SiRNA逆转人红白血病细胞株(K562/ADM)阿霉素耐药性的实验研究

目的:研究小分子干扰RNA片段(small inteffering RNA,siRNA)对人红白血病细胞株K562/ADM细胞mdr1基因表达及药物敏感性的影响,探索新的耐药逆转途径.方法:siRNA根椐GeneBank已知序列设计,在脂质体介导下转染K562/ADM细胞;用流式细胞仪检测K562/ADM细胞Pgp的表达;用MTT检测其对阿霉素ADM的敏感性;用PCR-ELISA法检测K562/ADM细胞的端粒酶活性.结果:siRNA转染后K562/ADM细胞Pgp的表达明显下降,对阿霉素ADM的IC50从8.7μg/ml降到5 μg/ml,端粒酶活性明显下调.结论:siRNA有效逆转了mdr1介导的耐药性,不失为一种新型、有效的肿瘤耐药逆转途径.     

双氢青蒿素对白血病多药耐药K562/ADM细胞的逆转作用

目的:探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)在白血病多药耐药中的应用。方法:采用MTT检测DHA联合阿霉素(adriamycin,ADM)对白血病多药耐药细胞(K562/ADM)生长增殖的影响;应用流式细胞技术分析细胞内罗丹明123(Rhodamine 123)浓度,以检测DHA对白血病细胞膜P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测DHA对白血病细胞P-gp表达水平的影响。结果:10、20、40μmol/L DHA实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.46、2.16和3.52倍。DHA使用前、后K562/ADM细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的22.16%升至89.18%,Rh123外排试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的27.15%升至60.51%。结论:DHA:能有效逆转白血病细胞的MDR机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制和P-gp表达。     

siRNA对人红白血病细胞株（K562／ADM）阿霉素耐药性的影响

目的：研究小分子干扰RNA片段（small interfering RNA，siRNA）对人红白血病细胞株（K562／ADM）细胞mdr1基因表达及功能的影响，探索一新的耐药的逆转途径。方法：siRNA根椐GeneBank已知序列设计，在脂质体介导下转染K562／ADM细胞：用流式细胞仪检测K562／ADM细胞Pgp的表达及细胞周期的改变；用TUNEL法检测其凋亡；用MTTT检测其对阿霉素ADM的敏感性。结果：siRNA转染后K562／ADM细胞Pgp的表达明显下降，凋亡率明显提高，对阿霉素ADM的敏感性明显提高。结论：siRNA有效逆转了mdr1介导的耐药性，不失为一种新型、有效的肿瘤耐药逆转途径。     

siRNA逆转survivin介导的T24/AMD细胞多药耐药的研究

目的:研究siRNA(small interfering RNA)逆转survivin介导的膀胱癌多药耐药性。方法:设计针对survivin基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,采用RT-PCR检测mRNA表达,免疫印迹法检测蛋白表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素累积量。结果:siRNA能明显逆转T24/ADM细胞的多药耐药,使survivin基因的mRNA及蛋白表达水平下调,细胞内阿霉素累积量显著增加(P<0.05)。结论:siRNA通过抑制survivin基因表达从而逆转膀胱癌的多药耐药。     

新型多胺缀合物NMMB逆转K562/ADM细胞多药耐药及其机制

目的：研究新型多胺缀合物NMMB对白血病细胞株K562/ADM的多药耐药（MDR）逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以不同浓度的NMMB(10～1 000 mg/L)作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞24 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定NMMB的非毒性剂量;采用非毒性剂量,NMMB 0、 2.5 、5.0 和10.0 mg/L组,分别与不同浓度ADM（0.25～100.00 mg/L）联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC50,计算逆转倍数;利用流式细胞术检测NMMB联合ADM作用后K562/ADM 细胞内ADM蓄积程度和细胞周期变化。结果：随着NMMB浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;NMMB的最大无毒剂量为12.5 mg/L,逆转倍数为4倍;NMMB可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.05）;K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.01）。结论：NMMB对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积和将K562/ADM细胞阻滞在G0/G1期而实现的。     

