细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜上皮细胞Toll样受体表达的影响

目的 通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用.方法 通过RT.PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLR mRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg·L-1、10μg·L-1、100μg·L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10 μg·L-1 LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg·L-1、10×103μg·L-1、100×103μg·L-1)进行干预,并检测TLR mRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达.结果 TLR1-TLR10 mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、YLR6高表达.LPS能增加细胞TLR mRNA的表达,且当LPS为10μg·L-1时,TLR mRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLR mRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加.免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致.结论 LPS能改变角膜上皮细胞TLR mRNA的表达,提示上皮细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCEC中TLR的表达,即轻度促进LPS刺激的HCEC中TLR的表达,在细菌侵袭角膜的早期,糖皮质激素可能具有一定的免疲促进作用.     

Toll样受体对角膜免疫调节的研究进展

Toll样受体(TLRs)是先天性免疫的病原模式识别受体,在病原体的识别、获得性免疫反应的调节、信号转导等方面起重要作用.随着对感染性角膜炎和角膜移植术后急性、慢性排斥反应发生机制研究的深入,TLRs在角膜免疫应答中的诱导和调控作用日益受到研究者的关注.目前对TLRs激活细菌性角膜疾病、真菌性角膜疾病、病毒性角膜疾病、角膜移植后植片排斥反应等炎症过程中的免疫信号通路已有较多研究,对TLRs及其信号系统表达的调控有助于减轻或阻止上述炎症反应过程.就TLRs、TLRs信号转导途径及其对角膜炎症反应的免疫调控机制进行综述,探讨其关键作用及可能的治疗靶点.     

Toll样受体介导的信号通路与感染性角膜病

Toll样受体(TLR)是一类跨膜受体,最初在果蝇体内发现,至今已在哺乳动物和人类细胞上发现11种TLR,分别识别细菌、病毒、真菌等致病微生物的病原相关分子结构,并经过下游信号转导通路启动先天免疫,可能也在自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。已经报告角膜上皮细胞表达功能性的TLR4和TLR5,分别识别绿脓杆菌的脂多糖和鞭毛蛋白。了解TLR信号转导通路将为感染性角膜病的治疗提供很多特异性的新靶点。     

缺氧诱导体外培养人视网膜色素上皮细胞中Toll样受体4的表达

目的:了解缺氧对人视网膜色素上皮(retinal pigmentepithelium,RPE)细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达的影响。方法:采用200μmol/L CoCl2处理RPE细胞建立化学缺氧模型,以未处理细胞作对照,在缺氧处理后2,4,8,12和24h用免疫荧光法观察TLR4在细胞中的定位,用RT-PCR和Western blot检测细胞中TLR4表达水平。结果:共聚焦显微镜观察到正常对照组RPE细胞胞质内有微弱的TLR4荧光表达,缺氧后胞质内荧光表达明显增强,缺氧12h荧光强度达最强。RT-PCR和Western blot结果分别提示随缺氧时间延长,RPE细胞中TLR4mRNA和蛋白表达增强水平升高,缺氧至12h表达高峰最强(P<0.05),24h表达开始下降,各组差异有统计学意义。结论:缺氧可诱导RPE细胞中TLR4表达增强。     

Toll样受体在眼部各组织中的表达及其作用

Toll样受体是新近发现的一类广泛存在于植物、昆虫和哺乳动物体内的与跨膜信号转导有关的受体，在进化上具有高度保守性。研究揭示了其在机体免疫特别是抗感染免疫中有重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄膜、视网膜、虹膜内皮细胞、睫状体等都能表达Toll样受体，而且与眼部的免疫和炎症反应密切相关。Toll样受体的发现为深入研究眼部感染性疾病的发病机制及临床治疗开辟了更为广阔前景。     

