水通道蛋白基因和连接蛋白基因在先天性白内障发病机制中的作用

水通道蛋白和连接蛋白在维持晶状体的透明中发挥着重要作用，其相关基因的改变可引起相应蛋白质结构和功能的改变，导致先天性白内障的发生。本文就目前发现的水通道蛋白基因和连接蛋白基因的突变形式及其在先天性白内障发病机制中的作用作一综述。     

水通道蛋白基因和连接蛋白基因在先天性白内障发病机制中的作用

水通道蛋白和连接蛋白在维持晶状体的透明中发挥着重要作用,其相关基因的改变可引起相应蛋白质结构和功能的改变,导致先天性白内障的发生。本文就目前发现的水通道蛋白基因和连接蛋白基因的突变形式及其在先天性白内障发病机制中的作用作一综述。     

长春新碱对视网膜母细胞瘤细胞整合素连接激酶表达的抑制作用

目的探讨视网膜母细胞瘤(Rb)细胞中整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达以及长春新碱对ILK表达的影响。方法采用免疫组织化学检测9例Rb组织中ILK的表达。分别在0mg·mL-1、10mg·mL-1、20mg·mL-1、40mg·mL-1、80mg·mL-1长春新碱浓度条件下体外培养Rb细胞48h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量PCR、Western blotting检测不同浓度组ILK mRNA和蛋白的表达。结果 9例Rb组织中ILK的表达呈阳性。体外细胞实验显示:与对照组相比,培养48h后出现长春新碱抑制人Rb细胞ILK mRNA表达,并呈浓度依赖性,在20mg·mL-1组其抑制作用达到高峰,荧光定量PCR检测发现,20mg·mL-1组ILK/18S值明显较对照组低(F=228.130,P<0.05),Westernblotting检测结果与RT-PCR、荧光定量PCR趋势相同。结论 ILK在视网膜母细胞瘤组织中有表达;长春新碱可抑制ILK mR-NA和蛋白的表达。     

整合素连接激酶与缺氧状态下VEGF表达的实验研究

目的探讨缺氧状态下整合素连接激酶(ILK)的表达是否增高以及这种增高与血管内皮生长因子(VEGF)的表达上调是否相关。方法将恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)置于94%N2、5%CO2和1%O2的低氧环境,检测0、1、2、3、4hILK,HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达水平,进一步用LY294002抑制ILK的活性或RNA干扰抑制ILK的表达后再次检测缺氧4h上述3种因子的表达情况。结果在缺氧0hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均较低,而缺氧1～4hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均明显增高,但这种增高都会因为ILK的表达或活性受到抑制而被抑制。结论缺氧状态下在RF/6A细胞中ILK的表达增高,并且ILK的表达增高也会使HIF-1α和VEGF表达上调,说明ILK参与缺氧状态下RF/6A细胞VEGF的表达。     

整合素连接激酶对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的研究整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)小分子干扰RNA(siRNA)对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增殖的影响。方法培养hRPE细胞,角蛋白鉴定。以ILK为靶基因设计合成特异性的siRNA干扰片段转染hRPE细胞。荧光显微镜下观察转染效率,选择转染效率最高的干扰片段进行细胞转染。RT-PCR检测siRNA对ILK基因表达的抑制作用,MTT法检测转染前后hRPE细胞增殖活性。结果 ILK-siRNA可以成功转染至hRPE细胞,转染24h后hRPE细胞中ILK mRNA的相对表达水平在正常对照组、单纯脂质体组、阴性对照组及转染组中分别为0.44±0.48、0.43±0.38、0.42±0.47、0.32±0.71,正常对照组、单纯脂质体组和阴性对照组中ILKmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),转染组ILKmRNA的表达较正常对照组明显降低,差异有显著统计学意义(F=21.78,P<0.01)。不同浓度ILK-siRNA转染组在不同时间点细胞增殖较正常培养组明显降低(P<0.01),50nmol·L-1浓度转染组对hRPE细胞的生长抑制最明显。结论 hRPE细胞表达ILK,siRNA抑制ILKmRNA的表达,在一定范围呈时间浓度依赖性抑制hRPE细胞增殖。     