丁酸钠诱导K562细胞肺耐药相关蛋白表达的初步研究

目的研究丁酸钠(NaB)对K562细胞肺耐药相关蛋白(LRP)表达的诱导作用。方法以K562细胞为体外模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NaB诱导前后K562细胞LRPmRNA的水平,采用流式细胞仪检测比较NaB诱导前后K562细胞LRP蛋白表达的变化。结果2mmol/L诱导后LRPmRMA水平、蛋白表达均明显增加。结论NaB诱导可使K562细胞LRPmRNA水平和蛋白质表达的增加。     

丁酸钠诱导K562细胞肺耐药相关蛋白表达的初步研究

目的；研究丁酸钠（NaB)对K562细胞肺耐药相关蛋白（LRP）表达的诱导作用，方法：以K562细胞为体外模型，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测NaB诱导前后K562细胞LRP mRNA的水平，采用流式细胞仪检测比较NaB诱导前后K562细胞LRP蛋白表达的变化。结果：2mmol/L诱导后LRP mRNA水平，蛋白表达均明显增加，结论：NaB诱导可使K562细胞LRP mRNA水平和蛋白质表达的增加。     

白血病耐药细胞中多药耐药基因MDR1与核转录因子κB的关系

目的:研究核转录因子κB与多药耐药基因MDR1在白血病化疗耐药中的作用,阐明核转录因子κB(NF-κB)与白血病多药耐药的关系及相关分子机制。方法：白血病细胞K562和阿霉素(ADM)诱导的耐药细胞K562/ADM分别应用ADM（0、0.25、0.50、1.00和2.00 μg·L^-1）或丝裂霉素(MIT)（0、2、4、8和16 mg·L^-1）　作用48 h,通过MTT法检测细胞生存率,计算细胞耐药指数;RT-PCR方法检测MDR1和IκB mRNA表达;Western blotting方法检测P-gp和P65的蛋白表达。结果：ADM和MIT分别作用后,与空白对照组比较,白血病细胞K562细胞生存率下降(P<0.01),呈剂量依赖性;ADM和MIT对耐药细胞K562/ADM生存率作用不明显;在mRNA水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的MDR1 mRNA高表达(P<0.01)。与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00　 μg·L^-1>或MIT 4和8 mg·L^-1分别作用K562细胞和K562/ADM细胞,IκBα mRNA表达均下降(P<0.01),并呈剂量依赖性;在蛋白水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的P-gp蛋白高表达(P<0.01)。与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00 μg·L^-1或MIT 4和8 mg·L^-1分别作用K562/ADM细胞,P-gp蛋白表达量升高(P<0.01),同时P65蛋白表达量升高,且呈药物剂量依赖性(P<0.01)。结论：MDR1基因及P-gp蛋白的高表达很可能是白血病细胞K562多药耐药性形成的关键机制,而NF-κB的激活可能参与了多药耐药的调控。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

功劳木组分F_6逆转白血病MDR的作用和机制

目的:背景与目的从中药功劳木中提取、分离出来的异喹啉类生物碱组分(Fraction 6,F6),具有抗病毒、抗炎、降血压等生理活性。近年有文献报道异喹啉类生物碱具有一定的逆转肿瘤细胞耐药的作用。本文以白血病多药耐药细胞(K562/ADM)为对象来研究F6逆转肿瘤多药耐药性(Mu ltidrug resistance,MDR)的效果及作用机制,以寻找具有多药耐药逆转活性的新型中药。方法:采用MTT法检测F6及阿霉素(Adriamyc in,ADM)对K562/S和K562/ADM细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测F6对耐药肿瘤细胞MDR1基因mRNA表达的影响;流式细胞仪分析细胞内罗丹明123(Rhodam ine123,Rh123)浓度,以检测F6对肿瘤细胞膜P糖蛋白(P-glycoprote in,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测F6对肿瘤细胞膜P-gp表达水平的影响;流式细胞仪检测F6对肿瘤细胞凋亡的作用。结果:10 mg/L为F6的无毒剂量;ADM对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.68±0.08)mg/L和(80.25±1.06)mg/L;无毒剂量F6与ADM联合应用后对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.09±0.07)mg/L和(16.68±0.72)mg/L,此剂量F6使K562/ADM细胞的IC50下降4.81倍;无毒剂量的F6应用前后,K562/ADM细胞MDR1基因表达水平和细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的29.21%升高到85.35%,Rh123外排试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的27.19%升高到59.22%;凋亡检测结果显示无毒剂量的F6使K562/ADM细胞凋亡率升高3.82倍。结论:F6能有效逆转白血病细胞的MDR;F6逆转白血病MDR的机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制MDR1基因和P-gp表达。     

