端粒酶和P53在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的 研究人脑胶质瘤中端粒酶活性与P53蛋白表达的情况,并探讨其与胶质瘤的相关关系及可能存在的临床意义.方法 采用PCR-ELISA法和免疫组化ABC法,对72例人脑胶质瘤及16例正常脑组织标本中的端粒酶活性和P53蛋白分别进行检测.结果 脑胶质瘤中端粒酶活性和P53蛋白的阳性表达率分别为61.11%(44/72)和51.39%(37/72),且各组阳性率随病理级别的升高而增加(P＜0.01),而正常脑组织中两者表达均为阴性;P53蛋白表达阳性患者端粒酶活性表达的阳性率为83.78%(31/37);P53蛋白表达阴性患者端粒酶活性表达的阳性率为37.14%(13/35),两者之间存在相关关系(P＜0.05).结论 P53蛋白与端粒酶共同参与了脑胶质瘤的发生发展过程,可作为反映胶质瘤恶性程度的重要指标.     

ABCG2在人脑胶质瘤中的表达及其与Cyclin D2的关系

目的 探讨ABCG2在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤分级和Cyclin D2表达的关系.方法 实时荧光定量PCR法检测ABCG2在52例不同病理级别胶质瘤及8例正常脑组织中的mRNA表达;免疫组织化学SABC法检测ABCG2和Cyclin D2的蛋白表达;SPSS统计分析其表达的相关性.结果 ABCG2在脑胶质瘤中的mRNA表达与正常脑组织相比存在过表达(P<0.05),且随着病理级别的升高而增加(P<0.05);免疫组化检测显示ABCG2在52例胶质瘤中的阳性表达率为32.7%(17/52),与病理级别具有明显相关性(χ2=4.62,P<0.05),呈亲血管分布;ABCG2的表达与Cyclin D2的表达具有一定的相关性(P<0.05).结论 ABCG2在人脑胶质瘤中的表达随着病理级别的升高而逐渐增加,且与Cyclin D2的表达呈正相关,表明以ABCG2为标志物的脑肿瘤干细胞具有较高的增殖能力.     

120例人脑胶质瘤组织P73蛋白表达分析

目的研究P73蛋白在人脑胶质瘤中的表达,探讨其在胶质瘤发生、发展和恶性变中可能作用.方法应用免疫组化方法(ABC法)分别检测胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级20例,Ⅲ、Ⅳ级各20例;另外随机选取星形细胞瘤、少枝胶质瘤、室管膜瘤和胶质母细胞瘤各15例;同时取正常脑组织11例作为对照组.结果 P73蛋白的表达在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组和正常脑组织无显著性差异(X2=0.818,P＞0.05),Ⅲ级胶质瘤组和正常脑组织有显著性差异(X2=5.011,P＜0.05),Ⅳ级胶质瘤组和正常脑组织有显著性差异(X2=6.229,P＜0.05),Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组和Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤组比较有统计学意义(P＜0.05),星形细胞瘤、少枝胶质瘤室和管膜瘤与正常脑组织组比较无统计学意义(P＞0.05),胶质母细胞瘤与正常脑组织组比较有统计学意义(x2=4.547,双侧P=0.051,单侧P=0.040).结论①P73蛋白的表达在肿瘤的病理分级间有明显差异,随分化程度低而表达率增高,说明了P73基因可能参与胶质瘤的发生,发展和恶性变;②除胶质母细胞瘤外,其它细胞类型的胶质细胞瘤中的P73的表达均与正常脑组织无显著性差异;③人胶质瘤组织中可能是DNNp73表达占相对优势.     