角膜基质细胞Toll样受体4对茄病镰刀菌炎性反应的实验研究

目的 检测茄病镰刀菌刺激小鼠角膜基质细胞后Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达分布状况,探讨TLR4与炎性因子分泌的关系.方法 对小鼠角膜基质细胞进行原代培养和鉴定;制备茄病镰刀菌液;MTT法观察菌液刺激对角膜基质细胞生长作用的影响;免疫组化、RT-PCR测定刺激后不同时间点角膜基质细胞TLR4的表达;ELISA检测封闭TLR4对菌液诱导的角膜基质细胞分泌TNF-α、IL-8的影响.结果 采用消化法1～2 d培养出小鼠角膜基质细胞,抗波形蛋白免疫荧光染色阳性;菌液刺激48h后,MTT法显示刺激组较对照组OD值明显下降;正常角膜基质细胞TLR4在蛋白及mRNA水平呈弱表达,刺激6h可达到高峰,12h开始逐渐降低;菌液可上调角膜基质细胞TNF-α、IL-8的释放,刺激3h、6h、12 h的TNF-α、IL-8的浓度与TLR4 mRNA的表达呈明显的正相关(P＜0.05);预先封闭TLR4,可明显降低TNF-αt、IL-8的释放.各时间组间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 角膜可能通过TLR4识别真菌感染,TLR4在角膜对真菌的免疫炎性防御反应中起到重要作用.     

Toll样受体介导的信号通路与感染性角膜病

Toll样受体（TLR）是一类跨膜受体，最初在果蝇体内发现，至今已在哺乳动物和人类细胞上发现11种TLR，分别识别细菌、病毒、真菌等致病微生物的病原相关分子结构，并经过下游信号转导通路启动先天免疫，可能也在自身免疫性疾病的发生中发挥重要作用。已经报告角膜上皮细胞表达功能性的TLR4和TLR5，分别识别绿脓杆菌的脂多糖和鞭毛蛋白。了解TLR信号转导通路将为感染性角膜病的治疗提供很多特异性的新靶点。     

Toll样受体在眼科的研究现状

Toll样受体是自身免疫的关键受体，它参与宿主对致病微生物的识别和防御等感染免疫过程，也与人体的获得性免疫密切相关，是目前免疫学研究的重点和热点。眼球作为感染性和免疫性疾病的好发部位，在感染免疫和获得性免疫方面与全身摹他器官有相似之处，但是其独特的解剖特点，例如血房水屏障、血视网膜屏障、角膜的无血管化等，使其免疫学特点的特异性也非常明显。就Toll样受体的特点以及在眼科的研究现状进行综述。     

细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜基质成纤维细胞Toll样受体表达的影响

目的 通过研究细菌脂多糖（LPS）对人角膜基质成纤维细胞（HCF）Toll样受体（TLR）表达的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控作用,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的可能作用.方法 选取人供体角膜细胞,对其进行分离、培养和鉴定,通过RT-PCR及quantitative Real-time PCR检测角膜基质成纤维细胞中TLR在mRNA水平的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS（1、10、100 ng/ml）共培养,检测TLR的表达.在此基础上,选择在10 ng/ml LPS的细胞培养液中加入糖皮质激素氢化可的松（1、10、100 μg/ml）进行干预,并通过Real-time PCR检测此种情况下HCF中TLR的表达.再通过免疫荧光组化来检测TLR2、TLR4在蛋白水平的表达.各组数据的差异性采用Student t检验和非参数秩和检验,Real-time PCR的倍数间的比较采用非参数统计.结果 TLR1-10 mRNA在HCF中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8、TLR10呈高表达.LPS能增加HCF中TLR mRNA的表达,且当LPS为10 ng/ml时,TLR的表达量最高.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增加,HCF中TLR mRNA的表达却随激素浓度的增高而下降.免疫荧光组化结果显示,在10 ng/ml LPS刺激、10 ng/ml LPS＋10 μg/ml氢化可的松共同刺激以及正常条件培养3种情况下,TLR2、TLR4在HCF内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致.结论 TLR1～10 mRNA在HCF中均有表达.LPS能改变角膜基质成纤维细胞TLR mRNA的表达,提示该细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCF TLR的表达,即对LPS刺激的HCF TLR的表达表现出抑制;提示当细菌的侵袭突破角膜上皮到达基质时,糖皮质激素起到了免疫抑制的作用.     