羟丙哌嗪的手性高效液相色谱法拆分

目的：建立羟丙哌嗪对映体拆分的高效液相色谱法。方法：使用Chimed-OC手性柱，以异丙醇-正己烷(15：85)为流动相，流速0．5ml／min，检测波长250nm；将羟丙哌嗪酯化衍生后进样拆分。结暴：在正相条件下，上述衍生物对映体实现基线分离，分离度为4．0，理论板数均大于6000，左、右旋异构体衍生物峰面积比值精密度(RSD)为0．63％。结论：方法简便，精密度高，可用于羟丙哌嗪的手性拆分。     

胸腺瘤致异位促肾上腺皮质激素综合征1例

库欣综合征是临床上较为常见的一类因糖皮质激素过多所产生的临床症候群，按其病因可分为促肾上腺 皮质激素依赖型和非依赖型。现报告1例库欣综合征的女性患者，临床表现为轻度满月脸、雄激素增多的男性化特 征、肤色加深、血压升高以及合并肺部感染等，病因未明。在影像学检查排除垂体肿瘤和肾上腺肿瘤之后，经胸部 增强CT检查，发现病变部位在胸腺。予胸腔镜手术切除肿瘤，术后患者伤口感染，予多种抗生素行抗感染治疗，伤 口愈合。随访21个月，患者的上述症状完全消失，近期预后良好。术后病理诊断为胸腺神经内分泌癌。此病例为1例 典型的胸腺瘤异位分泌促肾上腺皮质激素，而导致库欣综合征，称为异位促肾上腺皮质激素综合征。     

不同原因所致宫腔积液的超声声像图分析

目的 总结不同原因引起的宫腔积液患者的超声声像图特征,探讨超声检查用于宫腔积液病因诊断的临床价值.方法 回顾性分析243例不同原因所致宫腔积液患者的超声声像图及相关临床资料.结果 超声检查显示:异位妊娠时宫腔内暗区周边回声略增强,壁薄;生理性宫腔积液量少、透声好,一侧附件区可见生理性囊肿,复查积液消失;宫腔粘连者于宫腔见梭形液性暗区,其内可见带状稍高回声与前后壁相连.绝经后无器质性病变患者单层内膜菲薄,约1 mm,宫腔积液量少,多＜5 mm,透声较好,积脓者透声差.子宫内膜良性病变超声检查表现为宫腔分离,内有异常回声团,带蒂者可脱至宫颈内口.结论 超声检查是妇产科患者的重要辅助检查手段,将超声图像特点与临床表现相结合,可为临床诊断提供客观依据,对临床诊断与治疗具有指导意义.     

全麻药对发育期大脑神经毒性的研究进展

随着外科学的快速发展，手术治疗的适应症扩大，妊娠期非产科手术及婴幼儿手术的数量均不断增加。这些手术大多数需要在全身麻醉下实施，致胎儿和婴幼儿发育期的大脑不可避免地暴露于全麻药。故近年来，全麻药对发育大脑的神经毒性成为医学科学界关注和争论的热点。尤其是2016年，美国食品药品监督管理局（FDA）对临床常用全麻药添加黑框警告，造成医患及相关领域人员的困惑。因此，我们结合发育大脑的特点，对全麻药发育期神经毒性的临床前及临床研究作一阐述。     