P57kip2、IGFⅡ、Cyclin E和Caspase-3蛋白在胃腺癌中的表达及其相关性研究

目的:检测P57kip2、IGFⅡ、Cyclin E和Caspase-3蛋白在胃腺癌组织中的表达、相互关系及意义。方法:采用SP免疫组化法检测73例胃腺癌和20例正常胃黏膜组织中P57kip2、IGFⅡ、Cyclin E和Caspase-3蛋白的表达。结果:73例胃腺癌中P57kip2、IGFⅡ、Cyclin E和Caspase-3蛋白的检出率分别为35.6%(26/73)、47.9%(35/73)、46.6%(34/73)和61.6%(45/73),4种蛋白在正常胃黏膜组织中的阳性率分别为85.0%(17/20)、20%(4/20)、15%(3/20)和90%(18/20)。P57kip2和Caspase-3蛋白在胃腺癌中的阳性表达率显著低于正常胃黏膜(P<0.01,P<0.05),IGFⅡ和Cyclin E在胃腺癌中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜(P<0.05,P<0.05);P57kip2蛋白表达与胃腺癌的淋巴结转移有关(P<0.01),Cyclin E蛋白表达与腺癌浸润深度有关(P<0.05),Caspase-3蛋白的表达和腺癌分化程度有关(P<0.05);P57kip2与IGFⅡ、Cyclin E、Caspase-3蛋白表达之间差异有显著性(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论:P57kip2蛋白低表达可能是胃腺癌发生发展的重要因素,P57kip2可能拮抗Cyclin E蛋白表达,IGFⅡ对P57kip2负向调节,同时P57kip2与细胞凋亡有关。     

COX-2,bcl-2和c-erbB-2在人脑胶质瘤中表达水平及其相关性研究

目的 探讨脑胶质瘤肿瘤中bcl-2,环氧化酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2),原癌基因HER-2/neu(c-erbB-2)的表达及二者与肿瘤恶性程度的关系.方法 采用经病理和免疫组织化学染色证实的程度的低级别胶质瘤(WHO 0~Ⅱ级)25例,高级别胶质瘤(WHOⅢ,Ⅳ级)25例,对照组选用脑外伤患者的非肿瘤脑组织,用免疫组织化学法检测两组组织的bcl-2,COX-2,c-erbB-2的蛋白表达并采用半定量积分法进行结构判定.结果 外伤非肿瘤脑组织中无bcl-2,COX-2,c-erbB-2的蛋白表达,低级别脑胶质瘤的bcl-232%,COX-218%,c-erbB-24%.高级别胶质瘤bcl-276%,COX-272%,c-erbB-216%,在对3组间行两两比较,bcl-2,COX-2表达蛋白表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05),c-erbB-2差异无统计学意义.相关分析显示,COX-2与bcl-2之间存在正相关性(r=0.682,P<0.001),COX-2与cerbB-2之间有正相关性(r=0.33,P=0.018<0.05).bcl-2与c-erbB-2之间有正相关性(r=0.308,P=0.03<0.05).结论 bcl-2,COX-2,c-erbB-2可能通过相关联系,影响胶质瘤的生长甚至恶变.     

人脑胶质瘤中Cyclin D1、P16蛋白的表达及相关性研究

目的 检测不同级别胶质瘤中Cyclin D1、P16蛋白的表达,探讨二者在胶质瘤恶性程度以及预后的预测方面的意义。方法 通过S-P法免疫组化检测人脑胶质瘤中Cyclin D1、P16蛋白的表达水平,并分析相关性。结果 低级别胶质瘤与高级别胶质瘤两组的Cyclin D1、P16蛋白阳性率有显著差异。复发组、死亡组与未复发组、未死亡组的Cyclin D1阳性、P16蛋白阳性率有显著差异。结论 Cyclin D1与P16蛋白的表达水平对预测脑胶质瘤恶性程度与预后有重要意义。     

人脑胶质瘤中P16的表达及其意义

[目的]检测人脑胶质瘤中P16表达水平,探讨P16在判断胶质瘤恶性程度以及预测预后方面的意义.[方法]采用S-P免疫组化法检测84例胶质瘤P16的表达水平;结合临床资料,分析胶质瘤的P16表达及其与肿瘤恶性程度、复发和死亡之间的关系.[结果]①32例低级别胶质瘤中P16蛋白平均阳性细胞百分率为25.45%±19.78%,52例高级别胶质瘤中平均阳性细胞百分率为10.45%±11.11%,两组均数比较,差异有统计学意义(P＜0.01).②低级别胶质瘤中P16蛋白阳性率高于高级别胶质瘤中阳性率,两组阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).③1年后复发组的P16蛋白阳性率低于未复发组的阳性率(P＜0.01),两年后死亡组的P16蛋白阳性率低于未死亡组的阳性率(P＜0.01),差异均有统计学意义.[结论]①P16蛋白表达水平随胶质瘤病理分级的增高而下降.②P16蛋白表达水平越低,预后越差.③P16蛋白的表达水平可作为预测脑胶质瘤恶性程度与预后的指标.     