高浓度葡萄糖体外对人晶状体上皮细胞整合素连接激酶表达的影响

目的:观察体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04在高浓度葡萄糖条件下细胞的增殖活性及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达变化。方法:用人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中加入不同浓度的葡萄糖溶液,使糖浓度分别为5.5mmol/L(正常对照组),15.5mmol/L,30.5mmol/L和50.5mmol/L,并设立5.5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇组(甘露醇对照组)。细胞经过处理0,6,12,24,48,72h后,用MTT法检测晶状体上皮细胞的增殖活性,并用Western blot法检测细胞在30.5mmol/L葡萄糖处理6,12,72h后ILK蛋白表达量的变化。结果:高糖作用下晶状体上皮细胞的增殖活力高于正常对照组和甘露醇组,在30.5mmol/L组最为明显,而且随高糖暴露时间的延长,在48,72h时细胞的增殖活力增加更显著。30.5mmol/L葡萄糖作用6,72h,晶状体上皮细胞ILK蛋白的表达明显增高,分别是正常组的1.25和1.28倍,而甘露醇并不引起ILK的表达增加。结论:高浓度的葡萄糖促进人晶状体上皮细胞的增生,使细胞中ILK的表达量增加,这些变化并不依赖于高糖引起的高渗透压改变。     

整合素连接激酶对人视网膜色素上皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨RNA干扰抑制整合素连接激酶（integrin-linked kinase, ILK）对人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium,hRPE）细胞增殖和迁移的影响。方法:体外培养hRPE细胞,设计并合成特异性人ILK的RNA干扰片段,阳离子脂质体转染入人视网膜色素上皮细胞,利用RT-PCR及Western blot半定量检测siRNA对ILK基因及蛋白表达的抑制作用,MTT方法检测转染前后siRNA对细胞增殖的抑制作用。损伤愈合实验和Transwell实验观察人视网膜色素上皮细胞迁移能力的改变。结果:培养的hRPE细胞存在ILK的基因转录表达,siRNA显著抑制hRPE细胞ILK的mRNA和蛋白表达（P<0.01）。MTT、损伤愈合实验和Transwell实验提示转染ILK-siRNA后人视网膜色素上皮细胞的增殖、迁移能力有明显下降,与正常对照组相比有统计学差异（P<0.05）。结论:特异性ILK-siRNA能有效抑制ILK在hRPE的mRNA和蛋白的表达并显著降低hRPE的增殖和迁移能力。     

渗透压在白内障形成过程中的研究进展

白内障是当今世界范围内的主要致盲眼病之一,其病理基础是晶状体的代谢异常以及晶状体混浊。目前的研究发现,渗透压的改变在晶状体的代谢过程中发挥重要作用,通过影响晶状体上皮细胞内的多元醇代谢路径(polyolpathway)、水通道蛋白(aquaporin)以及晶状体上皮细胞间的缝隙连接通道蛋白(gap junction proteins)等的改变,以影响晶状体的代谢,从而引起白内障。关于渗透压对晶状体代谢的作用及其机制作一综述。     

整合素与去整合素在后发性白内障方面的研究现状

晶状体摘除术后晶状体上皮细胞的增殖、黏附和迁移是后发性白内障的主要原因,整合素是一类介导C-C间以及C-ECM间的相互作用的黏附分子,在晶状体上皮细胞的增殖、黏附和迁移过程中发挥重要的作用,去整合素是一种小分子多肽,它可以特异性的被整合素识别并黏附,从而抑制整合素的生物学作用,本文就整合素的功能,整合素在晶状体上皮细胞上的分布及功能,晶状体上皮细胞与后发性白内障之间的关系以及去整合素在后发性白内障防治方面的研究进展做一综述。     