Addressing bias in prediction models by improving subpopulation calibration

ObjectiveTo illustrate the problem of subpopulation miscalibration, to adapt an algorithm for recalibration of the predictions, and to validate its performance.Materials and MethodsIn this retrospective cohort study, we evaluated the calibration of predictions based on the Pooled Cohort Equations (PCE) and the fracture risk assessment tool (FRAX) in the overall population and in subpopulations defined by the intersection of age, sex, ethnicity, socioeconomic status, and immigration history. We next applied the recalibration algorithm and assessed the change in calibration metrics, including calibration-in-the-large.Results1 021 041 patients were included in the PCE population, and 1 116 324 patients were included in the FRAX population. Baseline overall model calibration of the 2 tested models was good, but calibration in a substantial portion of the subpopulations was poor. After applying the algorithm, subpopulation calibration statistics were greatly improved, with the variance of the calibration-in-the-large values across all subpopulations reduced by 98.8% and 94.3% in the PCE and FRAX models, respectively.DiscussionPrediction models in medicine are increasingly common. Calibration, the agreement between predicted and observed risks, is commonly poor for subpopulations that were underrepresented in the development set of the models, resulting in bias and reduced performance for these subpopulations. In this work, we empirically evaluated an adapted version of the fairness algorithm designed by Hebert-Johnson et al. (2017) and demonstrated its use in improving subpopulation miscalibration.ConclusionA postprocessing and model-independent fairness algorithm for recalibration of predictive models greatly decreases the bias of subpopulation miscalibration and thus increases fairness and equality.     

膝外翻全膝关节置换外侧髌旁入路的手术方法探讨

目的探讨外侧入路行膝外翻全膝关节置换手术技术。方法采用膝关节外侧入路对中重度固定膝外翻患者行膝关节置换术。术中行膝关节正中偏外侧皮肤切口,行髂胫束苹果派样延长,自髌骨外侧“Z”字成形切开关节囊。以松解髂胫束止点、股骨侧及胫骨侧外侧副韧带及后外侧关节囊为主进行软组织平衡。股骨远端内外翻截骨定为5。外翻,股骨远端旋转角度截骨采用Whiteside线结合内外上髁轴线定位,全部病例均行髌骨置换。屈曲位缝合关节囊,将关节囊外侧袖套结构（深层）与内侧支持带边缘（浅层）缝合。结果8例10个膝外翻骨性关节炎患者采用外侧入路行全膝关节置换术。其中男1例1膝,女7例9膝。平均年龄68．2岁（58～79岁）。KrackowⅠ型外翻7例9膝,Ⅱ型1例1膝。临床分型均大于15°,属重度外翻。其中双膝关节同时置换2例4膝,单膝关节置换6例6膝。7例9膝采国产后稳定骨水泥型假体（TC—Dynamic,PLUS）,1例1膝采用进口旋转铰链式假体（RT—PLUS^TM Solution,PLUS）。全部患者术后外翻畸形均得到完全矫正,出院时均能独立或习步架辅助行走距离平均超过100m。关节活动度由术前平均95．6°（85°～110°）提高到术后平均117．1°（100°-125°）。被动内外翻活动度由术前平均12．6°（9°-15°）提高到术后0°。平均FTA角由术前的27．6°（20°～40°）提高到术后的6．8°（5°～9°）。KSS评分及功能评分由术前22．7分（9～48分）及26．5分（12—55分）分别提高到术后的86．4分（85～95分）及89．1分（80～95分）。术后平均随访时间19．6个月（1个月-51个月）,随访期间股胫角无明显变化,关节稳定性良好。结论采用外侧入路,关节囊“Z”字成形切开方法能够直接松解外侧韧带及软组织结构,并有效地缓解了腓总神经压力,解决了外侧软组织覆盖问题。     