鼻咽癌组织p16蛋白、p27kip1表达与CT表现的关系

目的研究p16蛋白、p27kip1(kinase inhibition protein 1,kip1)表达与鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)CT表现的关系.方法回顾性分析确诊的47例鼻咽癌患者CT表现,应用免疫组化法检测其与18例相应癌旁组织p16蛋白、p27kip1表达状况.结果 NPC中p16蛋白、p27kip1表达阳性率分别为40.43%、34.04%,癌旁组织中表达阳性率分别为88.89%、83.33%,两组差异有显著性(P＜0.01).p16蛋白、p27kip1表达缺失均与颅内转移、骨远处转移密切相关(均P＜0.05),均与咽旁间隙浸润无明显关系(P＞0.05).结论 p16蛋白与p27kip1表达缺失与NPC发生及颅内转移、骨远处转移有密切关系.     

mdm2和P53在人脑胶质瘤中的相关性分析

目的　通过对人脑胶质瘤标本中 p5 3、mdm2蛋白表达关系的研究 ,探讨人脑胶质瘤的发病机理。 方法　应用免疫组化 (链霉素菌抗生物素蛋白 -过氧化酶法Streptavidin peroxidase ,S -P法 )标记检测 10 0例人脑胶质瘤标本 p5 3和mdm2 ,同时标记DNA原位杂交探针 p5 3。结果 10 0例脑胶质瘤标本 p5 3和mdm2免疫组化标记阳性率分别为 35 %、32 %;p5 3DNA探针原位杂交标记 ,阳性率为 90 %,其中 2 8例免疫组化标记mdm2阳性 ,而 p5 3阴性标本的原位杂交 p5 3阳性率为 89.2 8%(2 5例 )。统计学显示p5 3基因表达和mdm2基因表达有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　mdm2和 p5 3呈明显负相关 ,mdm2在人脑胶质瘤的发病过程中起重要的作用 ;p5 3的缺失不是人脑胶质瘤的主要发病机理 ,mdm2和 p5 3协同作用在脑胶质瘤的发生和发展中起重要作用。     

鼻咽癌中细胞周期蛋白E与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27kip1的相关性分析

目的: 研究鼻咽癌中细胞周期蛋白E(cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(p27kip1)的表达及相关性.方法: 以抗cyclin E抗体、抗p27kip1抗体为标记物,采用免疫组织化学方法(Elivision法)对37例鼻咽癌、17例慢性鼻咽炎石蜡标本进行检测,并结合临床资料进行分析.结果: 37例鼻咽癌组织中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为51.4%和45.9%,17例慢性鼻咽炎中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为5.9%和88.2%,两者比较差异有显著性(P＜0.01).Cyclin E阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移、颅神经侵犯无关(P＞0.05),但与3年生存率有关(P＜0.05);p27kip1阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移无关(P＞0.05),但与颅神经侵犯及3年生存率有关(P＜0.05).Cyclin E与p27kip1二者的表达有负相关性(r=-0.509,χ2=9.745,P=0.002).结论: cyclin E和p27kip1表达可能是判断鼻咽癌生物学行为的指标.     

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与接头蛋白Gab2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与接头蛋白Gab2在子宫内膜癌中的表达、两者的相关性及其与预后的关系.方法 采用免疫组化SP法,检测50例子宫内膜癌(癌组)、50例子宫内膜不典型增生(癌前病变组)及30例正常增殖期子宫内膜(正常组)中Shp2蛋白和Gab2蛋白的表达水平,分析其表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系,及二者的相关性.结果 正常组、癌前病变组和癌组的子宫内膜组织中,Shp2蛋白的阳性表达率分别为0、12.00%、64.00%,Gab2蛋白的阳性表达率分别为3.33%、38.00%、58.00%,且组间比较均有统计学意义(P<0.05);Shp2蛋白及Gab2蛋白的阳性表达率在肌层浸润深度及有无淋巴结转移组中比较,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素生存分析显示:Shp2蛋白阳性表达者的总生存率明显下降,Gab2蛋白阳性表达者总生存率也明显下降;子宫内膜癌中Shp2蛋白的表达与Gab2蛋白的表达呈正相关(r=0.368,P<0.05).结论 Shp2蛋白及Gab2蛋白的表达可能参与了子宫内膜癌的发生、发展、浸润等过程,有可能作为判断子宫内膜癌预后的新指标.     

绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体，在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法：用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段，插入到GFP表达载体pEGFP—N2中GFP基因序列的上游，构建成GFP—mfgl2融合基因表达载体pEGFP—mfgl2，将该载体转染到CHO细胞后24—48h，通过荧光显微镜观察并摄片。结果：扩增出长约1．3kb的基因片段，经双酶切鉴定和测序鉴定无误；重组载体转染CHO细胞后，在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论：成功构建了pEGFP．mfgl2融合基因表达载体；重组载体可在CHO细胞中表达出GFP—mfgl2融合蛋白，为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。     

人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

 目的  构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2 (human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白。方法  采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性。结果  重组质粒经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1%,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L。结论  成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高。     

c-erbB-2,bcl-2和nm23-H1在原发性肺癌组织中的表达

目的：探讨癌基因c-erbB-2、凋亡抑制基因bcl-2及转移抑制基因nm23-H1蛋白在原发性肺癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法：采用免疫组化S-P法检测59例原发性肺癌组织中c-erbB-2，bcl-2和nm23-H1蛋白的表达。结果：c-erbB-2蛋白的阳性表达在肺腺癌、腺鳞癌与鳞癌组间比较差异有显著性(P＜0．05)，与肺癌组织分化程度无明显关系(P＞0．05)，与淋巴结的转移呈正相关(P＜0．05)。bcl-2蛋白的阳性表达在高、中分化肺癌组和低分化肺癌组间比较，差异有显著性(P＜0．05)，与肺癌组织学类型及淋巴结转移无明显关系(P＞0．05)．nm23-H1蛋白在淋巴结无转移肺癌组中显著高于转移组(P＜0．05)，且与伴淋巴结转移组中c-erbB-2的表达呈负相关．结论：c-erbB-2，bcl-2及nm23-H1在肺癌的组织发生上起着重要作用，检测三种基因蛋白可作为判断肺癌病人预后的有效指标之一。     

食管癌组织环氧化酶-2和BCL-2蛋白的表达与临床病理的关系研究

目的：检测环氧化酶（COX）-2及凋亡相关蛋白BCL-2在食管癌组织中的表达,并探讨二者与食管癌临床病理行为的关系。方法：应用免疫组化SP法检测67例食管癌组织及10例癌旁组织标本中COX-2及BCL-2的表达。结果：食管癌组织中COX-2和BCL-2表达增高,阳性率分别为77．6％、83．5％,两者高表达与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、组织类型、分化程度、临床分期、淋巴结转移均无关。癌旁组织中二者均呈阴性表达。BCL-2和COX-2表达呈正相关（r=0．270,P〈0．05）。结论：人食管癌组织COX．2和BCL-2表达增强,COX-2可能通过激活BCL-2发挥抗凋亡作用,且在食管癌的发生、发展中起重要作用。     

苦参碱对膀胱癌大鼠COX-2、cPLA2及PGDH蛋白表达水平的影响

目的:探讨苦参碱对膀胱癌大鼠环加氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)、细胞膜磷脂酶A2(cytosolic phospholipases A2,c PLA2)、前列腺素脱氢酶(prostaglandin dehydrogenase,PGDH)蛋白表达水平的影响。方法:选取SD雄性大鼠120只,随机分为正常对照组、模型组、塞来昔布组、苦参碱高剂量组、苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组,各20只。给予亚硝基胺灌胃建立膀胱癌模型,并给予相应的药物治疗。观察所有大鼠的膀胱质量、质量200 mg膀胱所占比例、肿瘤细胞凋亡指数,并对各组大鼠COX-2、c PLA2及PGDH蛋白的表达水平进行检测。结果:治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠的膀胱质量、质量200 mg膀胱所占比例较低,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组低于苦参碱中剂量组、低剂量组(P0.05);治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠肿瘤细胞凋亡指数较高,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组高于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05);治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠COX-2阳性表达率较低,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组低于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05);治疗后,与模型组比较,各药物组大鼠COX-2、c PLA2蛋白表达水平较低,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组低于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05);各药物组大鼠PGDH蛋白表达水平较高,其中塞来昔布组、苦参碱高剂量组高于苦参碱中剂量组、苦参碱低剂量组(P0.05)。结论:苦参碱能够明显抑制亚硝基胺诱发的大鼠膀胱癌的生长,其作用机制可能与抑制前列腺素通路相关蛋白COX-2、c PLA2表达、促进PGDH蛋白表达有关,且其作用具有剂量依赖性。     

Expression and significance of P53 protein and MDM-2 protein in human gliomas

Background  P53 is one of the most studied tumor suppressors in the cancer research, and over 50% of human tumors carry P53 mutations. MDM-2 is amplified and/or overexpressed in a variety of human tumors of diverse tissue origin. The aim of this study was to examine the expression of P53 protein and MDM-2 protein in gliomas, and to investigate the relationship between the expression of the two proteins and the histopathological grades of glioma. The relationship between MDM-2 protein expression and P53 protein expression was also analyzed.