TLR4和CD14在体外培养的晶状体上皮细胞有表达

目的：探讨Toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）和CD14在晶状体上皮细胞（lens epithelial cell,LEC）的表达。方法：采用一步法反转录多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测LEC中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果：用RT-PCR检测分别获得451bp和348bp的清晰扩增条带,经基因测序证实为TLR4 mRNA和CD14 mRNA。结论：晶状体上皮细胞可表达TLR4和CD14。     

Toll样受体2调节Th细胞极化对小鼠角膜移植排斥反应发生的影响

目的 探究Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)是否通过调节辅助性T细胞(T helper cells,Th)极化影响角膜移植排斥反应的发生.方法 取30只C57BL/6小鼠和30只TLR2基因敲除小鼠为受体,BALB/c小鼠为供体,在受体小鼠右眼行同种异体角膜移植术,分别为野生组和基因敲除组;取19只C57BL/6小鼠右眼行自体角膜移植术,为自体组.术后每周两次裂隙灯下观察植片水肿程度和透明度,参照Sonoda评分标准对排斥指数(reject index,RI)进行评分;术后14 d收集角膜.分别取9只C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠作为野生对照组和基因敲除对照组,行常规HE染色和实时荧光定量PCR检测.结果 术后随时间变化各手术组植片水肿和混浊程度不一,以野生组最为严重.角膜RI评分显示术后7d、14 d、21 d,基因敲除组(0.80 ±0.83、0.90±0.55、1.35±0.99)低于野生组(1.55 ±0.94、2.25 ±0.97、2.55±1.19),差异均有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000).HE染色显示,野生组角膜基质层出现水肿和大量炎性细胞;而基因敲除组和自体组炎症反应较轻.PCR检测显示,基因敲除组角膜Th1和Th17细胞因子(IFN-γ和IL-17)mRNA表达(1.94±0.34、2.62±0.30)比野生组(4.27±0.37、3.99±0.40)低,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001);Th2细胞因子(IL-4)三组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除TLR2可能通过抑制Th向Th1和Th17极化,降低角膜移植排斥率.     

Toll样受体4对2型糖尿病小鼠视网膜病变的影响

目的　探讨Ｔｏｌｌ样受体４（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４,ＴＬＲ４）对２型糖尿病小鼠模型糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的影响。方法　取１６周龄的健康雄性ＴＬＲ４基因缺陷小鼠Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ（ｍｕｔａｔｉｏｎ,Ｍｕｔ）及相应野生型小鼠Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ｗｉｌｄｔｙｐｅ,ＷＴ）各１２只,用链脲佐菌素（ＳＴＺ）腹腔注射建立２型糖尿病动物模型,另取４只未处理小鼠做对照,分为Ｍｕｔ组、ＷＴ组与对照组。于模型建成后１个月、２个月、４个月分别取材,每个时间点模型组分别取材４只,对照组分别取１６周龄的两种小鼠各２只眼球。通过电镜观察小鼠视网膜组织超微结构的变化,并应用ＲＴ-ｑＰＣＲ检测视网膜ＴＬＲ４及巨噬细胞炎性蛋白２（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ-２,ＭＩＰ-２）的ｍＲＮＡ表达。结果　糖尿病模型造模后１个月的超微电镜显示,小鼠视网膜组织即有神经节细胞及神经纤维水肿,核周间隙增宽,核固缩,胞浆颜色变淡;模型造模后２个月时毛细血管内皮细胞胞浆线粒体水肿,嵴变短,周细胞水肿;模型造模后４个月时基底膜节段性增厚,微绒毛突起,管腔狭窄,各时间点的病变ＷＴ组均重于Ｍｕｔ组。视网膜组织ＲＴ-ｑＰＣＲ结果显示,ＷＴ组和Ｍｕｔ组ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ的表达在糖尿病模型造模后１个月、２个月、４个月时依次上调（均为Ｐ＜０．００１）,各时间点ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ的表达以ＷＴ组强于Ｍｕｔ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　２型糖尿病小鼠模型中,随病程发展出现视网膜病变并不断恶化,此过程中视网膜中ＴＬＲ４与ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ表达呈显著性上调趋势;ＴＬＲ４基因突变小鼠的视网膜ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的表达比野生型小鼠减弱,同时视网膜病变减轻。     

