环孢素A对肺纤维化大鼠模型TGF-β1／Smad3表达的影响

目的研究环孢素A（CsA）对大鼠肺纤维化的干预作用及TGF—β1／Smad3信号转导通路的作用机制。方法54只SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组。模型组、干预组经气管内注入博莱霉素（BLM，5mg／kg）诱导肺纤维化模型，干预组次日CsA灌胃进行干预，对照组用生理盐水代替。各组注药后7天、14天和28天3个时间点分别处死6只大鼠。观察肺泡炎及肺纤维化程度；用免疫组织化学法检测转化生长因子β1（TGF-β1）和smad3的表达；TUNEL检测28天各组大鼠肺组织细胞凋亡情况。结果对照组肺泡结构正常，模型组7天时以肺泡炎改变为主，14天时肺泡炎较前有所减轻，28天时以广泛性肺纤维化为主。干预组病理改变与模型组有同一规律，但肺泡炎和肺纤维化程度都轻于模型组。干预组各时间点TGF-β1和smad3表达明显低于模型组（P〈0．05），28天时大鼠肺组织中细胞凋亡指数干预组明显低于模型组。结论环孢素A可下调博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1／Smad3介导的细胞内信号转导途径，减少肺组织上皮细胞的凋亡，最终改善肺间质纤维化。     

TGF-β3拮抗TGF-β1诱导的FMT 改善小鼠肺纤维化

目的 研究转化生长因子(transforming growth factor, TGF)-β3是否能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast, HLF)间质转化。方法 在体外培养原代HLF进行细胞实验,分为3组:对照组:给予等体积超纯水;TGF-β1组:细胞给予TGF-β1(4ng/ml)处理HLF 24h;TGF-β3组:细胞给予20ng/ml的TGF-β3预处理24h后加入TGF-β1(4ng/ml)处理24h。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和纤连蛋白(Fibronectin)蛋白的表达水平。在体内构建小鼠肺纤维化模型,分为3组:对照组:给予等体积0.9%氯化钠溶液气管滴注;模型组:博来霉素溶于0.9%氯化钠溶液,按2.0U/kg的浓度给予小鼠气管内滴注;TGF-β3干预组:于造模前1天,将TGF-β3(100μg/kg)给予小鼠尾静脉注射。HE和Masson染色法观察肺组织病理学变化,免疫荧光法检测α-SMA和Fibronectin蛋白的变化。结果 在体外,与TGF-β1组比较,TGF-β3组细胞迁移和侵袭能力降低,α-SMA和Fibronectin蛋白表达下调。在体内,与模型组比较,TGF-β3组小鼠肺组织病理变化改善,胶原沉积减少,α-SMA和Fibronectin蛋白荧光强度降低。结论 TGF-β3抑制TGF-β1引起的HLF间质转化,并改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。     

TGF-β1及其信号蛋白Smad2,3在大鼠心肌细胞肥大中的作用

目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)及其信号蛋白Smad2，3在诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法 培养新生大鼠心肌细胞，用不同剂量TGF-β1刺激，检测[^3H]-Leu掺入量，RT—PCR检测信号蛋白Smad2，3mRNA的表达。结果 不同剂量的TGF-β1均能明显增加心肌细胞[^3H]-Leu掺入量，TGF-β1增加肥大心肌细胞Smad2，3mRNA的表达。结论 TGF-β1能诱导大鼠心肌细胞肥大，信号蛋白Smad2，3在其中发挥了重要作用。     

IL-27调控TGF-β/Smad通路在博来霉素诱导肺纤维化中的作用

［摘要］目的　在博来霉素诱导肺纤维化小鼠肺组织中, 探讨IL-27是否通过TGF-β/Smad信号通路抑制肺纤维化．方法　将40只雄性C57/BL6小鼠随机分为:空白对照组（A组）,博来霉素组（B组）,博来霉素+白介素27组（C组）,博来霉素+白介素27抗体组（D组）,每组10只．于造模后第7、28天每组各处死5只小鼠,取右肺组织用Western Blot 的方法检测TGF-βR1、Smad1、Smad3蛋白的表达．结果（1）博来霉素诱导肺纤维化模型中,7 d、28 d肺组织均有TGF-βR1表达升高,IL-27治疗后降低TGF-βR1表达（P＜0.05）;（2）D组p-Smad1、p-Smad3表达量在造模后7 d、28 d均最高,C组在造模后7 d表达量少于B组（P＜0.05）．结论　外源性IL-27可能通过抑制TGF-β/Smad通路相关蛋白的磷酸化减轻肺纤维化．     