整合素连接激酶对视网膜色素上皮细胞生长、凋亡和分泌功能的影响

背景 玻璃体视网膜手术后视网膜色素上皮(RPE)细胞的增生和移行是增生性玻璃体视网膜病变(PVR)发生的主要病理机制,干预RPE细胞的生物学行为对于PVR的靶向治疗有重要意义. 目的 观察整合素连接激酶(ILK)对RPE细胞生长、凋亡及分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响. 方法 用低糖DMEM培养基常规培养和传代人RPE D407细胞系,选择50代以内的细胞进行实验.应用特异性敲减ILK的小干扰RNA(siRNA) (ILK-siRNA)与100μl无血清培养基和RPE细胞共培养的方式转染RPE细胞作为实验组,应用非特异性siRNA转染RPE细胞作为对照组,分别将24孔板置于37℃、体积分数5％ CO2孵箱中孵育.转染48 h后,应用MTT比色法检测各组RPE细胞活力;应用流式细胞仪检测RPE细胞的生长周期及细胞凋亡情况;采用Western blot法检测并比较各组RPE细胞中cyclin D1和caspase-3表达水平的变化;应用ELISA法检测并比较各组RPE细胞分泌VEGF水平的变化. 结果 转染siRNA 48 h后,MTT法检测见实验组和对照组RPE细胞活力分别为(43.69±0.89)％和(73.95±1.20)％,实验组比对照组降低了40.92％,差异有统计学意义(t=49.524,P=0.000).流式细胞术检测发现,实验组处于G1期的细胞数为(83.30±1.26)％,对照组为(47.10±0.93)％;实验组S期细胞数量显著减少,为(12.63±0.92)％,对照组为(36.25±1.21)％;实验组G2期细胞数量显著减少,为(4.07±1.40)％,对照组为(16.65±1.53)％,两组间G1、S、G2期细胞比例的差异均有统计学意义(t=56.624、-38.130、-14.860,均P=0.000).实验组的细胞凋亡率为(15.18±1.22)％,对照组为(2.20±0.15)％,二者间差异有统计学意义(t=25.742,P=0.000).Western blot 检测结果示,实验组cyclin D1的表达量明显降低,而caspase-3的表达量则明显增高.ELISA法检测结果示,实验组RPE细胞的VEGF分泌量为(1314.49±147.23) ng/L,比对照组的(3251.27± 113.87) ng/L降低了59.6％,差异有统计学意义(t=-31.217,P=0.000).结论 体外培养的RPE细胞敲减ILK后导致细胞增生活力下降,凋亡增加,且RPE细胞分泌VEGF的功能受到抑制,有望为PVR的靶向防治提供理论基础.     

缺氧对视网膜色素上皮细胞基质细胞衍生因子-1和整合素连接激酶表达的影响

背景 缺氧是诱导新生血管形成的主要因素,近年来越来越多的研究证实基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和整合素连接激酶(ILK)在新生血管性疾病中发挥着重要作用,而缺氧对视网膜色素上皮(RPE)细胞SDF-1和ILK表达的影响尚未阐明. 目的 探讨缺氧对体外培养RPE细胞中SDF-1和ILK表达的影响.方法 从4周龄SPF级健康C57BL/6小鼠眼球中获取RPE组织并进行消化和培养,将达到80％融合的细胞进行传代.取第3代细胞制作细胞爬片后用细胞角蛋白18(CK18)抗体进行免疫组织化学检测和鉴定,以5×104个/ml密度将RPE细胞接种于含胎牛血清的DMEM/F12培养液的培养瓶中,无血清饥饿培养24 h后常氧组在常规培养基中进行培养,缺氧组在CoCl2浓度为200 μmol/L的含胎牛血清的DMEM/F12培养液中进行培养,2个组根据培养时间的不同再亚分为1、3、6、12、24、48、72h组.采用逆转录PCR(RT-PCR)检测RPE细胞中SDF-1 mRNA和ILK mRNA的表达,采用Western blot检测RPE细胞中SDF-1蛋白和ILK蛋白的表达,均以目的基因A值/β-actin A值表示.结果 培养的RPE细胞呈不规则多边形,细胞质内布满黑色素颗粒,90％以上的细胞对CK18呈阳性反应.随着CoCl2培养时间的延长,SDF-1 mRNA和ILK mRNA的表达量逐渐增加,总体比较差异均有统计学意义(SDF-1 mRNA:F=281.875,P=0.000;ILK mRNA:F=187.566,P=0.000),12h达高峰,之后略有降低,但仍高于常氧组,缺氧1h组SDF-1 mRNA及蛋白表达无明显变化;缺氧培养3、6、12、24、48、72 h组SDF-1 mRNA和ILK mRNA的表达量均明显高于常氧培养组,差异均有统计学意义(P＜0.01).随着CoCl2培养时间的延长,SDF-1蛋白和ILK蛋白的表达量逐渐增加,差异均有统计学意义(SDF-1:F=44.719,P=0.000; ILK:F=144.481,P=0.000).缺氧1h组SDF-1及ILK蛋白表达无明显变化;缺氧3、6、12、24、48、72 h组SDF-1蛋白、ILK蛋白表达明显升高,与常氧组比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 SDF-1和ILK参与了RPE细胞的缺氧反应,并且在缺血缺氧性视网膜病变的发生发展过程中可能发挥一定的作用.     