敲除TLR2基因对同种异体小鼠角膜移植排斥反应的影响

目的　探讨敲除Ｔｏｌｌ样受体２（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ２,ＴＬＲ２）基因后是否抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。方法　以ＢＡＬＢ／ｃ为供体,各取３０只Ｃ５７ＢＬ／６和同背景ＴＬＲ２基因敲除鼠为受体行右眼角膜移植术,设为野生组（ＷＴ）和基因敲除组（ＫＯ）;取１９只Ｃ５７ＢＬ／６行右眼自体角膜移植术,为自体组（ＩＳＯ）;各取９只Ｃ５７ＢＬ／６和ＴＬＲ２基因敲除鼠分别设为野生对照组（ＷＴｃｏｎｔｒｏｌ）和基因敲除对照组（ＫＯｃｏｎｔｒｏｌ）。术后每周两次观察植片并记录免疫排斥的发生时间;术后１４ｄ,收集术眼同侧颈部淋巴结,行流式细胞术分析ＣＤ４＋Ｔ细胞百分比;收集术眼角膜,行免疫组织化学染色和实时荧光定量ＰＣＲ检测角膜干扰素（ｉｎｔｅｒ-ｆｅｒｏｎ,ＩＦＮ）-γ、ＴＬＲ２和ＭｙＤ８８的表达。结果　ＷＴ组和ＫＯ组小鼠角膜移植术后中位生存时间ＫＯ组（３５．０±３．８）ｄ长于ＷＴ组（２１．０±１．５）ｄ（Ｐ＜０．０５）。流式细胞术分析显示,ＷＴ组同侧颈部淋巴结ＣＤ４＋Ｔ细胞百分比较ＷＴｃｏｎｔｒｏｌ组明显增高（Ｐ＜０．０５）,而ＩＳＯ和ＫＯ组相对于其对应的ｃｏｎｔｒｏｌ组（ＷＴ／ＫＯｃｏｎｔｒｏｌ）差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;免疫组织化学结果显示,ＩＳＯ和ＫＯ组间角膜ＩＦＮ-γ和ＭｙＤ８８分子表达无差异,但两者均低于ＷＴ组。ＫＯ组角膜几乎不表达ＴＬＲ２分子,ＩＳＯ组有微量表达,ＷＴ组表达明显增高;ＰＣＲ检测显示,ＩＳＯ和ＫＯ组角膜ＩＦＮ-γ和ＴＬＲ２ｍＲＮＡ相对表达量差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）,但两者均低于ＷＴ组（均为Ｐ＜０．０５）;ＫＯ组角膜ＭｙＤ８８ｍＲＮＡ相对表达量比ＩＳＯ组高（Ｐ＜０．０５）,但两者均低于ＷＴ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　敲除ＴＬＲ２基因可以一定程度抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。     

TLR-2、TLR-4与大鼠角膜碱烧伤早期炎症反应相关性研究

目的 动态观察大鼠角膜碱烧伤后Toll样受体-2(Toll like-receptor 2,TLR-2)、Toll样受体-4(Toll like-receptor4,TLR-4)与炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达情况及变化规律,分析Toll样受体家族(Toll like-receptor familys,TLRs)与炎性因子IL-1β、TNF-α的表达是否存在相关关系.方法 选用健康SPF级SD大鼠40只,右眼为烧伤实验眼,左眼为正常对照眼,用浓度为1 mol·L-1 NaOH建立Ⅲ级角膜碱烧伤模型(模型建立时及模型建立后出现大鼠角膜烧伤程度不是Ⅲ级、大鼠角膜穿孔或前房积血等情况,均予以剔除,最后随机选取32只符合条件的大鼠进行后续实验),随机分为碱烧伤后3d组、7d组、14 d组、21 d组,每组8眼.分别在模型制作后观察大鼠眼前节,评估其角膜炎症指数,然后摘取大鼠眼球,行HE染色,计算炎症细胞数,同时用Western blot蛋白检测法检测大鼠角膜中TLR-2、TLR-4、IL-1β、TNF-α表达情况,分析各组差异,评估TLRs与炎性因子的相关性.结果 在正常大鼠角膜中可检测到TLR-2、TLR-4、IL-1β、TNF-α蛋白少量表达,碱烧伤后其表达量增加,并于碱烧伤后7d达到峰值,以后逐渐递减,各组间(3d组、7d组、14 d组、21 d组)比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).相关性分析:TLR-2与IL-lβ(r=0.986,P＜0.05)、TNF-α(r=0.986,P＜0.05)的表达量呈正相关,TLR-4与IL-1β(r =0.975,P＜0.05)、TNF-α(r =0.990,P＜0.05)的表达量亦呈正相关.结论 TLRs参与并可能启动角膜碱烧伤的免疫炎症反应,介导炎性因子的产生.     