TGF-β1、TGF-βR1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系

目的:探讨TGF-β1、TGF-βR1及Smad4三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系,为乳腺癌发病和治疗机制提供理论和实验依据。方法:提取30例乳腺癌临床标本(经液氮、研磨等处理)和MCF-7、T47D、SKBR-3三种乳腺癌细胞(取指数增长期细胞)总RNA,反转录cDNA第一链,克隆TGF-βR1、Smad4基因片段,测定质粒浓度,制备标准样品,并作出标准曲线,探针法荧光定量PCR(FQ-PCR)检测TGF-βR1和Smad4基因mRNA表达。结果:FQ-PCR检测发现恶性程度高的SKBR-3细胞,其TGF-βR1和Smad4的基因拷贝数明显低于恶性程度低的MCF-7细胞(P均<0.01),T47细胞两种基因拷贝数介于两者之间。结论:随着乳腺癌细胞病理类型恶性程度增加,TGF-βR1和Smad4 mRNA表达逐步下降,表明TGF-β1和Smad4可能具有类似乳腺癌抑癌基因的作用。     

Smad3在TGF-β1诱导肌成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨TGF-β1及其信号转导分子Smad3在肌成纤维细胞(C2C12)增殖中的作用.方法 TGF-β1作用C2C12细胞,对Smad3基因进行RNA干扰,用[3H]测定法检测TGF-β1诱导的C2C12细胞增殖.结果 0、1、5和10 ng/mL TGF-β1作用C2C12细胞后,其[3H]值(cpm/min)分别是(630±17),(907±19),(1 493±25),(1 808±24),F=3080.499,P=0.000.经200 pmol/L siKNA-Smad3转染24 h,再用5 ng/mL TGF-β1作用24h,测定细胞增殖,其[PH]值(cpm/min)分别是(464±30)(空白对照组),(1062±50)(内对照组),(428±38)(实验组),F=412.186,P=0.000.结论 TGF-β1通过Smad3信号转导促进C2C12细胞增殖并呈剂量依赖性,siRNA-Smad3可以有效地阻断其信号转导而降低C2C12细胞增殖.     

华山参通过TGF-β1/Smad3通路对体外纤维化的调节作用

[目的] 研究华山参对重组小鼠转化生长因子 β1 以及香烟提取物（CSE）对小鼠胚胎成纤维细胞（NIH-3T3）和人源支气管上皮细胞（BEAS-2B）的影响及相关机制。[方法] 噻唑蓝（MTT）法筛选华山参生物碱、非生物碱、总提取物对 NIH-3T3 细胞的安全浓度;重组小鼠转化生长因子 β1 诱导 NIH-3T3 细胞 24 h,进行天狼猩红染色,并计算相对胶原沉积率;MTT 法分别筛选 7 种华山参生物碱单体对 BEAS-2B 细胞的安全浓度;CSE 处理 BEAS-2B细胞 24 h 后,进行 β-半乳糖苷酶（β-Gal）染色;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测 TGF-β1、Smad3、NLRP3 蛋白的表达水平。[结果] 华山参生物碱、非生物碱、总提取物均能抑制重组小鼠转化生长因子 β1 诱导的 NIH-3T3 细胞发生胶原沉积（P 均<0.05）;东莨菪碱和去水阿托品可以显著抑制 CSE 诱导的 BEAS-2B 细胞发生衰老（P 均<0.05）,并且能够显著抑制 TGF-β1、Smad3、NLRP3 蛋白的表达（P 均<0.05）。[结论] 华山参可能通过抑制 TGF-β1/Smad3 通路来调节体外肺纤维化的进程。     