雌激素诱导泌乳素瘤动物模型的建立及稳定性的观察

【目的】 通过注射苯甲酸雌二醇建立大鼠泌乳素瘤动物模型,并鉴定肿瘤模型的稳定性?【方法】 取40只雌性Wistar大鼠随机分成对照组(A组)和用药组:注射苯甲酸雌二醇8周组(B组)?注射苯甲酸雌二醇12周组(C组)和撤除苯甲酸雌二醇4周组(D组),每组10只?每隔15 d记录大鼠的体质量变化,并在相应的时间处死大鼠称量垂体质量并观察成瘤情况质量?取各组垂体进行HE染色和泌乳素免疫组化来鉴定泌乳素瘤?选取1只大鼠做标记,分别在注射苯甲酸雌二醇8?12周以及撤除苯甲酸雌二醇4周后做MRI,通过动态观察垂体大小的变化来鉴定泌乳素瘤模型的稳定性?【结果】苯甲酸雌二醇诱导组大鼠体质量明显增长缓慢,并且在2周左右开始出现脱毛现象,B?C和D组致瘤率分别为70%?100%和100%?苯甲酸雌二醇诱导组HE染色细胞排列紊乱,出现核深染细胞,血管丰富?免疫组化鉴定为泌乳素瘤,泌乳素阳性表达细胞明显多于对照组?MRI显示随着苯甲酸雌二醇诱导时间的增长,垂体体积逐渐增加,且在撤除苯甲酸雌二醇后垂体体积并未缩小,证明泌乳素瘤模型的稳定性? 【结论】 腹腔注射苯甲酸雌二醇诱导大鼠泌乳素瘤不仅诱导率高,而且具有很好的稳定性?     

TXNIP介导的氧化应激在雌激素延缓阿尔兹海默病中的作用

目的：研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病及雌激素延缓AD发生中的作用。方法：检测雌二醇(E2)处理的AD细胞模型中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和TXNIP水平、细胞凋亡情况;TXNIP过表达慢病毒后,观察E2处理对AD细胞ROS水平和凋亡的影 响。在AD大鼠模型中,观察E2处理后大鼠学习记忆能力和TXNIP的表达变化;过表达TXNIP后,观察E2处理对AD 大鼠模型学习记忆能力的影响。结果：AD细胞中ROS,TXNIP及细胞凋亡水平升高,而E2处理可降低AD细胞ROS, TXNIP及细胞凋亡水平;增强TXNIP表达后,E2处理可降低AD细胞ROS和凋亡水平。与细胞实验类似,E2处理可增 强AD大鼠的学习记忆能力,抑制脑内TXNIP表达;而TXNIP过表达可削弱E2对AD大鼠学习记忆能力的增强效果。 结论：雌激素可通过抑制神经组织中TXNIP的表达,降低神经损伤程度,延缓AD的发生发展。     

PFT-α对隐睾所致生精细胞凋亡的影响

目的：通过研究PFT-α对隐睾生精细胞中p53和bcl-2/bax表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方
法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+p53抑制剂(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)组、隐睾+ PFT-α溶
媒(DMSO)组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组分别于大鼠腹腔内注射PFT-α和PFT-α溶媒,每天1次,定时定量。
7 d后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。观察手术侧睾丸生精细胞组织形态,采用TUNEL法结合流式细胞术(flow
cytometry,FCM)检测生精细胞凋亡程度,免疫组织化学和Western 印迹分别检测p53和bcl-2/bax的表达。结果：隐睾+PFT-α组
与隐睾组和隐睾+PFT-α溶媒组比较,生精上皮排列有序,细胞层数厚,凋亡指数较低,p53和bax表达弱,bcl-2表达强。结
论：PFT-α可能通过上调bcl-2,下调p53和bax的表达,抑制隐睾生精细胞的过度凋亡。     

毛细管电泳法检查瑞格列奈片中左旋异构体杂质

目的：建立毛细管电泳法检测瑞格列奈片中左旋异构体杂质。方法：采用未涂层熔融石英毛细管柱(50 μm×50 cm,有效长度41 cm)为分离通道,运行缓冲液为pH 3.5, 30 mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液,含5 mg/ml CM-β-CD。结果：左旋瑞格列奈在浓度为2.00～80.00 μg/ml范围内线性关系良好 (r=0.9993),方法回收率为92.5%～105.0%。结论：本实验建立的方法简单、准确、灵敏,可用于瑞格列奈片中左旋异构体杂质的检测。