制.结论:缺氧时间、程度对HPDLFs增殖和ALP活性表达存在效应关系,长期中、重度缺氧不利HPLFS的生长及向成骨分化能力,提示牙周组织改建修复功能降低.     

淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLC）增殖及对内毒素（Lipopolysaccha-ride,LPS）干扰下碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。方法：原代培养PDLC,MTT法检测不同浓度（0、10^-5～10^-9mol／L）淫羊藿苷对PDLC增殖的影响;RT—PCR、对硝基苯酚法测定淫羊藿苷对LPS抑制PDLC的ALPmRNA表达和分泌的影响。结果：淫羊藿苷在一定浓度下（10^-6～10^-7mol／L）可促进PDLC增殖;10υg／mLLPS可抑制PDLC的ALP活性;加入10^-6mol／L淫羊藿苷干扰后,对LPS抑制PDLC的ALP有拮抗作用,可提高其mRNA表达和活性。结论：淫羊藿苷在一定浓度时可促进PDLC增殖;可能通过拮抗LPS抑制其ALP的活性。     

茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜成纤维细胞 MMP-1、MMP-2表达的影响

目的：观察茶多酚（TP）在脂多糖（LPS）介导下对人牙周膜成纤维细胞（HPDLCs）MMP-1、MMP-2表达的影响。方法：体外培养 HPDLCs,在培养液中添加 TP（200μg/ml）作用于脂多糖（100μg/ml）介导的 HPDLCs,培养24、48、72 h,ELISA法检测 HPDLCs 分泌 MMP-1和 MMP-2的量。荧光实时定量 PCR 法检测 HPDLCs 中 MMP-1和 MMP-2 mRNA 的表达。结果：在 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2分泌量和基因表达升高,TP 可抑制 LPS 介导下 HPDLCs MMP-1和 MMP-2表达。结论：TP 可抑制 LPS 介导的人牙周膜细胞的胶原降解。     

H2S在模拟正畸力作用下对人牙周膜细胞内ALP表达的影响

目的 研究模拟临床正畸力的张力作用下,人牙周膜细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)在不同浓度硫化氢(H2S)的刺激下,mRNA及蛋白表达的变化.从而探索气体信号分子H2S调控牙周组织改建的机理,为进一步的临床应用研究打下基础.方法 组织块法原代培养人牙周膜细胞(hPDLCs),传代培养并进行细胞来源鉴定.以不同浓度H2S对hPDLCs处理24 h及采用基底形变加载方式对hPDLCs施加张力1、3、6h,采用qRT-PCR和Western blotting检测hPDLCs内ALP的表达变化.结果 hPDLCs内ALP的mRNA水平和蛋白水平在H2S处理24 h后及张力处理1、3、6h后均升高,且在张力作用下更为明显(P＜0.05).结论 在相对较短的时间段内,H2S可上调ALP的mRNA和蛋白水平的表达.     

牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶K对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶K对人牙周膜细胞增殖的影响.方法 组织块法体外培养人牙周膜细胞,不同浓度的牙龈蛋白酶K作用于人牙周膜细胞24h,对照组为无牙龈蛋白酶K作用的人牙周膜细胞.浓度为12.5μg/ml牙龈蛋白酶K分别作用于人牙周膜细胞24、48、72、96h,对照组也培养相同的时间.采用MTT法检测人牙周膜...     

不同培养基对人牙周膜细胞生物学行为的影响

目的：研究α—MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLcs）生物学行为的影响,为体外培养人牙周膜细胞寻找合适的培养基。方法：采用改良组织块培养法,分别用α-MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对hPDLcs进行体外培养,比较三组细胞在游出成功率、增殖及矿化等方面的差异。结果：α-MEM促进hPDLcs增殖作用最强。α—MEM组培养的细胞表达的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）含量最高,与其它两组间有显著差异。DMEM—LG组矿化结节形成个数最多且体积大。结论：α-MEM促进hPDLcs增殖,DMEM—LG促进hPDLcs分化。应根据实验要求选择合适培养基。     