Co-regulation of Dectin-1 and TLR2 in inflammatory response of human corneal epithelial cells induced by Aspergillus fumigates

AIM: To investigate the co-regulation of dendritic cell-associated C-type lectin-1 (Dectin-1), Toll-like receptor 2 (TLR2), and relative chemotactic factors in the Telomease-immortalized human corneal epithelial (THCE) cells after exposure to Aspergillus fumigatus (Af) hyphae. METHODS: The normal THCE cells were investigated as control. After cultured in vitro with Af hyphae, with or without laminarin and anti-TLR2 antibody for 4, 8, 16 and 24h, THCE cells were harvested. The expression of Dectin-1, TLR2, CXCL1 and CXCL8 mRNA were measured by real-time quantitative polymerase chain reaction at the stimulation of 4, 8 and 16h separately. The protein expression of Dectin-1 and TLR2 were analyzed at 8, 16, and 24h by Western blot. RESULTS: The mRNA expression of CXCL1 and CXCL8 increased in THCE cells after stimulated by Af hyphae. The stimulatory effects on these inflammatory chemokines were shown in a dose-dependent manner and reached the peak at 8h. Af hyphae significantly stimulated the production of Dectin-1 and TLR2 in THCE cells at both mRNA and protein levels. The protein of Dectin-1 and TLR2 gradually increased till 16h. While pretreated with laminarin (a Dectin-1 inhibitor), the expression of TLR2, CXCL1 and CXCL8 all decreased dramatically at the peak point. Interestingly, when pretreated with TLR2 neutralizing antibody, the expression of Dectin-1, CXCL1 and CXCL8 also decreased dramatically at the peak point. CONCLUSION: These findings suggest that Dectin-1 and TLR2 co-regulated with each other after treated with inactive Af hyphae in the THCE cells, and they contribute together to the inflammatory responses by induction of chemokines CXCL1 and CXCL8.     

Toll样受体4对HLA-B27相关前葡萄膜炎患者外周血单个核细胞分泌细胞因子的影响

目的通过对比正常人与HLA-B27相关前葡萄膜炎恢复期患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)受脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激及抗Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)抗体(HTA125)干预后分泌细胞因子的变化,探讨TLR4在HLA-B27相关前葡萄膜炎发病机制中的作用。方法选取HLA-B27阳性前葡萄膜炎恢复期患者10例,相同性别及年龄段的HLA-B27阴性正常人10例作为对照。抽取研究对象外周血分为以下5组体外培养PBMC:(1)正常人非LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的PBS进行培养;(2)正常人LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的LPS进行培养;(3)HLA-B27阳性患者非LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的PBS进行培养;(4)HLA-B27阳性患者LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的LPS进行培养;(5)HLA-B27阳性患者LPS+HTA125干预组:终浓度为5mg·L-1的HTA125预先干预PBMC 30 min后再加入1mg·L-1的LPS共同培养。分别于培养4h、8h、12h、24h后,利用ELISA法测定细胞培养上清液中的TNF-a、IL-10和(4)(5)组中IL-6的浓度。结果 LPS未刺激组,PBMC培养4h、8h、12h、24h后,HLA-B27阳性患者TNF-α浓度分别为(1329.46±155.09)ng·L-1、(1926.76±163.28)ng·L-1、(1424.61±141.63)ng·L-1、(526.98±112.29)ng·L-1,正常人分别为(562.83±106.45)ng·L-1、(839.57±73.98)ng·L-1、(559.60±88.48)ng·L-1、(200.81±51.39)ng·L-1,两组各时间点相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);HLA-B27阳性患者PBMC培养8h、12h、24h后,IL-10浓度分别为(145.51±26.91)ng·L-1、(259.16±32.71)ng·L-1、(435.98±134.54)ng·L-1,正常人分别为(63.57±17.28)ng·L-1、(123.21±15.73)ng·L-1、(247.82±32.10)ng·L-1,两组各时间点相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LPS刺激后,正常人与HLA-B27阳性患者PBMC分泌TNF-α和IL-10水平在各时间点均比LPS刺激前明显升高,且HLA-B27阳性患者升高更明显。HLA-B27阳性患者PBMC在LPS刺激后与LPS+HTA125干预组相比,后者各时间点分泌TNF-α、IL-10的水平均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且HTA125干预组IL-6浓度在4h、8h时较单纯LPS刺激组低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HLA-B27阳性患者PBMC对LPS的刺激更加敏感,抗TLR4单克隆抗体能够抑制HLA-B27阳性患者PBMC分泌细胞因子的水平。     