Methods  The expression of P53 protein and MDM-2 protein was immunohistochemically detected using monoclonal antibodies in 242 paraffin embedded tissues, including 30 normal brain tissues from patients with craniocerebral injury and 212 tissues from patients with primary glioma (grade I–II group: 5 cases of grade I, 119 cases of grade II; and grade III–IV group: 53 cases of grade III, and 35 cases of grade IV).

Results  The P53 positive rate was significantly higher in the glioma groups than in the control group (P <0.0001). The P53 positive rate was significantly higher in glioma tissues of grade III–IV than in glioma tissues of grade I–II group (P=0.001). The MDM-2 positive rate was significantly higher in glioma groups than in the control group (P <0.0001). There was no significant difference in the MDM-2 positive rate between the two glioma groups (P=0.936). The expression of P53 protein was not related to expression of MDM-2 protein (P=0.069)

Conclusions  Overexpression of P53 protein might be related to the occurrence and progression of glioma. Overexpression of MDM-2 protein may play an important role in glioma tumorigenesis, but may not be involved in glioma progression. The overexpression of MDM-2 protein was an early event in malignant transformation of glioma. MDM-2 may be a key player in glioma in its own right.

     

解偶联蛋白2基因多态性与中国人2型糖尿病的关系

目的研究解偶联蛋白2(UCP2)基因外显子8一个45 bp的插入/缺失(I/D)多态性与中国上海地区汉族人2型糖尿病及肥胖之间的关系.方法采用病例-对照研究方法,以聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳方法,对195例2型糖尿病患者及181例正常对照者解偶联蛋白2第8外显子的45 bp的I/D多态性进行基因分型.结果 45 bp I/D多态性的基因型频率和等位基因频率在2型糖尿病组与正常对照组中的分布无显著性差异;将所有入选者根据体重指数(BMI)分成BMI≤23 kg/m2组和BMI≥25 kg/m2组,在这两组中I/D多态性的基因型频率和等位基因频率的差异亦无显著性;而且纯合缺失(D/D)组与杂合缺失(I/D)+纯合插入(I/I)组间的BMI亦无明显差异(P均＞0.05).结论 UCP2基因的第8外显子45 bp的I/D多态性与上海地区汉族人群中2型糖尿病和肥胖无显著相关性.     

MUC4和ErbB2在胰腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨MUC4和ErhB2在胰腺癌中的表达及临床意义。方法 免疫组化SP法检测60例胰腺癌．12例慢性胰腺炎及8例正常胰腺组织标本中MUC4和ErbB2蛋白的表达。结果 MUC4和ErbB2在胰腺癌中的表达率较慢性胰腺炎及正常胰腺组织均明显升高（P＜0．01）；ErbB2随胰腺癌病理分化程度的降低．阳性表达率逐渐增高（P〈0．05）；MUC4和ErbB2在临床Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌中的表达率均明显高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0．05），在伴淋巴结转移的39例胰腺癌患者中的表达率亦较无淋巴结转移者明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论 MUC4可能是一个特异的胰腺癌肿瘤相关标志物．与ErbB2共同在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用。     

人淋巴细胞HSP70蛋白多态性双向电泳-Western blot分析

目的：将双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术用于HSF70蛋白多态性分析。方法：分离5名志愿者淋巴细胞中的蛋白质组成分,使用2种蛋白酶抑制剂Leupeptin和PMSF进行处理,进行双向电泳,其中第一次等电聚焦电泳时间延长至24h,电泳完毕,一面胶用于银染,另一面胶采用Western blot方法特异性鉴定其中的HSP70成分。结果：运用2-DE和Western blot,至少可以检测到5种以上HSP70亚型成员。结论：该方法可将HSP70各亚型充分分离。