瓜蒌薤白汤对肺纤维化早期阶段肺组织中TGF-β、Smad3、Smad7表达的影响

目的:探讨瓜蒌薤白汤防治肺纤维化的作用机理。方法:72只SD大鼠随机分为4组,即博莱霉素组、瓜蒌薤白汤组、泼尼松组、正常组,每组18只。用博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型后,用药组每天灌胃瓜蒌薤白汤,分别于第7天、第14天后处死各组大鼠,观察、比较各组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度和肺组织中转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)、Smad3、Smad7的表达。结果:光学显微镜下,正常组大鼠肺组织正常;博莱霉素组大鼠第7天肺泡间隔增厚,肺泡腔内有炎性细胞浸润,第14天呈1级肺泡炎改变和2级、3级肺组织纤维化;瓜蒌薤白汤组大鼠肺组织炎性改变和纤维化程度较博莱霉素组减轻,炎性细胞浸润减少,部分呈1级纤维化改变。免疫组织化学结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平升高,Smad7表达下降(P0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β、Smad3表达下降(P0.05),而Smad7表达增高(P0.05)。Real time-PCR结果显示:与正常组比较,第7天和第14天博莱霉素组TGF-β、Smad3表达水平明显升高(P0.05),Smad7表达下降(P0.05);与博莱霉素组比较,4 g·kg~(-1)瓜蒌薤白汤可使TGF-β和Smad3表达下降(P0.05),Smad7表达增高(P0.05)。结论:瓜蒌薤白汤能明显减轻博莱霉素所致的大鼠肺泡炎,有效调控TGFβ-Smad信号通路介导的致纤维化作用,进而起到抗纤维化的作用。     

反义Smad3抑制3T3细胞增殖和TGF-β1基因表达

目的研究反义Smad3对转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的调控和对3T3细胞增殖的影响.方法构建反义Smad3质粒,以脂质体介导转染NIH3T3细胞,进行细胞计数,并用RT-PCR方法观察TGF-β1 mRNA的表达.结果反义Smad3能下调TGF-β1 mRNA的表达,并抑制3T3细胞增殖.结论可以通过阻断TGF-β1细胞内信号传导调控TGF-β1基因的表达并抑制细胞增殖.     

反义Smad3抑制3T3细胞增殖和TGF-β1基因表达

目的 研究反义Smad3对转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的调控和对3T3细胞增殖的影响。方法 构建反义Smad3质粒,以脂质体介导转染NIH3T3细胞,进行细胞计数,并用RT-PCR方法观察TGF-β1 mRNA的表达。 结果 反义Smad3能下调TGF-β1 mRNA的表达,并抑制3T3细胞增殖。 结论 可以通过阻断TGF-β1细胞内信号传导调控TGF-β1基因的表达并抑制细胞增殖。     

TGF-β1作用下Smad3蛋白在绒癌细胞中的表达

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）对绒癌细胞系JEG-3细胞Smad3蛋白表达的影响,探讨TGF—D／Smads信号通路在绒癌中的功能状况。方法：以绒癌细胞系JEG-3为研究对象,分别用0ng／ml、100ng／ml及200ng／ml浓度的TGF-β1处理48h后,采用蛋白印迹法检测JEG-3细胞Smad3蛋白的表达。结果：随着TGF-β1浓度的升高,Smad3蛋白的表达水平逐渐升高,呈一定的量效关系。结论：绒癌细胞系JEG-3中不存在Smad3的缺失,且其对外源性TGF-β1刺激具有良好的反应性。     

Smad7对TGF-β/Smad信号转导通路的调节及其在肾纤维化中的作用

TGF-β是肾纤维化发生、发展中的必需因子,Smad蛋白是TGF-β受体的胞内激酶底物,介导了TGF-β的胞内信号转导.Smad7是负反馈调节TGF-β功能的细胞分泌因子,其过度表达可能改变了R-Smads和I-Smads对TGF-β诱导纤维化的应答或阻断的病理生理平衡.深入研究Smads介导的TGF-β胞内信号转导,将有助于对肾脏纤维化发病机制的理解,为探索新的治疗途径、开发临床新药提供理论依据.     