成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的 观察成骨细胞(osteoblast cells,OBs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)生物学特性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法 建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果 3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为3.5×10~4个/ml及7.5×10~4个/ml,均明显低于对照组HPLFs细胞计数,且差异有统计学意义(P<0.05)。HPLFs碱性磷酸酶(ALP)活性比较中,transwell共培养组HPLFs ALP活性高于对照组。在3 d时,差异有统计学意义(P<0.05),5 d及7 d时差异也有统计学意义(P<0.01)。结论 人OBs可能抑制HPLFs的增殖,促进HPLFs ALP活性。     

BMP4对人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响

目的观察体外培养的人牙周膜细胞转染骨形成蛋白4基因(bone morphogenetic protein,Bmp4)后,骨钙素(osteocalcin,OCN)的分泌变化,为深入探讨BMP4在牙周再生中的调控作用奠定基础。方法Bmp4基因转染体外培养的第四代人牙周膜细胞,经原位杂交检测确定Bmp4成功转染细胞后,计数并统计转染组和未转染组人牙周膜细胞中骨钙素的表达变化。结果Bmp4基因转染后的人牙周膜细胞上清液中骨钙素的含量明显高于未转染组细胞。结论Bmp4基因能够促进人牙周膜细胞分泌非胶原蛋白,因此,对牙周组织的再生具有一定的调控作用。     

牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱磷酶活性的影响

目的:观察人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)对成骨细胞(Osteoblast cells,OBs)细胞数量和碱磷酶活性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性的影响。结果:3d和5d时,共培养组OBs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组OBs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3d时,两组OBsALP活性有显著性差异(P<0.05),5d及7d时差异尤其显著(P<0.01),transw ell共培养组OBsALP活性低于对照组。结论:人HPLFs能增加OBs的细胞数量,但抑制OBsALP活性。     

黄芩苷对人牙周膜细胞功能活性调节的实验研究

目的：通过观察中药黄芩的有效成份黄芩苷对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）增殖、矿化成骨等功能活性的影响,研究黄芩对人牙周膜细胞的调节作用。方法：采用组织贴块联合胶原酶消化的方法,体外分离、培养、纯化和鉴定hPDLCs后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、酶联免疫吸附、半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等方法,检测不同浓度的黄芩苷（10、1.0、0.1、0.01mg/L）对hPDLCs增殖、矿化成骨、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、细胞核因子-κB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）mRNA表达等方面的影响。结果：0.1mg/L的黄芩苷对于增加人牙周膜细胞的增殖活性、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达作用最强;适宜浓度的黄芩苷可以降低RANKL/OPGmRNA比值。结论：黄芩苷能促进hPDLCs的增殖和成骨作用,该作用可能与RANKL/OPG信号通路相关。     

低氧对人牙周膜细胞骨向分化能力的影响

目的 研究低氧对人牙周膜细胞（PDLC）的碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨相关基因表达的影响.方法 采用组织块法体外分离培养人PDLC;取第3 ～ 5 代细胞分别在常氧和低氧条件下培养后检测其ALP 活性;并通过荧光定量聚合酶链反应（PCR）观察低氧处理后人PDLC 中成骨相关基因的表达变化.结果 低氧12、24、36、48 h 组ALP 活性均比常氧组高;其中低氧48 h 组与常氧组相比明显升高,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）;低氧48 h 组ALP mRNA 表达比常氧组高,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;4 个时间点低氧组骨钙蛋白（OCN）mRNA 表达均比常氧组高,且差异有统计学意义（12、36 h：P ＜ 0.05;24、48 h：P ＜ 0.01）.结论 低氧增强人PDLC 的ALP 活性,上调ALP mRNA 和OCN mRNA 的表达,促进人PDLC 向成骨细胞分化,同时促进成骨细胞的矿化,提示低氧环境对人PDLC 的骨向分化功能产生一定的影响.