整合素链激酶在大鼠外伤性白内障模型中的表达

目的:探讨整合素链激酶(integrin-linked kinase,ILK)在大鼠外伤性白内障形成过程中的作用。方法:取15只正常大鼠(体质量250～300g),建立单眼外伤性白内障模型,并随机分为伤后1,3,7d3个时相组,用免疫组化法检测ILK在各组晶状体上皮细胞中的表达。结果:晶状体混浊在外伤后1d即开始出现,并随时间延长而加重。ILK在各外伤组晶状体上皮细胞中均有较强的阳性表达。而未行手术的对照眼ILK表达为阴性。结论:晶状体穿通伤后ILK参与了外伤性白内障形成的病理环节。     

蛋白激酶C-α在晶状体上皮细胞中的表达及其与白内障关系的研究

目的 研究蛋白激酶C-α(PKC-α)在晶状体上皮细胞中的表达及其在皮质性白内障形成过程中的变化及作用。方法 离体培养的大鼠晶状体,应用Western-blot检测蛋白激酶C在晶状体上皮细胞中的表达和分布;H_2O_2诱导大鼠皮质性白内障形成,Western-blot检测晶状体上皮细胞内蛋白激酶C-α的蛋白表达变化;RT-PCR检测其mRNA含量改变。同时,流式细胞仪检测晶状体上皮细胞调亡率。结果 在正常晶状体上皮细胞中PKC-α高表达,经H_2O_2处理产生凋亡的晶状体上皮细胞中PKC-α的蛋白表达和mRNA含量均降低,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论 H_2O_2可抑制大鼠晶状体上皮细胞中PKC-α的活性,提示PKC-α与白内障的发生发展有关。     

晶状体蛋白的外消旋化及其在白内障发病机制中的研究进展

外消旋化是老年人晶状体蛋白中重要的翻译后修饰类型.多项研究发现,随着年龄的增长,α-、β-及γ-晶状体蛋白中的部分L型氨基酸残基倾向于通过外消旋化反应转化为D型氨基酸残基,导致晶状体蛋白的构象改变,聚合形成的大分子蛋白质在晶状体核区和皮质中逐渐积累,晶状体蛋白失去了原有功能而不能维持晶状体的透明度.外消旋化在晶状体蛋白年龄相关性改变中的效应和参与程度,及其对白内障发生与进展的具体机制都值得进一步研究.     

白内障患者散光状态分析

目的 研究白内障人群散光发布规律。方法 分析1050例白内障患者的角膜地形图。结果 患者中顺规散光比例随年龄增大而减小，逆规散光比例则相应增大。80岁以下各年龄组，1D以下散光所占比例最高，散光度越大，所占比例越小。结论 白内障人群中80岁以下者的散光分布规律与80岁以上者有所不同。     

The role of biogeochemical factors in the pathogenesis of age-related cataract

The paper describes results of comparative analysis of the incidence of senile cataract in the siliceous and control subregions of the Chuvash ASSR biosphere. Primary morbidity per 10,000 population according to addresses, the number of cataract extractions per 10,000 population, the detection of cataract in active examination of rural population, the incidence of cataract among primary pathology of the eye were used as criteria for the assessment. Besides this, some indices of metabolic processes were studied in practically healthy persons inhabiting these subregions. It was found that the incidence of cataract is twice higher in the siliceous than in the control subregion. The character of lens opacification in the subjects with initial cataract from the siliceous subregion is characterized by predominance of cortical changes, while from the control subregion--by nucleic changes. Among the population of the siliceous subregion, changes in the state of biochemical processes in the body are recorded.