实验性血吸虫病肝纤维化中TGF-β1、Smad3的表达变化

目的 :研究TGF - β1、Smad3蛋白在血吸虫病肝纤维化家兔肝组织中的表达及意义。 方法 :日本血吸虫尾蚴腹贴法制备家兔肝纤维化模型 (n =32 ) ,按诱导时间将动物随机分为 4、8、12周及正常对照共 4组 ,采用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测肝组织中转化生长因子TGF - β1mRNA表达水平 ,免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原的表达 ,同时应用Westernblot检测Smad3蛋白的表达。结果 :肝纤维化形成过程中TGF - β1mRNA表达进行性增强 ,且伴有肝组织Ⅰ型胶原含量的明显增高 ,两者呈正相关 (r =0 .6 2 9,P <0 .0 1)。与正常对照组相比 ,各期肝纤维化家兔肝组织中Smad3蛋白表达增加 ,与TGF - β1mRNA表达趋势基本一致。该Smad蛋白上调与肝纤维化程度呈明显正相关 (r =0 .5 2 7,P <0 .0 1)。结论 :TGF - β1/Smad信号通路参与了血吸虫病肝纤维化进程 ,Smad3的上调在肝纤维化发生、发展中起重要的介导作用。     

转化生长因子β1及相关细胞因子在肺纤维化发生中的作用

肺纤维化是一大组弥漫性肺实质疾病群．以大量的成纤维细胞（fibroblast,FB）聚集、细胞外基质（extracellular matrix,ECM）沉积并伴有炎症和损伤所致的肺组织结构破坏为特征。近年来随着分子生物学技术和免疫学技术的发展．肺纤维化的细胞因子机制得到进一步的阐明。越来越多的研究表明有多种细胞因子参与肺纤维化的发病机制,它们既相互促进又彼此拈抗,形成复杂的细胞因子网络,共同促使肺纤维化的形成发展。     

TGF-β1及TGF-β3在妊娠期高血压疾病中的作用

目的探讨转化生长因子-β1,β3(TGF-β1,TGF-β3)在妊娠期高血压疾病发生和发展中的作用。方法60例为妊娠期高血压疾病患者(妊娠期高血压患者20例,轻度子痫前期患者20例,重度子痫前期患者20例),采用免疫组织化学方法检测分娩后胎盘滋养细胞及蜕膜细胞TGF-β3和TGF-β1的表达,20例正常妊娠孕妇为对照组。取重度子痫前期患者剖宫产后分娩胎盘绒毛体外培养24h,然后分别收集培养后1,4,12,24h上清液,采用ELISA法检测胎盘滋养细胞TGF-β1和TGF-β3的分泌。结果妊娠期高血压疾病组绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞TGF-β3阳性表达率和表达程度明显高于对照组,TGF-β1阳性表达率和表达程度明显高于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。重度子痫前期组分娩后胎盘绒毛体外培养24h后,于1,4,12,24h分别收集上清液中TGF-β1和TGF-β3的分泌均显著高于正常孕妇组,差异有显著性(P<0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者胎盘绒毛滋养层细胞的TGF-β3,TGF-β1表达异常在妊娠期高血压疾病的发生发展过程中起重要作用。     

解毒通络方通过TGF-β1/Smad和ROCK通路对大鼠心肌纤维化的改善作用

目的:探讨解毒通络方在大鼠心肌纤维化进程中的作用,并阐明其作用机制.方法:30只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组(n=6),以5 mg·kg-1盐酸异丙肾上腺素皮下注射法复制大鼠心肌纤维化模型,卡托普利组、低剂量解毒通络方组和高剂量解毒通络方组大鼠分...     

贝那普利对糖尿病大鼠胰腺组织中TGF-β1和Smad3表达的影响

目的 研究贝那普利对糖尿病大鼠胰腺组织中TGF-β<,1>和Smad3表达和RAS系统的影响。方法 以健康成年Wistar大鼠为实验对象,随机分为正常组、糖尿病未干预组和糖尿病贝那普利干预组3组。正常组以普通饲料喂养,糖尿病未干预组和糖尿病贝那普利干预组以高脂高糖饲料喂养。6周后腹腔注射链脲佐菌素诱导成糖尿病大鼠。于给药8周后处死。检测各组大鼠的血糖、胰岛素、体重。采用免疫组织化学方法检测胰腺组织中TGF-β<,1>及Smad3蛋白的表达,并用彩色病理图像分析系统进行定量分析。采用放射免疫的方法检测胰腺组织中的血管紧张素Ⅱ的含量。结果 与正常组相比,糖尿病未干预组血糖增加胰岛素分泌减少、体重减,轻。TGF-β<,1>及Smad3蛋白的表达明显增加。胰腺组织中的血管紧张素Ⅱ含量增加。贝那普利治疗后除体重无变化外上述指标均明显改善(P<0.05)。结论 胰腺局部RAS系统和TGF-β<,1>/Smad通路在糖尿病时是激活的,贝那普利治疗后可改善胰腺纤维化并可改善胰岛功能。     