Toll样受体-4及其介导的信号转导与急性前葡萄膜炎

急性前葡萄膜炎是最常见的葡萄膜炎,其发病机制尚不明确。近年来研究认为,G阴性细菌感染启动、Toll样受体-4介导的信号转导在急性前葡萄膜炎的发病机制中发挥重要作用。本文对目前脂多糖-Toll样受体-4信号转导通路及通过对该通路干预来调控炎症的相关研究进展进行综述,以期为前葡萄膜炎的治疗提供新的思路。     

二氢睾酮对小鼠角膜上皮细胞Mucins表达的影响

目的　探讨不同浓度二氢睾酮（ＤＨＴ）对角膜上皮黏蛋白Ｍｕｃｉｎｓ表达的影响。方法　体外原代培养ＢＡＬＢ／ｃ小鼠角膜上皮细胞,分为空白对照组以及ＤＨＴ干预组,ＤＨＴ干预组给予不同浓度（０．０５ｇ?Ｌ－１、０．１０ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１、１．００ｇ?Ｌ－１）ＤＨＴ干预２４ｈ;采用ＲＴ-ＰＣＲ方法与免疫荧光组织化学方法分别检测Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ以及蛋白水平的表达。结果　Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ检测结果显示:空白对照组,０．０５ｇ?Ｌ－１、０．１０ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ１ｍＲＮＡ相对表达量分别为１．００±０．００、０．１５±０．０１、１．４０±０．０９、０．０７±０．１１、０．０６±０．０２;Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ相对表达量分别为１．００±０．００、０．３０±０．２８、１．３６±０．０５、０．４３±０．０１、０．４５±０．０１,０．１０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ４ｍＲＮＡ表达水平较空白对照组明显增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;０．０５ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组表达均下降,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。免疫荧光化学检测结果示,以上各组Ｍｕｃ１ＯＤ值分别为１．８６±０．０１、１．８２±０．０１、２．０３±０．０４、１．８８±０．０１、１．８１±０．０２,０．１０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ１表达较空白对照组明显增加,０．０５ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组表达均下调,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;Ｍｕｃ４ＯＤ值分别为１．８６±０．００、１．７７±０．０１、１．８４±０．０２、１．９２±０．００、１．６９±０．０５,０．１０ｇ?Ｌ－１与０．２０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组Ｍｕｃ４表达较空白对照组明显增加,０．０５ｇ?Ｌ－１、０．２０ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ干预组表达均下调,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。０．５０ｇ?Ｌ－１与１．００ｇ?Ｌ－１ＤＨＴ可影响细胞体外生长。结论　一定浓度ＤＨＴ（如０．１０ｇ?Ｌ－１）可上调小鼠角膜上皮细胞Ｍｕｃ１与Ｍｕｃ４的表达水平;而高浓度（０．５０ｇ?Ｌ－１与１．００ｇ?Ｌ－１）ＤＨＴ对角膜上皮细胞存在毒性作用。