IL-31与TGF-β1在小鼠肺纤维化过程中的表达及关系

目的 探讨白细胞介素31与转化生长因子β1在博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中的表达规律以及关系.方法 取48只雄性昆明种小鼠,随机分为两组:对照组和实验组,分别给予生理盐水和博莱霉素(5 mg/kg)一次性气管内灌注后,第7、14、21和28 d处死小鼠,应用Western Blotting法测定肺组织中...     

尿激酶对肺纤维化干预作用及对TGF-β1的影响

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）对肺纤维化模型的干预作用和对TGF-β1的影响。方法45只SD雄性大鼠随机分成3组,每组15只: (1)干预组：经气管灌注博莱霉素,随后从第2天起每两天腹腔给予尿激酶干预;(2)模型组：气管内灌注博莱霉素;(3)对照组:气管内滴入生理盐水。模型组与对照组腹腔给予生理盐水。所有动物第28天全部处死。肺组织经苏木精-伊红(HE)、Masson胶原染色来评价肺泡炎和肺纤维化。对肺泡灌洗液进行细胞计数、分类,酶联免疫吸附测定( ELISA)法检测灌洗液中TGF-β1含量。结果尿激酶干预组中性粒细胞百分比为（3.1±1.8）,低于模型组（9.3±4.1）,高于对照组（2.5±1.3）,有统计学意义(P＜0.01) 。干预组肺泡炎程度为（0.9±0.7）分,低于模型组（1.7±0.6）分,高于对照组（0.2±0.4）分,有统计学意义(P＜0.01)。干预肺纤维化程度（1.1±0.7）分,低于模型组的(2.0±0.8)分(P＜0.01)。干预组TGF β1含量在第28天为(42.5±1.7)ng/mL,低于模型组的(45.6±0.6)ng/mL (P＜0.01),差异有统计学意义。结论尿激酶能减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能通过抑制TGF-β1来实现     

抗纤合剂对肺纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路调控的研究

目的:观察益气养阴法中药组方——抗纤合剂对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织中Smad3和Smad7蛋白质表达的影响,探讨抗纤合剂治疗肺纤维化的可能分子作用机制。方法:将健康雄性Wistar大鼠120只随机分为正常对照组、模型组、强的松组、抗纤合剂组。每组30只。除正常对照组,其他3组采用Szapiel SV经典博莱霉素致肺纤维化模型。模型建成后,强的松组以6.25 mg·kg~(-1)的强的松溶液灌胃,抗纤合剂组以5 g·kg~(-1)灌胃。正常对照组与模型组以等溶生理盐水灌胃,每组每只大鼠每日灌胃给药2次,观察大鼠一般行为状态,分别于7、14、28 d 3个时间点处死大鼠,取肺组织固定。每个时间点每组大鼠10只。分别观察3个时间点Smad3 mRNA、Smad7mRNA的蛋白表达的变化。结果:模型组在14 d时,Smad3的mRNA表达水平达到峰值,Smad7的mRNA表达水平达到低点。到28 d时,Smad3的mRNA表达水平有下降,Smad7的mRNA表达水平有上升。强的松组和抗纤合剂组大鼠肺组织中Smad3 mRNA表达水平随着时间的推移,逐渐下降,Smad7 mRNA表达水平逐渐升高。且从总体上与模型组相比,Smad3 mRNA表达水平显著降低,Smad7 mRNA表达水平显著升高,差异明显(P0.05)。结论:抗纤合剂可以对TGF-β/Smad信号通路中Smad3、Smad7 mRNA的表达进行有效调控,通过下调BLM致肺纤维化大鼠Smad3的表达,促进Smad7表达的升高,抑制大鼠肺纤维化的形成,对肺纤维化起到一定的治疗作用。